大鼠卵泡细胞的程序发育和类胰岛素生长因子Ⅱ的表达

用孕马血清，人绒毛膜促性腺激素刺激２０ｄ雌性大鼠，然后在ｈＣＧ刺激的不同时程处死动物，用细胞生物学方法和分子生物学原位杂交方法，观察卵泡细胞形态学的改变，以及卵泡内的类胰岛素生物因子－Ⅱ在该动物卵泡细胞的动态表达。在ＰＭＳＧ刺激４８ｈ后，卵泡开始发育成对促性腺激素有应答反应或对其依赖的卵泡、内泡膜细胞和颗粒细胞增殖、甘油三脂滴大量堆积在内泡膜细胞浆中，外泡膜细胞不含ＴＧＤ，同时ＩＧＦ－Ⅱ基因开始在     

影响卵泡发育的因素及相关信号传导

卵泡的发育与闭锁除了受到垂体分泌的卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）的内分泌调节外,卵巢内局部因子对卵泡生长的影响尤为重要。     

胰岛素、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在PCOS患者子宫内膜的表达

目的探讨胰岛素及其受体、胰岛素样生长因子I及其受体在多囊卵巢综合征患者子宫内膜的表达特点。方法利用免疫组化实验技术分析INS、INS-R、IGF-I和IGF-IR在多囊卵巢综合征和非多囊卵巢综合征不孕症患者子宫内膜中的表达情况,对结果进行图像分析,并利用SPSS10.0软件进行统计学分析,比较各组间的差异。结果1.多囊卵巢综合征患者子宫内膜IGF-I和INS-R表达水平明显高于对照组,差异有显著性(P<0.01)。其中多囊卵巢综合征中子宫内膜增生症患者的IGF-I和INS-R表达水平高于多囊卵巢综合征组增殖期患者,差异有显著性(P<0.05)。2.IGF-IR和INS在多囊卵巢综合征患者与对照组子宫内膜的表达水平无明显差异(P>0.05)。结论多囊卵巢综合征患者子宫内膜异常增生可能与局部IGF-I和INS-R表达异常有关。     

GnRH-A促进雌兔FSH与LH分泌及卵巢发育的作用

目的探讨GnRH类似物(GnRH-A)对FSH与LH分泌及卵巢发育的影响,及GnRH-A调节生育的机制。方法 24只雌兔均分为实验Ⅰ组(EG-Ⅰ)、Ⅱ组(EG-Ⅱ)、Ⅲ组(EG-Ⅲ)和对照组(CG)(n=6),实验组分别于颈背侧皮下注射0.1、0.1和0.05 g/L GnRH-A抗原1.0 mL,EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组于20 d加强注射1次。ELISA法测定血清FSH和LH含量。于70 d无菌切取卵巢,光镜和电镜观察。结果 40 d时EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组血清FSH和LH浓度均达到峰值,明显高于EG-Ⅰ和CG组的FSH和LH(P<0.01),且EG-Ⅱ组高于EG-Ⅲ组(P<0.05)。EG-Ⅱ组和EG-Ⅲ组卵巢皮质变厚,卵泡纵径和横径均增大,且与剂量相关。实验组卵巢卵泡数增加,生长加快。细胞核、线粒体和线粒体嵴变大,细胞质中的皮质颗粒和分泌物增多,透明带和微绒毛变大。结论 GnRH-A能促进FSH和LH的合成及卵巢与卵泡的发育,加强注射效果更明显。     

卵泡发育与多囊卵巢综合征相关因素的研究进展

多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄期女性最常见的生殖内分泌紊乱疾病,可表现为高雄激素血症,高胰岛素血症,胰岛素抵抗（IR）,并可引起生殖功能的障碍,该病与卵泡发育异常密切相关。人类卵泡的发育过程包括原始卵泡的募集、生长、发育、最终只有一个优势卵泡发育成熟并排卵。在这个过程中,生殖激素、内分泌、旁分泌,肽类细胞生长因子对卵泡生长发育进行规律而有序的调节,在PCOS患者中这些机制出现异常。本文就卵泡发育异常,及其与PCOS之间相关因素做一简要综述。     

