左归丸与右归丸对EAE大鼠APP及GAP-43表达的影响

目的观察左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠淀粉样前体蛋白（APP）及生长相关蛋白（GAP-43）表达的影响,探讨滋阴与温阳补肾法治疗EAE的可能机制。方法应用髓鞘碱性蛋白（MBP）68-86免疫诱导Lewis大鼠建立EAE模型。免疫后第7天、第14天、第28天取大鼠脑白质与脊髓,采用Western-blot和实时荧光定量RT-PCR技术检测APP及GAP-43蛋白及mRNA的表达。结果免疫后第7天,激素和左归丸均能升高EAE大鼠脊髓中APP和脑白质中APP mRNA的过低表达（P〈0.05或P〈0.01）,且在脊髓中二者对APP的调节优于右归丸（P〈0.05）;第14天,左归丸显著调节脑白质中APP mRNA的过高表达、脊髓中APP mRNA的过低表达（P〈0.05或P〈0.01）,作用优于右归丸（P〈0.05）。免疫后第7天,激素与左归丸显著上调EAE大鼠脑白质和脊髓中GAP-43水平（P〈0.05或P〈0.01）,在脊髓中二者作用优于右归丸（P〈0.01）,右归丸显著下调脑白质中GAP-43 mRNA的表达（P〈0.05）;第14天,激素与左归丸显著抑制脑白质中GAP-43的过高表达（P〈0.05）;第28天,激素组与左归丸组脑白质中GAP-43水平低于模型组与右归丸组（P〈0.01）。结论左右归丸对EAE大鼠脑白质和脊髓中APP和GAP-43蛋白与基因的表达均具有一定调节作用,且左归丸的作用明显优于右归丸。     

补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对于脑缺血大鼠神经修复的影响

目的观察中药复方补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）对于缺血性大鼠模型神经修复的影响。方法分空白对照,假手术组,移植组,药物干预移植组。观察12h、2d、7d3个时间点大鼠神经元阳性率及神经生长相关蛋白（GAP-43）的表达。结果药物干预移植组3个时间点神经元阳性表达均高于干细胞移植组,GAP-4312h开始升高,2d达到高峰,7d开始逐渐下降,药物干预移植组表达高于干细胞移植组（均P＜0．05）。结论中药复方补阳还五汤能够提高骨髓基质干细胞移植神经元的阳性表达率。增加神经生长蛋白的表达,促进相关损伤神经的修复。     

补肾益髓方及其拆方对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中BDNF/TrkB的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中脑源性神经营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF)与受体Trk B的影响。方法:将EAE造模小鼠于当天和第7天背部皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein,MOG)35-55抗原,并在免疫当天和第2天后腹腔注射百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX)。每日对小鼠进行不同药物的灌胃,并于造模第20和40天分别取脑和脊髓,采用实时荧光定量RTPCR(qRT-PCR)与Western Blot法检测BDNF和Trk B的表达。结果:BSYS及其拆方BS方与HTHX方均可明显上调EAE小鼠脑和脊髓BDNF和Trk B mRNA与蛋白的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。BSYS方作用优于其BS与HTHX方,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BSYS及其拆方促进轴突修复的作用可能与增强BDNF/Trk B表达有关,BSYS全方更有显著趋势。     

