布鲁氏菌病新型疫苗研究进展北大核心CSCD

布鲁氏菌病(简称布病)是一种严重危害人类及动物健康的人兽共患传染性疾病,接种疫苗是控制布病流行的有效手段之一,而目前还没有获得许可的疫苗来预防人类布病,兽用疫苗存在毒力恢复及不能区分疫苗接种与野菌株感染的不足。随着基因工程、分子克隆等技术的日益发展,重组蛋白疫苗、DNA疫苗、纳米颗粒疫苗、载体疫苗等新型疫苗相关研究逐渐成为布病疫苗领域的研究热点。本文就近十年出现的新型布病疫苗研究进展情况作一综述,以期为开发更为有效、安全的布鲁氏菌病新型疫苗提供新的思路。     

布鲁氏菌疫苗株S2全基因组测序及牛羊布鲁氏菌比较基因组学研究

目的 为了了解布鲁氏菌S2疫苗株全基因组结构及分子生物学功能。方法 对布鲁氏菌疫苗株S2进行全基因组测序,并与GenBank公布的6株牛羊布鲁氏菌进行比较基因组学研究。结果与结论 通过全基因组测序发现S2基因组大小为3 331 982 bp,预测基因有3 243个,GC含量为57.23 %。S2预测基因中大多数基因功能主要与糖代谢﹑氨基酸代谢﹑氨基酸转运和膜转运有关。通过比较基因组学研究发现S2有20个特有基因。另外S2与GenBank公布的S2序列进行比对发现有19个差异基因。     

布鲁氏菌病疫苗研究进展

使用疫苗免疫是防控布氏菌病(简称布病)的重要措施之一,但对人群使用疫苗免疫一直存有争议,世界上主要是俄罗斯(前苏联)和中国使用19-BA疫苗和104M疫苗对布病高危人群进行免疫.对于动物布病,早期曾使用灭活疫苗进行免疫,目前主要使用S19,Rev.1,RB51,S2和M5等弱毒活疫苗,其中Rev.1和S19是预防小反刍动物和奶牛布病最有效的疫苗,其它疫苗的使用也比较广泛.初步研究表明基因工程疫苗等新型布病疫苗具有良好的应用前景,但尚未被官方认可用于人和动物的布病免疫.特对人布病疫苗和动物布病疫苗进行介绍,并对基因工程疫苗以及其它新型布病疫苗的最新研究进展进行概述.     

几种布鲁氏菌化学疫苗的提取及动物实验观察

本文所提取的几种化学疫苗对豚鼠都产生了不同程度的免疫学改造,但“PI”抗原的血清学效价很低。除了布氏菌核蛋白免疫的少数豚鼠对其本身抗原产生了弱的皮肤变态反应外,其余免疫制剂对布氏菌素和其自身抗原均不产生皮肤变态反应。在免疫高峰时,各种疫苗对豚鼠都产生了良好的保护力,同时在本次试验中和104M 活菌苗比较未出现差别。     

铜绿假单胞菌疫苗研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,Pa）是常见的非发酵精G专性需氧小杆菌,广泛存在于土壤、水、污物、植物和动物中,常定植于健康人的上呼吸道、肠道和皮肤等处,是免疫抑制个体重要的机会致病菌。     

