铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0. 05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340 nm;柱温30℃;流速1. 0 mL·min~(-1)。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即"丹霞种"),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了"云南广南种""广西铁皮兰种"),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即"浙江本地种"),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较"丹霞种"与"广西铁皮兰种"的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛"丹霞种""云南广南与广西铁皮兰种"与"浙江本地种"的判断依据。     

3种铁皮石斛种源HPLC特征图谱比较研究

目的 研究不同产地种源铁皮石斛高效液相色谱（HPLC）特征图谱,并初步比较丹霞地貌种源（广东、福建、浙江、江西）、浙江本地种、铁 皮兰种（广西、云南）特征图谱的差异。方法 采用Zorbax SB Aq色谱柱;流动相为乙腈-体积分数为0.2 %的甲酸溶液（梯度洗脱）;检测波长为270 nm;柱温为35 ℃;流 速为1.0 mL·min-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）生成对照图谱。结果 10批丹霞种源样品标示出37个特征共有峰,以对照图谱为 对照,10批样品的相似度为0.907~0.972;10批丹霞种源生成的对照图谱与5批浙江本地种对照图谱、5批铁皮兰种对照图谱的相似度分别为0.855,0.700。结论 分析方法准 确可靠,重复性好;提出了铁皮石斛“丹霞铁皮种”、“浙江本地种”、“铁皮兰种”的种源概念;3种铁皮石斛种源主要成分群基本一致,显示铁皮石斛内在成分的稳定性 ;不同道地产地种源成分群比例以及少数特征峰存在差异,又为区分丹霞种源、浙江本地种、铁皮兰种区域特征提供一定依据。     

3种种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱比较

目的:研究不同产地种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱,并初步比较丹霞地貌种源(广东、福建、浙江、江西)、浙江本地种、铁皮兰种(广西、云南)特征图谱的差异。方法:采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水(梯度洗脱),检测波长340 nm,柱温25℃,流速0.8 m L·min~(-1)。采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2004A版)生成共有模式。结果:3种种源的23批样品共标示出14个共有特征峰。其中,10批丹霞种源样品标示出12个共有特征峰(峰14为最强峰),样品相似度为0.880~0.996;6批浙江本地种源样品标示出13个共有特征峰(主要峰的相对峰面积较接近),样品相似度0.774~0.981;7批铁皮兰种源样品标示出9个共有特征峰(峰10,峰11相对峰面积较大),样品相似度0.922~0.974。丹霞种源对照图谱与浙江本地种对照图谱、铁皮兰种对照图谱的相似度分别为0.395,0.061,铁皮兰种对照图谱与浙江本地种对照图谱相似度仅为0.370。结论:该分析方法准确可靠,重复性好;相同种源铁皮石斛叶黄酮类成分群基本一致,显示铁皮石斛叶内在的稳定性;不同产地种源成分群组成及比例存在明显差异,亦为快速区分丹霞种源、浙江本地种、铁皮兰种区域特征提供了依据。     

铁皮石斛专属性成分的分离制备及质量标准研究

采用色谱和光谱技术首次从铁皮石斛追踪分离并鉴定专属性成分佛莱心苷。对铁皮石斛药材粉末特征进行描述。采用薄层色谱法对铁皮石斛中佛莱心苷进行定性分析,硅胶SGF254薄层板,展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1),显色剂三氯化铝,结果铁皮石斛中佛莱心苷的薄层色谱鉴别特征明显,具有一定专属性,可实现铁皮石斛药材与易混淆的齿瓣石斛、杯鞘石斛、兜唇石斛等石斛的加工品区分鉴别。对铁皮石斛的粉末特征进行描述。采用高效液相色谱法对铁皮石斛药材中的活性成分柚皮素进行定量分析,Bischoff Chromatography HIPAK NC-04 ODS AB色谱柱(4.4 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,检测波长226 nm,柱温25℃;结果柚皮素的定量测定在3.90~250.00 mg·L~(-1)呈良好的线性关系,r=0.999 9;平均回收率99.20%(RSD 0.17%),20批铁皮石斛药材质量分数在0.190~0.498 mg·g~(-1)。所建立的定性和定量方法简单灵敏,准确可靠,重现性好,为提高铁皮石斛的质量控制方法提供了实验依据,对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。     

铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用

目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,viceninⅡ)进行体外抗氧化及诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的活性研究。方法:采用2,2-联苯基~(-1)-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对viceninⅡ(0. 005~1 g·L~(-1))进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12. 5~100μmol·L~(-1))对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75μmol·L~(-1),采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行Hep G2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测Hep G2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达。结果:ViceninⅡ质量浓度为1 g·L~(-1)时,对DPPH的清除率和Cu2+还原率为48. 82%和22. 01%(P 0. 01);当viceninⅡ质量浓度为0. 5 g·L~(-1)时,对ABTS清除率为86. 88%(P 0. 01); viceninⅡ显著抑制Hep G2细胞增殖并诱导凋亡,75μmol·L~(-1)的viceninⅡ作用48 h后,细胞存活率为45. 69%(P 0. 01),细胞凋亡率为14. 57%(P 0. 01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB) mRNA表达(P 0. 01)。结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制Hep G2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导Hep G2细胞凋亡。     

铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分的高效液相指纹图谱及指标成分的含量测定

 目的 建立铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,并同时测定主要成分芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷的含量,为科学评价和有效控制其质量提供依据。方法 采用XB C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,甲醇-0.4%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长335 nm。收集了14批铁皮石斛叶和3批同属不同种石斛叶进行测定,用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004AB”对其质量进行评价,同时对黄酮碳苷类成分进行主成分分析。结果 建立了铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,标定了9个共有色谱峰,并采用对照品指认了8个色谱峰。3批同属不同种石斛叶与铁皮石斛叶对照图谱明显不同。主成分分析结果表明,黄酮二碳糖苷类成分中芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷对其质量影响最为显著。结论 所建立的铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分指纹图谱特征性强,方法简便,结合主要成分含量测定可更好地控制其质量,对铁皮石斛叶的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。     

铁皮石斛不同部位黄酮碳苷类成分及清除DPPH自由基能力比较研究

目的:对铁皮石斛根、茎、叶和花中黄酮碳苷类成分及抗氧化作用进行比较,为扩大铁皮石斛的药用部位提供实验依据。方法:采用TLC和HPLC及与对照品对照,对铁皮石斛不同部位黄酮类成分种类和含量进行分析;以清除DPPH自由基能力对抗氧化活性进行比较。结果:铁皮石斛茎、叶和花中含有种类相同的黄酮二糖碳苷类成分,并采用对照品指认了共有的8个色谱峰;但各黄酮碳苷的含量有显著差异,叶和花中黄酮碳苷的含量明显高于茎,叶和花HPLC色谱图相似度较高;根中黄酮类成分较少。茎中含有柚皮素,而根、叶和花均不含该成分。铁皮石斛茎和叶对DPPH自由基均有一定的清除作用,叶对DPPH自由基清除能力优于茎。结论:以黄酮碳苷含量及抗氧化活性为指标,铁皮石斛叶和花代替茎入药有一定可能性。该研究为铁皮石斛的综合开发利用提供了前期基础。     

狭基线纹香茶菜水溶性成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究狭基线纹香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus的水溶性成分及其抗肿瘤活性。方法采用大孔吸附树脂D-101、ODS、Sephdex LH-20等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱技术进行结构鉴定;以Hep G2为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究。结果从狭基线纹香茶菜水提液中分离得到12个水溶性化合物,分别鉴定为新西兰牡荆苷II(1)、新西兰牡荆苷III(2)、异夏佛塔苷(3)、夏佛塔苷(4)、牡荆苷(5)、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(6)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷(7)、芹菜素-6-C-β-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(8)、芹菜素-6-C-β-D-木糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷(9)、咖啡酸(10)、迷迭香酸(11)、芦丁(12)。结论化合物1~9为首次从香茶菜属植物中分离得到;其中化合物1、6、11对Hep G2细胞有较好的抑制作用。     

金莲花中牡荆苷在兔体内药动学及组织分布研究

目的 采用HPLC技术,阐明中药金莲花中有效成分牡荆苷在体内的药动学及组织分布规律.方法 以新西兰白兔为研究对象,通过静脉注射(iv)、腹腔注射(ip)、肌肉注射(im)3种不同给药方式,比较3种不同给药方式的牡荆苷在新西兰白兔体内的药动学特点;研究静脉注射牡荆苷后在兔体内组织分布情况,考察静脉注射牡荆苷后其在动物体内的组织分布特征.采用3P97程序计算药物代谢动力学参数.结果 3种给药方式在兔体内的房室模型均符合二房室开放模型,牡荆苷在新西兰白兔体内分布及消除较快.新西兰白兔静脉注射牡荆苷后,牡荆苷可广泛分布于兔体内各组织中,各组织中AUC大小顺序为肾＞肝＞肺＞脾＞心＞脑,提示肾对牡荆苷具有很高的摄取率,同时它义较难通过血脑屏障.结论 该方法简便、快速、稳定可靠,适用于牡荆苷的体内分析.     

HPLC测定短瓣金莲花中两种黄酮苷的含量

 目的 研究短瓣金莲花及不同部位中两种黄酮苷的含量情况。方法 采用RP-HPLC,测定其中所含的两种黄酮苷荭草苷和牡荆苷的含量。结果 短瓣金莲花中荭草苷和牡荆苷的平均含量分别为1.9%和0.46%。结论 对短瓣金莲花中的黄酮应该加以研究和开发利用,短瓣金莲花可能是中药金莲花的一种代用新药源。     

苗族药三月泡的品种鉴定和成分研究

三月泡是一种苗族药，具有清热、镇痛、生新和消食积的作用，用于疮肿、骨折、筋骨疼痛，食积。经品种鉴定其来源应为蔷薇科植物山莓Rubus corchonfoliusL.F.的根皮，经化学成分预试实验表明三月泡根成含有鞣质、皂甙、糖类等多种化学成分。     