黄芪糖蛋白对EAE小鼠的神经保护作用及其修复机制分析

目的:观察黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的保护作用,并探讨其神经修复机制。方法:复制髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG_(35-55))多肽诱导的小鼠EAE模型,20只C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE组和HQGP组。HQGP组于免疫后第3日起,按1 mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射HQGP,持续给药18 d。通过五级临床症状评分和小鼠体质量变化观察HQGP对EAE小鼠的干预效应;取小鼠脊髓进行苏木精-伊红(HE)和固蓝(LFB)染色观察HQGP的神经保护作用;免疫组织化学法检测小鼠脊髓白细胞分化抗原(CD)68~+巨噬细胞的浸润以及诱导型一氧化氮合酶(i NOS),微管相关蛋白2(MAP-2)和神经元核抗原(Neu N)的表达;免疫荧光组织化学双染法检测小鼠脊髓CD11b~+细胞和趋化因子配体-5(CCL-5)的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脾脏单个核细胞(MNC)培养上清液中相关细胞因子的变化。结果:HQGP有效缓解EAE小鼠的临床症状,推迟发病时间,减轻中枢神经系统的炎性反应和髓鞘脱失;HQGP能减少小鼠脊髓CD68~+巨噬细胞和CD11b~+细胞的数量,抑制脊髓i NOS和趋化因子CCL-5的表达,增加MAP-2和Neu N的表达水平;HQGP能明显降低EAE小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6的分泌,促进IL~(-1)0和γ-干扰素(IFN-γ)的分泌。结论:HQGP具有治疗EAE的潜在作用,其神经保护机制与抑制炎症反应、调控免疫细胞表达及细胞因子的分泌、减轻髓鞘脱失并促进轴突修复和神经元发育有关。     

补阳还五汤对急性脊髓损伤大鼠NOD样受体蛋白1/半胱氨酸蛋白水解酶-1细胞焦亡通路的影响

目的:探究补阳还五汤对急性脊髓损伤(SCI)大鼠NOD样受体蛋白1(NLRP1)/半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)细胞焦亡通路的影响。方法:将32只SPF级大鼠随机分成假手术组、甲强龙组、补阳还五汤(BYHWT)组和模型组,造模成功后补阳还五汤组每天给予补阳还五汤灌胃1次,连续14d,甲强龙组给予甲强龙冲击治疗;假手术组及模型组注射等补阳还五汤剂量的生理盐水;干预后的第1,3,7及14天以BBB评分评价大鼠神经功能恢复情况,Western Blot法检测损伤脊髓中组织NLRP1,Caspase-1及IL-18蛋白的表达。结果:BBB评分:假手术组大鼠评分无变化,BYHWT组及甲强龙组治疗后3d,7d及14d评分大于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后7d及14d,各组大鼠评分变化不明显。干预后第14天大鼠损伤脊髓组织中NLRP1,Caspase-1及IL-18蛋白的表达结果:BYHWT组和甲强龙组蛋白表达均低于假手术组,高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补阳还五汤联合脊髓减压治疗急性SCI效果明显,作用机制可能是通过抑制NLRP1/Caspase-1通路以减少细胞焦亡。     

补阳还五汤对肺纤维化小鼠中介导细胞自噬的mTOR蛋白的调控机制探讨

目的:观察肺纤维化中介导自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达、自噬在肺纤维化形成中的作用,探索补阳还五汤对肺纤维化的治疗机制。方法:144只C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,强的松组,补阳还五汤高、中、低剂量组,每组24只,假手术组小鼠给予气管注入等量的0. 9%生理盐水,其余各组采用博莱霉素(bleomycin,BLM)气管注入法复制肺纤维化模型,造模后假手术组、模型组给予0. 9%生理盐水(0. 01 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤高剂量组给予补阳还五汤(28. 08 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤中剂量组给予补阳还五汤(14. 04 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤低剂量组给予补阳还五汤(7. 02 g·kg~(-1)·d~(-1)),强的松组给予强的松(0. 455 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本。采用苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色观察小鼠肺泡炎和纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织mTOR,核糖体S6,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associate protein 1 light chain 3,MAP1LC3-Ⅱ)的表达;电镜检测观察小鼠肺组织自噬情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠在7,14,28 d肺泡炎及肺纤维化显著(P 0. 01);与模型组比较,给药组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度均有不同程度的改善(P 0. 05),补阳还五汤高剂量组下降最明显(P 0. 05)。与假手术组比较,模型组小鼠肺组织mTOR,S6蛋白表达水平显著上调(P 0. 01),与模型组比较,各给药组mTOR,S6蛋白表达下调(P 0. 01);与假手术组比较,模型组小鼠肺组织LC3-Ⅱ表达水平下调(P 0. 01),与模型组比较,各给药组LC3-Ⅱ上调(P 0. 01)。假手术组细胞形态良好,未见自噬。模型组细胞形态最差,存在个别自噬。各给药组细胞形态及自噬数量好于模型组,其中补阳还五汤高、中剂量组自噬数量最多。结论:在BLM所致小鼠肺纤维化形成的过程中,小鼠肺组织中mTOR蛋白被激活,自噬抑制,mTOR蛋白通过抑制自噬参与了肺纤维化的发病;补阳还五汤对BLM所致小鼠肺纤维化有一定的治疗作用,其机制可能与其下调介导细胞自噬的mTOR蛋白表达有关。     

