双环醇治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化的临床研究

目的研究双环醇对慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)肝纤维化的治疗作用。方法以双环醇治疗慢性乙肝患者20例,疗程6个月。分别于治疗前后检测患者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)及血清纤维化指标层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)和透明质酸(HA)水平。同时经皮肝活检观察治疗前后肝脏组织病理学变化。结果双环醇可以显著降低慢性乙肝患者血清ALT和GGT水平,复常率分别达95%和70%,同时可以明显降低慢性乙肝患者血清LN、CⅣ和PⅢP水平,尤其PⅢP和CⅣ水平与肝组织纤维化程度呈明显正相关(相关系数分别为0.653和0.530,P<0.01)。结论双环醇可以减轻慢性乙肝患者肝脏炎症反应,保护肝细胞和抑制肝纤维化。     

慢性病毒性肝炎患者肝组织转化生长因子β1及其mRNA分布的研究

目的了解慢性病毒性肝炎患者肝组织转化生长因β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｌ,ＴＧＦβ１）蛋白及ＴＧＦβｌｍＲＮＡ的分布状况及其意义。方法用免疫组织化学方法检测了４５例慢性病毒性肝炎患者肝组织ＴＧＦβ１蛋白表达,并做其中２１例ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ原位杂交检测。结果ＴＧＦβ１蛋白肝组织表达阳性率为８８８９％,主要为间质细胞、汇管区及纤维化发生活跃部位阳性,且随肝纤维化程度加重而表达增强（ｒ＝０７３,Ｐ＜００５）;ＴＧＦβｌｍＲＮＡ检测阳性率为５７．１４％,不仅定位于间质细胞,某些肝细胞也有阳性信号。结论ＴＧＦβｌ与肝纤维化发生发展密切相关。在病毒性肝炎,不仅间质细胞能够产生ＴＧＦβ１,肝细胞本身也能分泌ＴＧＦβ１。     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的动态研究

目的　探讨肝纤维化形成不同阶段ＴＧＦβ１和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化规律及其相互关系。方法　建立肝纤维化动物模型;分别用免疫组化法和斑点杂交法检测肝纤维化不同阶段ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达。结果随着肝纤维化程度的加重,ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达量都逐渐增高,各实验组与对照组相比,其差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论肝纤维化时,肝内ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达呈正相关,提示ＴＧＦβ１是重要的肝纤维化介质。     

双环醇对小鼠日本血吸虫病心肌组织中TGF-β_1、金属蛋白酶1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的研究小鼠日本血吸虫病肝纤维化致心肌损伤作用及双环醇对心肌损伤及纤维化的保护效应及机制。方法80只小鼠随机均分为4组。其中3组小鼠感染日本血吸虫8周后,分别以双环醇60mg/(kg·d)、120mg/(kg·d)治疗56d(8周)以及不作任何治疗(实验对照组),第4组小鼠作为健康对照组。应用苏木素伊红(HE)染色及免疫组化染色法,观察并分析不同剂量双环醇治疗前后各组小鼠心肌组织病理改变、转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化同步观察肝组织病理改变。结果用高剂量双环醇治疗后,小鼠心肌组织、肝组织病理损伤减轻,心肌组织中TGF-β1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显低于实验对照组而高于健康对照组,而低剂量双环醇对日本血吸虫病致肝纤维化及心肌损伤无明显治疗效果。结论日本血吸虫病可致心肌损伤。双环醇抗日本血吸虫病肝纤维化、保护心肌作用呈剂量依赖性,通过抑制心肌组织中TGF-β1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原过度表达减轻心肌纤维化程度,从而保护心肌作用。     

积雪草苷对心肌梗死大鼠转化生长因子-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达的影响

目的研究积雪草苷对心肌梗死大鼠左室心肌纤维化和心肌组织转化生长因子(TGF)-β1、Ⅰ型胶原(Col)Ⅰ和Ⅲ型胶原(col)Ⅲ表达的影响。方法结扎雄性SD大鼠大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,随机分为假手术组、假手术+积雪草苷组、心肌梗死模型组和心肌梗死模型+积雪草苷组。造模当天给药,早晚各1次,2 w后分别测定各组大鼠心脏左心室重量与体重之比、左室梗死面积;免疫组织化学检测心肌组织非梗死区TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达。结果心肌梗死模型组和心肌梗死模型+积雪草苷组左室梗死面积无显著差异(P0.05)。心肌梗死模型+积雪草苷组的左心室重量/体重低于心肌梗死模型组(P0.05);免疫组织化学染色结果显示:与心肌梗死模型组比,心肌梗死模型+积雪草苷组非梗死区心肌TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达明显降低(P0.05)。心肌梗死大鼠非梗死区心肌梗死组织ColⅠ、ColⅢ表达与心肌组织TGF-β1的表达正相关。结论积雪草苷可减少心肌梗死大鼠非梗死区TGF-β1的表达,从而减弱非梗死区心肌组织ColⅠ、ColⅢ异常合成与沉积,减轻心肌梗死后左室心肌纤维化程度,延缓左室重构的发展。     

