马钱子碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞周期的影响及其作用机制

目的:探讨马钱子碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞周期的影响及其作用机制.方法:体外培养HT-29细胞,加入不同浓度马钱子碱,用MTT法检测对HT-29细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测对HT-29细胞周期的影响.采用Western blot法检测细胞中Bcl-2、caspase3、caspase9、P53、c-PA...     

白藜芦醇对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用研究

目的:观察白藜芦醇对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用。方法:使用不同浓度白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HT-29后,运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测白藜芦醇对HT-29细胞生长的影响,流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇对HT-29细胞凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性(P0.01)。FCM法检测结果提示,与阴性对照组比较,不同浓度的白藜芦醇可以提高HT-29细胞凋亡率(P0.05)。结论:白藜芦醇对人结肠癌HT-29细胞的增殖有抑制作用,且能诱导HT-29细胞凋亡,是一种高效低毒的药物,其具体机制有待进一步探讨。     

克瘤丸对结肠癌细胞HT-29细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察克瘤丸对人结肠癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 将4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml浓度克瘤丸作用于HT-29细胞24～48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测克瘤丸对HT-29细胞增殖的影响,AnnexinV单染法检测克瘤丸对HT-29细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测细胞周期的分布情况. 结果 与对照组比较,浓度为4、2、1、0.5mg/ml克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率差异均有统计学意义(P＜0.01);4、2、1mg/ml浓度克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率均明显优于0.25mg/ml及0.5mg/ml浓度克瘤丸(P＜0.01).与1mg/ml浓度比较,2mg/ml、4mg/ml组凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05).4mg/ml时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区,与1mg/ml、2mg/ml组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29的增殖具有抑制作用并能够引起该细胞的凋亡.     

苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究

目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱(matrine)对大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western-blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-29细胞前后COX-2 mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2(PGE2)水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-29细胞COX-2 mRNA、蛋白表达及PGE2合成水平,但对COX-1无影响。当苦参碱2．0mg／ml处理时,COX-2 mRNA表达在处理后6h和9h时抑制率均为100％;细胞培养液PGE2合成水平在9h时抑制率为63．9％;COX-2蛋白表达在12h和24h时抑制率分别为48％和100％。结论苦参碱具有选择抑制HT-29细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在一定浓度和时间范围内,表现出时效与量效关系．     

吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞体外抑制作用的研究

目的 研究吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用.方法 MTT法筛选吉祥草乙醇提取物及其不同溶剂萃取部分对HT-29细胞抑制作用的活性部位;通过凋亡染色观察细胞凋亡形态;应用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率.结果 吉祥草正丁醇萃取物对HT-29细胞的抑制作用较强,且呈量效和时效关系,作用48 h时IC50值为66.59 mg·L-1,凋亡染色显示有典型的凋亡形态出现,流式细胞仪检测其能诱导HT-29细胞凋亡并呈剂量依赖关系.结论 吉祥草正丁醇萃取物能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

白花蛇舌草提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制研究

目的探讨白花蛇舌草提取物在体外诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的机制研究。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定不同浓度白花蛇舌草提取物对HT-29细胞增殖的影响,DNA Ladder试剂盒检测药物作用后细胞凋亡情况,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位变化,应用比色法分析Caspase-9和Caspase-3的活化情况。结果白花蛇舌草提取物干预HT-29细胞24 h后,HT-29细胞密度明显减少,细胞变小,可明显抑制HT-29细胞增殖,细胞凋亡增加,线粒体膜电位丧失,具有显著地剂量依赖,并出现明显的DNA Ladder条带;Caspase-9和Caspase-3的活化随着药物浓度的升高而增加。结论白花蛇舌草提取物能通过线粒体通路诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

克瘤丸对结肠癌细胞HT-29黏附和侵袭能力的影响

目的:观察克瘤丸体外对人结肠癌细胞HT-29增殖、黏附、侵袭的影响,评价其抑瘤的效果。方法:采用MTT法、细胞黏附人工重组基底膜培养小室(TransweⅡ小室)法,观察克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果:与对照组比较,克瘤丸有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖的作用,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,当药物浓度达到1mg/mL时,对HT-29细胞的抑制作用最强。克瘤丸作用于人结肠癌细胞HT-29后,细胞的黏附能力明显降低,侵袭的细胞数较对照组明显减少。结论:克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29的增殖具有抑制作用,能抑制人结肠癌细胞HT-29的黏附能力和侵袭能力。     

益气健脾抗癌法对结肠癌HT-29细胞自噬的作用研究

目的 探索益气健脾抗癌法对体外培养的结肠癌HT-29细胞自噬作用及相关机制。方法 将体外培养的结肠癌HT-29细胞分为高剂量益气健脾抗癌组,中剂量益气健脾抗癌组,低剂量益气健脾抗癌组,及不含药血清对照组。应用Western blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3和p62蛋白表达量,吖啶橙染色检测细胞自噬。结果 在作用48 h时,与不含药血清对照组相比,益气健脾抗癌法可激活HT-29细胞的自噬(P<0.05)。高剂量组较中、低剂量组对细胞的激活能力差异具有统计学意义,3个剂量组均可降低HT-29细胞的侵袭能力,高剂量组与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 益气健脾抗癌法可以激活HT-29细胞的自噬,且与剂量呈正相关。     

