骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血患者骨髓原始细胞免疫表型分析

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者骨髓原始细胞免疫表型特征,探讨其对二者发病机制、诊断、分型诊断及鉴别诊断的临床意义。方法选用多种单克隆抗体,应用直接免疫荧光法、流式细胞术和CD45/SSC设门,对MDS组23例、AA组14例、正常对照组9例的骨髓原始细胞各免疫标志的表达率进行检测。结果MDS组与正常对照组相比其造血干/祖细胞抗原CD34、HLA DR、髓系早期抗原CD13、CD33、单核系抗原CD14、T淋巴细胞抗原CD7的表达率增高,髓系成熟抗原CD15、B淋巴系抗原CD19、CD20的表达率降低,DI值增高（P＜0.05）;RAEB组与RA组相比CD34、HLA DR、CD13、CD33、CD14、CD7的表达率增高,CD15、CD3、CD19、CD20的表达率减低,DI值增高（P＜0.05）。AA组与正常对照组相比其CD34、CD13、CD33、CD15的表达率降低,CD3、CD7、CD25、CD22的表达率增高（P＜0.05）。MDS组与AA组相比其CD34、HLA DR、CD13、CD33、CD14的表达率增高,CD3、CD5、CD7、CD15、CD19、CD20、CD22、CD25的表达率显著降低（P＜0.05）。结论MDS和AA患者骨髓细胞免疫表型分析,有助于揭示二者的发病机制,为临床提供新的诊断、分型及鉴别诊断方法。     

免疫表型检测对骨髓增生异常综合征诊断的意义

目的 探讨免疫表型检测对骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及鉴别诊断的价值.方法 采用免疫细胞化学法中的生物素-亲和素桥联碱性磷酸酶酶标法(ABC-AP法)对38例初诊的MDS患者、8例再生障碍性贫血(AA)患者及17例正常对照的骨髓片进行免疫表型检测.结果 CD41阳性的淋巴样小巨核细胞在MDS组中较特异出现,且以RCMD组出现率最高;MDS患者骨髓单个核细胞(MNC)早期髓系抗原CD13、CD33表达升高,而T淋巴系抗原CD3表达下降,其主要表现在RAEB和RCMD组,而RA/RAS组不明显;干/祖细胞抗原CD34在MDS组未见明显增加.结论 酶标淋巴样小巨核及其他免疫表型检测有助于MDS的诊断及鉴别诊断.     

骨髓增生异常综合征（MDS）免疫表型研究

[目的]探讨免疫异常表型对骨髓增生异常综合征（MDS）分型诊断及鉴别诊断价值。[方法]选用多种单克隆抗体,用流式细胞测定分析仪,对79例MDS、70例良性血液病人（贫血、粒细胞减少症、血小板减少性紫癜、感染）的骨髓细胞免疫表型进行测定分析。[结果]MDS89．3％以上有二系或三系免疫袁型异常,其中CD19、CD13、CD14、CD33、CD34、HLA—DR免疫标志变化最大,明显高于正常对照组（P〈0．01）。髓系抗原表达明显增高,而且随MDS进展恶化。FAB亚型抗原表达出现规律性变化：RA→RAS→RAEB→向RAEB—T转化。较早期髓系抗原表达（如CD13、CD33）逐渐增加,而较晚期髓系抗原表达（如CD15）逐渐减少;同时伴淋系抗原表达逐渐减少;骨髓干细肜祖细胞表面抗原（如CD34、HLA—DR）,随着MDS恶化发展,有逐渐明显增加异常表现,而且CD34、HLADR早期抗原表达增高者,常常预后较差,易于转化成白血病。[结论]MDS病人骨髓细胞免疫异常表型,有利于MDS诊断、分型诊断及鉴别诊断,并对治疗、预后判断有重要指导价值。     

