抑制线粒体动力相关蛋白1通过PI3K/AKT通路对糖尿病大鼠七氟醚后处理心肌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探究抑制线粒体动力相关蛋白1（Drp1）通过磷脂酰肌醇激酶3（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路对糖尿病（DM）大鼠七氟醚（Sev）后处理心肌细胞凋亡的影响和机制。方法 60只雄性SD大鼠分为假手术（Sham）、缺血/再灌注（I/R）、I/R+DM、I/R+DM+Sev、I/R+DM+Sev+Mdivi 1、I/R+DM+Mdivi 1组,每组10只。通过腹腔〖JP2〗注射链脲佐菌素建立大鼠DM模型,通过结扎左冠脉前降支建立心肌I/R模型,在缺血后吸入Sev或腹腔注射Drp1的抑制剂Mdivi 1。〖JP〗比较各组的梗死体积、心肌组织损伤情况、心肌细胞凋亡水平以及PI3K/AKT通路水平。 结果 I/R 组的cTnI、CK MB、凋亡指数水平显著高于Sham组,PI3K、AKT水平显著低于Sham组（P＜005）。I/R+DM 组的cTnI、CK MB、凋亡指数水平显著高于I/R组,PI3K、AKT水平显著低于I/R组（P＜005）。I/R+DM+Sev组和I/R+DM+Mdivi 1组的cTnI、CK MB、凋亡指数水平显著低于I/R+DM组,PI3K、AKT水平显著高于I/R组（P＜005）。I/R+DM+Sev+Mdivi 1组的cTnI、CK MB、凋亡指数水平显著低于I/R+DM+Sev组和I/R+DM+Mdivi 1组,PI3K、AKT水平显著高于I/R+DM+Sev组和I/R+DM+Mdivi 1组（P＜005）。 结论 抑制Drp1可以通过促进PI3K/Akt通路抑制DM大鼠心肌I/R模型的心肌细胞凋亡,从而促进Sev对DM大鼠心肌I/R损伤的保护作用。     

黄芪甲苷对高血压脑出血模型大鼠神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取人胃癌细胞株,随机分为胃癌组（GC组）、ANCR siRNA组（siRNA组）、LncRNA ANCR组（ANCR组）3组,同时选取正常胃粘膜上皮细胞设为正常胃细胞组。GC组：单纯胃癌细胞株;siRNA组：将ANCR siRNA转染到胃癌细胞中;ANCR组：将LncRNA ANCR转染到胃癌细胞中。通过TUNEL法、Transwell、cck 8法、Westernblot法、RT PCR法分析3组胃癌细胞增殖情况,PI3K、AKT蛋白表达量,细胞凋亡情况,细胞侵袭能力,PI3K、AKT mRNA的表达量的差异性来探究LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制。结果 GC组LncRNA ANCR蛋白含量最高,正常胃细胞组LncRNA ANCR蛋白含量最低(P＜0.05);ANCR组胃癌细胞侵袭能力强,显微镜下细胞数量多,siRNA组胃癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱（P＜0.05）,GC组与siRNA组相比较胃癌细胞数量明显增多,整体侵袭能力明显增强（P＜0.05）;GC组和siRNA组、ANCR组OD值相比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;ANCR组胃癌细胞的增殖情况明显高于GC组,而GC组明显高于siRNA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。经TUNEL染色,siRNA组胃癌细胞凋亡数量最多,ANCR组胃癌细胞凋亡较少(P＜005),ANCR组和GC组与siRNA组相比较凋亡率明显下降(P＜0.05)。蛋白免疫印迹法分析显示,siRNA组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最低,ANCR组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最高,3组相比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 LncRNA ANCR能激活PI3K及AKT蛋白的表达,升高细胞的侵袭和增殖能力,促进胃癌细胞生长,加快病情的发展。     