补阳还五汤联合运动训练对脑梗死大鼠神经元突触重建的影响

目的 :研究补阳还五汤联合运动训练对脑梗死大鼠神经元突触重建的影响。 方法 :用自体血栓经导管注入右侧大脑中动脉建立大鼠局灶性脑梗死模型,分别给予生理盐水、运动训练、补阳还五汤以及补阳还五汤联合运动训练处理,观察神经功能损伤情况,脑组织中突触体素P38(P38) 和生长相关蛋白-43(GAP-43)的动态表达变化。 结果 :运动训练、补阳还五汤和联合治疗均能够使大鼠神经功能损伤评分降低,P38,GAP-43表达增加,以联合治疗组最为明显。 结论 :补阳还五汤联合运动训练可改善脑缺血后神经行为症状,促进神经细胞突触再生重建,两者联合具有协同增效的作用。     

复健片对大脑中动脉闭塞模型大鼠cAMP/PKA信号通路mRNA及神经营养因子表达的影响

目的:研究复健片对大脑中动脉模闭塞型大鼠cAMP/PKA信号通路mRNA及神经营养因子生长相关蛋白43、脑源性神经营养因子表达的影响,探讨其治疗脑梗死的作用机制。方法:50只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、复健片高剂量组、复健片低剂量组、丁苯酞组,每组10只,除对照组外,其余各组制备大脑中动脉闭塞模型,采用Zea Longa 5分制进行评分,1～3分为模型成功。各组采用相应干预措施14d,采用HE染色观察大鼠梗死区神经元损伤情况,RT-PCR法检测梗死区脑组织BDNF、GAP-43、PKA、cAMP mRNA表达情况,Western Blot法检测梗死区脑组织BDNF、GAP-43的含量。结果:与对照组比较,模型组梗死区脑组织神经元损伤明显,GAP-43mRNA表达量降低(P0.05),BDNF、PKA、cAMP mRNA表达量明显降低(P0.01),BDNF、GAP-43蛋白表达量降低(P0.05);与模型组相比,复健片高、低剂量组梗死区脑组织神经元损伤均减轻,BDNF、GAP-43、PKA、cAMP mRNA的表达均明显升高(P0.01),复健片高剂量组BDNF、GAP-43蛋白表达量明显升高(P0.01),低剂量组二者的表达也升高(P0.05)。结论:复健片可激活cAMP/PKA信号通路,调控梗死区脑组织中神经营养因子BDNF、GAP-43的表达,促进大脑中动脉闭塞模型大鼠的神经再生。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠恢复期突触可塑性的影响

