华支睾吸虫生活史在实验室的建立

目的 构建华支睾吸虫生活史的室内生态系统。 方法 解剖自然感染华支睾吸虫的家猫,收集华支睾吸虫虫卵,放入养殖缸内自然感染纹沼螺和长角涵螺,待尾蚴发育成熟,分离阳性螺,放入养殖缸内与各种鱼类同缸饲养,使阳性螺释放的尾蚴自然感染缸内的各种鱼类。螺类释放尾蚴后的第30天开始,定时检查鱼类的感染情况,分别采用鱼肉压片法和消化法检查各种鱼体内的感染率和感染度。分离、收集鱼肉中囊蚴感染家猫和SD大鼠。 结果 水温在24.3～37.2 ℃时,尾蚴发育成熟逸出螺体的时间需95 d。纹沼螺的感染率为12.5%（25/200）,长角涵螺为18%（9/50）。水温在20 ℃以下时,螺体内尾蚴停止逸出。鱼类感染尾蚴后形成囊蚴的时间为30 d,至囊蚴完全成熟需45 d。麦穗鱼、草鱼、鳑鮍鱼、鳙鱼、鲮鱼、鲫鱼、鲤鱼和罗非鱼体内囊蚴的感染度不尽相同,每克鱼肉含囊蚴数分别为1 792、16、8、6、5、4、4和2个。将鱼体内分离的囊蚴分别感染大鼠和家猫均获得成虫。 结论 华支睾吸虫生活史室内生态系统构建成功。     

华支睾吸虫的组织化学研究

用组织化学方法观察华支睾吸虫成虫各种物质的分布和定位。结果其糖原、蛋白质、脂肪、核酸ACP、酚酶的分布与文献记载基本一致,但ACP的分布较为局限,活性低下。虫体的SDH,MDH、MAO、G-6-P、G-ATP等五种酶系首次记载,前三者的分布以皮层、皮下,睾丸、卵巢与吸盘为主,SDH和MDH的活性较MAO强,G-6-P与糖原的分布颇为一致,主要在虫体的实质组织和皮下肌层,在皮层与皮下肌层的Ca-ATP活性较强。     

华支睾吸虫尾蚴扫电镜观察

The surface structure of Clonorchis sinensis cercariae was observed under scanning electron microscope. The cercaria was of the parapleuro-lophocercous type. The measurements of the cercariae were as follows: body 137-240 x 62-90 microns, tail 320-470 x 21-34 microns, oral sucker 27-46 x 23-33 microns. The ventral sucker was incompletely developed and much smaller than the oral one. The whole body surface was covered with backward pointing spines. Four horizontal rows of oral spines were found around the mouth opening of the oral sucker. These spines diminished in size with the distance of the rows from the opening and their numbers were 12, 18, 19 and 18 respectively. Transverse and longitudinal plicae formed from tegument were found on the surface of the tail, being in connection with dorsal and ventral fins along posterior half of the tail. Many sensory structures or papillae were observed on the body. They were of three different types: 1) papillae with long or short cilia distributed widely on the body surface and around the mouth opening, the number of papillae with cilia on the body surface being greater than that described by Komiya et al (1940); 2) a few sensory fossa on the tail, measuring 1.0 x 0.6 microns; 3) a few ring-type papillae with knob on the body surface with pore of 0.5 micron in diameter.     

