肺结核病原体和易感因素及结核分枝杆菌优势耐药谱分析

目的 了解县镇地区肺结核流行现状及其易感因素、结核分枝杆菌耐药谱和优势耐药组合模式方法 采用罗氏培养基和PNB/TCH生长试验,对杭州市周边7个县镇临床诊断为肺结核的2 840例初治和712例复治患者抗酸染色阳性痰标本进行分枝杆菌分离培养和菌种鉴定。采用浓度比例法,检测3 152株结核分枝杆菌对链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RIF)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)和卡那霉素(KM)的敏感性。采用统计学方法分析结核分枝杆菌优势耐药模式以及肺结核易感因素结果 3 552株分枝杆菌中,88.7%(3 152/3 552)为结核分枝杆菌,11.3%(400/3 552)为非结核分枝杆菌,复治患者非结核分枝杆菌感染率(23.7%)显著高于初治患者(8.1%)(χ²=138.67,P<0.05)。3 152株结核分枝杆菌对6种抗结核药物总耐药率为25.1%,对一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率分别为15.9%、4.6%和0.2%,其中SM(χ²=50.40, P<0.05)和INH耐药率较高(χ²=47.81, P<0.05)。结核分枝杆菌有35种耐药谱,优势耐药组合模式分别为INH+SM(χ²=19.19,P<0.05)、INH+RFP+SM(χ²=24.85,P<0.05)和IHN+RFP+SM+EMB(χ²=20.11,P<0.05)。来自复治患者的结核分枝杆菌总耐药、一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率(38.3%、36.1%、14.0%和0.9%)均显著高于初治患者(22.3%、19.3%、2.7%和0.04%)(P<0.05)。本地户籍60岁以上男性农民肺结核发病率显著较高(χ²=1 435.29,P<0.05)结论 本县镇地区肺结核疫情防控形势依然严峻,老年男性农民是肺结核易感人群,复治肺结核患者非结核分枝杆菌感染率以及结核分枝杆菌耐药性显著高于初治肺结核患者,提示县镇地区肺结核患者抗结核药物规范化治疗有待加强。     

DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的临床应用价值研究

目的 评价DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌及其对异烟肼和利福平耐药的检测效能。 方法 收集2011年1月至2017年5月间在江苏省灌云县疾病预防控制中心登记的814例涂阳肺结核患者的痰标本。利用传统罗氏培养法及比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和DNA微阵列芯片法,同时对患者的痰标本进行结核分枝杆菌检测,并检测其对异烟肼和利福平的耐药情况;分别以传统罗氏培养及比例法药敏试验为标准,评价DNA微阵列芯片法的检测效能。 结果 DNA微阵列芯片法对涂阳肺结核患者的结核分枝杆菌检出率为86.1%(701/814),高于传统罗氏培养法的82.4%(671/814),差异有统计学意义(χ ²=6.81,P<0.05)。以传统罗氏培养法为标准,DNA微阵列芯片法检测涂阳患者结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为92.4%(620/671)和43.4%(62/143),Kappa=0.39,阳性预测值和阴性预测值分别为88.4%(620/701)和54.9%(62/113)。以药敏试验为标准,对有完整的异烟肼和利福平耐药检测结果的620例患者进行分析,DNA微阵列芯片法检测初治涂阳患者是否对异烟肼与利福平耐药的敏感度分别为78.7%(37/47)和84.6%(22/26),阳性预测值分别为69.8%(37/53)和73.3%(22/30);检测复治涂阳患者是否对异烟肼与利福平耐药的敏感度分别为71.9%(23/32)和89.3%(25/28),阳性预测值分别为85.2%(23/27)和89.3%(25/28)。 结论 DNA微阵列芯片法对结核分枝杆菌的检出率高于传统罗氏培养;对结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药性检测效果理想,具有较好的应用价值。     