目的:探讨补阳还五汤在脑缺血再灌注大鼠恢复期提高突触可塑性的机制研究。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤联合缝隙连接蛋白43(Cx43)抑制剂(Gap26)组,补阳还五汤每天灌胃2次(16 g·kg^-1),Gap26于术后第3天腹腔注射,每天1次(25μg·kg^-1);7 d后取材,采用透射电镜观察缺血侧海马突触和缝隙连接超微结构的改变,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测缺血侧海马突触素(SYN),生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达。结果:电镜下观察到假手术组突触结构完整、清晰,突触数量多,缝隙连接结构清晰;模型组缺血侧海马突触结构溶解,突触数量减少,缝隙连接消失,存在较大间隙,与假手术组比较,SYN,GAP-43的表达明显增高(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤组缺血侧海马突触结构较清晰,突触数量增多,缝隙连接结构较完整,与模型组比较,SYN,GAP-43的表达明显增强(P<0.05,P<0.01);而联合使用Gap26后缺血侧海马突触数量较补阳还五汤组减少,仅可见少量结构完整的缝隙连接,补阳还五汤增强SYN,GAP-43的作用被明显抑制(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可提高脑缺血再灌注恢复期缺血侧海马突触可塑性,其机制可能与增加Cx43的表达促进对SYN,GAP-43的干预有关。     

补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘再生的作用

目的观察补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠髓鞘再生的作用。方法 80只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照、模型、醋酸泼尼松及补肾益髓方组。以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein,MOG)35-55诱导小鼠EAE模型。治疗组小鼠每天给予相应药物灌胃治疗,共40天,醋酸泼尼松为阳性对照药物。每天观察动物的一般情况,记录小鼠神经功能评分,统计小鼠的发病率、潜伏期、病程和疾病负荷等。取小鼠脑和脊髓经固蓝染色观察其髓鞘变化,免疫组化法测定髓鞘再生相关蛋白硫酸软骨素蛋白多糖2胶质细胞和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达。结果补肾益髓方能够延长小鼠发病潜伏期、缩短EAE病程、降低小鼠疾病负荷(P0.05),减少小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润和髓鞘脱失;本方还可促进NG2和MBP蛋白的表达(P0.01)。结论补肾益髓方对EAE小鼠有神经保护作用,并能减轻髓鞘损伤和促进髓鞘修复。     

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CCL2,CCR2mRNA表达的影响

目的:观察目前国际上公认的人类多发性硬化(MS)的理想动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型脊髓中单核细胞趋化蛋白2(CCL2),单核细胞趋化蛋白受体2(CCR2)mRNA表达,探讨苦参素对EAE大鼠的保护作用,为临床应用提供依据。方法:将50只雌性Wistar大鼠随机分5组,分别为正常组,模型组,苦参素低、高剂量组(150,250 mg·kg~(-1)),地塞米松组(1 mg·kg~(-1)),每组10只,自免疫当天起连续给药16 d,同期正常组、模型组ip等量生理盐水,观察记录大鼠的临床症状,并检查组织病理学变化,采用RT-PCR法检测脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达。结果:与模型组比较,苦参素有效延迟EAE大鼠的发病时间,明显降低临床神经功能学评分(P0.01),改善EAE大鼠中枢神经系统炎症浸润(P0.01)和髓鞘脱失(P0.01)程度,下调脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达(P0.01,P0.01)。结论:苦参素对EAE大鼠有防治作用,其作用机制可能与下调大鼠脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达有关。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠PTEN mRNA的影响

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)mRNA表达与血小板活化的影响。方法:将无特定病原体(SPF)级SD大鼠60只随机分为假手术组、模型组、氢氯吡格雷组、补阳还五汤高、低剂量组,每组12只。氢氯吡格雷组ig给予氯吡格雷6.8 mg·kg-1·d-1,补阳还五汤高、低剂量组分别ig给予补阳还五汤26,6.5 g·kg-1·d-1,其余各组ig给予生理盐水,连续给药14 d后,采用大脑中动脉线栓法复制大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,并在造模前2 h给予相应ig处理,造模60 min后拔除栓线再灌注12 h后收集相应标本保存,测定各组大鼠血浆P-选择素(CD62P)含量与海马组织PTEN mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,模型组神经行为评分显著增加,与模型组比较,各用药组的神经行为评分显著降低;与假手术组比较,模型组血浆中CD62P表达显著升高(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组与氢氯吡格雷组均能显著抑制血浆中CD62P表达(P0.05),但补阳还五汤组与氢氯匹格雷组之间抑制作用无显著性差异;与假手术组比较,模型组PTEN mRNA表达显著增加;与模型组比较,各用药组的PTEN mRNA表达显著降低(P0.05),以补阳还五汤高剂量组尤为明显。结论:补阳还五汤对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护机制可能与下调PTEN基因过表达及抑制CD62P表达有关。     