骨髓增生异常综合征患者Fas抗原的表达及临床意义

目的:探讨Fas(CD95)在骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制中的作用及临床意义。方法:用酶联免疫夹心法检测25例MDS患者血浆可溶性Fas(sFas),用流式细胞术检测骨髓(BM)CD34+细胞、CD34-细胞、外周血单个核细胞(PBMNCs)Fas抗原的表达。结果:MDS难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)/转变中的RAEB(RAEB-t)组患者骨髓CD34+细胞百分率显著高于对照组及难治性贫血(RA)组(均为P<0.01);RA组及RAEB/RAEB-t组骨髓CD34+细胞Fas表达显著高于对照组(分别为P<0.01,P<0.05),其中RA组高于RAEB/RAEB-t组,有统计学意义(P<0.05);RA组患者骨髓CD34-细胞Fas表达高于对照组及RAEB/RAEB-t组患者(均为P<0.05)。两患者组血浆sFas显著低于正常对照(均为P<0.01),sFas水平与患者血红蛋白(Hb)浓度呈正相关(r=0.67,P<0.01)。结论:MDS患者骨髓、外周血细胞Fas抗原广泛表达,Fas表达异常与MDS的发生、发展密切相关。     

重组人G-CSF治疗不同白细胞减少症的疗效与机制

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）治疗不同白细胞减少症的疗效与机制。方法 临床选取四组患者：再生障碍性贫血组（AA组,n=10）、骨髓增生异常综合征组（MDS组,n=10）、药物性白细胞减少组（药物组,n=20）（根据骨髓粒系增生程度再分为增生活跃组和增生减低组）和缺铁性贫血组（对照组,n=10）。ELISA法测定外周血G-CSF浓度;流式细胞仪检测骨髓单个核细胞（BMMNC）G-CSF受体(G-CSFR)的表达率及CD34+细胞比例;培养BMMNC,比较粒细胞集落形成单位（CFU-G）集落数。比较AA组、MDS组和药物组进行rhG-CSF治疗的效果。结果 AA组和药物组的血清G-CSF浓度均高于对照组和MDS组（P<0.05）。AA组的G-CSFR表达率低于其余各组（P<0.05）,但MDS组与药物组和对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）;增生减低组G-CSFR表达率低于增生活跃组和对照组（P<0.05）,但增生活跃组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。AA组的CD34+细胞比例低于其余各组（P<0.05）,但其余各组间差异无统计学意义（P>0.05）。AA组和MDS组的CFU-G集落数均低于对照组和药物组（P<0.05）,但AA组与MDS组、药物组与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。经rhG-CSF治疗后,药物组疗效优于MDS组,MDS组疗效优于AA组（P<0.05）。结论 rhG-CSF疗效与骨髓G-CSFR表达率、CD34+细胞比例、干祖细胞对G-CSF的反应性及内源性G-CSF浓度有关。     

骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血患者血清LDH、SF的变化和临床意义

目的:探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)、血清铁蛋白(SF)在骨髓增生异常综合征(MDS)、再生障碍性贫血(AA)患者中的变化和临床意义。方法:采用国际血液学标准化委员会介绍的酶法及放射免疫法检测。结果:MDS组与AA组相比较血清LDH及SF水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);AA组和对照组比较二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清LDH、SF水平可作为MDS与AA鉴别诊断的血清学指标。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞的免疫表型分析

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞的分化抗原的表达情况。方法　采用流式细胞术的CD45 -侧向散射光 (SS)设门的方法 ,检测 14例骨髓增生异常综合征患者 ,16例急性髓系白血病 (AML)和 5例骨髓形态学正常的非血液病患者的骨髓和干 /祖系分化抗原。结果　MDS患者原始细胞群所占比例为 (11 2± 7 3 ) % ,明显高于对照组而低于AML组。该群细胞的髓系和干 /祖系分化抗原 ,MDS及AML组均存在较高的阳性表达 ;71 4%的MDS患者低SS表达的粒细胞群明显增加 ;2 8 6%的MDS患者髓系细胞群的部分细胞表达淋系抗原CD7。结论　MDS患者骨髓细胞存在复杂异常的分化抗原表达 ,通过免疫表型分析有助于MDS的诊断。     