The value of Xpert MTB/RIF detection technology in diagnosis of tuberculosis

目的 评价Xpert MTB/RIF 检测技术在综合性医院结核病诊断中的价值。方法 收集2016年6月至2017年8月入住株洲市中心医院疑似结核病患者的各类标本376份,其中痰标本227份(60.37%),肺泡灌洗液109份(28.99%),脑脊液21份(5.59%),胸腔积液15份(3.99%),其他标本4份(1.06%,包括引流液、脓液、分泌物、尿液各1份),分别进行GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert法”)、夹层杯液基集菌抗酸染色涂片镜检法(简称“夹层杯法”)和传统固体罗氏培养法(简称“固体培养法”)检测结果的比较和临床分析。采用SPSS 19.0软件进行数据资料处理,计数资料采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 376例疑似结核病患者的各类标本中,最终临床诊断为结核病349例,非结核病27例。Xpert法检测阳性率(37.50%,141/376)明显高于夹层杯法(22.87%,86/376)和固体培养法(17.82%,67/376)(χ ²值分别为19.09、36.39,P值均<0.05);以临床诊断结果为标准,Xpert法检测敏感度(40.11%,140/349)明显高于夹层杯法(23.50%,82/349)和固体培养法敏感度(19.20%,67/349)(χ ²值分别为19.86、35.98,P值均<0.05),且Xpert法检测结果与临床确诊结果的一致性(K=0.080)高于夹层杯法(K=0.016)与固体培养法(K=0.033)。140份Xpert法检测阳性的标本中利福平耐药率(15.71%,22/140)与63份固体培养法检测阳性的标本中利福平耐药率(14.29%,9/63)差异无统计学意义(χ ²=0.07,P>0.05),且耐利福平患者一致。 结论 Xpert法检测技术操作简单、快捷、敏感度高,对综合性医院早期诊断、治疗结核病具有很高的临床应用价值。     

RNA恒温扩增实时荧光检测技术对结核性胸腔积液的诊断价值

目的 探讨RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing, SAT-TB)对结核性胸腔积液的诊断价值。方法 选取2014年6月至2016年6月聊城市传染病医院收治的有胸腔积液的患者210例作为研究对象,其中143例临床诊断为结核性胸膜炎,作为结核性胸膜炎组;其余67例患者作为对照组。应用涂片法、改良罗氏培养法、SAT-TB法检测研究对象胸腔积液标本,比较各检测方法的检测效能。结果 SAT-TB检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为36.36%(52/143)、98.51%(66/67)、98.11(52/53)、42.04%(66/157)。SAT-TB检测的敏感度明显高于涂片法[3.50%(5/143)]及罗氏培养法[20.28%(29/143)],差异均有统计学意义(χ ²=19.08,P=0.021;χ ²=9.12,P<0.01)。SAT-TB法检测完成时间为1~2h,罗氏培养法完成时间为6~8周。 结论 SAT-TB法能快速检测胸腔积液中的结核分枝杆菌,敏感度高于涂片法和罗氏培养法。     

不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 研究不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 收集2014年1月至2017年3月首都医科大学附属北京胸科医院收治的临床诊断为结核性胸膜炎的1955例患者,其中1232例(63.02%)有肺部实质病变,723例(36.98%)无肺部实质病变,通过抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片法”)、改良固体培养法和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“培养法”)和Xpert MTB/RIF技术(简称“Xpert法”)单独及联合检测患者痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率,并分析肺部实质病变对结核分枝杆菌检测阳性率的影响。结果 1955例结核性胸膜炎患者同时采用涂片法进行痰液和胸腔积液检测者中有535例(27.37%)患者、353例(18.06%)采用培养法、294例(15.04%)采用Xpert 法,188例(9.62%)患者同时进行了涂片法+培养法+Xpert法检查。涂片法、培养法和Xpert法单独检测胸腔积液结核分枝杆菌的阳性率[3.18%(17/535)、15.30%(54/353)、19.05%(56/294)]明显低于3种方法联合检测痰液+胸腔积液的阳性率[21.87%(117/535)、43.63%(154/353)、47.62%(140/294)](χ ²值分别为85.31、68.16、54.00,P值均<0.01)。在有肺部实质病变的患者中,涂片法、培养法、Xpert法单独检测胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性率[3.82% (13/340)、16.30% (37/227)和23.91% (44/184)]明显低于3种方法单独检测痰液的阳性率[30.29% (103/340)、51.10% (116/227)、60.33% (111/184)](χ ²值分别为84.19、61.53、50.04,P值均<0.01)和联合检测痰液+胸腔积液的阳性率[分别为32.06% (109/340)、55.95% (127/227)、67.93% (125/184)](χ ²值分别为92.06、77.32、71.79,P值均<0.01)。以培养为金标准,涂片法、培养法和Xpert法检测痰液+胸腔积液的敏感度[48.36%(59/122)、79.38%(77/97)、80.49%(66/82)]明显高于单独检测胸腔积液的敏感度[8.20%(10/122)、26.80%(26/97)、26.83%(22/82)](χ ²值分别为48.52、53.84、47.47,P值均<0.01);检测痰液+胸腔积液的特异度较单独检测胸腔积液有所下降,其中涂片法检测的差异无统计学意义(χ ²=3.65,P=0.056);而Xpert法和涂片法+Xpert法检测的差异均有统计学意义(χ ²=4.71,P=0.030;χ ²=5.67,P=0.017)。 结论 联合检测痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率高于单独检测,对于疑似结核性胸膜炎的患者,应尽量进行痰液标本的检测,以提高对结核性胸膜炎诊断的参考价值。     