宫内发育迟缓大鼠血清胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ、BP3的变化及L-精氨酸的保护作用

目的通过L-精氨酸孕期干预后大鼠血清胰岛素样生长因子-Ⅰ、Ⅱ及结合蛋白3水平的变化,探讨L-精氨酸的保护作用及其机制。方法采用被动吸烟法造大鼠IUGR模型,孕鼠随机分为4组:对照组、模型组、L-精氨酸小剂量和大剂量防治组,每组9只。孕21d剖宫取胎,测量胎鼠体重。应用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及IG-FBP-3水平。结果对照组、模型组与小、大剂量L-精氨酸防治组IUGR发生率分别为3.92%,54.95%,5.55%和9.09%。模型组大鼠血清IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平较对照组明显降低(P<0.01),小剂量和大剂量L-精氨酸防治组与模型组相比,IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平明显增高(P<0.01)。模型组大鼠血清IGFBP-3水平较对照组明显增高(P<0.01),小剂量和大剂量L-精氨酸防治组与模型组相比,IGFBP-3水平明显降低(P<0.01),与对照组亦有明显差异(P<0.01)。结论L-精氨酸可增高被动吸烟致宫内发育迟缓大鼠血清胰岛素样生长因子-Ⅰ、Ⅱ的水平,降低胰岛素样生长因子结合蛋白3的水平,从而促进胎鼠发育,防治IUGR的发生。     

二恶英对成骨细胞胰岛素样生长因子家族基因表达的抗雌激素作用

目的 探讨大鼠骨骼发育过程中环境类致畸因子对成骨细胞中胰岛索样生长因子(insulin-like growth factors，IGFs)家族基因表达的抗雌激素作用。方法 应用环境类致畸因子二恶英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo—p—dioxin，TCDD)构建先天性大鼠骨骼发育畸形动物模型；应用雌激素和TCDD分别或联合作用于小鼠头盖骨成骨样(MC-3T3-E1)细胞株；再用逆转录-聚合酶链反应及流式细胞仪定量检测胎鼠头盖骨组织和MC-3T3-E1细胞中IGF—I和胰岛索样生长因子结合蛋白-6(insulin—like growth factor binding protein-6，IGFBP-6)mRNA的表达和细胞增殖率。结果 在5～15μg／kgTCDD浓度下诱导了大鼠骨骼发育畸形，并存在剂量依赖性生物学效应；雌激素增加了胎鼠头盖骨组织及MC-3T3-E1细胞中IGF—ImRNA的表达，提高了MC-3T3-E1细胞的增殖率，但使IGFBP-6mRNA的表达降低；TCDD抑制了雌激素对IGF—I、IGFBP-6基因表达及细胞增殖的调节作用。结论 在高雌激素水平下，TCDD可以诱导大鼠骨骼发育畸形；通过靶基因IGF—I和IGFBP-6，TCDD可发挥拮抗雌激素对成骨细胞的正性调节作用。     

卵泡刺激素与卵泡刺激素及黄体生成素共同干预对玻璃化冻存小鼠卵巢组织血管内皮生长因子表达的影响

目的 通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织卵泡刺激素（FSH）及FSH和黄体生成素（LH）共同干预,观察冻融卵巢组织的形态学改变以及两种激素干预对冻存卵巢组织血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,寻找最佳的提高冻融卵巢组织卵泡存活及VEGF表达的激素干预方式。 方法 4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组（CG）,玻璃化冻存对照组（VCG）,300IU/L FSH全程干预玻璃化冻存组（OG-FSH）,以及150IU/L FSH+150IU/L LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+LH),每组30个卵巢样本。通过常规组织学、Western blotting技术,观察并分析各组卵巢组织形态结构改变及VEGF蛋白表达量;通过荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测VEGF mRNA表达情况。 结果 OG-FSH+LH 组正常卵泡百分比最高,且显著高于OG-FSH组（P<0.05）;VEGF蛋白表达量在OG-FSH+LH组显著高于OG-FSH组（P<0.05）;荧光定量PCR检测结果表现为VEGF mRNA表达量在OG-FSH+LH组最高,其次为OG-FSH组,最低是VCG组（P<0.05）。 结论 玻璃化冻存全程添加FSH+LH的干预方式较单独FSH干预具有更高正常卵泡百分比和更佳的VEGF蛋白表达。     

