基于“肺与大肠相表里”研究清半夏多糖对哮喘模型大鼠结肠水液代谢的影响

目的观察清半夏多糖对哮喘模型大鼠结肠水通道蛋白5(Aquaporin 5,AQP5)mRNA表达的影响,探讨清半夏多糖作为"大分子"多糖类成分,基于"肺与大肠相表里",对哮喘大鼠结肠水液代谢调节的作用机制。方法 48只SPF级Wistar大鼠,随机分至正常对照组、哮喘模型组、清半夏多糖高、中、低剂量组。采用鸡卵清蛋白(OVA)诱导致敏、激发,建立哮喘大鼠模型。PowerLab数据采集分析系统收集各组大鼠血氧饱和度,记录造模前后体质量变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清、肠黏液中核因子κB(NF-κB)的含量;苏木素-伊红(HE)、高碘酸-雪夫(PAS)染色观察结肠组织病理改变和杯状细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测结肠AQP5 mRNA变化。结果哮喘模型组大鼠的血氧饱和度显著降低(P0.01);阳性药组和清半夏多糖中剂量组大鼠血氧饱和度均有显著升高(P0.01);哮喘模型组大鼠体质量变化不大,而正常对照组和阳性药组体质量持续显著上升(P0.01),清半夏多糖各组大鼠体质量有上升趋势。ELISA结果显示,哮喘模型组大鼠血清和肠黏液NF-κB含量显著升高(P0.01);而阳性药组、清半夏多糖高剂量组能显著降低哮喘模型大鼠血清、肠黏液的NF-κB的含量(P0.01,P0.05),清半夏多糖中剂量能显著降低哮喘大鼠肠黏液中NF-κB的含量(P0.01)。HE染色结果发现,与正常对照组比较,哮喘模型组大鼠结肠组织出现明显病理改变,阳性药组、清半夏多糖各组与哮喘模型组比较具有缓解作用;PAS染色结果发现与哮喘模型组比较,阳性药组、清半夏多糖各组结肠杯状数量明显增多、染色加深。qPCR结果显示,阳性药组,清半夏多糖各组与哮喘模型组比较,AQP5 mRNA均有明显降低(P0.01)。结论基于"肺与大肠相表里"理论,研究发现清半夏多糖可能通过对哮喘模型大鼠结肠AQP5 mRNA的表达从而影响结肠黏液生成,进而干预哮喘进程,说明清半夏多糖可能是原药材发挥"燥湿化痰"的物质作用基础。     

黄芪对哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液γ-干扰素及肺组织T—bet表达的影响

目的：观察黄芪注射液（Radix Astragali injection，RA）对哮喘大鼠肺泡灌洗液γ干扰素（IFN—γ）及肺组织T—bet表达的影响。方法：用卵清蛋白建立哮喘模型，SPF级SD雄性大鼠24只随机分为3组：正常对照组、哮喘模型组、黄芪组。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞记数及分类；采取双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IFN—γ的含量；应用免疫组化及流式细胞术测定肺组织中T-bet的表达。结果：1、哮喘组BALF中EOS占细胞总数百分比（EOS％）高于正常组及黄芪组（P〈0．01），2、哮喘组BALF中IFN—γ水平低于正常组（P〈0．01），RA组IFN-γ水平比哮喘组增高（P〈0．01），3、免疫组化及流式细胞术显示，与正常组相比，哮喘组T-bet表达降低（P〈0．01），RA组T-bet表达增高，与哮喘组相比差异有显著性（P〈0．01）。结论：IFN—γ，T-bet的低表达参与哮喘的病理生理过程；黄芪可使IFN—γ及T-bet表达上调，可能为其抑制哮喘呼吸道炎症的重要作用机制之一。     