三种实验室诊断技术对结核分枝杆菌复合群检出率及检测费用的比较研究

目的 评估液基夹层杯涂片法(采用集菌法;简称“涂片法”)、L-J固体培养法(简称“L-J培养法”)、结核分枝杆菌复合群核酸检测(采用恒温扩增法;简称“恒温扩增法”)对结核分枝杆菌复合群的检测效能。 方法 采用随机数字表法从湖南省120家结核病定点医院中抽取3家作为研究现场,分别为浏阳市人民医院、醴陵市湘东医院、桃江县人民医院。以3家医院2018年11月1日至12月31日就诊的存在可疑肺结核症状的628例患者为研究对象,对同一份痰标本同时采用涂片法、L-J培养法和恒温扩增法进行检测,分析3种检测方法对结核分枝杆菌复合群阳性检出率的差异;并依据《WS 288—2017 肺结核诊断》的诊断标准,以临床诊断肺结核作为参考标准,计算各种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致率;再以患者进行每项检测的实际支出费用为准,计算每种方法的检测费用。结核分枝杆菌复合群检出率在3种检测技术间的两两比较采用χ ²检验,检验水准α=0.05/3=0.017。 结果 628例疑似肺结核患者中,临床确诊为肺结核患者153例(24.4%),NTM肺病患者6例(1.0%)。3种技术检测结果显示,涂片法、L-J培养法和恒温扩增法的结核分枝杆菌复合群阳性检出率(排除6例NTM肺病患者)分别为13.5%(84/622)、14.0%(87/622)和12.2%(76/622),涂片法和L-J培养法,L-J培养法和恒温扩增法,涂片法和恒温扩增法之间比较,差异均无统计学意义(χ ²=1.32,P=0.359;χ ²=5.83,P=0.024;χ ²=4.00,P=0.077)。以临床诊断结果作为参考标准,排除6例非结核分枝杆菌肺病患者和32例培养污染的患者,涂片法、L-J培养法和恒温扩增法的敏感度分别为55.2%(80/145)、57.9%(84/145)、50.3%(73/145);特异度分别为99.6%(443/445)、99.3%(442/445)、99.8%(444/445);阳性预测值分别为97.6%(80/82)、96.6%(84/87)、98.6%(73/74);阴性预测值分别为87.2%(443/508)、87.9%(442/503)、86.0%(444/516);一致率分别为88.6%(523/590)、89.2%(526/590)、87.6%(517/590)。3种方法的检测费用,由低到高依次为L-J培养法[317.2元(29500/93)]、涂片法[813.8元(70800/87)]、恒温扩增法[1992.2元(153400/77)]。 结论 涂片法、L-J培养法、恒温扩增法的阳性检出率及其敏感度和特异度均未见差异。平均发现1例病原学阳性结核病患者的检测费用,L-J培养法较低,恒温扩增法较高。     