中国民族药的品种和使用现状

目的：调查和整理中国当前少数民族传统药物的现状,发现民族药物之间的异同,分析民族药物的品种、使用范围和功能主治之间的关系,为民族药的开发、研究和使用建立一个基础信息平台。方法：主要对上世纪70年代后期（改革开放）以来,公开出版的图书和期刊中收载的民族药物进行系统的归类整理,编著一部内容详实可靠,且能快速查阅的工具书。结果：现已编写完成《中国民族药辞典》一书,并提交中国医药科技出版社。该书共收载了53个少数民族所使用的传统药物,涉及药物总数为7 734种,字数约170万字。结论：中国民族药物品种繁多;采收、用药部位、功能主治等内容丰富,特色突出;亟待查明的主要问题是品种和功能主治的规范。     

藏药材的生药学特点及品种整理研究策略

通过对藏药专著文献的分析整理,从藏药材的分类、文献入手,对藏药材基源的记载形式、名称(命名、异名、名称文字)、基源、质量控制等进行研究分析,阐述了藏药材的生药学特点及其成因,提出了规范藏药材品种的名称和基源的研究思路.     

藏药材的生药学特点及品种整理研究策略

通过对藏药专著文献的分析整理,从藏药材的分类、文献入手,对藏药材基源的记载形式、名称(命名、异名、名称文字)、基源、质量控制等进行研究分析,阐述了藏药材的生药学特点及其成因,提出了规范藏药材品种的名称和基源的研究思路.     

冬虫夏草及其伪劣商品的鉴别

冬虫夏草为名贵滋补药。明代即出口日本，现畅销国际市场，是中国传统的出口商品，享有极高的声誉。近年来国内外市场需求增大，而产量小，价格上扬，伪品、掺杂品增多。本文提出实用鉴别方法，以利保证冬虫夏草的质量。     

杭州药材紫花地丁及其相近种分类鉴定研究

紫花地丁（Herba Violae）为堇菜科紫花地丁（Violayedoensis Makino）植物的干燥全草。最早见于《千金要方》。《植物名实图考》称堇堇菜。附图为草本,无地上茎,叶片卵形,叶基心形,边缘有锯齿,花紫色,蒴果3裂。徐国兵等认为该描述为紫花地丁（V．yedoensis）,而据杨武亮等的考证,此植物为堇菜科的锐尖叶堇菜（V．cuspidifolia）。     

中国药用菊花的品种演变

目的 :了解中国药用菊花主产地及品种的历史和现状。方法 :实地调查、栽培观察和文献研究。结果 :弄清并比较了贡菊、杭菊、滁菊、亳菊、怀菊、济菊各栽培品种的形态特征 ,并对这些品种历史演变进行了考证。结论 :贡菊与杭菊有亲缘关系 ,亳菊、怀菊、济菊及祁菊有亲缘关系 ,滁菊是独立类型。通过研究为栽培和发展生产提供了有意义的资料。     

用随机扩增多态DNA（RAPD）技术鉴定野山人参

目的：探索用随机扩增多态DNA(RAPD)技术鉴别野山参和栽培人参的可能性。方法：从经过形态鉴定的野山人参和栽培人参药材中提取DNA模板,运用RAPD技术在电泳中产生条带。结果：用80个引物,其中一个引物产生野山人参可重复的特征条带。结论：结果证明应用RAPD技术能有效地区别野山人参和栽培人参。     

几种金银花的高效液相色谱法鉴别与系统聚类分析

目的鉴别17种金银花的质量。方法采用高效液相色谱法对样品进行分析,获得反映样品整体化学特征的数据,利用聚类分析进行分类。结果在选定的色谱条件下,建立了稳定可控的药材高效液相色谱图,系统聚类法可将样品有效地分类。结论该方法鉴别金银花是可行的,能为其质量评价提供有用的信息。     

新疆4种绢蒿属植物及近缘种银蒿的ITS/ITS2条形码鉴定研究

目的：评价ITS/ITS2热点条形码序列对新疆4种绢蒿属植物及其近缘种银蒿的鉴别能力,为绢蒿属植物分类鉴定提供分子参考依据。方法：对15份绢蒿属及银蒿植物样本进行DNA提取、PCR扩增、双向测序,采用CodonCode Aligner软件对序列峰图进行校对拼接,MEGA6.0分析序列碱基组成及变异,计算K2P遗传距离并构建聚类邻接树,预测ITS2序列二级结构,评估鉴别能力。结果：西北绢蒿、针裂叶绢蒿种内变异位点及信息位点数均小于银蒿。ITS序列种间、种内遗传变异均大于ITS2序列。ITS/ITS2 序列邻接（NJ）树均聚为3支,绢蒿属、银蒿1、银蒿2。绢蒿属ITS2序列二级结构与银蒿有差异。结论：通过ITS/ITS2序列的种间K2P遗传距离、邻接树、ITS2序列二级结构分析,ITS、ITS2序列具很好的属鉴定效果,不同产地的针裂叶绢蒿被区分开。