消喘膏贴敷对哮喘豚鼠Thl／Th2类细胞因子的影响

目的：观察消喘膏贴敷对哮喘琢鼠Thl／Th2类细胞因子的影响。方法：采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏加雾化吸入激发的方法复制豚鼠哮喘模型，外用贴敷给药，测定哮喘模型组和消喘膏组豚鼠用药前后引喘潜伏期的变化；光镜下检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸粒细胞(EOS)数量，用酶联免疫吸附法测定BALF上清中白细胞介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)水平，并进行组间比较。结果：(1)贴敷后消喘膏组豚鼠引喘潜伏期延长，与哮喘模型组相比有显著差异(P＜0．01)；(2)消喘膏组豚鼠BALF中细胞总数和EOS计数与哮喘模型组相比减少(P＜0．01)，但与正常对照组相比仍增高(P＜0．01)；(3)消喘膏组豚鼠BALF上清中IL-4水平与哮喘模型组相比降低(P＜0．01)，但与正常对照组相比仍增高(P＜0．01)；IFN—γ水平略增高，但与哮喘模型组及正常对照组相比均无显著差异(P＞0．05)；(4)消喘膏组IL-4/INF-γ比值低于哮喘模型组(P＜0．01)，但仍高于正常对照组(P＜0．01)。结论：消喘膏贴敷后可将哮喘豚鼠模型中以IL-4升高为主的Th2优势逆转为以IFN-γ为主的Thl优势，进而减轻哮喘豚鼠的气道炎症。     

生品和蜜炙桑白皮对哮喘大鼠血清NO,LPO,IL-4和IFN-γ的影响

目的:探讨生品和蜜炙桑白皮对哮喘大鼠血清中一氧化氮(NO),脂质过氧化物(LPO),白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的影响。方法:Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,阳性药地塞米松0.4 mg·kg-1组,生品和蜜炙桑白皮1.08,3.24 g·kg-1组。造模大鼠于实验第1,7天ip卵蛋白混悬液1 m L致敏,第15天起雾化吸入1%卵蛋白生理盐水,激发5d。从造模之日起开始ig给药,共20 d。观察大鼠10 min内出现Ⅱ级哮喘的潜伏期,肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数(EOS),血清中NO,LPO,IL-4和IFN-γ的水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠哮喘反应的潜伏期显著缩短,BALF中EOS及血清NO,LPO,IL-4含量增加(P0.01),血清IFN-γ含量减少(P0.001)。与模型组相比,桑白皮蜜炙品、生品3.24 g·kg-1剂量组大鼠显著延长哮喘反应的潜伏期、减少BALF中EOS及血清NO,LPO,IL-4含量(P0.05)、升高血清IFN-γ(P0.01)。桑白皮生品与蜜炙品之间各项指标均无显著差异。结论:桑白皮蜜炙品和生品均能明显降低哮喘大鼠BALF中炎性细胞数量,影响细胞因子水平变化,从而减轻气道炎症反应,改善哮喘症状。     

清热润燥方对哮喘小鼠气道反应及炎性反应影响的实验研究

目的:观察清热润燥口服液对哮喘小鼠模型的气道反应、肺组织病理学、气道炎症中IL-13诱导表达的黏蛋白5AC(MUC5AC)和水液代谢的水通道蛋白(AQP5)等因子的影响,探讨“润养与通利”辨治哮喘的理论。方法:采用卵蛋白制造小鼠哮喘模型。将72只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组,清热润燥口服液高、中、低剂量组,各组药物作用后观察相关指标。结果:与模型组比较,清热润燥低剂量组吸气峰流速减少,气道炎症稍好转,BALF中IL-13、MUC5AC均减少; 清热润燥中、高剂量组及阳性药物组吸气峰流速增加、气道炎症好转,IL-13、MUC5AC均减少,AQP5增加。结论:清热润燥方在改善哮喘小鼠气道炎性反应、减少MUC5AC及增加AQP5的表达方面具有积极作用。     