结核抗体IgG检测辅助诊断结核病的应用价值

目的 探讨结核抗体IgG检测(简称“IgG检测”)辅助诊断结核病的应用价值。方法 收集黑龙江省传染病防治院2015年7月至2016年5月期间,具有IgG检测、抗酸杆菌涂片(简称“涂片”)镜检、结核分枝杆菌液体培养(简称“液体培养”)、CT扫描及临床诊断等资料的住院及门诊患者,共计1494例,其中继发性肺结核1020例(肺结核组)、肺外结核54例(肺外结核组)和排除结核病的其他肺部疾病420例(其他肺病组),对比分析不同患者的临床资料。结果 1020例肺结核患者和54例肺外结核患者的IgG检测阳性率分别为73.33%(748/1020)、62.96%(34/54),高于涂片镜检[分别为43.24%(441/1020)、20.37%(11/54)]和液体培养[分别为61.37%(626/1020)、29.63%(16/54)](χ ²=190.02,P<0.001;χ ²=20.15, P<0.001; χ ²=33.18,P<0.001; χ ²=12.07,P=0.001);IgG检测肺结核与其他肺病患者的阳性率(6.90%,29/420)差异有统计学意义(χ ²=553.47,P<0.001)。IgG检测1440例肺部疾病患者的敏感度、特异度、总符合率分别为73.33%(748/1020)、93.10%(391/420)、79.10%(1139/1440)。1020例肺结核患者中,涂片镜检阳性者的IgG检测阳性率(86.85%,383/441)与涂片镜检阴性者的IgG检测阳性率(63.04%,365/579),以及液体培养阳性者的IgG检测阳性率(80.51%,504/626)与液体培养阴性者的IgG检测阳性率(61.93%,244/394)的差异均有统计学意义(χ ²值分别为72.56、42.70,P值均<0.001)。分别以涂片镜检和液体培养为标准,IgG检测1020例肺结核组患者的敏感度、特异度、总符合率分别为86.85%(383/441)和80.51%(504/626) 、36.96%(214/579)和38.07%(150/394)、58.53%(597/1020)和64.12%(654/1020)。1020例肺结核组患者中涂阴培阴(菌阴)肺结核患者为372例(36.47%),其IgG检测阳性率为61.29%(228/372),阳性患者的CT扫描表现以斑片、条索状阴影(83.77%,191/228)多见。420例其他肺病患者IgG检测假阳性率为6.90%(29/420),与肺部感染(62.07%,18/29)和肿瘤(13.79%,4/29)患者有少量交叉反应。 结论 结核抗体IgG检测具有较高的敏感度和特异度,对结核病,尤其是对菌阴肺结核和肺外结核检出具有较高的辅助诊断价值。     

液基细胞学技术在肺结核诊断中的应用价值

目的 探讨液基细胞学技术(thinprep cytologic test,TCT)在肺结核诊断中的应用价值。方法 按照患者纳入标准搜集2017年11月至2019年2月河北省张家口市传染病医院诊治的248例初诊为疑似肺结核的患者,最终临床综合诊断确诊为肺结核患者181例,非肺结核患者67例。由结核科医生根据相应临床表现及体征按照每例患者选用1种类型临床标本的原则共采集248份临床标本,包括101份晨痰标本、67份胸腔积液标本、80份支气管肺泡灌洗液标本。248份标本均行TCT、萋-尼抗酸染色涂片镜检(Ziehl-Neelsen 染色涂片法镜检,简称“Z-N涂片法”)、BACTEC^TM MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960法”)检测分枝杆菌。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,计数资料间的比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 TCT检测248份标本、痰液标本、胸腔积液标本、支气管肺泡灌洗液标本的阳性率[分别为53.63%(133/248)、67.33%(68/101)、17.91%(12/67)、66.25%(53/80)]均明显高于Z-N涂片法 [分别为25.81%(64/248)、36.63%(37/101)、7.46%(5/67)、27.50%(22/80)](χ²值分别为46.788、19.736、9.449、20.833,P值分别为0.000、0.000、0.002、0.000);但TCT检测痰标本的阳性率明显低于MGIT 960法[81.19%(82/101)](χ ²=5.076,P=0.024),而检测胸腔积液及支气管灌洗液标本的阳性率与MGIT 960法[分别为25.37%(17/67)、70.00%(56/80)]差异均无统计学意义(χ ²=1.100,P=0.294;χ ²=0.377,P=0.539)。以临床诊断为参考标准,TCT、Z-N染色法、MGIT 960法检测所有临床标本的敏感度分别为72.93%(132/181)、30.39%(55/181)、85.64%(155/181),一致率分别为79.84%(198/248)、48.79%(121/248)、89.52%(222/248),特异度分别为98.51%(66/67)、98.51%(66/67)、100.00%(67/67)。 结论 TCT检测痰液、胸腔积液及支气管肺泡灌洗液标本中分枝杆菌的阳性率、敏感度均高于Z-N涂片法,对诊断肺结核具有重要临床应用价值。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术辅助诊断肺外结核的临床价值

