血管内皮细胞生长因子在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达

材料和方法:取Sprague Dawley雄性大鼠(体重2 0 0～2 5 0g) 2 4只,制作糖尿病模型[1] ,随机分成糖尿病组(DM组)和治疗组,每组再分为2周、6个月组,每组6只。鼠龄配对的12只正常雄性大鼠为对照组。治疗组在造模后立即应用神经生长因子(NGF)后肢肌肉注射80 0U·kg-1·d-1。2周及6个月后,将大鼠麻醉,取一侧坐骨神经,用于蛋白印迹检测。组织经蛋白提取、定量,再制样、电泳、转印、抗体孵育、ECL化学发光检测。结扎该侧下肢后,灌流固定,取另一侧坐骨神经固定、脱水及包埋,按SP法行免疫组织化学染色,用图像分析仪分析(结果以积分吸光度值表示…     

纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子对大鼠损伤坐骨神经运动功能的影响

背景：坐骨神经损伤后的修复方法多样,但由于坐骨神经解剖和功能上的特殊性,神经功能的恢复仍不理想。 目的：观察局部应用纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子,对损伤坐骨神经组织神经功能恢复的疗效。 方法：将Wistar大鼠左侧坐骨神经切断,神经两断端原位缝合,制作大鼠坐骨神经损伤动物模型,然后随机分为2组,实验组于坐骨神经切断处外膜内、外注射纤维蛋白凝胶/血管内皮生长因子复合体;对照组于同处注射血管内皮生长因子165质粒。于用药后4,8,12周行大体观察、神经功能指数检测、电生理检测(测运动神经传导速度)。 结果与结论：两组动物伤口均为一期愈合。实验组用药后1周有6只出现足底溃疡伴肌萎缩;对照组有5只出现足底溃疡。实验组4周时,纤维蛋白凝胶基本被吸收;8周时完全吸收;12周时,神经外形基本正常。对照组4周时,神经轻度充血、水肿;8周时,神经无水肿,与周围组织见少量粘连;12周时,神经周围见瘢痕形成。实验组4,8周的神经功能指数、运动神经传导速度较对照组降低(P < 0.05),12周无显著性差异(P > 0.05)。提示纤维蛋白凝胶可以作为血管内皮生长因子的载体,纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子给药可以促进损伤神经结构和功能的恢复。 关键词：坐骨神经;损伤;纤维蛋白凝胶;血管内皮生长因子;载体 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.29.015     

缺血预处理对脑缺血大鼠血管内皮生长因子表达及微血管密度变化的影响

目的 观察局灶性缺血预处理诱导脑缺血耐受大鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达及微血管密度（MVD）的变化。方法 将99只Wistar大鼠随机分成对照组9只、非缺血预处理（non-ischemic preconditioning,NIP）组45只、缺血预处理（ischemic preconditioning,IP）组45只,后两组按照再灌注时间随机分成1 d,3 d,7 d,14 d,21 d,5个亚组,每亚组9只大鼠。对IP组采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性IP模型,分别在IP后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d对大鼠进行再次缺血2 h再灌注22 h,然后取脑检查。测定脑梗死体积,免疫组化检测MVD变化,原位杂交法检测VEGF信使核糖核酸（messenger RNA,mRNA）表达。结果 ①组间比较：对照组无梗死灶,未见有VEGF mRNA表达,IP组1 d,3 d,7 d亚组梗死体积较NIP组相应亚组明显减小（P均为0.001）。IP组1 d,3 d,7 d亚组VEGF mRNA较NIP组相应亚组表达明显增高（P分别为0.002、0.001、0.001）,IP组3 d,7 d亚组MVD较NIP组相应亚组表达明显增高（P分别为0.012、0.001）。②组内比较：IP组3 d亚组梗死体积减小最为明显,明显小于同组内其他亚组（与1 d、7 d、14 d、21 d亚组相比,P分别为0.001、0.042、0.001、0.001）;7 d亚组微血管在缺血灶周边区分布最为密集,MVD明显高于同组内其他亚组（与1 d、3 d、14 d、21 d亚组相比,P分别为0.001、0.003、0.004、0.001）;VEGF mRNA在IP后1 d表达即开始升高,高峰出现在IP后3 d,持续至7 d,且IP组3 d亚组VEGFmRNA表达明显高于同组内其他亚组（与1 d、7 d、14 d、21 d亚组相比,P分别为0.001、0.038、0.007、0.005）。③VEGF mRNA表达与MVD变化呈一定正相关性（r =0.472,P =0.017）。结论 VEGF mRNA及MVD在缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受的相应时间点内表达有所增加,VEGF及微血管形成可能在脑缺血耐受中发挥了重要作用。     