布鲁氏菌omp25重组BCG的构建及其疫苗作用检测

目的构建分泌性表达布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因重组卡介苗（rBCG-omp25）,并免疫BALB／c小鼠,观察其免疫作用。方法利用分子生物学技术构建重组穿梭分泌载体pMV261-Ag85B-omp25．电穿孔技术导人卡介苗（BCG）。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增、测序,以及Western blot对重组卡介苗进行鉴定。分别用rBCG-omp25、BCG腹腔接种BALB／c小鼠,于免疫后第10、20、30、40和50d称重,尾部采血,用表达纯化的融合蛋白OMP25—32a检测免疫小鼠抗体的生成情况,用流式细胞仪（FCM）检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞百分率,并计算CD4^＋／CD8^＋T细胞比值。制作小鼠肝组织切片,HE染色观察病理学变化。结果重组卡介苗rBCG-omp25含有Ag85B-omp25序列,大小为745hp;Western blot表明rBCG-omp25可分泌表达布鲁氏菌OMP25。rBCG-omp25免疫小鼠后第20d,用Western blot检测到布鲁氏菌OMP25特异性抗体;rBCG—omp25免疫组和BCG免疫组的CD4^＋、CD8^＋T细胞百分率分别为38．68％、11．32％和、48．44％、14．01％,PBS组为33．24％、9．81％,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫后50d内rBCG-omp25组、BCG组与PBS组小鼠体重差异无统计学意义（P〉0．05）;各实验组小鼠肝组织均未见明显病理改变。结论构建的rBCG-omp25能够表达特异性蛋白OMP25。该蛋白能刺激小鼠产生特异性抗体,能刺激小鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞增殖。rBCG-omp25毒力弱,可作为预防布鲁氏菌病的疫苗候选株之一。     

铜绿假单胞菌重组Bb-OprF疫苗构建及鉴定

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb) OprF疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT PCR扩增获得OprF抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌 双歧杆菌穿梭表达载体pGEX 1λT,构建重组质粒pGEX OprF。转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb OprF疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT PCR扩增出1 016bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprF基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb OprF疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。     

布鲁氏菌病治疗研究进展

布鲁氏菌病（以下简称布病）是一种传染性变态反应性疾病，人兽共患，不但阻碍了畜牧业的发展，同时给人类的健康带来了严重的危害。尽管治疗布病的药物及方法很多，尤其是我国学者还研究出了许多中药方剂，进行中西医结合治疗，取得了较好疗效，但由于布氏菌是细胞内寄生，目前尚无一种理想药物能将其彻底杀灭。笔者就近年来国内外有关方面的研究成果进行概述，以供同行参考。     

布鲁氏菌A19疫苗株全基因组测序及比较基因组学分析

目的 探索布鲁氏杆菌A19疫苗株全基因组的结构、分子生物学的功能,并对其生物信息学进行研究。方法 采用Illumina Hiseq 4000和PacBio对A19进行全基因组测序,并与GenBank 上的8株菌进行比较基因组学解析。A19基因组3 286 167 bp, 预测3 371个基因,GC含量57.25%。通过注释COG库,对应基因有2 560个,将其归入22类COG中;根据比对KEGG库,得到2 544个基因,共参与33类代谢通路。结果 综合两个数据库结果发现,大多数A19预测基因中的基因功能主要与膜运输、氨基酸转运及碳水化合物代谢有关。结论 通过分析发现, A19和猪羊牛种布鲁氏菌之间存在一定差异,并找出牛种毒力基因。本实验通过测序A19全基因组,为布鲁菌疫苗的研究提供思路。     

布氏菌苗皮内与划痕接种的效果评价

目的 将布氏疫苗通过皮内注射和皮上划痕方式免疫豚鼠,比较两种方式的免疫效果,为进一步研究人用皮内注射布氏菌活疫苗奠定基础。方法 采用两种免疫方法免疫动物,免疫一个月后进行采血,用ELISA法检测血清中总IgG抗体;通过皮肤迟发性超敏反应进行体内细胞免疫评价;用羊布鲁氏菌弱毒株M5攻击免疫动物,通过脾脏细菌计数评价并比较两种免疫方法的保护效果。结果 抗体检测结果显示,两种免疫方法均能诱导较强的体液免疫应答;皮内注射和皮上划痕对Br-PPD抗原DTH阳转率均为100%;两种免疫方法的保护效果差异无统计学意义。结论 通过体液免疫检测、细胞免疫评价和疫苗免疫保护力3个方面结果显示,皮内注射和划痕接种两种途径免疫效果相当。     