金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探讨金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌细胞凋亡Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠分别为假手术组、模型组、阿司匹林组（10 mg·kg-1·d-1）、金雀异黄酮低剂量组（20 mg·kg-1·d-1）、中剂量组（40 mg·kg-1·d-1）和高剂量组（80 mg·kg-1·d-1）,每组10只。给药2周后经典方法构建MI/RI大鼠模型后HE染色检测心肌组织;采集血清测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同功酶(CK MB)和α 羟丁酸脱氢酶（α HBD）,采集心脏检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力(T AOC)和一氧化氮合酶（NOS）;同时,RT PCR和Western Blotting检测心肌组织中Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达。结果 假手术组心肌排列整齐无断裂,模型组出现大量断裂;与模型组相比,各治疗组明显改善;模型组大鼠血清LDH、CK、CK MB、α HBD高于假手术组（P＜005）,心肌MDA水平高于假手术组（P＜005）,心肌SOD、T AOC及 NOS水平均低于假手术组（P＜005）;与模型组比较,金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组血清LDH、CK、CK MB、α HBD明显降低（P＜005）,心肌MDA明显降低（P＜005）,心肌SOD、T AOC及NOS明显升高（P＜005）;模型组大鼠心肌Bcl 2蛋白和mRNA表达均低于假手术组（P＜005）,Bax和Caspase 3蛋白和mRNA表达均高于假手术组（P＜005）,而金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组Bcl 2显著上调（P＜005）,Bax和Caspase 3显著下调（P＜005）。结论 金雀异黄酮可抑制心肌细胞凋亡,同时提高心肌抗氧化能力,抑制MI/RI给心肌带来的损伤。     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

miR-15b通过靶向LPAR3抑制子宫内膜癌细胞PI3K/AKT信号通路活化

【摘要】 目的 探讨miR-15b靶向溶血磷脂酸受体3（LPAR3）调控PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞（HEC-1B）增殖的影响。方法 生物信息学分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与LPAR3之间的靶向结合作用;将HEC-1B细胞分为NC组、miR-15b mimic组、miR-15b inhibitor组、siRNA-LPAR3组和miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR 15b、LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（AKT）在HEC 1B和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测HEC-1B的细胞活力;流式细胞术检测HEC-1B的细胞周期分布;Transwell测定法检测HEC-1B的细胞迁移和侵袭能力。结果 LPAR3为miR-15b的靶基因;与HEEC组相比,HEC-1B组中LPAR3、PI3K和AKT mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而miR-15b表达显著降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组细胞PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组细胞LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,抑制miR-15b的表达后,上述现象被逆转(P＜0.05)。与miR-15b inhibitor组相比,miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论 miR-15b可能通过靶向LPAR3抑制HEC-1B的PI3K/AKT信号通路活化,从而抑制HEC-1B细胞的增殖。     

富血小板血浆对肩袖损伤后脂肪浸润干预作用的研究

目的探讨富血小板血浆（PRP）对肩袖损伤模型大鼠肩袖相应肌肉脂肪浸润的干预作用及其机制。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、PRP组,每组10只。假手术组仅予以切开皮肤,暴露肩袖组织后缝合,于冈上肌组织多部位肌肉内注射0.9%氯化钠注射液0.5ml,每2d注射1次;模型组和PRP组暴露肩袖组织后予以切断冈上肌肌腱,然后缝合皮肤。模型组于冈上肌组织多部位肌肉内注射0.9%氯化钠注射液0.5ml,每2d注射1次;PRP组于冈上肌组织多部位肌肉内注射PRP0.5ml,每2d注射1次。将新鲜获取的健侧及造模侧冈上肌组织进行称重,获得肌肉湿重比。采用油红O染色观察3组大鼠冈上肌组织中脂肪形成情况,随机选取冈上肌组织中腹部5个区域,采用ImageJ软件计算每个区域内20根肌纤维的横截面积。采用qRT-PCR法检测3组大鼠成脂指标[CCAAT增强子结合蛋白（C/EBPβ）、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）]、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）mRNA表达水平,采用Westernblot法检测3组大鼠C/EBPβ、PPARγ、PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果造模8周后,模型组大鼠冈上肌肌肉湿重比小于假手术组和PRP组（均P＜0.01）,PRP组大鼠冈上肌肌肉湿重比大于假手术组（P＜0.05）。对3组大鼠冈上肌病理切片脂肪浸润情况进行观察,模型组大鼠冈上肌中脂滴形成较假手术组明显增多,且肌肉组织出现萎缩;PRP组冈上肌中脂滴形成数量较模型组明显减少,且肌肉组织萎缩程度也较轻。模型组大鼠肌纤维横截面积小于假手术组和PRP组（均P＜0.01）,PRP组肌纤维横截面积大于假手术组（P＜0.01）。模型组大鼠C/EBPβ、PPARγmRNA及蛋白表达水平均高于假手术组（均P＜0.05）,而PRP组大鼠C/EBPβ、PPARγmRNA及蛋白表达水平均低于模型组（均P＜0.05）。模型组大鼠PI3K、Akt、mTORmRNA及蛋白表达水平均高于假手术（均P＜0.05）,而PRP组大鼠PI3K、Akt、mTORmRNA及蛋白表达水平均低于模型组（均P＜0.05）。结论PRP可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,从而抑制脂肪转录因子的表达,减少肩袖损伤后脂肪浸润的发生。     