目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)辅助诊断肺外结核的价值。 方法 收集2016年1月至2017年12月期间重庆市公共卫生医疗救治中心结核科、普通外科与骨科收治的482例患者肺外样本(主要为病变部位的脓液或手术取出物),根据患者病历记录的临床诊断分为肺外结核(试验组,433例)和排除结核病的其他疾病(对照组,49例)。所有标本同步采用培养法(联合罗氏培养法和BACTEC MGIT 960液体培养法两种方法,只要其中一种培养阳性就视为“培养法”结果为阳性)和SAT检测结核分枝杆菌,并对培养法阳性、SAT检测结果阴性的标本进行菌种鉴定。分别与培养法、患者临床诊断比较,并分析SAT检测的敏感度、特异度和临床辅助诊断肺外结核的价值。 采用SPSS 13.0软件进行分析,计数资料采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 试验组127例培养法阳性的标本中TB-SAT检测阳性107例,阴性20例;306例培养法阴性的患者中TB-SAT检测阳性73例,阴性233例。对照组1例标本培养法阳性、TB-SAT检测阴性,其余48例标本培养法与TB-SAT检测均为阴性。以培养法为标准,SAT检测MTB的敏感度、特异度分别是83.6%(107/128)、79.4%(281/354)。与患者临床诊断相比,则培养法的敏感度、特异度分别为29.3%(127/433)、98.0%(48/49);SAT检测MTB的敏感度、特异度分别为41.6%(180/433)、100.0%(49/49)。培养法检测阳性率为29.3%(127/433),SAT法检测阳性率为41.6%(180/433),两者检测阳性率比较,差异有统计学意义(χ ²=14.17,P<0.05)。 结论 SAT检测技术辅助诊断肺外结核具有方便快速、检出率高、敏感度和特异度高等优势,具有较高的临床价值。     

新型胶颗粒芯片技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的 评估一种新型胶颗粒芯片技术[TruArray胶颗粒芯片(Gel element arrays),简称为“TruArray芯片”]用于痰标本中结核分枝杆菌及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的检测效能。 方法 选取2016年8月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的149例疑似肺结核患者痰标本,分别进行涂片镜检、BACTEC MGIT 960快速液体培养系统(简称“MGIT 960”)、TruArray芯片和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,对液体培养阳性菌株进行测序菌种鉴定、MGIT 960药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和耐药相关基因测序,分析TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的检测效能。 结果 液体培养、GeneXpert和TruArray芯片对结核分枝杆菌的检出率分别为32.2%(48/149),53.7%(80/149)和57.0%(85/149),TruArray芯片和GeneXpert两种方法检出率差异无统计学意义(χ ²=0.34,P=0.560),但TruArray芯片检测阳性率高于液体培养(χ ²=18.59,P<0.01)。以MGIT 960试验结果为标准,TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.9%(47/48)和61.4%(62/101);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.5%(78/80)和88.4%(61/69)。以MGIT 960药敏试验结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为91.7%(11/12)和96.8%(30/31);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度为85.0%(17/20)和97.9%(47/48);以耐药基因测序结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为92.3%(12/13)和100.0%(30/30)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,TruArray芯片技术检测INH耐药的敏感度和特异度分别为78.6%(11/14)和93.8%(30/32);以耐药基因测序结果为判断标准,TruArray芯片检测INH耐药的敏感度和特异度分别为100.0%(11/11)和94.3%(33/35)。 结论 TruArray芯片检测技术快速、可靠,在结核病及耐多药结核病快速诊断方面具有非常好的应用前景。     

DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的价值探讨

目的评价DNA微阵列芯片法快速检测耐药结核分枝杆菌的效果。方法对125份结核分枝杆菌痰涂片阳性标本和40份结核分枝杆菌传统培养阳性菌株样本,采用DNA微阵列芯片法进行异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)耐药性快速检测。同时以传统结核杆菌药物敏感试验方法作为金标准,对DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的一致率进行评价分析。结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对INH耐药的敏感度为87.5%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为98.8%。DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对RFP耐药的敏感度为83.3%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为99.4%。DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐多药的敏感度为100%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为100%。结论 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性与传统药物敏感法有较高的一致率,较为可靠,且检测所需时间短,可以作为临床肺结核耐药性的快速筛查方法。     

