BDNF和NT-3对体外培养胎鼠脊髓神经元生长发育的影响

目的:观察脑源性神经生长因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)单独及联合应用对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响。方法:胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞记数和显微测量,观察神经元存活和生长分化的状况。结果:BDNF和NT-3均能促进培养胚胎大鼠脊髓神经元的存活,BDNF的作用效果更好。BDNF主要促进胞体发育;NT-3主要促进突出分化和伸长,二者有互补作用。结论:BDNF和NT-3能促进体外培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,其作用具有选择性。     

胎鼠脊髓内源性NT—3及BDNF对脊髓神经元的营养作用

目的：研究发育中的胎鼠脊髓中神经营养因子－3（NT－3）和脑源性的神经营养因子（BDNF）的营养作用．方法：用抗NT－3及BDNF的抗体封闭小鼠胚胎脊髓内源性NT－3及BDNF，观察封闭后体外培养的脊髓神经元活性和突起生长的变化．结果：NT－3在小鼠脊髓神经元中广泛表达，其作用主要为促进脊髓神经元突起生长，不加抗体封闭式，突起平均长度为（362．062±166．381）μm，当封闭抗体浓度为5mm／L时，突起长度为（262．011±109．168）μm．BDNF免疫反应阳性细胞主要为大细胞和DRG神经元，其作用主要是促进神经元的存活，在封闭抗体浓度为6．25mg／L，4．34mg／L时吸光度（A）值显著低于对照组．结论：发育中胚胎小鼠脊髓中NT－3促进神经元突起生长，BDNF则促进神经元存活．     

人脑源性神经营养因子基因克隆及序列分析

脑源性神经营养因子(Brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)是神经营养素家族重要成员之一,具有广泛的神经营养作用。在脊髓损伤和修复过程中发挥重要的作用,能促进神经元的存活,增强神经再生能力,促进功能的恢复[1～3]。大鼠转基因治疗脊髓损伤的实验表明BDNF能够促进红核脊     

脑源性神经营养因子在海马学习记忆中的作用

脑源性神经营养因子(BDNF)作为神经营养因子家族的一员,不仅能够促进神经干细胞的增殖,迁移和分化,促进多种神经元的存活和生长发育,而且BDNF能促进突触的可塑性,改变脑内神经元的形态,增加突触终末的密度和促进树突和轴突的生长,BDNF还参与了学习的可塑性机制和长时程增强效应,对学习记忆功能起重要作用.     

脑源性神经营养因子与脊髓损伤修复作用的研究

脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)是神经营养因子家族中的一员,其生物学效应十分广泛,可促进中枢及周围神经元的生长、存活及分化.至今,对BDNF的研究已较为深入,尤其是其对脊髓损伤修复的作用.因此,本文就BDNF的生物学特性及其在脊髓损伤修复作用的研究作一介绍.     

大鼠脊髓横断损伤后不同时间神经营养素表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓全横断后不同时间神经营养因子表达的变化。方法:30只成年健康SD大鼠,随机分为正常组(手术对照组)和脊髓全横断1d、3d、7d、14d、21d组,共6组,每组5只。采用免疫组织化学ABC法结合图像灰度分析法,检测脊髓全横断后各组神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养素-3(NT-3)表达的变化。结果:脊髓全横断后手术对照组NGF、BDNF、NT-3的表达较少,损伤后表达明显增加,NGF、BDNF和NT-3在损伤后1-7d表达的阳性细胞数逐渐增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),7d达到最高;NGF和NT-3的高表达一直维持到21d,而BDNF在损伤后14d恢复到正常。结论:在脊髓横断损伤中,神经营养因子NGF、BDNF和NT3的表达增加,可能起着保护作用。     

神经营养因子对体外培养多巴胺能神经元营养作用比较研究

目的：比较5种神经营养因子对体外培养多巴胺能（DA）神经元营养作用差别。方法：在培养孕14－16d大鼠胚胎黑质神经元中加入5种神经营养因子（NTF）。采用免疫组化染色及计算机图像的分析系统对培养细胞进行观察。结果：脑源性神经营养因子（BDNF）、血小板源性生长因子（PDGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)能促进中脑DA神经元发育,提高神经元及长突起神经元存活率。BDNF在整个培养期都有较强营养作用,PDGF在早期、bFGF在中期有轻度作用,神经生长因子（NGF）和白细胞介素－6（IL－6）则无作用。结论：体外DA神经元培养过程中,BDNF有较强的神经营养作用,PDGF和bFGF次之,NGF和IL－6无作用。     