布鲁氏菌非编码小RNA BSR1526突变株与过表达株的构建及毒力研究

目的 为探讨非编码小RNA BSR1526在布鲁氏菌胞内生存中的作用,构建BSR1526突变株与过表达株并分析它们在模拟胞内环境和小鼠体内的存活能力。方法 首先采用Northern blot和RT-PCR验证布鲁氏菌16M在体外刺激条件中BSR1526的转录;然后采用融合PCR构建BSR1526缺失株;将BSR1526插入到质粒pBBR1-MCS4中,电转入16M中构建过表达株16M-BSR1526;最后分析BSR1526缺失株和过表达株在模拟胞内环境以及小鼠体内的存活力。结果 BSR1526在布鲁氏菌16M中存在转录,且在不同刺激条件下转录水平不同。BSR1526缺失或过表达影响了布鲁氏菌16M在体外的生长能力,缺失后在热应激、氧化压力及酸性环境下的生存能力下降,在小鼠脾脏内的细菌数量显著下降,表明BSR1526影响了布鲁氏菌的毒力。结论 非编码小RNA BSR1526影响着布鲁氏菌16M在胞内生存能力,缺失BSR1526后布鲁氏菌16M抵抗外界不良环境的能力下降,同时在小鼠体内的毒力下降。     

布鲁氏菌噬菌体基因组学研究进展北大核心CSCD

布鲁氏菌噬菌体用于鉴定和鉴别布鲁氏菌种属,其种类、遗传特性以及基因组功能对布鲁氏菌鉴别分型具有重要作用,因此布鲁氏菌噬菌体的研究备受关注。基于当前的研究进展,本文对布鲁氏菌噬菌体的基本特征、基因组功能、基因组比对以及最新应用技术的相关研究进行综述,在了解布鲁氏菌噬菌体基因多样性和复杂性的基础上,进一步认识噬菌体与宿主的相互作用机制。     

布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察

目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率。方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体pcDNA3.1( )构建的核酸疫苗及上述6条片段转入pET32a( )后诱导表达的的重组蛋白免疫小鼠,3次免疫后进行攻毒实验,对其免疫保护效率进行初步观察。结果L7/L12和BLS的重组蛋白疫苗和核酸疫苗都产生了非常显著的保护作用,P39的核酸疫苗、IF3和BCSP31的重组蛋白疫苗也产生了非常显著的保护作用,其中L7/L12核酸疫苗的保护效率最高。结论初步认为布鲁杆菌的优势抗原表位所获得的基因工程疫苗可产生一定的抗布鲁杆菌作用,可作为未来布鲁杆菌新型疫苗的候选者,有进一步研究的价值。     

狂犬病mRNA疫苗的应用和研究进展

狂犬病是一个古老而又传统的疾病,其公共安全威胁持续存在,人类需要新型、快速和价格更为低廉的疫苗技术对其进行防治.mRNA疫苗作为一种新型的核酸疫苗,在感染性疾病的预防控制和癌症的治疗等领域已经取得阶段性进展,因此狂犬病mRNA疫苗有望成为抗击狂犬病的新生力量.本文将从狂犬病mRNA疫苗的结构、递送系统和临床前及临床研究...     

布鲁氏菌17.3kDa蛋白的表达及其免疫学评价(英文)

目的获得布鲁氏菌保护性抗原17.3kDa重组蛋白并以此构建亚单位疫苗。方法用PET32a(+)原核表达载体表达17.3kDa蛋白纯化后加氟氏佐剂肌肉注射免疫小鼠,三免后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、WesternBlot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生,蛋白苗所诱导产生的IgG1抗体远远高于IgG2a;通过细胞因子和CD分子测定表明重组蛋白以诱发ThⅡ型免疫为主。结论所表达的布鲁氏菌17.3kDa蛋白苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力,可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗或诊断抗原,有进一步研究的意义。