补阳还五汤对动脉粥样硬化模型主动脉Rho激酶,PAl-1及eNOSmRNA表达的影响

目的:通过运用益气活血法的代表方剂补阳还五汤对动脉粥样硬化模型的干预,观察主动脉组织Rho激酶,纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA的表达、血脂等指标的变化,揭示该方药抗动脉粥样硬化作用的新靶点和新途径。方法:60只大鼠随机分为正常组,模型组,补阳还五汤低、高剂量组(10,20 g·kg-1),辛伐他汀组(0.6 mg·kg-1),补阳还五汤预防组(10 g·kg-1),除正常组外,其余各组维生素D3加高脂饮食诱导大鼠动脉粥样硬化模型,分别ig给予相应药物,补阳还五汤预防组给药的同时造模,造模成功后干预28 d,检测主动脉Rho激酶,PAl-1及e NOS mRNA表达,血脂水平总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。结果:与正常组比较,模型组大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平明显升高,e NOS mRNA表达量水平明显降低及血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平明显升高(P0.01),HDL水平明显降低,均具有明显统计学差异(P0.01),补阳还五汤低、高剂量治疗组、辛伐他汀组、补阳还五汤预防组明显降低大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平,明显升高e NOS mRNA表达量水平,明显降低血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平,明显升高HDL水平,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补阳还五汤可以下调Rho激酶,PAl-1 mRNA的表达,同时,上调e NOS mRNA的表达水平、降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用,抑制Rho激酶mRNA,PAl-1 mRNA表达及上调e NOS mRNA表达水平可能是其作用机制之一。     

EAE小鼠中枢神经系统中CD11b mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠不同发病时期脑和脊髓组织中CD11b mRNA的表达变化,明确益肾达络饮的干预机制。方法：采用MOG_35-55抗原免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,随机选取分为正常组,佐剂组、模型组、醋酸泼尼松3.9 mg·kg^-1组、益肾达络饮20 g·kg^-1组,在造模后第7天开始灌胃给药,直到相应时间点进行取材。采用实时荧光定量PCR测定免疫后7 d（发病前期）、14 d（发病初期）、24 d（发病急性期）、40 d（慢性持续期）4个不同时间点EAE小鼠脑和脊髓组织中CD11b mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,在免疫后14,24,40d,模型组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA表达分别升高至2.39±1.09,3.20±1.14,1.58±0.36（P<0.05）。与模型组比较,在免疫后40 d激素组和益肾达络饮组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）;与正常组比较,激素组、益肾达络饮组在免疫后40 d CD11b mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平无显著改变;在免疫后14 d激素组EAE小鼠脊髓中CD11b mRNA的表达水平明显降低。结论：单核细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮干预EAE的作用机制与中枢神经系统单核细胞黏附分子CD11b的调节密切相关。     