脑源性神经营养因子和神经营养因子-3的抗伤害性刺激作用

脑源性神经营养因子(BDNF)或神经营养因子-3(NT-3，不是神经生长因子)，注入大鼠中脑可以明显延长甩尾反应的潜伏期。注萄后24小时出现镇痛作用，第5天达到最高水平，井可继续维持至少6天，提示没有形成耐受。注入BDNF也能延长热板烫爪反应的潜伏期。给予纳洛酮可使翻转BDNF引起的甩尾潜伏期延长。注入BDNF诱导抗伤害性作用同时伴有脑和脊髓中5-羟色胺能神经元活动增强，这些资料既表明BDNF和NT-3对5-羟色胺能神经元的怍用，又说明这些神经营养因子的镇痛特性与S-羟色胺和阿片样物质的机制有关。     

人胚胎脊髓神经干细胞生长及分化过程中BDNF的作用研究

目的研究脑源性神经营养因子对人胚胎脊髓神经干细胞生长和分化的影响。方法孕20周水囊引产胎儿标本经家属同意捐赠,分离培养脊髓神经干细胞,分为正常对照组、BDNF蛋白组、BDNF抗体封闭组,计数神经球数目并以MTT法检测细胞活力,免疫组织化学检测NeuN和GFAP的表达情况并进行计数。结果与对照组相比,BDNF蛋白组神经球数目或MTT值均无明显变化,BDNF抗体封闭组的神经球数目和MTT值有明显减少(P<0.05);BDNF蛋白组NeuN阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),GFAP阳性细胞数与对照组相比有明显减少(P<0.05),BDNF抗体封闭组NeuN或GFAP阳性细胞数均少于对照组(P<0.05)。结论外源性BDNF可促进人胚胎脊髓神经干细胞向神经元样细胞分化;内源性BDNF在人胚胎脊髓神经干细胞的增殖分化过程中发挥重要作用。     

NGF、BDNF和NT-3在鸡胚脊髓发育中的表达变化

目的 探讨神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子3(NT-3)在鸡胚脊髓发育中的表达变化.方法 对发育第7 d(E7)和第14 d(E7)鸡胚腰段脊髓用NGF、BDNF和NT-3抗体进行免疫组化和Western blot检测.观察NGF、BDNF、NT-3在脊髓两时相的分布和含量变化.结果 脊髓发育第7 d,NGF仅在腹侧白质表达,BDNF阳性细胞主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内,而NT-3阳性细胞则分布于腹角前外侧群神经元;脊髓发育至第14 d,不但白质NGF表达进一步增强,脊髓灰质内亦出现少量NGF阳性细胞,尤其是背角细胞可见强的NGF表达;BDNF除腹角染色外,也扩展至整个背角神经元及神经突起,并出现一些BDNF阳性胶质细胞;NT-3除分布于腹角前外侧群神经元外,中间带、背角内亦出现了一些NT-3阳性神经元.Western blot进一步证明上述3种因子的表达量均随发育进程增强,尤以BDNF为甚,其E14的表达量约为E7的2.7倍.结论 NGF、BDNF和NT-3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展,且表达量逐渐升高.提示,NGF、BDNF和NT-3可能与促进脊髓的发育有关.     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响ＳＧ神经元存活和生长的因素,取５００只Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ４０期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质。以简易细胞钓蛋白带（ＰＢＦＣ）技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率（Ｒｆ）。将有神经细胞贴附的各Ｒｆ范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＧＤＮＦ兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Ｗ     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响SG神经元存活和生长的因素,取 500只Hamburger 40期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用SDS-PAGE电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质.以简易细胞钓蛋白带(PBFC)技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率(Rf).将有神经细胞贴附的各Rf范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用NGF、BDNF、NT-3、GDNF兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Western杂交.PBF C结果显示: 在电泳胶Rf 0.10～0.19、0.30～0.35、0.50～0.55、0.60～0.67、0.90～0.94 处发现有多少不等的神经元附着.而Western杂交结果表明,在上述各Rf范围均有强弱不等的多条阳性杂交带.分别为NGF、BDNF、GDNF者;NGF、BDNF、NT-3者;NGF、BDNF、NT-3者 ;NGF、NT-3者、BDNF、NT-3者.提示:40期鸡胚脊髓背角提取液各Rf蛋白带的促神经元存活作用,至少涉及NGF、BDNF、NT-3、GDNF中的两种或三种.     

丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨丙戊酸（VPA）对脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养素3（NT-3）表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为三组：对照组（C组）、损伤组（SCI组）和丙戊酸保护组（VPA组）。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水。于伤后24、48、72 h和1周取材。利用BBB评分标准进行不同时段的行为学评分。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的变化。结果 BBB评分显示,C组运动功能未受影响,VPA组的BBB评分均高于SCI组,在伤后48、72 h和1周两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与C组比较,SCI组和VPA组的BDNF及NT-3表达在各时间点均明显增加（P〈0.05）,但VPA组各时间点的BDNF及NT-3表达均明显高于SCI组（P〈0.05）。结论 VPA可促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复,其机制可能与促进BDNF及NT-3表达有关。     

The spatiotemporal change of neurotrophin family and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial rhizotomy]