下肢缺血大鼠模型血管内皮细胞生长因子变化

背景：组织缺血初期,机体通过代偿性调节与修复,实现血管的新生,使组织供血得以维持,在此代偿过程中,多种细胞因子,特别是血管内皮细胞生长因子发挥了关键的作用。 目的：观察下肢缺血大鼠模型造模后不同时间点缺血组织及血清中血管内皮细胞生长因子水平变化特点及规律。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-04/11在东直门医院重点学科实验室和北京中医药大学分子生物实验室完成。 材料：将4周龄雄性SD大鼠42只按照随机数字表分为6组：对照组、造模后4 h、3 d、1周、2周及4周组。 方法：将模型组大鼠用100 g/L水合氯醛麻醉后行左侧股总动脉结扎离断术制作下肢缺血模型,于造模成功后4 h、3 d、1周、2周及4周抽取大鼠腹主动脉血5 mL,3 000 r/min离心10 min后,取上清;同时分离大鼠左小腿腓肠肌组织。对照组大鼠麻醉后直接取材。 主要观察指标：利用Western Blotting法检测缺血组织血管内皮细胞生长因子蛋白表达量、ELASA法检测血清中血管内皮细胞生长因子水平。 结果：缺血组织血管内皮细胞生长因子在缺血后4 h即开始增多,3 d时达到高峰,3 d后血管内皮细胞生长因子表达量逐渐减少,至缺血2周时血管内皮细胞生长因子表达量最少,2周后缓慢回升,至缺血4周时血管内皮细胞生长因子表达量接近正常组织。缺血后血清血管内皮细胞生长因子水平立即下降,缺血后即刻至缺血4 h下降幅度最大,缺血4 h~1周下降幅度减少;缺血1~4周血清血管内皮细胞生长因子少量增加,至缺血4周时仍显著低于正常组(P < 0.01)。血清血管内皮细胞生长因子含量变化趋势表现为至缺血4 h迅速下降,缺血1周降至最低点,1周后缓慢升高的趋势。 结论：大鼠后肢缺血后,缺血组织中血管内皮细胞生长因子水平呈现先升高-再下降-再上升的趋势,血清中血管内皮细胞生长因子水平呈现先下降-再上升趋势,即呈现血清水平低,局部组织水平高的特点。     

血管内皮细胞生长因子在人脑血管母细胞瘤中的表达及临床意义

目的研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)在正常人脑组织和人脑血管母细胞瘤中的表达,以了解其在血管母细胞瘤发病机制中所起的作用。方法应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(S-P法)对32例人脑血管母细胞瘤、10例正常脑组织中VEGF的表达进行检测和统计学分析。结果脑血管母细胞瘤组织中VEGF高于正常脑组织中VEGF表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论检测VEGF可以为人脑血管母细胞瘤的发病机制研究及临床治疗提供新的思路。抗VEGF治疗可能成为治疗人脑血管母细胞瘤的新方法。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后血管内皮生长因子表达的影响

目的通过观察高压氧对成年大鼠脊髓损伤后不同时期血管内皮生长因子（VEGF）表达变化的影响,探讨高压氧对脊髓损伤的治疗作用机制。方法雌性SD大鼠55只,体质量250-300g。随机分为脊髓损伤组（对照组）、脊髓损伤＋高压氧治疗组各25只（n=5）,假手术组5只。采用改良A llen＇s法制作T8脊髓打击伤动物模型,各组分别于伤后1 d、1 w、2 w、4 w和8 w进行行为学观察,运动功能评分方法（BBB）评分后损伤部位取材,免疫组化染色及图像分析检测组织中VEGF的表达。结果假手术组的评分21分,治疗组和对照组与假手术组比较在各时间点评分明显降低,治疗组在各时间段BBB评分明显高于对照组（P〈0.05）。假手术组显示除脊髓中央管周围可见到极少量VEGF表达外,其它部位几乎不表达;对照组脊髓损伤1 d VEGF在大鼠脊髓损伤区及损伤周边区高表达,主要出现在软脊膜和脊髓灰、白质血管壁上的血管内皮细胞胞浆内,脊髓灰、白质内的神经胶质细胞和巨噬细胞胞浆内也出现表达,一般脊髓白质中更为多见,1 w后下调,而治疗组1 d至2 wVEGF的表达较对照组明显增加,差异有显著性（P〈0.05）,4 w、8 w时各组比较无统计学差异。结论急性脊髓损伤可上调VEGF在脊髓血管内皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞内的表达,高压氧可能通过促进VEGF表达,促进血管内皮细胞生长从而对脊髓损伤起到治疗作用。     