苓甘五味姜辛汤对哮喘大鼠中p-CREB、MUC5ACmRNA的表达和蛋白相对表达量的影响

目的通过检测苓甘五味姜辛汤治疗后寒饮伏肺型哮喘模型大鼠中磷酸化的CREB(p-CREB)和黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA的表达和蛋白相对表达量的变化,探讨苓甘五味姜辛汤干预寒饮伏肺型哮喘的作用机制。方法采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射和雾化激发+吹冷风、饮冷水、水浴游泳等寒冷刺激建立动物模型。将90只大鼠随机分为空白组、模型组、苓甘五味姜辛汤低、中、高剂量组及地塞米松组,经药物干预后采用酶联免疫法检测各组大鼠中p-CREB和MUC5AC的含量,RT-q PCR法和Western blot法检测各组大鼠中p-CREB、MUC5AC mRNA的表达和蛋白的相对表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠中p-CREB含量降低(P0.05),MUC5AC含量升高(P0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠中p-CREB含量升高(P0.05),MUC5AC含量降低(P0.05),其中苓甘五味姜辛汤高剂量组作用显著(P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠中p-CREBmRNA的表达和蛋白的相对表达量明显降低(P0.05),MUC5ACmRNA的表达和蛋白的相对表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠中p-CREBmRNA的表达和蛋白的相对表达量升高(P0.05),MUC5ACmRNA的表达和蛋白的相对表达量明显降低(P0.05)。其中苓甘五味姜辛汤高剂量组和西药组作用最显著(P0.05)。结论具有温肺化饮功效的苓甘五味姜辛汤可以调节寒饮伏肺型哮喘模型大鼠p-CREB和MUC5AC的正常分泌,增加气道液体的分泌,从而起到治疗哮喘的作用。     

痰热清注射液对COPD大鼠体内炎症因子及气道黏液高分泌的影响

目的:观察痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响,初步探讨痰热清注射液通过炎性介质路径干预COPD大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法:清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、模型组、痰热清组,每组20只,除空白组外,其余2组采用脂多糖(LPS)联合烟熏建立COPD大鼠模型。痰热清组腹腔注射痰热清注射液,空白组和模型组同时给予等量生理盐水腹腔注射。检测大鼠肺功能,肺组织切片行HE染色,测定肺组织匀浆中IL-8、TNF-α及肺泡灌洗液中MUC5AC的含量。结果:与空白组比较,模型组和痰热清组大鼠体量明显下降,模型组气道阻力(RI)和肺总量(TLC)显著升高,第0.1秒用力呼气量与用力肺活量的比值(FEV0.1/FVC)显著降低,肺泡灌洗液中MUC5AC的含量和肺组织匀浆中的炎症因子IL-8、TNF-α显著升高,差异均有统计学意义(P0.01);肺动态顺应性(Cdyn)无显著变化。与模型组比较,痰热清组大鼠体量增加,RI和TLC下降,FEV0.1/FVC升高,MUC5AC和TNF-α含量显著下降,差异均有统计学意义(P0.01);IL-8和Cdyn无显著变化。结论:痰热清注射液可以通过抑制炎症介质的释放、调节MUC5AC分泌,来减轻气道炎症,从而改善气道黏液高分泌症状,在一定程度上起到延缓肺功能恶化的作用。     

苏麻胶囊对哮喘大鼠肺泡灌洗液中白细胞及IL-5的影响

目的 :探讨苏麻胶囊防治哮喘的部分作用机制。方法 :6 0只大鼠随机均分为正常对照组、模型对照组、氨茶碱组、苏麻高剂量组、苏麻低剂量组 ,采用卵清白蛋白 (OA)等致敏大鼠哮喘模型 ,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数与分类的变化及IL - 5含量的改变。结果 :苏麻胶囊可有效地降低BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞 (EOS)含量 ,抑制BALF中IL - 5含量的增高。结论 :苏麻胶囊可通过降低细胞因子IL - 5含量而抑制EOS的活化和趋化作用 ,具有良好的抑制气道炎症反应的作用。     