慢性肝病患者肝组织转化生长因子-β1及其Ⅰ型受体的表达及意义

肝纤维化作为肝细胞对损伤因素的修复反应，是各种慢性肝病发展到肝硬化的必经之路。转化生长因子-β（TGF-β）家族是一类小分子多肽，有三种亚型：TGF-βI、TGF-β2、TGF-β3。研究证明，TGF-β1在调节细胞增殖及细胞外基质（ECM）的合成代谢中起重要作用，是最重要的促肝星状细胞（HSC）合成ECM的细胞因子，与肝纤维化的发生有密切关系。     

激动素对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

激动素（kinetin）本源于植物，目前广泛应用于植物细胞的组织培养。近年来的研究发现激动素能抑制细胞的分化过程，对人的成纤维细胞具有选择性杀伤作用。我们在大鼠肝纤维化模型上，结合Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及转化生长因子β1（TGFβ1）免疫组织化学探讨了激动素的抗肝纤维化作用。     

乙型肝炎病毒促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原在肝星状细胞中的表达

目的:研究转染HBV的HepG2.2.15细胞株在体外促进肝星状细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,进而探讨HBV促肝细胞纤维化的机制.方法:将HepG2和HepG2.2.15细胞株分别在体外与肝星状细胞共培养,以单独培养的肝星状细胞为对照组.取培养后24、48、72 h 3个时间点.以RT-PCR定量检测肝星状细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达:以Westem blot定量检测肝星状细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与对照组和与HepG2共培养的肝星状细胞比较,与HepG2.2.15共培养的肝星状细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达明显增高,以72 h差异最为显著(P<0.01);与HepG2.2.15共培养的肝星状细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也明显增高,以48 h差异最为显著(P<0.01).结论:与HepG2.2.15细胞株共培养后,肝星状细胞中肝纤维化相关因子的表达明显增强,HBV具有诱导肝细胞纤维化的重要作用.     

金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 探讨金钗石斛多糖(DNP)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg/kg),扶正化瘀组(0.415 g/kg),DNP低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),采用50％四...     

肝力克对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1 mRNA表达的影响

[目的 ]探讨中药复方肝力克对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子 β1(TGF β1)mRNA表达的影响。 [方法 ]用 4 0 ?l4皮下注射建立SD大鼠肝纤维化模型。造模结束后 ,给予不同剂量的肝力克和秋水仙碱灌胃治疗 9周。采用原位杂交法观察大鼠肝组织中TGF β1mRNA的表达情况。 [结果 ]肝纤维化模型组大鼠肝组织TGF β1mRNA阳性表达较正常对照组明显升高 (P <0 .0 1) ;应用肝力克大、中、小剂量和秋水仙碱治疗后 ,大鼠肝组织TGF β1mRNA阳性表达均较肝纤维化模型组明显降低 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。肝纤维化模型组大鼠肝组织纤维化计分与TGF β1表达程度呈明显正相关 (r =0 .80 1,P <0 .0 1)。 [结论 ]肝纤维化大鼠肝组织TGF β1mRNA表达程度与肝纤维化的发生发展有密切关系 ;中药肝力克降低肝纤维化大鼠肝组织TGF β1mRNA的表达可能是其抗肝纤维化的作用途径之一。     

复方红景天对大鼠肝组织转化生长因子β1 mRNA表达的影响

目的 :初步探讨复方红景天抗肝纤维化的疗效与分子机制。方法 :用 CCl4 皮下注射法诱导 SD大鼠肝纤维化模型 ,同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗 ,观察大鼠血清肝纤维化指标、肝组织转化生长因子β1 -(TGF-β1 ) m RNA、α1 ( ) m RNA表达水平及肝组织病理学变化。结果 :口服复方红景天可降低肝纤维化大鼠血清 型前胶原 (PC )、 型胶原 (C )、透明质酸 (HA)水平 ,抑制 TGF-β1 m RNA与α1 ( ) m RNA表达的增加 ,并明显改善大鼠肝组织病理变化 ,TGF-β1 m RNA表达的变化与纤维化指标、αl( ) m RNA表达及肝组织病理学改变呈正相关。结论 :复方红景天可能通过抑制 TGF-β1 m RNA、α1 ( ) m RNA表达从而减少胶原纤维合成等机制有效干预CCl4 诱导的大鼠肝纤维化     

慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化患者应用双环醇治疗的临床疗效观察

目的探究应用双环醇治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化患者的临床效果。方法将我院2014年4月至2015年2月接收的慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化患者60例作为研究对象,按治疗方式不同将其分为两组,各30例,对照组应用常规治疗,治疗组应用双环醇治疗。观察两组患者治疗前后肝功能变化情况以及血清肝纤维化指标变化情况,对比其临床疗效。结果两组治疗前肝纤维化指标、透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白无明显差异,治疗后均显著好转;尤以治疗组明显优于对照组,存在统计学差异(P0.05);治疗组临床疗效为93.33%,明显优于对照组的80.00%,组间比较,差异存在统计学意义(P0.05);两组治疗前肝功能情况无明显差异,而治疗后差异显著;治疗组明显优于对照组,存在统计学差异(P0.05)。结论应用双环醇治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化患者,可使其肝脏炎症反应减轻,疗效显著,值得应用。     

转化生长因子β_1对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA表达的影响

目的纤维母细胞是重要的胶原合成细胞，观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｍＲＮＡ表达的影响，以了解ＴＧＦ－β１在肝纤维化中的作用机制。方法首先对含有Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｃＤＮＡ片段的质粒进行扩增、提纯及酶切，然后用自由引物延伸法进行地戈辛标记，并对探针进行检测；其次对纤维母细胞进行培养，加用ＴＧＦ－β１孵育后收集细胞并提取细胞总ＲＮＡ，最后将ＲＮＡ点样于尼龙膜上，并与上述探针进行斑点杂交。结果杂交结果显示ＴＧＦ－β能明显促进纤维母细胞Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０５），也能促进其Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＝０．０９）；而对其胶原酶ｍＲＮＡ的表达则起抑制作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＴＧＦ－β可以从细胞及分子水平发挥其抗纤维化作用。     

转化生长因子β1对不同活化状态肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察不同活化状态肝星状细胞(HSC)对外源性转化生长因子-β_1(TGF-β_1)旁分泌刺激的生物学效应作用。方法 原代分离培养大鼠HSC,无包被塑料培养皿上分别培养1、4、7d,细胞处于静止、中间活化与完全活化状态,继以10～500 pmol/L TGF-β_1温育细胞24h,~3H—TdR掺入法测定细胞增殖,western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与Ⅰ型胶原蛋白表达沉积,~3H-脯氨酸掺入与胶原酶消化法测定细胞总胶原的分泌量。100pmol/L TGF-β_1温育细胞15～90min,northern blot法检测细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达水平。结果 TGF-β_1浓度依赖性抑制培养1d HSC的细胞增殖,10～500 pmol/L TGF-β_1浓度组细胞内~3H—TdR掺入率分别为对照组的52.8％～16.8％,与对照组比较,q值为5.44～10.37,P<0.01。但TGF-β_1对培养4d与7d的细胞增殖无影响。随细胞活化,HSC基础性α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白与mRNA水平明显增加,而TGF-β_1刺激各培养时间HSC以上蛋白与基因的表达。培养1、4、7d HSC基础水平与TGF-β_1刺激的总胶原分泌量分别为(804±274)dpm/孔与(1 200±708)dpm/孔;(2 966±1 701)dpm/孔与(6 160±1 123)dpm/孔;(2 580±767)dpm/孔与(4 583±1 467)dpm/孔,后2组组内比较,t值分别为3.84与2.96,P<0.01或P<0.05。以培养4d HSC     

硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,将32只♀SD大鼠分为3组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(hepatic fibrosis,HF组)13只、NaHS干预组(S组)11只,采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,S组自造模第6周始给予NaHS56μmol/(kg·d)腹腔注射12d,N组和HF组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,应用RT-PCR法检测肝脏中COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达,采用SP免疫组织化学法检测肝脏COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达.结果:HF组与N组相比,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及其mRNA表达升高(均P=0.000),与肝纤维化分期结果一致(P=0.000);S组与HF组相比,COL-Ⅰ和COL-Ⅲ表达降低(均P=0.000);COL-ⅠmRNA表达降低(P=0.009),同时COL-ⅢmRNA表达亦降低(P=0.003),肝纤维化分期下降(P=0.047).结论:H2S具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