血管内皮生长因子基因对大鼠缺血脑组织的保护作用

目的　探讨血管内皮生长因子基因对大鼠缺血脑组织的保护作用 ,为临床治疗脑梗死提供实验依据。方法　用线拴法制成Wistar大鼠大脑中动脉永久性闭塞模型 ,将VEGF1 6 5真核表达质粒 (pUCCAGGS/hVEGF1 6 5)经颅骨注入到缺血区。术后 7d断头取脑 ,2 %红四氮唑 (TTC)染色测梗死体积、HE染色观察组织坏死情况、免疫组织化学检测VEGF1 6 5基因的表达。结果　治疗组VEGF表达高 ,脑组织坏死明显减轻 ,脑梗死体积明显缩小 (P <0 .0 1 )。结论　在质粒载体介导下 ,VEGF基因可转化到缺血脑组织中并表达VEGF ,进而保护神经细胞 ,治疗脑梗死     

缺血再灌注对鼠脑血管内皮生长因子表达的影响

目的 了解血管内皮生长因子（VEGF）在一过性全脑缺血再灌注鼠脑表达的动态变化。方法 采用Pulisnelli改良法四血管堵塞全脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学方法观察了全缺血15min再灌注2－14d时,VEGF表达的动肪变化。结果 全脑缺血15min再灌注6h VEGF即可在大脑皮层,纹状体及丘脑等区域的血管内皮细胞表达,1d达高峰,一直持续到缺血后再灌注3d,结论 脑缺血后再灌注可上调VEGF在大脑皮质,纹状体及丘脑等区域内皮细胞的表达,VEGF可能通过促进血管内皮细胞生长对缺血性神经元损伤起一定的作用。     

川芎提取物对缺氧条件下体外培养的人脐静脉内皮细胞和大鼠脑缺血组织中血管内皮生长因子表达的影响

BACKGROUND： Vascular endothelial growth factor （VEGF） acts as ＂molecular bridge＂ following ischemic stroke to improve and restore blood supply and reduce infarction volume. Clinical studies have demonstrated the efficacy of Rhizoma Chuanxiong （Chuanxiong） in the treatment of ischemic cerebrovascular diseases. However, whether it promotes endogenous VEGF expression in ischemic stroke remains unknown. OBJECTIVE： To investigate the influence of Rhizoma Chuanxiong on VEGF production in vitro cultured human umbilical vein endothelial cells and on VEGF expression in ischemic cerebral tissues to explore its role in angiogenesis. DESIGN, TIME AND SETTING： In vitro basic comparison of traditional Chinese drug-containing serum pharmacology; in vivo randomized, controlled, animal experiment. This study was performed at the Medical Laboratory of West China Hospital, Sichuan University between December 2002 and April 2004. MATERIALS： Two Chinese rabbits were selected. One was intragastrically perfused with 5.8 g/kg Rhizoma Chuanxiong extract twice per day for three consecutive days to prepare Rhizoma Chuanxiong extract-containing serum. The remaining rabbit was intragastrically perfused with the same volume of normal saline twice per day for three consecutive days. Rhizoma Chuanxiong extract was provided by Beijing Traditional Chinese Medicine Research Institute, predominantly composed of ligustrazine, ligustilide, and ferulic acid. ChemiKineTM human VEGF Kit was purchased from Chemicon, USA; mouse anti-VEGF monoclonal antibody and biotin-goat anti-mouse IgG were purchased from Santa Cruz Biotechnology. Inc., USA. METHODS： （1） In vitro experiment： in vitro cultured human umbilical vein endothelial cells were separately incubated in rabbit serum with 10% Rhizoma Chuanxiong extract, normal medium without rabbit serum, and rabbit serum without Rhizoma Chuanxiong extract （blank control）. In addition, cells from the three groups were incubated under normoxia （5% CO2, 95% air） and hypoxia （1% 02, 5% CO2, 94% N2）, respectively, for 24 hours. （2） In vivo experiment： a total of 4/44 Sprague Dawley rats were selected for the sham-operated group （no occlusion）, and the remaining rats were used to establish a cerebral ischemiaJreperfusion model by suture occlusion. 32 animals with ischemia/reperfusion injury were randomly divided into treatment and model groups, with 16 rats in each group. Both groups were intraperitoneally infused with 0.58 g/kg Rhizoma Chuanxiong extract and normal saline two hours following reperfusion. The sham-operated group was administrated normal saline. Animals were treated with saline or Chuanxiong extracts （0.58 g/kg） twice per day for three consecutive days. MAIN OUTCOME MEASURES： In vitro experiment： VEGF concentration was detected in each group by enzyme-linked immunosorbent assay. In vivo experiment： behavioral alterations of rats were evaluated by neurological function scale; infarct volume was assessed by hematoxylin-eosin staining; VEGF protein expression in the infarct regions was determined by immunohistochemistry. RESULTS： （1） VEGF levels were similar between the three groups under normexic condition （P 〉 0.05）; while hypoxia induced VEGF production （P 〈 0.01 ）. VEGF levels in the drug-containing serum group were particularly higher compared with the other groups （P 〈 0.01）. （2） Compared with normal saline treatment, Rhizoma Chuanxiong extract significantly improved the neurological scale and reduced cerebral infarct volumes （P〈 0.05）. The percent of VEGF-positive cells was significantly greater than the model group （P 〈 0.05）. The sham-operated group exhibited normal neurological function, with no infarct focus. CONCLUSION： Rhizoma Chuanxiong extract-containing rabbit serum effectively promoted cultured VEGF production under hypoxia. Rhizoma Chuanxiong extract upregulated VEGF expression in the infarct region, improved neurological function, and reduced infarct size.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注血管内皮生长因子的表达变化及意义