术后标本行分子生物学检测对结核病患者诊疗的价值

目的 初步探讨分子生物学检测技术在结核病患者术后快速诊断中的价值。方法 回顾性分析2015年1月至2018年2月期间在上海市公共卫生临床中心胸外科接受手术治疗、临床资料齐全的170例结核病患者。170例患者中,男100例(58.82%)、女70例(41.18%); 1~18岁年龄组18例(10.59%)、19~65岁年龄组142例(83.53%)、66~82岁年龄组10例(5.88%);肺结核39例(22.94%)、肺外结核131例(77.06%)。取术后标本采用PCR膜条杂交及二代测序技术的分子生物学方法进行菌种鉴定和耐药相关基因检测。所有患者术前进行晨痰及穿刺活检,或者术中取样进行抗酸染色涂片检测。在进行痰涂片的同时,进行分枝杆菌改良罗氏固体培养、BACTEC MGIT 960快速培养及药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。结果 (1)痰液抗酸染色阳性率为9.41%(16/170),其中肺结核患者的阳性率为23.08%(9/39), 而穿刺活检或者术中取样(脓液或分泌物等)的抗酸染色阳性率为51.76%(88/170)。(2)分枝杆菌培养阳性率为27.65%(47/170),其中耐药结核病检出率为14.12%(24/170)。(3)术后标本分子生物学菌种鉴定阳性率为51.76%(88/170);PCR膜条杂交显示,7例为NTM,4例培养联合MPB64抗原检测结果显示为NTM,但未鉴定到菌种;3例培养结果为阴性,无法进行MPB64抗原检测。7例标本进行了分子生物学菌种鉴定,1例为瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌复合感染,3例为胞内分枝杆菌, 1例为海分枝杆菌, 1例为鸟分枝杆菌,1例为脓肿分枝杆菌。(4)除去7例NTM感染患者,剩余的163例进行了分子生物学耐药基因检测,对一线抗结核药物耐药基因的检出率为54.60%(89/163), 对二线抗结核药物耐药基因的检出率为49.69%(81/163);与培养后药敏试验结果相比,药敏试验阳性的标本中有29.79%(14/47)在分子生物学耐药基因检测时的结果为阴性,而分子生物学耐药基因检测与药敏试验检测结果阳性的一致性为90.00%(27/30);分子生物学耐药基因检测与BACTEC MGIT 960快速培养药敏试验联合判断对耐药结核病的检出率为63.19%(103/163)。结论 分子生物学检测技术在术后标本的快速诊断中具有重要的价值,可区分结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌及是否耐药,为结核病患者术后进一步诊治提供重要参考。     

基因芯片技术在肺结核快速诊断及分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值

目的探讨基因芯片技术诊断肺结核及鉴定分枝杆菌菌种的应用价值。方法搜集2017年1-12月在黑龙江省传染病防治院结核科就诊并连续3次痰涂片检测为阳性的1248例疑似肺结核患者为研究对象。每例患者均留取清晨痰液标本3~5ml,对痰液标本分别进行BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")培养和基因芯片检测。以MGIT 960培养结果作为参照,分析基因芯片法的检测效能。结果1248例患者痰标本经MGIT960培养阳性1224例(98.08%),基因芯片法检测阳性1212例(97.11%)。以MGIT 960培养结果作为参照,基因芯片法检测的敏感度为98.94%(1211/1224),特异度为95.83%(23/24),符合率为98.88%(1234/1248),Kappa值为0.76。1212例基因芯片法检测阳性的患者中非结核分枝杆菌(NTM)感染60例(4.95%),结核分枝杆菌感染1152例(95.05%)。60例NTM感染者中比较常见的菌种是胞内分枝杆菌(43.33%,26/60)。结论基因芯片检测与MGIT 960培养结果的一致性较好,可以快速、准确地区分结核分枝杆菌复合群和NTM,并可进一步进行菌种鉴定。     