电针联合丰富康复训练对局灶性脑缺血大鼠PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨电针联合丰富康复训练对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase,PI3K/AKT）信号通路的影响及血管新生机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针康组、抑制剂组,每组15只,参照Longa线栓法建立局灶性大脑中动脉缺血动物模型。针康组于模型复制后给予电针及康复治疗,电针取穴“百会”“风府”“内关”“心俞”,每日1次,连续治疗7 d。抑制剂组侧脑室注射AKT阻断剂后,进行电针联合康复训练干预,每日1次,连续治疗7 d。干预结束后,比较各组大鼠神经功能评分、脑梗死面积,分别采用免疫组织化学法和Western blot法检测缺血侧脑组织中PI3K、AKT蛋白的表达水平。结果 与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分显著增加（P＜0.05）,梗死面积显著增大（P＜0.05）,缺血侧脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,针康组神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05）,脑梗死面积显著缩小（P＜0.05）,缺血侧脑组织PI3K、AKT蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）;与针康组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分显著增加（P＜0.05）,脑梗死面积显著增大（P＜0.05）,缺血侧脑组织PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 电针联合丰富康复训练可有效促进脑缺血大鼠神经功能恢复,减小脑梗死面积,这可能与其激活PI3K/AKT信号通路,诱导血管新生有关。     

重楼皂苷I预防给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠调节PI3K/AKT信号通路的作用研究

目的 从磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨重楼皂苷I预防给药对心肌缺血再灌注损伤（MI/IR）大鼠的干预机制。方法 将购买的72只SPF级SD大鼠按照随机数字法分为假手术组、模型组、阿司匹林组、重楼皂苷I低、中和高剂量组,每组12只。分组后即给予相应药物干预2周,2周后构建MI/IR模型。模型构建成功24 h后先采用动物彩色多普勒超声仪检测心脏功能,后处死大鼠收集相关组织采用HE染色观察心肌病理学、TTC法检测心肌梗死面积,试剂盒检测心功能指标[乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和谷草转氨酶（AST）,抗氧化指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）],TUNNEL染色检测心肌细胞凋亡特点,Western blot检测心肌PI3K、AKT、B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 假手术组心肌纤维排列整齐、无水肿,模型组有心肌纤维断裂,重楼皂苷I低、中、高剂量组和阿司匹林组明显改善心肌纤维断裂情况。与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显升高（P＜0.05）,LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH明显降低（P＜0.05）;相较于模型组,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组干预后,心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显降低（P＜0.05）,LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH则明显升高（P＜0.05）。Tunnel染色可见,假手术组几乎没有心肌细胞凋亡,而模型组呈现出明显的大量的细胞凋亡;与模型组相比,阿司匹林组和重〖JP2〗楼皂苷I低、中、高剂量组凋亡情况明显好转。此外,与假手术组相比,模型组大鼠心肌PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bax明显升高（均P＜0.05）;相较于模型组,重楼皂苷I低、中、高剂量组以及阿司匹林组PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达明显降低（均P＜0.05）。结论 重楼皂苷I对心肌缺血再灌注损伤有一定的预防作用,其作用机理可能与其能够调节PI3K/AKT信号通路有关     

卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠ERK1/2通路的影响

目的 观察卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠心肌组织细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路的影响并探讨其可能的作用机制.方法 188只清洁级近交系4~6周龄雄性Balb/C小鼠随机分成4组.心肌炎对照组（C组）、美托洛尔干预组（M组）、卡维地洛干预组（K组）各60只,空白对照组（B组）8只做总体对照.观察各组小鼠各时间点（1、3、7和14d）的心肌组织病理学改变、血清cTnI水平、IL1β含量及心肌组织磷酸化ERK1/2含量的动态变化.结果 病程第1、3天,M组、K组心肌磷酸化ERK1/2水平低于C组（P＜0.01）,病程第14天,K组心肌磷酸化ERK1/2水平仍低于C组（P＜0.01）.病程第3、7天,M组、K组心肌组织炎症积分、血清cTnI和IL-1β水平低于C组（P＜0.05或0.01）,且K组上述水平下降更加显著（P＜0.01）.结论 卡维地洛可能通过β1、β2肾上腺素能受体双重阻滞作用,抑制ERK1/2信号通路活化,减轻病毒性心肌炎引起的心肌损伤.     