华支睾吸虫尾蚴扫描电镜观察

华支睾吸虫尾蚴体部呈圆筒形,口吸盘明显大于腹吸盘。体表布满小棘,口吸盘上有4行较大的棘,其中第1行的最大,其余3行的依次变小,其数目分别约为12、18、19和18个。尾部细长,表面有由皮层形成的横行褶襞,腹面尚有数条纵行褶襞。尾部有膜状的背鳍和腹鳍。感觉器有3型:具长纤毛或短纤毛的感觉乳突、感觉小窝和中心具结节的环形乳突。     

华支睾吸虫减数分裂的观察

本文研究了华支睾吸虫的减数分裂,报道了同源染色体的配对、交换与分离及其细线期、偶线期、粗线期、双线期,终变期的形态学特点,以及华支睾吸虫的单倍体、二倍体、多倍体、精原细胞、精细胞和精子的观察结果。     

华支睾吸虫亚显微结构的研究

华支睾呼虫卵黄腺为分散型，由许多卵黄小叶组成，每个小时由不同发育期的卵黄细胞组成，小叶的外周有间质层包绕。营养细胞多分布于小叶外周，此种细胞具较多突起，形成网状，卵黄细胞则分布在网状之间。卵黄细胞又分为连续的３个发育阶段。一期（Ｓ１）为未分化的细胞，体积上，胸质内细胞器甚少。二期（Ｓ２）卵黄细胞系卵黄物质合成的活跃时期，细胞体积增大，胞质中有高尔基体，内质网。卵黄颗粒形成逐渐增多，聚集成团称卵黄球     

华支睾吸虫致胆管癌的研究进展

华支睾吸虫是胆管癌的一个重要的生物性致癌因素,其成虫寄生在宿主的肝胆管内,成虫的机械性刺激、分泌排泄产物的化学刺激和成虫定居所致的慢性炎症等导致了寄生部位胆管的增生、癌变.该文从流行病学、动物实验及分子机制等方面对华支睾吸虫致胆管癌的研究进行了综述.     

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。     

华支睾吸虫cDNA文库的构建

目的　构建华支睾吸虫cDNA文库。方法　采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0个克隆进行扩增 ,选择 9个克隆进行DNA序列测定。序列结果与GenBank中相关基因进行比对。结果　获得含有 9 7× 10 5个重组子库容量的华支睾吸虫cDNA文库。其中PC6号克隆基因序列与华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列具有 93%的同源性。结论　已构建成华支睾吸虫cDNA文库。     

华支睾吸虫卵与灵芝孢子的鉴别

在近几年的粪便常规检验中,常发现有一种酷似华支睾吸虫卵样物质,给实验室诊断带来不便。该文通过对患者服药后粪便涂片、灵芝类药物研碎后的生理盐水涂片及寄生虫学教研室保存的华支睾吸虫卵标本涂片的对比研究,总结出华支睾吸虫卵与灵芝孢子的鉴别要点。     

华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)亚细胞及虫体组织定位

目的真核表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶基因并研究CsLDH的亚细胞及虫体组织定位。方法构建pEGFP-N1-CsLDH真核表达质粒,转染HeLa细胞,通过绿色荧光蛋白标签GFP的示踪来揭示CsLDH在HeLa细胞中的亚细胞定位;免疫组织化学方法进行CsLDH的虫体组织定位。结果双酶切和测序均表明真核表达重组质粒pEGFP-N1-CsLDH构建成功,经RT-PCR鉴定转染正确的HeLa细胞能稳定表达,部分HeLa细胞的细胞膜出现强烈的绿色荧光;免疫组织化学的结果显示CsLDH主要定位成虫的表膜,口、腹吸盘,咽及肠支处。结论华支睾吸虫乳酸脱氢酶为定位于虫体皮层和消化道界面的膜蛋白。     