目的探讨Wistar大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化及意义。方法选择体质量250～300g健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、局灶性脑缺血2h后再灌注0、1、3、6、9、12、24、72h及1、2周组共12组,每组5只,用线栓法制备大脑中动脉闭塞和再灌注(MCAO/R)模型。各组分别于相应时间点取鼠脑行冠状切片的HE及免疫组化染色。结果HE染色结果可见缺血后脑组织出现神经元变性、坏死,细胞周围水肿,软化灶形成。免疫组化染色结果显示:缺血2h后再灌注各组缺血灶周围小血管内皮细胞VEGF表达均较对照组、假手术组增高,内皮细胞在再灌注24、72h组表达量最高,再灌注1周组表达有所下降,再灌注2周组表达量仍较对照组、假手术组高;神经元及胶质细胞在再灌注9、12h组VEGF表达量最高,再灌注24、72h组较再灌注9、12h组有所下降,再灌注1、2周组无表达。结论脑缺血再灌注后VEGF在内皮细胞、神经元和胶质细胞表达增加但不同步,提示VEGF通过不同机制参与脑缺血的病理生理过程。     

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景：在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是最有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用。 目的：观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响。 方法：取新生48 h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养。采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4 mol/L 17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达。 结果与结论：RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6 mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量最高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降。提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性。     

血管内皮细胞生长因子在颅脑外伤脑组织中的表达

目的了解颅脑外伤后血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在脑组织中的表达,探讨ⅥEGF与脑损害严重程度的关系。方法采用免疫组织化学法检测30例急性颅脑外伤患者及正常脑组织的VEGF表达水平。结果外伤组及正常组脑组织中VEGF阳性率分别为73.3％和20％(x-±s)分别为42.1％±14.2％和14.8％±7.5％),两组比较差异有显著性(P＜0.05)。在变性坏死神经细胞数达到40％之前,VEGF阳性率与之呈明显正相关(r=0.6348,P＜0.05);当变性坏死神经细胞数超过40％时,其与VEGF阳性率呈明显负相关(r=-0.6657,P＜0.05)。结论颅脑外伤后脑缺血状态能诱导VEGF表达,VEGF可能在继发性脑损害的内源性防卫机制中发挥作用。     

脑缺血耐受大鼠脑组织血管内皮生长因子和血管生成素-1表达的改变及其意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-1(Ang-1)在短暂性脑缺血预处理(IP)诱导的脑缺血耐受大鼠脑组织表达的改变及其意义。方法将99只Wistar大鼠随机分成对照组(9只)、非IP(NIP)组(45只)和IP组(45只)。大脑中动脉线栓法建立局灶性IP模型,NIP组以假手术代替预缺血,分别在IP后1、3、7、14、21 d予以缺血2 h、再灌注22 h,对照组2次均为假手术。大鼠处死前给予神经功能缺损评分(NDS),采用TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化染色法检测脑组织VEGF、Ang-1蛋白表达。结果对照组大鼠脑组织无梗死灶,NDS为0。IP 1、3、7 d亚组NDS和梗死体积显著小于NIP组1、3、7 d亚组(P<0.01～0.05),其中IP 3 d亚组NDS最低,梗死体积最小。对照组脑组织少量VEGF蛋白表达,IP 1、3、7 d亚组VEGF蛋白表达显著高于NIP 1、3、7 d亚组(均P<0.05),其中IP 3 d亚组VEGF蛋白表达最高。各组脑组织均有一定程度Ang-1蛋白表达,IP 7 d亚组Ang-1蛋白表达高于NIP 7 d亚组(P<0.05)。结论 IP 1～7 d内脑组织VEGF、Ang-1表达增加,对脑缺血耐受的产生具有重要作用。     