复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的研究复合螺旋藻多糖对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的抑制作用及其机制。方法将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶提取物(GBE)按一定比例复合,用不同浓度的复合制剂分别对细胞作用后,在显微镜下观察细胞形态学变化、用MTT法测其生长抑制率、PI及AnnexinV-FITC/PI染色后,流式细胞仪测细胞周期及凋亡率。结果不同比例和浓度的复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞均有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,抑制作用高于单一成分组;细胞阻滞于S期,凋亡细胞增加。结论复合螺旋藻多糖通过阻断细胞周期而抑制体外培养人结肠癌HT-29细胞的生长,并能够促进细胞凋亡,具有较好的抑肿瘤活性。     

苦参碱对HT29人结肠癌细胞凋亡及Bax和BcL-2蛋白表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌HT29细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 取HT29人结肠癌细胞体外培养,加苦参碱处理24～48 h.采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,采用Western Blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 在2～16 mg/mL苦参碱作用下,HT29细胞增殖被明显抑制,且呈剂量和时间依赖性（P＜ 0.05或P＜0.01）;给予4、8和16 mg/mL苦参碱作用HT29细胞24 h后,细胞凋亡率分别为（14.84±2.35）％、（37.80±2.49）％和（54.10±1.60）％,均明显高于对照组（4.36±0.23）％（P＜0.05）;经苦参碱作用24 h后,细胞Bax蛋白表达增加,而BcL-2表达减少,呈剂量依赖性.结论 苦参碱能抑制HT29细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与抑制BcL-2和促进Bax蛋白表达有关.     

氧化苦参碱对结肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的作用研究

目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对人结肠癌LOVO细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用MTT法检测OM对LOVO细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡率以及细胞周期分布;吉姆萨染色法观察用药前后细胞形态变化;荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测药物作用后p53 mRNA表达变化情况。结果:MTT法显示,OM在一定浓度范围(200μg/mL～5mg/mL)对人结肠癌LOVO细胞的生长有明显的抑制作用,对LPS诱导的LOVO细胞的过度增殖也具有明显的抑制作用。LOVO细胞经OM作用后光镜下可见细胞数量明显减少,细胞内空泡明显增多。流式检测表明OM可明显诱导LOVO细胞凋亡,使LOVO细胞周期停滞于S期。荧光定量PCR法显示,OM作用后LOVO细胞p53 mRNA表达明显下降。结论:OM能显著抑制人结肠癌LOVO细胞增殖,并诱导LOVO细胞凋亡,其机制可能与OM使LOVO细胞周期停滞于S期,下调LOVO细胞p53 mRNA表达有关。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

柯里拉京对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究柯里拉京对转移性人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:分别通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,划痕实验,transwell实验检测不同浓度的柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移和侵袭的作用;通过细胞免疫荧光法观察不同浓度柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H肌动蛋白纤维的分布、丝状和片状伪足形成等的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)研究柯里拉京抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。结果:MTT实验显示,柯里拉京抑制人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖的半数抑制浓度(IC50)分别为388.67,314.42μmol·L~(-1)。划痕实验显示,200μmol·L~(-1)柯里拉京对SMMC7721细胞迁移的抑制作用最强,迁移率为12.16%;120μmol·L~(-1)柯里拉京对MHCC97H细胞迁移的抑制作用最强,迁移率为9.84%。Transwell实验显示,200μmol·L~(-1)柯里拉京对SMMC7721细胞和MHCC97H细胞侵袭的抑制作用最强,侵袭的细胞数分别为(40.44±3.01),(36.69±3.36)个。细胞免疫荧光显示,柯里拉京可使SMCC7771,MHCC97H中F-肌动蛋白(F-actin)骨架发生重塑,浓度增高,细胞边缘的丝状伪足和片状伪足形成逐渐减少、张力纤维数目逐渐增多,这种影响在SMMC7721为200μmol·L~(-1)时最显著,MHCC97H为120μmol·L~(-1)最明显。Western blot显示,柯里拉京能明显下调肝癌细胞SMMC7721和MHCC97H上皮-间充质转分化(EMT)的钙黏附蛋白-N(N-Cad)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P0.05),下调有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达(P0.05),上调磷酸化-p38(p-p38)蛋白表达(P0.05)。结论:柯里拉京能抑制2种人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能是通过抑制EMT通路中的N-Cad,Vimentin,MAPK信号通路p-ERK蛋白表达和上调p-p38蛋白表达,从而调控细胞骨架重塑来实现的。     

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P0.05,P0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P0.05,P0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。     

薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及IL-8，CXCL-12，VEGF表达的影响

目的:体外实验观察不同剂量薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及白细胞介素-8(IL-8),趋化因子-12(CXCL-12)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,阐释薄荷醇抗肝癌的作用及其相关机制。方法:设立薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)组以及空白组作用于肝癌HepG2细胞,利用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测方法检测薄荷醇对HepG2细胞增殖的影响,利用迁移实验(Transwell)检测薄荷醇对HepG2细胞迁移能力的影响,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测薄荷醇处理HepG2细胞炎症和趋化因子IL-8,CXCL-12 mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测薄荷醇处理对HepG2细胞中VEGF蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)在体外对HepG2细胞增殖和迁移均有抑制作用。薄荷醇100μmol·L-1时抑制作用明显(P 0. 05);薄荷醇(50,100,200μmol·L-1)对HepG2细胞迁移能力有明显抑制作用(P 0. 05),呈剂量依赖性。与空白组比较,薄荷醇(100,200μmol·L-1)均能显著抑制HepG2细胞中的IL-8,CXCL-12 mRNA和VEGF蛋白的表达水平(P 0. 05),进一步证实薄荷醇通过抑制炎症趋化因子起到抗癌作用。结论:薄荷醇在体外对肝癌HepG2细胞增殖、迁移具有明显抑制作用,潜在机制可能与其抑制细胞IL-8,CXCL-12,VEGF的表达有关。此结论为薄荷醇抗肝癌作用的阐释提供了实验依据。     

苦参碱抑制JM细胞株增殖和诱导凋亡的研究

目的 :观察苦参碱对T细胞白血病细胞株JM的作用。方法 :Wright Giemsa染色及Hoechst 332 5 8荧光染色观察苦参碱作用JM细胞株前后形态学变化 ,电镜观察超微结构的改变 ;流式细胞仪分析不同剂量加药组第4天及 0.8g·L^-1加药组 1～4d细胞周期的改变 ;DNA琼脂糖凝胶电泳检测“梯状”DNA。结果 :第 3天起各加药组细胞形态学观察见典型凋亡特征改变 ,随时间延长更加明显 ;流式细胞仪检测第 4天各组均可见亚二倍体峰。0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g·L^-1各处理组凋亡细胞比率分别为 3.1% ,2.5 % ,13.3% ,40.4 % ,48.6 % ,对照组为1.4 % ;各处理组S期细胞比率分别为 28.9% ,26.1% ,27.7% ,20.9% ,14.2% ,对照组为 30.4% ;各处理组G1期细胞比率分别为 63.2% ,67.5% ,68.1% ,75.2% ,83.6% ,对照组为 41.8%。 0 .8g·L^-1加药组 1～4d ,G1期细胞比率分别为 45.5% ,77.3% ,77.2% ,83.6% ;S期细胞比率分别为 28.6 % ,17.5 % ,19.1% ,14.2% ;凋亡细胞比率分别为 3.0% ,3.7% ,9.1% ,48.6%。DNA电泳 :0.4,0 .6 ,0.8g·L^-1组见DNA“梯形”图谱 ,0.1,0.2g·L^-1及对照组未见。结论 :苦参碱可以抑制JM细胞的DNA合成 ,造成G1期阻滞 ,从而抑制了细胞的增殖。同时 ,该生物碱还可诱导。     

头针对脑缺血再灌注大鼠内源性神经干细胞增殖及迁移的影响

目的 研究脑缺血大鼠内源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖、迁移及头针对其干预情况,探讨头针治疗脑缺?〉淖饔没啤?     

双根清脑颗粒对血管性痴呆模型大鼠神经干细胞增殖迁移的影响

目的: 观察双根清脑颗粒对血管性痴呆(VD)模型大鼠神经干细胞(NSCs)增殖、迁移的影响,探讨双根清脑颗粒治疗VD的机理。 方法: SPF级SD大鼠42只,随机分为双根清脑颗粒高、中、低剂量组,脑复康组、模型组、假手术组、正常组等7组,每组大鼠6只。采用注入同种血栓栓子方法造成VD模型,中药高、中、低剂量组分别以双根清脑颗粒36,12,4 g ·kg^-1 ig,脑复康组以0.108 g ·kg^-1 ig,给药容积均为1.5 mL ·kg^-1,模型组、假手术组和正常组以等量生理盐水ig。免疫组化法分别标记5-溴脱氧尿苷(BrdU)阳性细胞和微管相关蛋白(DCX)阳性细胞,显微镜下观察BrdU与DCX阳性细胞的表达。 结果: 双根清脑颗粒中、低剂量组、脑复康组大鼠皮质区与SGZ区BrdU阳性细胞数均明显增加( P <0.05);双根清脑颗粒中、低剂量组SGZ区BrdU阳性细胞比脑复康组增加更为显著( P <0.01)。假手术组以及双根清脑颗粒中、低剂量组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数明显增加( P <0.01),高剂量组、脑复康组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数亦显著增加( P <0.05);双根清脑颗粒中、低剂量组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数比脑复康组明显增加( P <0.01)。 结论: 双根清脑颗粒可促进VD模型大鼠脑内NSCs的增殖与迁移。