雌二醇对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGFβ1表达的影响

目的:观察雌二醇对肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积和转化生长因子β_1(TGF β_1)表达的影响,研究雌激素对肝纤维化形成的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法:设立模型组、治疗对照组、雌二醇组和正常对照组,以四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型,雌二醇组在四氯化碳应用的同时皮下注射苯甲酸雌二醇1mg/kg,2次/wk,共8wk。大鼠肝脏HE染色与Masson染色,分级观察肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化,并观察对大鼠肝纤维化形成过程中肝脏表达Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及对TGF β_1的影响。结果:与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠出现典型的肝纤维化表现,肝脏胶原纤维间隔广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原(0.58±0.26vs 6.34±2.24,1.07±0.49 vs 5.28±1.28,P值均<0.001)及TGF β_1基因表达明显增多;雌二醇应用可以明显减轻肝脏内胶原纤维增生沉积P<0.05),抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(2.47±0.76 vs 6.34±2.24,3.02±1.20 vs5.28±1.28,P值均<0.05)及TGF β_1的合成表达。结论:雌二醇可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及TGF β_1的合成表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。     

飞天蜈蚣七对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1蛋白表达的影响

目的探讨飞天蜈蚣七防治肝纤维化的作用机制.方法CCl4法复制肝纤维化模型,48只SD大鼠随机分为飞天蜈蚣七组(A组)、秋水仙碱组(B组)、模型组(C组)和正常对照组(D组),每组12只.各组分别在第22、43天时,检测血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量;行肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)免疫组化染色,检测其蛋白表达.结果第22天时,与D组、A组比较,C组血清HA、PC-Ⅲ升高,TGF-β1阳性表达较强(P＜0.05),LN升高(P＞0.05);第43天时,与D组比较,C组血清HA、LN、PC-Ⅲ明显降低,肝组织TGF-β1阳性表达明显减轻(P＜0.05).结论飞天蜈蚣七可以减轻肝纤维化程度、抑制肝组织TGF-β1蛋白的表达,飞天蜈蚣七可作为抗肝纤维化的一种有效药物.     

肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1和Ⅰ型胶原的影响

目的: 研究肝素与大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)作用后转化生长因子beta1(transforming growth factor beta1, TGF-beta1)和Ⅰ型胶原表达的变化及意义. 方法: 大鼠肝星状细胞以1×108/L浓度接种于96孔培养板, 每孔100 muL. 实验分组为肝素Ⅰ组、肝素Ⅱ组、肝素Ⅲ组, 加入肝素使各组培养液中肝素浓度分别是10, 100, 1000 mg/L, 加生理盐水为对照组(每组6孔重复3次)培养48 h. 培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存, ELISA法检测其上清液TGF-beta1和Ⅰ型胶原水平, MTT法观察细胞增殖情况. 结果: 肝素Ⅱ组和Ⅲ组HSC培养上清液TGF-beta1水平均显著低于对照组(4.59±1.27 ng/L, 3.34±1.13 ng/L vs 5.95±1.72 ng/L, P均<0.01), 肝素各组Ⅰ型胶原水平均低于对照组(87.20±9.30 ng/L, 73.17±12.04 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L, 63.31±10.93 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L, P均<0.05), 肝素Ⅲ组平均吸光度低于肝素Ⅰ组和对照组(0.29±0.07 vs 0.42±0.12, 0.46±0.17, P均<0.05). 结论: 大鼠肝星状细胞在肝素作用下TGF-beta1和Ⅰ型胶原分泌受抑制, 其增殖减少.     

肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1和Ⅰ型胶原的影响

目的:研究肝素与大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)作用后转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的变化及意义.方法:大鼠肝星状细胞以1×10~8/L浓度接种于96孔培养板,每孔100μL.实验分组为肝素Ⅰ组、肝素Ⅱ组、肝素Ⅲ组,加入肝素使各组培养液中肝素浓度分别是10,100,1000 mg/L,加生理盐水为对照组(每组6孔重复3次)培养48 h.培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存,ELISA法检测其上清液TGF-β1和Ⅰ型胶原水平,MTT法观察细胞增殖情况.结果:肝素Ⅱ组和Ⅲ组HSC培养上清液TGF-β1水平均显著低于对照组(4.59±1.27 ng/L,3.34±1.13 ng/L vs 5.95±1.72 ng/L,P均<0.01),肝素各组Ⅰ型胶原水平均低于对照组(87.20±9.30 ng/L,73.17±12.04 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,63.31±10.93 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,P均<0.05),肝素Ⅲ组平均吸光度低于肝素Ⅰ组和对照组(0.29±0.07 vs 0.42±0.12,0.46±0.17,P均<0.05).结论:大鼠肝星状细胞在肝素作用下TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌受抑制,其增殖减少.