Neuron-specific enolase expression in a rat model of radiation-induced brain injury following vascular endothelial growth factor-modified neural stem cell transplantation

BACKGROUND： Previous studies have shown that transplantation of vascular endothelial growth factor （VEGF）-modified neural stem cells （NSC） provides better outcomes, compared with neural stem cells, in the treatment of brain damage. OBJECTIVE： To compare the effects of VEGF-modified NSC transplantation and NSC transplantation on radiation-induced brain injury, and to determine neuron-specific enolase （NSE） expression in the brain. DESIGN, TIME, AND SETTING： The randomized, controlled study was performed at the Linbaixin Experimental Center, Second Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, China from November 2007 to October 2008. MATERIALS： VEGF-modified C17.2 NSCs were supplied by Harvard Medical School, USA. Streptavidin-biotin-peroxidase-complex kit （Boster, China） and 5, 6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester （Fluka, USA） were used in this study. METHODS： A total of 84 Sprague Dawley rats were randomly assigned to a blank control group （n = 20）, model group （n = 20）, NSC group （n = 20）, and a VEGF-modified NSC group （n = 24）. Rat models of radiation-induced brain injury were established in the model, NSC, and VEGF-modified NSC groups. At 1 week following model induction, 10 pL （5 ×10^4 cells/μL） VEGF-modified NSCs or NSCs were respectively infused into the striatum and cerebral cortex of rats from the VEGF-modified NSC and NSC groups. A total of 10μL saline was injected into rats from the blank control and model groups. MAIN OUTCOME MEASURES： NSE expression in the brain was detected by immunohistochemistry following VEGF-modified NSC transplantation. RESULTS： NSE expression was significantly decreased in the brains of radiation-induced brain injury rats （P 〈 0.05）. The number of NSE-positive neurons significantly increased in the NSC and VEGF-modified NSC groups, compared with the model group （P 〈 0.05）. NSE expression significantly increased in the VEGF-modified NSC group, compared with the NSC group, at 6 weeks following transplantation （P 〈 0.05）. CONCLUSION： VEGF-modified NSC transplantation increased NSE expression in rats with radiation-induced brain injury, and the outcomes were superior to NSC transplantation.     

Role of vascular endothelial growth factor in neuronal DNA damage and repair in rat brain following a transient cerebral ischemia

The antisense knockdown technique and confocal laser scanning microscopic analysis were used to elucidate vascular endothelial growth factor (VEGF) induction and its effect on DNA damage and repair in rat brain following a transient middle cerebral artery occlusion. Immunohistochemical study and in situ hybridization showed that the expression of VEGF and its mRNA was enhanced in the ischemic core and penumbra of ischemic brain. Western blot analysis further illustrated that VEGF induction was time-dependently changed in these areas. Double-staining analysis indicated that VEGF-positive staining existed in the neuron, but not in the glia, and it colocalized with excision repair cross-complementing group 6 (ERCC6) mRNA, a DNA repair factor. VEGF antisense oligodeoxynucleotide infusion reduced VEGF induction and resulted in an enlargement of infarct volume of the brain caused by ischemia. Moreover, it also increased the number of DNA damaged cells and lessened the induction of ERCC6 mRNA in ischemic brains. These results suggest that the induction of endogenous VEGF in ischemic neurons plays a neuroprotective role probably associated with the expression of ERCC6 mRNA.     