淫羊藿黄酮对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型病理特征的干预

 目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）大鼠模型,观察其组织病理特征。并进一步研究中药有效成分淫羊藿黄酮（epimedium flavone,EF）对该模型病理特征的干预作用。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis大鼠建立EAE动物模型,每天监测动物体重和行为学变化;应用HE染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖套形成等变化;Luxol Fast Blue（LFB）染色观察脊髓脱髓鞘变化;电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构;并考察EF对上述指标的干预作用。结果 ①随着病程进展,EAE模型组大鼠体重明显下降;从第8天起出现行为学异常,神经功能损伤评分逐渐增高,于第12天达峰值。病理形态学检查显示,EAE模型组大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润;脊髓腰膨大脊膜出现炎性水肿,并有炎症细胞浸润;脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕,呈“袖套样”改变;脊髓髓鞘大面积脱失,且髓鞘板层松散。②EF灌胃给药能显著增加EAE模型大鼠体重,延迟发病进程,缓解发病症状。③EF能减轻EAE模型大鼠脊髓腰膨大和脑实质炎性浸润和髓鞘脱失的病理变化。结论 EF能显著降低EAE大鼠行为学评分,改善EAE大鼠大脑和脊髓的炎性脱髓鞘变化,减轻神经细胞结构损伤,从而改善其临床症状。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡因子及学习记忆能力的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWT)对阿尔茨海默病小鼠海马组织凋亡因子及学习记忆能力的影响。方法:40只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg~(-1)),BYHWT高、中、低剂量组(分别为37.06,18.53,9.26 g·kg~(-1))。C57小鼠作为空白组。连续灌胃BYHWT 30 d,进行水迷宫行为学测试后,取材。用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马组织中凋亡因子Bcl-2明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3明显增加(P0.01)。与模型组比较,BYHWT高、中剂量组能明显改善小鼠学习记忆能力,凋亡因子Bcl-2明显增加(P0.01),Bax和Caspase-3明显减少(P0.01)。结论:补阳还五汤能够明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习记忆能力,降低海马组织中Bax和Caspase-3的表达,增加Bcl-2的表达。     

Effects of electroacupuncture on urodynamics,intramedullary apoptosis and bidirectional regulation of neurotrophic factors in neurogenic bladder rats after supersacral spinal cord injury: 电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学及髓内凋亡,神经营养因子双向调控作用的影响

ObjectiveTo observe the effects of electroacupuncture on urodynamics and intramedullary apoptosis related factor B cell lymphoma gene-2 (Bcl-2), Bcl-2 related protein X (Bax) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in neurogenic bladder rats after supersacral spinal cord injury.MethodsA total of 60 female SD rats, SPF grade, were randomly selected, 12 rats in the blank group and 12 rats in the sham operation group, and the remaining 36 rats were made models. Of these 36 rats, 24 rats meeting the model standard were randomized into the model group and electroacupuncture group, with 12 rats in each group. The neurogenic bladder models after supracacral spinal cord injury were prepared by the Hassan Shaker spinal cord transection method, via combining the previous model study experience. At the end of spinal shock stage, “Dàzhuī (大椎GV14)” “Zhōngjí (中极CV 3) ” “ Cìliáo (次髎BL 32) ”, and “Sānyīnjiāo (三阴交SP 6) ” were selected for electroacupuncture. Observation on the histomorphological changes of bladder detrusor and spinal cord in rats was conducted by HE staining. The apoptosis rate of spinal cord cells was measured by TUNEL assay. The maximum bladder volume and compliance were measured by urodynamics test. The protein expressions of Bcl-2, Bax, and BDNF in spinal cord tissues were measured by Western blot assay. The expressions of Bcl-2, Bax, and BDNF mRNA were measured by RT-PCR assay.Results① The results of HE staining showed that compared with the blank group and sham operation group, in the model group the bladder epithelial cell structure was destroyed, the detrusor muscle fibers proliferated, and there were severe bleeding changes, the spinal cord tissue was disordered, the structure was destroyed, the cell space was enlarged, and accompanied by a large number of inflammatory cell infiltration and cystic cavity formation. Compared with the model group, in the electroacupuncture group, the intact bladder epithelial cells increased, the detrusor muscle fiber proliferation decreased, the bleeding changes decreased, the complete structural area of spinal cord tissues increased, the cell space decreased, the levels were clearer, and the cystic cavity decreased. ② The results of TUNEL assay indicated that the TUNEL positive rate of spinal cord cells in the model group was significantly higher than that in the blank group and sham group (both P<0.05). Compared with the model group, the TUNEL positive rate of spinal cord cells in the electroacupuncture group was significantly reduced (P<0.05). ③ The results of urodynamics test suggested that compared with the blank group and sham operation group, the maximum bladder volume and compliance of the model group were significantly reduced (all P<0.05). Compared with the model group, the maximum bladder volume and compliance were significantly increased in the electroacupuncture group (both P<0.05). ④ The results of Western blot assay indicated that, compared with the blank group and sham operation group, in the model group the protein contents of Bcl-2 and BDNF were significantly reduced (all P<0.05), while the protein content of Bax in the model group was significantly increased (both P<0.05). ⑤ The results of RT-PCR assay indicated that, compared with blank group and sham operation group, in the model group the intramedullary Bcl-2 and BDNF mRNA were significantly reduced (all P<0.05), and Bax mRNA was significantly increased (both P<0.05).ConclusionElectroacupuncture at “GV14” “CV3” “BL32”, and “SP6” can promote the repair of bladder detrusor, improve the maximum bladder volume and compliance of bladder, promote morphological repair of bladder detrusor, reduce spinal cord cell apoptosis rate, thus to restore the function of bladder. This is maybe related with the electroacupuncture's two-way regulatory mechanism of increased expression of protein and gene of Bcl-2 and BDNF and decreased expression of protein and gene of Bax in spinal cord tissues.     