华支睾吸虫Rho GTPase重组蛋白免疫保护效果

目的探讨华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)Rho GTPase重组蛋白的免疫保护效果。方法将20只8周龄SD大鼠随机均分为2组,重组蛋白实验组(A组)和PBS对照组(B组)。A组共免疫5次,首次和第2周分别用Cs-Rho GTPase重组蛋白(90μg/ml)1ml加等体积福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂稀释后背部、足垫多点皮下注射,第4、7和11周分别用Cs-Rho GTPase重组蛋白(90μg/ml)1ml腹腔注射。B组用PBS加佐剂免疫小鼠。末次免疫后,即灌胃感染华支睾吸虫囊蚴(50个/只),感染后第21天起每隔3～5d粪检1次,待查见虫卵后,计数虫卵数,并用乙醚麻醉处死大鼠,剖检胆管和胆囊中华支睾吸虫成虫。采集各次免疫前小鼠尾静脉血,ELISA法测定血清IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。统计分析各组平均成虫数、虫卵数及抗体水平差异。结果 A组检获平均成虫数为(9.2±9.9)条、每克粪便平均虫卵数为(956.8±1062.5)个,B组分别为(23.25±15.75)条和(3062.5±2501.8)个,两组差异有统计学意义(P0.05)。A组血清的抗体吸光度(A450值)分别为IgG(0.1、0.45、0.65、0.6、0.65)、IgG1(0.1、0.45、1.1、1.0、1.1)、IgG2a(0.1、0.7、1.1、1.1、1.1),而B组IgG、IgG1和IgG2a吸光度(A450值)均维持在0.1水平,两组间差异有统计学意义(P0.05)。结论 Cs-Rho GTPase重组蛋白可诱导SD大鼠产生较好的抗华支睾吸虫感染的免疫保护作用。     

广西梧州市人群华支睾吸虫感染情况调查

目的 了解梧州市华支睾吸虫感染情况,探讨华支睾吸虫病感染方式、途径等流行病学特征,为开展华支睾吸虫病防控提供科学依据.方法 根据梧州市地理方位、居民生活习惯选择万秀、长洲和蝶山三个城区作为调查点,用改良加藤氏厚涂片法粪检华支睾吸虫虫卵,阳性者计算克粪虫卵数( eggs per garm of faces,EPG).结果 共调查3 078人,华支睾吸虫平均感染率为4.48％.其中万秀区感染率为6.45％;长洲区感染率为4.23％;蝶山区感染率为2.79％.男性和女性的感染率分别是6.13％和2.74％.所有年龄组均有感染,以20～岁组至60～岁组较高,EPG1～999占90.57％.结论 梧州市是华支睾吸虫病轻度流行区,食鱼生是感染华支睾吸虫主要途径,应积极开展综合性防治工作.     

华支睾吸虫排泄分泌抗原McAb的制备及双抗夹心ELISA的初步建立

目的 以华支睾吸虫排泄分泌抗原(ESA)免疫小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并建立一种可检测ESA的双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法。方法 用ESA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株,制备高效价单克隆抗体并鉴定;单抗经HRP标记和配对筛选,建立双抗夹心ELISA并分析其特异性及灵敏度。结果 成功制备出抗华支睾吸虫ESA McAb:B7、F1;抗体类型均为IgG₁,抗体滴度高,特异性好,以筛选到的两株单抗建立双抗夹心ELISA法,最佳线性范围为0.014~0.248 μg/mL(R²=0.996 9),最低检出限为0.014 μg/mL。结论 初步建立了检测华支睾吸虫ESA的免疫诊断方法。     

华支睾吸虫分泌蛋白基因（CsCrSP）的克隆和生物信息学分析

目的 筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因，克隆并构建重组表达载体。 方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选，通过BLASTn程序进行序列比对，识别华支睾吸虫新基因，并应用Motifscan，NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行结构域及进化树分析。 结果 筛选出华支睾吸虫未知基因Pcs004f03序列，含689 bp；应用Vecter NTI分析，理论相对分子质量（Mr）为21 000，完整的ORF含561 bp，编码187aa。该基因有潜在的糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶Ｃ磷酸化位点、cAMP-and cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点。利用软件在线搜索发现在第1～50aa内有一明显的信号肽，初步推断CsCrSP为一种分泌蛋白。结论 CsCrSP基因为华支睾吸虫富含半胱氨酸分泌蛋白基因。     

重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展

华支睾吸虫多种诊断抗原的基因已被克隆和重组表达，一些重组抗原已初步应用于华支睾吸虫病的免疫学诊断，显示出较高的诊断价值。