分子生物学和液体培养方法提高综合医院结核病病原学诊断能力的价值

目的 分析应用分子生物学检测及液体培养法对提升综合医院结核病病原学诊断能力的价值。方法 提取中日友好医院病案系统中2014年3月至2018年12月全院各科室诊断为肺结核且上报传染病卡的1438例住院患者的诊断依据、病原学检测方法及结果、病原学送检时间及结果返回时间、入院时间及出院时间等信息。分析该院2014—2016年仅开展抗酸染色和分枝杆菌固体培养法(罗氏培养法)时与2017—2018年开展分子生物学检测[GeneXpert MTB/RIF检测(简称“GeneXpert检测”)]和液体培养法(BACTEC MGIT 960分枝杆菌快速液体培养)后肺结核患者病原学诊断能力和确诊时间的变化情况。结果 2014年该院肺结核患者病原学检测阳性率仅为19.83%(24/121),2018年升至53.89%(256/475)。分子生物学检测及液体培养法开展前后,肺结核患者病原学检测阳性率分别为22.68%(132/582)和49.65%(425/856),差异有统计学意义(χ²=106.184,P=0.000)。开展GeneXpert检测后(2017—2018年),该院经检测确诊的肺结核患者中利福平耐药比例为7.45%(28/376),而在开展前无耐药结核病诊断能力。开展分子生物学和液体培养法检测后(2017—2018年),肺结核患者确诊时间为7.00(3.00,12.00)d 明显短于开展之前(2014—2016年)的10.00(6.00,14.00)d,差异有统计学意义(Z=-7.815,P=0.000 )。结论 分子生物学和液体培养方法的应用可提高综合医院结核病病原学诊断能力,缩短患者确诊时间。     

三种实验室技术在涂阳患者中诊断肺结核及其耐药性的效能分析

目的 探讨BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和荧光PCR熔解曲线技术在涂阳肺结核患者中的检测效能和应用意义。方法 回顾性分析2016年10月至2018年2月沈阳市胸科医院收治的所有涂片阳性患者411例,经结核分枝杆菌抗原检测(MPB64检测)阳性并符合临床诊断标准,确诊肺结核患者392例,MPB64检测阴性且经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌感染患者19例,比较MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对涂阳肺结核患者的检测效能;以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为参考标准,分别比较三种方法对耐药表型和耐药基因的检测效能。结果 在临床确诊的392例涂阳肺结核患者中,MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对痰标本检测的敏感度分别为96.17%(377/392)、99.74%(391/392)和92.09%(361/392),特异度均为100.00%(19/19)。以比例法药敏试验为参考标准,GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对利福平(RFP)耐药检测的敏感度相同,均为94.44%(119/126);荧光PCR熔解曲线技术在异烟肼(INH)、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药检测上的敏感度分别为74.84%(116/155)、83.33%(75/90)、44.00%(22/50);MGIT 960培养对RFP、INH、Lfx和Am耐药检测的敏感度分别为96.03%(121/126)、98.06%(152/155)、100.00%(50/50)、96.67%(87/90)。结论 GeneXpert法简便、快捷、安全,能够快速诊断肺结核及检测RFP是否耐药。荧光PCR熔解曲线技术可检测4种药物耐药情况,检测时间短,临床快速诊断耐多药肺结核/广泛耐药结核病,对指导临床用药具有重要意义。MGIT 960培养与比例法药敏试验耐药检测的一致性极高,是目前快速诊断结核病及一线药耐药检测的常用方法,可以缩短表型药敏试验时间。     

不同方法检测痰和肺泡灌洗液中结核杆菌的分析

目的对比分析不同检测方法和不同检测标本在结核杆菌检测结果中的意义。方法选取本科室收治的初次我院就诊并临床诊断符合"肺结核"标准的158例患者的痰液和肺泡灌洗液,对所有的标本均进行两次抗酸染色涂片、两次快速培养检测结核杆菌(1次及1次以上阳性均记为阳性)。结果 1.快速培养法的结核杆菌检出率高于抗酸染色涂片法;2.肺泡灌洗液的结核杆菌阳性率均高于痰液。结论快速培养法是临床工作中确诊结核病的首选方法,肺泡灌洗液能有效提高肺结核的诊断率。     