红豆杉多糖对Beagle犬心肌缺血再灌注损伤模型心肌NADPH氧化酶mRNA及SOD、MDA的影响

目的 观察红豆杉多糖对心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）模型心肌损伤及心肌还原型辅酶II（NADPH）氧化酶mRNA、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响。方法 将30只Beagle犬随机分为假手术组、模型组、红豆杉多糖低剂量组与高剂量组、卡维地洛对照组,每组6只,给药7 d后,建立MIRI模型。HE染色,光镜观察心肌组织病理改变;原位杂交检测NADPH氧化酶 p47^phox（NCF-47K）mRNA表达;比色法检测心肌SOD活性和MDA水平。结果 光镜下可见,模型组心肌严重紊乱、断裂,核固缩及胞浆嗜酸性变明显,轻至中度充血、水肿,炎细胞浸润;红豆杉多糖高剂量组心肌细胞紊乱、断裂程度较轻,核固缩及胞浆嗜酸性变明显减少,部分组织仍有轻度充血、水肿。模型组、红豆杉多糖低剂量组心肌NCF-47K mRNA表达较假手术组显著升高（P＜0.01）,红豆杉多糖高剂量组NCF-47K mRNA表达显著低于模型组（P＜0.05）。除红豆杉多糖高剂量组心肌SOD活性显著高于模型组（P＜0.01）外,模型组及各治疗组心肌组织SOD活性较假手术组显著降低（P＜0.01）。模型组及红豆杉多糖低剂量组心肌组织MDA水平较假手术组显著增加（P＜0.05）,红豆杉多糖高剂量组心肌MDA水平显著低于模型组（P＜0.05）。结论 红豆杉多糖可能通过降低心肌组织NADPH氧化酶NCF-47K mRNA表达,升高SOD活性,减少O₂^÷等氧自由基对心肌细胞的损伤,减轻缺血再灌注导致的心肌损伤。     

蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制研究

目的:探究蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用机制.方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、蒿本内酯组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组,每组各10只.采用改良大脑中动脉线栓法制作大鼠缺血再灌注损伤模型,比较各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数,检测脑组织中凋亡相关因子以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达水平.结果:蒿本内酯组神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl2 mRNA水平高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05),而Bax、caspase3 mRNA水平低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl2蛋白及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05),Bax、caspase3蛋白表达低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05).结论:蒿本内酯可通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路来抑制神经细胞凋亡,进而发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用.     

芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨鹰嘴豆芽素A治疗神经胶质瘤的作用机制

目的 通过网络药理学、分子对接的方法探究鹰嘴豆芽素A治疗神经胶质瘤的作用机制。方法 检索中药系统药理学数据库与分析平台（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP）、TargetNet、Swiss Target Prediction等数据库和分析平台,筛选出鹰嘴豆芽素A对应靶点,利用DisGeNET、GeneCards等数据库获得神经胶质瘤的作用靶点。取药物与疾病的交集靶点,借助STRING数据库进行蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,利用Cytoscape 3.9.1软件构建潜在靶点网络关系图。对交集靶点通过DAVID数据库进行本体论富集分析（gene ontology,GO）和京都基因和基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。通过DockThor数据库对鹰嘴豆芽素A和关键靶点进行分子对接,Pymol软件进行可视化处理。结果 共筛选出鹰嘴豆芽素A靶点149个,神经胶质瘤相关靶点5654个,药物与疾病交集靶点97个,核心靶点为表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、雌激素受体（estrogen receptor,ESR1）、热休克蛋白（heat shock protein,HSP）90AA1、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）9、PPARG、PTGS2,靶点参与的功能主要与肿瘤细胞增殖、侵袭、凋亡等过程有关。GO富集分析发现鹰嘴豆芽素A在生物过程、细胞组成、分子功能多方面参与神经胶质瘤的治疗。KEGG通路108条,包括肿瘤、化学致癌作用-受体活性、脂质和动脉粥样硬化、PI3K/Akt等信号通路。分子对接结果显示鹰嘴豆芽素A与关键靶点均有较好的结合活性。结论 鹰嘴豆芽素A可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、增强化疗敏感性等发挥治疗神经胶质瘤的作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨水蛭蜈蚣药对改善糖尿病勃起功能障碍大鼠的作用机制