被动吸烟下调大鼠卵泡刺激素、黄体生成素、促性腺激素释放激素及其受体的表达

目的 研究被动吸烟对Wistar大鼠卵巢结构、激素受体及血清中激素的影响. 方法 Wistar大鼠32只,分为实验组和对照组(各16只).实验组大鼠吸烟3个月,对照组不予吸烟,3个月后处死大鼠.光镜及电镜下观察各组大鼠卵巢结构的改变,免疫组织化学染色检测激素受体的改变,酶联免疫吸附试验检测血清中激素的改变情况. 结果 实验组大鼠卵巢髓质血管收缩、减少,间质疏松.卵巢颗粒细胞内线粒体水样变、空泡样变,线粒体嵴断裂、模糊;粗面内质网脱颗粒样变.血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)水平比对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05).实验组大鼠卵巢组织中卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)的表达显著低于对照组(P＜0.01,P＜0.05). 结论 被动吸烟可使大鼠血清中FSH、LH及GnRH水平明显降低,大鼠卵巢中FSHR及LHR的表达减少,提示被动吸烟可破坏卵巢的结构及功能,引起生殖内分泌失调.     

衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达

目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素.方法:用Northern blot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2 kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IGFBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件.结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30 bp序列存在一个新的增强子元件IEE (IGFBP-3 enhancer element),对IGFBP-3的表达起到调控作用.     

胰岛素样生长因子I与透明质酸对人关节软骨细胞的作用

目的探讨胰岛素样生长因子I(IGF-I)和透明质酸(HA)联合培养对人关节软骨细胞增殖及其生物学行为的影响.方法分离培养人关节软骨细胞,分4组,分别为对照组、IGF-I组、HA组和IGF-I+HA组.加入不同浓度的IGF-I、HA、IGF-I和HA,用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定不同时间点软骨细胞增殖活性的变化.从第4代开始,用IGF-I和HA联合培养,通过电镜观察、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原和软骨蛋白聚糖(aggrecan)免疫组化及RT-PCR判断联合培养第8代软骨细胞表型的变化.自然传代的第6代细胞为对照组.结果 IGF-I在10μg/L浓度时即可明显促进软骨细胞的增殖,当IGF-I浓度为50μg/L时,其促增殖作用达最大值.单独应用不同浓度的HA对人关节软骨细胞的促增殖作用不明显.联合应用IGF-I与HA对软骨细胞的增殖具有协同效应并使促增殖作用时间后延.IGF-I和HA联合培养的第8代细胞胞质内含有丰富的粗面内质网和分泌小泡;RT-PCR显示Ⅱ型胶原mRNA表达阳性而Ⅰ型胶原mRNA表达阴性;甲苯胺蓝染色显示细胞质内有大量的紫色异染颗粒;Ⅱ型胶原和aggrecan免疫组化见92%的细胞染色呈阳性或强阳性,平均灰度分别为85.92±9.71和116.23±16.69.而对照组的平均灰度值分别为105.12±12.20和135.68±10.65,二者均显著低于对照组(P<0.01).结论 IGF-I明显促进软骨细胞的增殖;HA对软骨细胞的增殖无影响;二者联合培养促增殖能力更强,并且能有效地保持软骨细胞表型的稳定.     