康脑液对脑缺血大鼠BDNF,MMP-9,ERK1/2表达的影响

目的:通过康脑液干预观察其对脑缺血再灌注大鼠脑源性神经生长因子(BDNF),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨康脑液对脑缺血的保护机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组(I/R)及康脑液高、中、低剂量(28.6,14.3,7.15 g·kg-1·d-1)组,线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。于缺血2 h后再灌注(分别于再灌注后1,6,12,24,72,168 h后,处死大鼠),用免疫组织化学法观察大鼠脑组织BDNF,MMP-9,ERK1/2的表达情况。结果:与I/R组比较,康脑液高、中剂量组各时间点的BDNF及ERK1/2表达量明显上调(P0.05),而MMP-9表达的阳性细胞明显减少(P0.05);再灌注24 h梗死灶体积康脑液高,中剂量组较I/R组明显减小(P0.05)。结论:康脑液可促进大鼠局灶性脑缺血后脑组织中BDNF的表达,激活ERK1/2信号通路,同时抑制脑内MMP-9的表达,发挥对神经血管单元的保护作用。     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化作用与紧密连接蛋白的关系

目的: 探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS) 的保护作用与紧密连接蛋白表达的关系. 方法: 将40只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,Rho激酶抑制剂Y-27632组.以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常组,每组8只动物.模型组和治疗组均采用0.1 g·kg^-1·d^-1的Hcy造模,造模同时,治疗组分别补阳还五汤(5,10,20 g·kg^-1·d^-1)组,Y-27632 50 mg·kg^-1组,ig.8周后采用Western-blot检测主动脉组织claudin蛋白的表达变化和反转录PCR(RT-PCR)检测连接蛋白包括咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白(claudin)、带状闭合蛋白(zonula occludens, ZO)、连接黏附分子(junction adhesion molecule, JAM)的mRNA的表达变化. 结果: 与正常组对比,Western-blot检测模型组AS病变明显,模型组与正常组比claudin蛋白表达明显减少,RT-PCR检测模型组与空白组相比,claudin,JAM,Zo,Occludin的mRNA的表达明显降低,不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时上调血管组织中Claudin,JAM,Zo,Occludin的表达水平. 结论: 补阳还五汤能显著的增加血管组织中Claudin,occludin,JAM,Zo表达量,说明补阳还五汤抗hcy所致的AS与增强血管组织中紧密连接蛋白有关.