目的 通过检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3 K/AKT/mTOR)信号通路关键因子,探讨水蛭蜈蚣药对改善糖尿病勃起功能障碍(DIED)的作用机制.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱导SD雄性大鼠.8周后,用阿扑吗啡对DIED模型进行验证.将造模成功大鼠分为模型组、他达拉非组、水蛭蜈蚣药对组(以下简称"药对组"),分别用去离子水、他达拉非(0.5 mg/kg)和水蛭蜈蚣颗粒剂(0.3 g/kg)灌胃8周.检测血糖水平及勃起功能,化学发光法测定血清睾酮、黄体生成素与卵泡刺激素释放激素水平.用Western blot和RT-qPCR法检测阴茎组织PI3K、AKT、mTOR蛋白和基因的表达,HE染色对阴茎组织进行病理学观察.结果 药物干预8周后,药对组大鼠的勃起次数较他达拉非组增加(P＜0.05);药对组的睾酮水平高于模型组(P＜0.05),他达拉非组的睾酮水平与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平和mRNA表达水平低于空白对照组(P＜0.05),药对组PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平和mRNA表达水平高于模型组(P＜0.05),他达拉非组与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 水蛭蜈蚣药对可以通过激活PI3 K/AKT/mTOR信号通路,抑制DIED大鼠阴茎平滑肌细胞的凋亡,改善勃起功能.     

布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡及抑制裸鼠移植瘤的形成

【摘要】目的 探究布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡的机制及其对裸鼠移植瘤形成的抑制作用。方法 结肠癌SW480细胞分为对照组、布比卡因组（025、05、1 mM）。各组细胞处理24h后采用Edu染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测增殖、凋亡、自噬及信号通路相关蛋白表达。建立结肠癌裸鼠模型,随机分为布比卡因组（5、10、20 mg）及对照组,分别腹腔注射5、10、20 mg/kg的布比卡因及等体积生理盐水,1次/d,连续治疗30d后处死小鼠,取瘤、称重,免疫组化检测肿瘤组织Ki67蛋白阳性表达,并绘制各组裸鼠生存曲线。〖HT结果 随着布比卡因浓度增加,SW480细胞增殖数及增殖相关蛋白Ki67、PCNA表达量逐渐降低（F=94068、160905、49255,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）;SW480细胞凋亡数及凋亡相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达量逐渐升高（F=30948、110730、233550,P＜005）,且均高于对照组（P＜005）。随着布比卡因浓度增加,SW480细胞Beclin1、ATG8蛋白相对表达量,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及LC3阳性数均逐渐升高（F=65287、112337、50602、26690,P＜005）,且高于对照组（P＜005）;p62蛋白相对表达量及p PI3K/PI3K、p AKT/AKT、p mTOR/mTOR比值逐渐降低（F=33276、98246、102488、58051,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）。给药30d后,布比卡因给药组裸鼠肿瘤质量、Ki67阳性细胞占比及30d生存率均低于对照组（P＜005）。结论 布比卡因可抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其发生自噬及凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的形成,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。     

基于VEGF信号通路研究苗药血脉通对脑出血大鼠脑组织细胞自噬与凋亡的作用

【摘要】目的 探讨基于血管内皮生长因子（VEGF）信号通路研究苗药血脉通对脑出血大鼠脑组织细胞自噬、凋亡的作用及其相关的作用机制。方法 选取正常Wistar雄性大鼠50只,将12只大鼠作为假手术组,其余按照Rosenberg法建立脑出血大鼠模型随机分为脑出血组、给药A组和给药B组。给药A组和给药B组分别予以15 mg/（kg·d）、30 mg/（kg·d）苗药血脉通治疗,假手术组、脑出血组予以等量生理盐水,给药方式为灌胃,均连续给药35 d。采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织细胞凋亡情况;采用Weatern blot法检测Beclin-1、VEGF、基质细胞衍生因子1（SCDF-1α）、CXCR-4蛋白表达量,免疫组化法检测PI3K、AKT蛋白水平;测定各组大鼠脑出血病灶体积。结果 脑出血组、给药A组和给药B组大鼠脑组织细胞凋亡数、脑出血病灶体积、Beclin-1、VEGF、PI3K、AKT、SCDF-1α、CXCR-4等蛋白表达量均显著高于假手术组（P＜0.05）。与脑出血组比较,给药A组和B组大鼠脑组织细胞凋亡数、脑出血病灶体积均显著降低（P＜0.05）,Beclin-1、VEGF、PI3K、AKT、SCDF-1α、CXCR-4等蛋白表达量均显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 苗药血脉通治疗脑出血可通过激活VEGF信号通路调节细胞自噬,抑制细胞凋亡,发挥脑保护作用。     