卵泡液中胰岛素样生长因子-Ⅰ水平与生殖的相关性研究

目的 检测超排卵过程中卵泡液中胰岛素样生长因子-Ⅰ水平,探讨其与卵子受精、胚胎发育的关系.方法 对因输卵管因素进行辅助生殖技术治疗的患者监测其受精率、优质胚胎形成率及妊娠情况,用放射免疫法测定其卵泡液中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)及雌二醇(E2)的水平,比较它们之间有无相关性.结果 IGF-Ⅰ及E2的水平与受精率之间呈明显的正相关关系,优质胚胎形成率随IGF-Ⅰ及E2的水平的增高而升高,但二者之间无明显的相关性.妊娠组IGF-Ⅰ及E2水平明显高于未妊娠组.结论 超排卵时卵泡液中IGF-Ⅰ及E2的水平与卵子受精及胚胎发育密切相关.     

胰岛素样生长因子受体-1在糖尿病小鼠脑内的分布

为了观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子受体 -1( IGF-1R)的分布及 APP17肽对其分布的影响 ,本研究用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型 ,并向皮下注射 APP17肽 (β-淀粉样肽前体蛋白 319-335 )给予治疗 ,4周后取脑组织进行 IGF-1R免疫组织化学反应。结果显示 ,糖尿病组 IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位 ,而正常对照组及 APP17肽治疗组仅在皮层、海马可见阳性反应细胞 ,且着色淡。结果表明 ,糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的 IGF -1R阳性神经元 ,而APP17肽能使 IGF -1R阳性反应细胞出现的部位和数量正常化     

胰岛素样生长因子1和胰岛素对人a1（I）前胶原启动子活性的影响

目的：探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素对人a1(I)前胶原（COL1A1）基因启动子的调控作用及肿瘤坏死因子a(TNFa）、干扰素γ（IFNγ）、干扰素a(INFa）对这一作用的影响。方法：构建含 COL1A1基因启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因的重组体pCOLH0.27与pCOLH2.5,它们分别含该启动子序列-268～ 42bp(0.27kb)与-2483～ 42bp(2.5kb)片段。将这2个重组体瞬时转染人皮肤成纤维细胞,加入IGF-1或胰岛素,部分细胞还加入TNFa或IFNγ或IFNa,测定CAT活性。结果：13nmol/L IGF-1使转染后的这2个重组体活性分别增高3.68倍与4.04倍。2.5umol/L的胰岛素亦使之分别增高3.69倍与3.93倍。TNFa、IFNγ、IFNa能降低IGF-1与胰岛素诱导的pCOLH2.5活性。结论：IGF-1和胰岛素能在转录水平促进COL1A1基因的表达,TNF-a、INFγ、IFNa能抑制IGF-1和胰岛素的这一作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对肝硬变患者骨代谢的影响

为研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对肝硬变患者骨代谢的影响,将44例肝硬变患者,按Child-pugh分级分为A、B、C三组,并用38名健康者作为对照组,分别测定血清IGF-Ⅰ、骨钙素(BGP)和右跟骨骨密度(BMD)值。结果表明,B、C组肝硬变患者IGF-Ⅰ、BGP和BMD较对照组明显降低(P<0.001),肝硬变越严重,IGF-Ⅰ、BGP、BMD降低越明显。IGF-Ⅰ分别与BGP、BMD呈正相关(r=0.398,0.357,P<0.05)。IGF-Ⅰ减少可能是肝硬变患者骨质疏松形成的重要原因。     

血清胰岛素样生长因子Ⅰ水平对结肠癌组织中VEGF表达的影响

目的探讨血清中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平与结肠癌组织中VEGF的表达的关系,进一步探讨血清中IGF-Ⅰ水平在刺激小鼠结肠癌生长和转移中的作用。方法 将Colon 38腺癌组织块(碎片)植入肝脏特异性IGF-Ⅰ基因缺失(LID)小鼠和对照组小鼠的盲肠表面。总共156只5周龄的雄鼠接受了肿瘤移植,其中对照组74只,LID组82只。两组小鼠分别又随机分成两个亚组:对照组30只鼠、LID组31只鼠接受腹腔注射重组人IGF-Ⅰ(2 mg/kg),每天2次,共6周;对照组44只鼠、LID组51只鼠接受盐水注射。结果接受IGF-Ⅰ注射组的LID和对照小鼠,血清IGF-Ⅰ和水平均升高。较高血清IGF-Ⅰ水平的小鼠的结肠癌发生率,肝脏转移率,VEGF表达及血管密度均显著高于较低血清IGF-Ⅰ水平的小鼠。结论结肠癌组织VEGF的表达和血管的密度依赖于血液中IGF-Ⅰ水平。血液循环中IGF-Ⅰ水平在结肠癌发展和转移中起了重要作用。     