OBJECTIVE: To investigate the spatiotemporal change rule of NGF, BDNF, NT-3 and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial dorsal rhizotomy. METHODS: Rhizotomy of unilateral L1-L5, L7-S2 dorsal roots of cats was performed, leaving L6 as a spared dorsal root. By using ABC immunohistochemistry and in situ hybridization techniques, the dynamic changes of the above three factors and their mRNA in spinal lamina II of different segments were analysed. RESULTS: 1. In normal cat, NGF and it's mRNA were detected in part of neurons; BDNF, in nerve fiber terminals, varicosities and neurons; NT-3, in part of neurons, neuroglias and few nerve fiber terminals and varicosities. The mRNAs of the later two were negative. 2. The population of NGF and NGGmRNA positive neurons, NT-3 positive neurons and neuroglias increased significantly 3d-5d after rhizotomy. However, the quantity and density of positive varicosity of BDNF decreased. At 10-11d, the population of NGF and NGF mRNA positive neurons was still on the high level as that at 3-5d, and that of NT-3 began to decrease; the quantity of BDNF recovered to normal except for L, segment, but the density of positive varicosity of BDNF did not yet. The mRNAs of BDNF and NT-3 were still negative. 3. The change of each factor varied with the segments. The highest level time of NGF was earlier in L5, L6 than in L3; the recovery of the quantity of BDNF was the latest in L7; the change of NT-3 positive neuroglia was the same at each segment, but the number of NT-3 positive neuron in L5, L7 returned to normal at 10-11d, and that of L3 did not. CONCLUSION: The three factors all play roles in spinal plasticity after partial rhizotomy, but they function at different time phase and last different time length.     

部分去背根促进神经营养因子在初级感觉神经元顺行转运的研究

目的探讨部分去背根是否促进BDNF、NT-3和GDNF在初级感觉神经元顺行转运。方法将5只成年猫行单侧部分背根切断术,切除一侧的L1～L5,L7～S2背根神经节(DRG),保留同侧L6DRG为备用根,在L6背根距DRG1cm处捆绑双侧背根。术后3d取两侧L6背根制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF、NT-3、GDNF抗血清按免疫组织化学ABC法染色。观察实验侧和对照侧捆绑背根部位的近DRG端和近脊髓端各因子的免疫反应强度。结果对照侧捆绑处两端NT-3、GDNF的免疫反应强度均为弱阳性反应,BDNF捆绑处近DRG端的免疫反应( )较近脊髓端者强( )。实验侧捆绑处近DRG端。BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应( )较捆绑处近脊髓端强,且较对照组近DRG强。结论部分去背根动物背根近DRG端BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应强度增加可能提示部分去背根可促进BDNF、NT-3、GDNF从备用背根节神经元顺行转运进入脊髓。     

PKC在NGF促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用

目的：研究蛋白激酶C(PKC)在神经生长因子（NGF）促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用。方法：体外培养胚胎大鼠颈段脊髓神经元，施加NGF，观测神经元生长发育情况并检测胞膜及胞浆PKC活性。结果：培养2，4d时，实验组与对照组相比细胞膜PKC活性增强；膜质比增高，4，7d时神经元存活数量增多，神经突起生长明显增强。结论：在NGF促进体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元生长发育过程中，PKC有可能发挥了正向调节作用。     

脊髓中间外侧神经元NOS与FAS和NT3共存

目的 :研究脊髓中间外侧神经元除含有NOS外是否还含有Fas和NT3 .方法 :取成年猫脊髓L3 节段制作 2 0 μm厚冰冻切片并分组 .用相邻切片分别进行ABC法免疫染色和NADPH -d组织化学反应双染 .观察NOS与Fas和NT3 在脊髓中间外侧神经元是否共存 .结果 :在脊髓中间外侧神经元观察到双标反应物 ,Fas主要位于细胞核 ,胞浆弱阳性反应 ,NOS的阳性反应物则主要位于细胞浆 .相对之 ,NOS和NT3 的阳性反应物则均位于细胞浆 .神经突起内均见双标染色 .结论 :脊髓中间外侧神经元内NOS ,Fas和NT3 共存 ,进而提示这些成员可能与脊髓中间外侧神经元的某些生理功能有关 .     

脊髓腹角神经元共存NGF,BDNF,NT_3,NT_4和GDNF

用NGF ,BDNF ,NT3,NT4 和GDNF抗血清 ,以免疫组织化学方法观察NGF ,BDNF ,NT3,NT4 及GDNF在成年猫L5脊髓腹角神经元是否共存 结果 :L5脊髓腹角神经元均含有上述被检测的 5种神经营养因子的免疫反应物 ,表明腹角神经元共存NGF ,BDNF ,NT3,NT4 及GDNF ,提示这 5种神经营养因子可能与脊髓腹角神经元的生理过程有关