舒肺贴对COPD大鼠肺组织IL-8、TNF-α及黏蛋白MUC5AC表达的影响

目的探讨舒肺贴(芫花、芥子、延胡索等)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,以及肺组织黏蛋白基因MUC5AC表达的影响。方法将80只健康SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、舒肺贴组、氨茶碱组。采用烟熏联合脂多糖(LPS)感染法建立大鼠慢阻肺模型,AniRes2005动物肺功能分析系统测定大鼠肺功能,ELISA法检测各组大鼠血清、BALF中IL-8、TNF-α含有量,免疫组织化学染色观察黏蛋白基因MUC5AC的表达。结果 ELISA检测结果显示,模型组、舒肺贴组和氨茶碱组大鼠BALF和血清中IL-8、TNF-α含有量明显高于正常对照组,舒肺贴组和氨茶碱组与模型组相比均显著降低。相比舒肺贴组,氨茶碱组在降低TNF-α含有量方面效果更显著,但两者在降低IL-8含有量方面效果无明显差异。免疫组化结果显示,黏蛋白基因MUC5AC主要表达于支气管管腔内,其次是上皮、间质组织,淋巴组织也有少量表达。模型组积分光密度IOD值较正常对照组升高,而舒肺贴组、氨茶碱组较模型组明显降低。结论舒肺贴可以明显改善慢阻肺大鼠的肺通气功能,降低炎症因子IL-8、TNF-α含有量,减轻气道及肺组织炎症,下调MUC5AC黏蛋白,对气道黏蛋白高分泌有明显的抑制作用。     

麦冬有效部位对支原体感染小鼠肺组织黏蛋白MUC5ac表达的影响

目的:通过实验研究麦冬有效部位对肺炎支原体(MP)感染小鼠的肺组织黏蛋白5ac(MUC5ac)表达及分泌的影响。方法:将100只BALB/c小鼠,分为正常对照组,模型组,阿奇霉素组,养阴清肺组,麦冬多糖高、中、低剂量组,麦冬皂苷高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组采用MP滴鼻法造模,连续造模3 d后,各组开始灌胃给药,每天1次,阿奇霉素组连续给药5 d,其他组连续给药6 d后,收集肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中MUC5ac的蛋白含量;采集小鼠肺组织,PCR法测定肺组织中MUC5ac mRNA的表达。结果:1)肺组织MUC5ac mRNA的表达:与正常组相比,模型组肺组织MUC5ac mRNA的表达极显著上升(P<0.01);与模型组对比,阿奇霉素的表达量降低,具有极显著性(P<0.01);麦冬多糖高、中、低剂量组,养阴清肺组及麦冬皂苷高剂量组的表达量降低,具有显著性差异(P<0.05)。2)BALF MUC5ac的含量:与正常组对比模型组含量显著增加(P<0.01),与模型组对比,阿奇霉素组、麦冬皂苷高剂量组含量显著减少(P<0.01),麦冬皂苷中剂量组和麦冬多糖高、中剂量组含量减少,具有显著性差异(P<0.05)。结论:麦冬有效部位可下调MUC5ac蛋白的表达及分泌。     

爱罗咳喘宁对COPD大鼠气道水通道蛋白5和黏蛋白5AC基因表达的影响

目的:观察爱罗咳喘宁对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型气管、支气管组织中水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)与黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)表达的影响。方法:采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加烟雾诱导COPD大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、急支糖浆组、爱罗咳喘宁低、中、高剂量组。正常组、模型组ig生理盐水(15.52 m L·kg-1·d-1),急支糖浆组给予太极急支糖浆(10 m L·kg-1·d-1)灌胃,爱罗咳喘宁低、中、高剂量组分别ig(7.75,15.52,31.04 g·kg-1·d-1),连续14 d。原位杂交和免疫组化检测AQP5与MUC5AC在气管、支气管组织中的原位表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠AQP5 mRNA和蛋白表达均减弱,MUC5AC mRNA和蛋白表达均增强,AQP5蛋白与MUC5AC蛋白表达呈负相关(r=-0.50,P<0.01);与模型组相比,爱罗咳喘宁中剂量组AQP5基因表达增强,MUC5AC基因表达减弱,AQP5蛋白与MUC5AC蛋白表达呈负相关(r=-0.45,P<0.01)。结论:爱罗咳喘宁调节COPD气道黏液高分泌的作用机制可能与上调AQP5、抑制MUC5AC基因表达有关。     