肝细胞生长因子和类胰岛素样生长因子对心肌干细胞的诱导作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)和类胰岛素样生长因子(IGF1)在外能否诱导心肌干细胞(CSCs)发生增殖并向心肌细胞定向分化。方法组织贴块法分离培养心肌干细胞,免疫荧光技术鉴定c-kit和CD34表达,流式细胞仪分选纯化c-kit+细胞,CFDA SE荧光探针示踪培养检测细胞增殖特征。实验分为单纯心肌干细胞组和与心肌共培养组,分别用HGF和IGF1干预,倒置显微镜观察细胞不同时期数量与形态的变化,活细胞工作站观察CFDA SE示踪剂荧光强弱,采集图像,进行统计学分析。免疫荧光技术检测Nkx2.5、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果单纯心肌干细胞组,生长因子刺激后心肌干细胞数量与形态均无明显变化。与心肌共培养组,细胞均发生增殖与形态变化,Nkx2.5、cTnT阳性表达,有个别心肌干细胞分化为自发搏动的心肌细胞。结论心肌干细胞与心肌细胞共培养条件下,HGF和IGF1能够促进心肌干细胞增殖,联合作用能够诱导心肌干细胞向心肌细胞分化。     

胰岛素样生长因子-2基因表达与人植入前胚胎的质量的研究

目的通过单个胚胎荧光定量RT-PCR的方法分析不同质量和来源的胚胎与IGF-Ⅱ表达量之间的关系。方法收集不适合移植及冷冻保存的胚胎,收集胚胎评分资料和所属患者资料。运用荧光定量RT-PCR方法测定其IGF-Ⅱ表达量。结果人类植入前胚胎形态学评分越高,其IGF-ⅡmRNA的表达量越高;年龄较轻和妊娠的病人中其胚胎中IGF-Ⅱ的基因表达量较高。结论荧光定量RT-PCR技术可用于检测单个植入前胚胎的mRNA含量;IGF-II可作为胚胎质量的标记物;IGF-II基因表达量和胚胎的形态学评分呈正相关。     

大鼠肝癌发生过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ的表达及意义

目的:研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝癌发生过程中的表达及意义.方法:采用二乙基亚硝胺(DEN)诱癌建立大鼠肝癌模型.应用放射免疫分析检测诱癌过程中血清IGF-Ⅱ浓度,应用免疫组织化学方法观察诱癌过程中大鼠肝组织IGF-Ⅱ的表达情况.结果:在大鼠肝癌的发生发展过程中,从肝细胞损伤期、增生-硬化期至癌变期3个阶段大鼠血清IGF-Ⅱ水平呈"高到低到高"的变化趋势;肝细胞损伤期嗜酸性变细胞中见IGF-Ⅱ阳性表达,癌变期癌灶中表达低于癌周增生灶、增生结节和非典型增生结节,而增生-硬化期阳性表达较少.结论:大鼠血清和肝中IGF-Ⅱ的高表达是肝癌发生发展过程中的早期及晚期事件,提示IGF-Ⅱ可能与肝细胞持续增殖及恶性转化有关.     

胰岛素样生长因子-1对雪旺细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对雪旺细胞氧化损伤的保护作用。方法:用体外纯化培养的雪旺细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分成氧化损伤组、IGF-1保护组和正常对照组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,免疫印迹法检测凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2处理组细胞胞体积缩小、空泡化,细胞活性降低,SOD含量明显减少,Bcl-2表达减弱;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高,SOD含量较损伤组高,Bcl-2表达明显上调。结论:IGF-1对氧化损伤的雪旺细胞有保护作用。