蛋白芯片技术与其他4种检测方法对结核病诊断价值的比较

目的通过比较分析,评估蛋白芯片技术对结核病的诊断价值。方法选择655例结核病患者按病变部位分为肺结核组、肺外结核组和肺结核并肺外结核组,以非结核患者作为对照。应用蛋白芯片技术、γ-干扰素释放试验(TB-IGRA)、TB DNA的PCR检测法(TB-PCR)、集菌涂片法、结核菌培养法5种检测方法对各组样本进行同步平行检测,并比较蛋白芯片技术与其他4种方法的检测阳性率、灵敏度、特异度等。结果上述5种检测方法在结核组的阳性率均显著高于非结核对照组,结核组和非结核对照组分别为66.26%、16.53%(蛋白芯片技术);91.30%、10.08%(TB-IGRA);67.02%、30.24%(TBPCR);25.04%、0.00%(集菌涂片法);25.65%、0.00%(结核菌培养法),差异均有统计学意义。蛋白芯片技术对结核的检出阳性率及灵敏度显著高于集菌涂片法和结核菌培养法,与TB-PCR检测阳性率类似,显著低于TB-IGRA。蛋白芯片技术的特异度及阳性预测值显著高于TB-PCR,显著低于集菌涂片法和结核菌培养;特异度与TB-IGRA类似,阳性预测值显著低于TB-IGRA;阴性预测值与TB-PCR阳性率类似,显著高于集菌涂片法和结核菌培养法,显著低于TB-IGRA,差异均有统计学意义(P0.05)。结论蛋白芯片技术和TB-IGRA作为诊断结核敏感度及特异度均较高的检测技术,二者取长补短,优势互补,具有良好的临床应用价值。     

环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用评估

目的 进行环介导等温扩增法（LAMP法）快速检测结核分枝杆菌的临床验证与应用,评估该方法在结核病临床诊断中的效能。方法 选取广东6地市专业结核病防治机构（简称“结防机构”）的肺部不同疾病及健康人员的痰标本2129份,分别采用直接涂片法、罗氏固体培养法及LAMP法检测痰标本中结核分枝杆菌;另广州、汕头两市337例结核病患者的痰标本浓缩处理后进行实时荧光定量（qPCR）及LAMP两种方法检测。 结果 2129例痰标本中,直接涂片法、罗氏固体培养法和LAMP法的阳性检出率分别为13.2%（282/2129）、21.7%（463/2129）和20.3%(432/2129);同罗氏培养法相比,LAMP法灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为89.1%(432/485)、95.5%(1570/1644)、85.4%(432/506)和96.7%(1570/1623);337例浓缩处理后的痰标本qPCR阳性率为35.0% (118/337),LAMP阳性率为35.9% (121/337);LAMP法同直接涂片法检测、罗氏固体培养法和qPCR法比较,检测结果实际一致率分别为87.9%（Kappa值＝0.612）、96.1%（Kappa值＝0.89）和91.4%（Kappa值＝0.812）。 结论 LAMP法用于痰标本中结核分枝杆菌检测,其效能同罗氏培养法及qPCR法相当,同直接涂片法相比,LAMP法能够大幅提高阳性检出率,具有很好的临床应用和推广前景。     

用DNA 芯片快速检测结核分支杆菌对利福平的耐药性

目的：研制一种新型DNA芯片，用于结核分支杆菌对利福平的耐药性快速检测，方法：根据结核分支杆菌rpoB基因的序列信息设计探针并制作DNA芯片，PCR扩增并荧光标记包含结核分支杆菌rpoB基因突变热点的目的片段，与芯片杂交，同时以DNA测序法为对照，结果：17株随机抽取的耐利福平结核分支杆菌菌株有14株可用DNA芯片检测出来，效率可达83％，患者痰液中少量的DNA足够进行芯片检测，无须进行培养。结论：用DNA芯片来检测结核分支杆菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和灵敏度，该法快速，精确，可以应用于临床耐药性检测。     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌链霉素耐药性的研究

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐链霉素rpsl和rrs基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpsl和rrs基因序列设计探针并制作DNA芯片,用TAMRA(四甲基罗丹明)标记的引物扩增结核分枝杆菌rpsl和rrs基因突变热点的片段,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果144株结核分枝杆菌临床分离株中,42株链霉素敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同;102株链霉素耐药株中有79株检测到rpsl基因突变77.5%(79/102),其中74株为43位密码子AAG→AGG突变,5株为88位密码子AAG→AGG突变;rrs基因突变5%(5/102),4株为513位密码子A→C突变,1株为516位密码子C→T突变,均与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致,余18株未检测到突变。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐链霉素分离株的rpsl和rrs基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。