针刺对干眼症患者泪液黏蛋白5AC表达的影响

目的 观察针刺治疗干眼症的疗效及对泪液黏蛋白(Mucin,MUC)5AC表达的影响.方法 50例(100只眼)干眼症患者采用针刺局部和远端相结合的方法,取穴睛明、攒竹、太阳、四白等,治疗前后观察患者干眼症状,并行泪液分泌试验(Schirmer Ⅰ test,Sit)、泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)检查,免疫组化方法检测泪液黏蛋白5AC的表达量.结果 泪液分泌量(mrn/5 min):治疗前5.2±2.6,治疗后7.3±2.1 (t=2.71,P=0.03).泪膜破裂时间(s):治疗前3.7±1.4,治疗后6.9±3.8(t=2.59,P=0.04).泪液黏蛋白5AC表达量(μg/ml):治疗前0.77±0.13,治疗后0.99±0.11 (t=1.98,P=0.05).临床疗效:显效43只眼,有效46只眼,无效11只眼,总有效率为89％.结论 针刺治疗可以促进泪液黏蛋白5AC的表达,提高泪膜稳定性,明显改善干眼症状.     

鼻敏宁颗粒对寒证变应性鼻炎大鼠的作用机制研究

目的：探索鼻敏宁颗粒对寒证变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中黏蛋白5B（MUC5B）、黏蛋白5AC（MUC5AC）、Toll样受体2（TLR2）蛋白表达情况。方法：将60只大鼠随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组、鼻敏宁低、中、高剂量组。造模成功后,鼻敏宁颗粒高剂量组大鼠予鼻敏宁颗粒2 g/kg,鼻敏宁颗粒中剂量组1 g/kg,鼻敏宁颗粒低剂量组0.5 g/kg,阳性对照组予辛芩颗粒5 g/kg,2 mL/次,空白对照组与模型组给予同等容积的0.9%氯化钠注射液灌胃,均为每天1次,连续7 d。应用免疫组织化学定位检测鼻黏膜上皮细胞TLR2蛋白表达情况,应用蛋白质印迹法（WB）检测鼻黏膜上皮组织MUC5B及MUC5AC蛋白表达量。结果：鼻敏宁低中高剂量组中阳性染色明显减弱,模型组与其他组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,中剂量组与高剂量组MUC5B及MUC5AC含量显著降低,有明显的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：鼻敏宁颗粒可通过降低黏蛋白5B及黏蛋白5AC的表达,TLR2蛋白的表达,减轻大鼠鼻黏膜免疫损伤,达到治疗变应性鼻炎的作用。     

Kaempferol and quercetin,essential ingredients in Ginkgo biloba extract,inhibit interleukin‐1β‐induced MUC5AC gene expression in human airway epithelial cells

According to our previous study, Ginkgo biloba extract (GBE) suppresses IL‐1β‐induced MUC5AC gene expression in NCI‐H292 cells via the ERK and p38 MAPK pathways. This study sought to identify which ingredients of GBE suppress IL‐1β‐induced MUC5AC gene expression in NCI‐H292 cells and to examine which MAPKs are related to MUC5AC gene suppression for each ingredient. After the cells were pretreated with each ingredient and treated with IL‐1β (10 ng/mL), MUC5AC mRNA expression was determined by RT‐PCR and real‐time PCR. The results showed that kaempferol (KP) and quercetin (QC) suppressed MUC5AC mRNA expression in a dose‐dependent manner, both with significant inhibition starting from 40 µm (equal concentration to about a twelfth or thirteenth dose of GBE). MAPK proteins were determined by western blot analysis after pretreatment with KP, QC and GBE. All three suppressed the phosphorylation of ERK and p38 kinases. In conclusion, the data suggested that KP and QC, essential ingredients in GBE, may overcome the dose problem of GBE and play a valuable role, clinically, in controlling mucin hypersecretion in airway inflammation. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

中药调节慢性阻塞性肺疾病黏蛋白5AC表达的研究进展

综述中药调节慢性阻塞性肺疾病黏蛋白5AC表达的研究进展。黏蛋白5AC在慢性阻塞性肺疾病中处于高表达状态,半夏、苦杏仁、桔梗等单味中药、黄酮类、皂苷类等单味中药提取物及清金化痰汤等中药复方被证实可以通过多种途径调节黏蛋白5AC高表达,为中药治疗慢阻肺提供了新思路。