维生素A制剂辅助布地奈德治疗支气管哮喘患儿临床疗效及对免疫功能的影响

【摘要】目的 探讨维生素A制剂辅助布地奈德治疗支气管哮喘患儿临床疗效及对免疫功能的影响。方法 选取2015年3月～2017年5月本院收治的122例支气管哮喘患儿为研究对象,按治疗方式不同分为对照组和观察组,每组各61例。两组患儿入院后均按照支气管哮喘常规治疗,对照组在常规治疗基础上给予布地奈德治疗,观察组在对照组的基础上加维生素A辅助治疗,两组均治疗4周。比较两组患儿治疗前后免疫功能、哮喘症状、血清IL 17、IL 10及TGF β1水平变化以及对两组患儿临床疗效、不良反应的影响。结果 治疗前两组体液免疫IgA、IgG、IgM水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后两组IgA、IgG、IgM明显升高,观察组明显高于对照组（P＜0.05）;治疗前两组T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后两组CD3+、CD4+、CD8+明显升高,观察组明显高于对照组（P＜0.05）;治疗前两组IL 17、IL 10及TGF β1水平无明显差异（P＞0.05）,治疗后两组IL 17均明显降低,观察组低于对照组（P＜0.05）,两组IL 10及TGF β1均升高,观察组明显高于对照组（P＜0.05）;治疗后两组哮喘症状评分均明显下降,观察组低于对照组（P＜0.05）;观察组临床有效率明显高于对照组（P＜0.05）;对照组不良反应发生率组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 采用维生素A辅助布地奈德治疗支气管哮喘患儿,可有效的缓解患儿症状,促进治疗效果,提高患者免疫水平,安全性可靠,可作为有效治疗支气管哮喘患儿的临床治疗方法之一。     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

全氟化碳对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素1相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨全氟化碳（PFC）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素 1受体相关蛋白（SIGIRR）表达的影响。方法 实验分为正常细胞组、全氟化碳+脂多糖（PFC+LPS）组、全氟化碳（PFC）组及脂多糖（LPS）组。各组细胞经相应处理24 h后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的TNF α、IL 6和IL 10含量,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子 κB （NF κB）和SIGIRR的表达。结果 ELISA结果显示,LPS组TNF α、IL 6水平较正常细胞组升高（P＜005）;PFC+LPS组TNF α、IL 6水平较LPS组下降（P＜005）;与正常细胞组相比,PFC组IL 10水平升高（P＜005）,PFC+LPS组IL 10水平较LPS组升高（P＜005）。Western blot 结果显示,与正常细胞组相比,LPS组核内磷酸化NF κB p65表达上调（P＜005）,PFC+LPS组核内磷酸化NF κB p65表达水平较LPS组降低（P＜005）;与正常细胞组相比,LPS组SIGIRR表达水平下调（P＜005）,PFC+LPS组SIGIRR表达水平较LPS组上调（P＜005）。PFC本身对TNF α、IL 6含量及NF κB p65表达无影响,但PFC可促进A549细胞释放IL 10及上调SIGIRR表达（P＜005）。结论 PFC可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,促进抗炎因子IL 10分泌及上调负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

青光增视方对青光眼大鼠模型视网膜神经节细胞保护机制的研究

目的 探究青光增视方对青光眼大鼠模型视神经的保护作用及对PI3K/AKT通路的调节作用。方法 通过烧灼大鼠右眼巩膜表面静脉制作青光眼模型，给予高、中、低剂量(3.40、1.70、0.85 g·kg^-1·d^-1)青光增视方颗粒(青光增视方给药组)或甲钴胺(0.159 mg·kg^-1·d^-1)(西药组)灌胃，末次给药后检测大鼠眼压，观察视网膜神经节细胞(RGCs)的形态及超微结构，采用定量PCR及Western blotting检测视网膜PI3K、AKT、PTEN、eNOS mRNA及蛋白的表达情况。结果 与空白组比较，其他各组大鼠眼压均显著升高，但青光增视方高、中剂量组眼压显著低于模型组和西药组，差异均有统计学意义(均P <0.05)。与空白组比较，模型组PI3K、AKT、eNOS mRNA及PI3K、p-AKT/AKT、eNOS蛋白表达水平显著降低，PTEN mRNA及蛋白表达显著升高，差异均有统计学意义(均P <0.05)。与模型组比较，各给药组PI3K、AKT、e NOS mRNA及...