CD133 在骨髓增生异常综合征患者中的表达及临床意义

摘要：目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓中CD133的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪采用直接
免疫荧光标记法,分别测定31例难治性贫血伴幼稚细胞增多（RAEB）、10例难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）
以及11例再生障碍性贫血患者骨髓中CD133+细胞和CD34+/CD38-细胞比例,对比分析CD133及CD34/CD38在不同亚型
MDS中的表达及临床意义。结果在RAEB型MDS患者骨髓有核细胞中,CD133阳性细胞平均占6.75%,RCMD患者平
均占1.41%,而再生障碍性贫血对照组占2.70%,RAEB组显著高于其他两组（P<0.05）;再障对照组与RCMD组之间无显
著性差异（P>0.05）;CD34+/CD38-细胞比例在3组中均小于1%,统计学上无显著性差异（P>0.05）。结论CD133在MDS
的进展类型RAEB患者骨髓细胞中高表达,CD133有助于RAEB分型诊断;而CD34+/CD38-标记在MDS分型诊断中并无
价值。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓造血细胞分化抗原表达及其意义

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓成熟粒系和红系细胞分化抗原表达特点并分析其与IPSS、WPSS评分的相关性.方法 采用流式细胞术检测34例(12例低危、22例高危)MDS患者及31名正常骨髓粒系CD11b、CD13、CD16、HLA-DR以及红系CD71和血型糖蛋白A(GlyA)抗原的序贯表达比例和模式.结果 选择CD13/CD11b、CD13/CD16及CD11b/CD16组合来分析粒细胞分化抗原表达模式,对照组骨髓粒系细胞组合模式分别为"对钩"、"镰刀"或"反7"状,MDS患者骨髓粒系细胞发育分化中的抗原表达模式出现不同程度的改变.高危组CD11b-/CD11b+比值(0.39±0.34)明显高于低危组(0.10±0.09)和对照组(0.07±0.05)(P<0.01);高危组CD16-/CD16+比值(1.33±0.77)明显高于对照组(0.39 ±0.31)(P<0.05);低危和高危组骨髓粒细胞CD13的平均荧光强度(MFI)高于对照组,侧向角散射光信号(SSC)的MFI低于对照组,但差异无统计学意义.高危组CD11b-HLA-DR+3.88%±3.07%、CD11b-HLA-DR-16.23%±15.59%、CD16-HLA-DR-41.12%±24.53%、CD11b+CD16-33.53%±17.26%及CD13+CD16-44.51%±21.99%细胞占粒细胞比例明显高于低危组和对照组(P<0.05),其他组间比较差异无统计学意义.应用CD71和GlyA的组合来分析红系细胞的分化,对照组两种抗原的组合模式均为双阳性表达,部分MDS患者可见CD71和GlyA表达不同步现象.低危组和高危组CD71+和GIyA+双阳性细胞分别占CD45-细胞和GIyA+细胞的比例均显著低于对照组.MDS患者粒、红系抗原表达的比例和模式异常数目与IPSS积分(r=0.690,P=0.000)、WPSS积分(r=0.651,P=0.000)均呈正相关.结论 MDS患者造血细胞分化抗原表达异常,异常程度与预后相关.这提示分化抗原检测可能有助于MDS患者的诊断和预后判断.     

骨髓增生异常综合征患者P16的表达态势分析

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞中P16基因表达异常态势,为寻找MDS患者分子诊断标记提供实验依据.方法 采用荧光实时定量聚合酶联反应检测44例初诊和18例治疗后MDS患者骨髓单个核细胞中P16基因mRNA表达水平,并与15例非MDS贫血患者相比较.磁珠分选8例初诊MDS患者CD34+细胞,并用流式细胞仪检测细胞纯度.检测MDS患者骨髓单个核细胞及CD34+细胞中P16表达水平.结果 在单个核细胞中,初诊MDS组与治疗后MDS组P16基因表达水平均显著高于非MDS贫血组,差异均有高度统计学意义(P<0.001).流式细胞仪检测CD34+细胞纯度为96.7%,在CD34+细胞中,初诊MDS组P16基因表达水平显著高于非MDS贫血组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MDS患者P16表达异常可发生在CD34+细胞,也可发生在分化后较成熟的单个核细胞.P16基因可作为MDS鉴别诊断的分子标志物之一,其在MDS患者细胞凋亡中可能发挥作用.     

Immunophenotype of myeloid cells in myelodysplastic syndromes and its clinical implications.