掺锶聚磷酸钙对成骨细胞分泌血管内皮生长因子的影响*

背景：掺锶聚磷酸钙作为一种新型骨修复材料,具有良好的生物相容性和可控降解性。课题组前期研究表明其具有促进血管生成的作用,但其机制尚不清楚。 目的：将ROS17/2.8成骨细胞与掺锶聚磷酸钙支架在体外共培养,观察细胞增殖情况和促血管生成因子血管内皮生长因子的分泌情况。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2008-10/2009-06在四川大学组织工程研究室完成。 材料：制备掺锶量为1%,2%,5%,8%,10%的掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙骨组织工程支架材料。ROS17/2.8成骨细胞株购自于四川大学华西医院移植免疫与移植工程实验室。 方法：①制备细胞支架复合物：将材料置于24孔培养板中,每孔接种300 μL细胞悬液(细胞浓度为2×107 L-1),培养14 d,隔天换液。②分别于1,3,5,7,10,14 d行MTT法观察成骨细胞的增殖情况。③将培养7 d的细胞支架复合物,离心取上清液,用夹心ELISA法检测血管内皮生长因子的分泌情况。 主要观察指标：观察掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙支架上成骨细胞的增殖情况及血管内皮生长因子的分泌情况。 结果：MTT法实验结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能促进成骨细胞的增殖,且8%掺锶聚磷酸钙效果最好;ELISA结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能上调血管内皮生长因子的蛋白分泌量,其中以8%掺锶聚磷酸钙促进作用最为明显(P < 0.05)。 结论：锶能有效促进成骨细胞增殖,并能明显上调血管内皮生长因子的分泌,且以8%掺锶聚磷酸钙效果最好,在一定程度上揭示了其具有促血管化作用的机制。 关键词：掺锶聚磷酸钙;成骨细胞;血管生成;血管内皮生长因子 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.47.014     

人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达

背景：骨髓间充质干细胞是最好的组织工程种子细胞来源,含有血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)不仅对血管再生和启动成骨修复有重要意义,其持续稳定的释放还能够提高新生骨的矿化程度,增强修复组织的力学性能。 目的：观察hVEGF165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子的蛋白功能。 方法：体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后的骨髓间充质干细胞以pcDNA3.1-VEGF165质粒和脂质体1∶3比例的混合液转染,并分为3组：转染组应用pcDNA3.1-VEGF165转染细胞,空载体转染组应用pcDNA3.1-空载体转染,未转染组不处理。通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性血管内皮生长因子的表达。 结果与结论：转染组与其他两组比较,VEGF165蛋白含量显著增高,差异有显著性意义(P < 0.05),但空载体转染组与未转染组之间差异无显著性意义(P > 0.05),转染组不同时间点之间VEGF165蛋白含量差异均有显著性意义(P < 0.05),hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF165蛋白。提示采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF165。     

脑膜瘤血管内皮生长因子与肿瘤增殖活性及瘤周脑水肿关系的研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)在脑膜瘤中的表达及其与脑膜瘤增殖活性、微血管密度及瘤周脑水肿的关系.方法应用免疫组化方法检测36例脑膜瘤组织中VEGF、增殖细胞核抗原(PCNA)、第Ⅷ因子的表达,测定其阳性细胞数;瘤周脑水肿通过术前颅脑MRI/CT来评估.结果脑膜瘤VEGF表达率为72%(26/36),5例可疑表达;PCNA、Ⅷ因子全部表达.VEGF表达与瘤周脑水肿和微血管密度有显著正相关关系,其r分别为0.878和0.631;VEGF表达与PCNA表达没有相关性,其r为0.087.PCNA标记指数＜25%者占97%(35/36)).结论VEGF存在于脑膜瘤组织中,在瘤周脑水肿和微血管形成方面起着重要的作用.脑膜瘤属于低增殖活性的良性肿瘤.     

血管内皮细胞生长因子与半月板白区修复中新生血管的长入

摘要 背景：血管内皮细胞生长因子可以促进血管的增殖,加快组织愈合。 目的 探讨通过血管内皮细胞生长因子能否促进血管向损伤半月板的白区生长及半月板白区愈合。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,与2008/2009在潍坊医学院动物实验基地完成 材料：血管内皮细胞生长因子购自北京博奥森生物技术有限公司 方法 制备新西兰白兔后肢半月板后角损伤的模型,关节内注射血管内皮细胞生长因子。术后1、3、6、12周切除半月板,制作切片进行大体和组织学观察。 结果 术后1周,实验组较对照组血管增生,成纤维细胞丰富,并且有透明软骨细胞出现。术后3周,实验组的软骨层明显较对照组厚。术后12周,实验组软骨层出现成骨基质和成骨细胞。 结论 术后早期,血管内皮细胞生长因子促进了血管的发生,从而促进损伤区的修复;但晚期,随血管的长入,促进了软骨内化骨,损伤了已修复的软骨层。