OBJECTIVE: To explore the immunophenotype of myeloid cells in myelodysplastic syndyomes (MDS) and its clinical implications. METHODS: A panel of monoclonal antibody was used to detect CD13+, CD33+, CD15+ and CD14+ antigens on the membrane surfaces of myeloid cells in the bone marrow from 51 MDS, 21 aplastic anemia (AA), 21 paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) patients. 10 acute myeloblastic leukemia (AML) patients and 15 normal subjects by immunoenzymatic assay. The morphology and chromosome karyotype of bone marrow cells of MDS patients were also examined. RESULTS: CD14+, CD13+ and CD33+ cells in the bone marrow were more in MDS patients than in normal controls, AA patients and PNH patients. CD15+ cells in the bone marrow were less in MDS patients than in normal controls. CONCLUSIONS: The percentages of CD14+, CD13+ and CD33+ positive cells in the bone marrow of MDS patients were related to the percentage of myeloblasts, the chromosomal aberrations and the response to treatment. It indicated that there is immunophenotypic misexpression of myeloid cells in MDS patients. Immunophenotype analysis of myeloid cells might be useful for the diagnosis and treatment of MDS patients.     

AA、MDS和AML患者CD4~+T细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17及Treg细胞)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者免疫发病机制中的作用,为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞术检测AA组25例,MDS组48例[其中难治性贫血(MDS-RA)22例,难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)26例],AML组12例和正常对照组8例的外周血单个核细胞Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例并对比分析,评价各组的细胞免疫状态。结果与正常对照组相比,AA组Th1、Th17细胞及Th1/Th2升高,而Th2和Treg细胞比例减低(P<0.05);MDS组Th1、Th2细胞、Th1/Th2与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),而Th17和Treg细胞比例升高(P<0.05);MDS-RA组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2均升高(P<0.05),Th2细胞比例减低(P<0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);MDS-RAEB组和AML组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2减低(P<0.05),Th2和Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论 AA、MDS不同阶段与AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,免疫因素介导的凋亡过度是骨髓衰竭的主要原因;而在MDS晚期和AML阶段,异常克隆细胞的大量积聚可能是其主要原因。     

环胞菌素A治疗再生障碍性贫血对骨髓细胞凋亡的影响

目的探讨环胞菌素A(CsA)治疗对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓单个核细胞Fas(CD95)抗原表达及调亡的影响作用.方法应用流式细胞仪测定24例再障患者CsA治疗前后骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率,其中急性再障7例,慢性再障17例;同时以20例正常人作对照.结果应用CsA治疗再障3个月时的总有效率58.3%.再障患者Fas表达率及凋亡率均高于正常对照(P＜0.05);急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障,但差异无显著性(P＜0.05).用CsA治疗后,再障患者骨髓单个核细胞凋亡率明显低于治疗前(P＜0.05).结论CsA治疗可降低再障患者骨髓MNC的凋亡率,骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高与再障发病有关.     

多参数流式细胞术分析骨髓增生异常综合征患者原始细胞的免疫表型特点

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者原始细胞免疫表型特点及其在诊断、分型及预后中的临床意义.方法:应用多参数流式细胞术,对41例MDS患者和24例非MDS患者原始细胞免疫标志的表达率进行检测.结果:MDS组与非MDS(non-MDS)组相比,CD34、CD123和CD133在原始细胞群表达显著增高(P＜0.01)...     

骨髓增生异常综合征（MDS）基因诊断研究

目的根据Southern印迹杂交结果设计并合成适当引物。方法以32例MDS、13例可疑MDS、53例其他血液病和8例正常人骨髓细胞DNA为模板进行PCR。根据PCR结果和用于上述Southern印迹杂交的限制性酶切位点,设计并合成2个寡核苷酸（Oligos）经地高辛标记,对33例MDS（包括转白血病者）,3例可疑MDS和19例其他血液病患者骨髓细胞涂片作原位杂交（ISH）。结果MDS有共同的PCR产物电池带型。MDS原位杂交均呈阳性反应。对照组19例中仅有1例AA阳性反应,可疑MDS3例中有2例阳性反应,且杂交信号的增强与MDS转白血病相关（P〈0．01）,也与SCD阴性相关（P〈0．01）。结论建立起MDSPCR基因诊断法,笔者设计的两条Oligos所包含的限制性酶切位点的确是MDSC-erbB重排位置和重排／扩增位置,为MDS基因治疗提供了靶基因的靶位置。