青蒿琥酯抗肝癌作用的实验研究

目的 :研究青蒿琥酯的抗肝癌作用。方法 :运用小鼠肝癌H₂₂ 癌模型、MTT法和集落形成法 ,观察青蒿琥酯对荷瘤鼠和人肝癌SMMC-772 1细胞株的作用。结果 :口服青蒿琥酯 30 0mg·kg^-1·d^-1,肿瘤受到明显抑制 ,抑瘤率在 3次实验中分别为 49.1% ,48.7% ,46.6% ;小鼠生存时间明显延长。青蒿琥酯与 5-氟尿嘧啶有协同抗肿瘤作用。青蒿琥酯体外对人肝癌细胞有明显细胞毒作用 ,其IC₅₀为 2.07μg·ml^-1,同时抑制人肝癌SMMC-7721克隆原细胞形成集落 ,其IC₅₀为2.48μg·ml^-1。结论 :口服青蒿琥酯有抗肝肿瘤作用。     

姜黄素/5-FU对肝癌细胞的生长抑制作用

目的研究姜黄素(CU)/5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌细胞(SMMC-7721、Bel-7402)的生长抑制作用。方法MTT法用于检测CU和5-FU单用及联合应用对肝癌细胞的生长抑制作用。结果 CU和5-FU单用时能明显抑制肝癌SMMC-7721及Bel-7402细胞的增殖,并呈现浓度依赖性,两药单独作用于肝癌SMMC-7721细胞48 h的IC_(50)值分别为(89.06±11.85)μmol·L~(-1)和(21.90±1.54)μmol·L~(-1),作用于肝癌Bel-7402细胞48 h的IC_(50)值分别为(94.74±4.03)μmol·L~(-1)和(38.48±2.27)μmol·L~(-1)。当CU和5-FU联合应用比例为1∶1(mol∶mol)时,两药联合应用时对肝癌SMMC-7721和Bel-7402细胞呈协同抑制作用(CI1),作用48 h的IC_(50)值分别为(4.95±1.20)μmol·L~(-1)和(19.30±2.29)μmol·L~(-1)。结论 CU与5-FU联合应用对肝癌SMMC-7721及Bel-7402细胞的增殖具有协同抑制作用,并且明显优于单药。     

苦参碱抗肝癌细胞增殖的~1H-NMR代谢组学研究

目的采用~1H-NMR代谢组学方法,研究苦参碱抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用。方法应用CCK8法检测苦参碱抑制SMMC-7721细胞增殖的作用,并对细胞裂解液及细胞培养上清液进行~1H-NMR检测,结合多元统计分析和代谢通路分析探讨其作用机制。结果 1、2、4 mg/m L苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖。与对照组相比,苦参碱作用于SMMC-7721细胞后,细胞内外共发现21种差异代谢物。苦参碱能显著调节细胞内外亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸等差异代谢物的量,对SMMC-7721细胞的氨基酸代谢起到一定的调控作用。结论苦参碱可能通过调控氨基酸代谢、能量代谢等途径发挥抗肝癌作用。本研究从代谢组学角度为阐释苦参碱抗肝癌的作用机制提供了科学依据。     

青蒿琥酯治疗肝癌的机理初探

目的：研究青蒿琥酯抗肝癌的作用机理。方法：检测拓扑异构酶活性，甲基绿－派络宁染色检测凋亡细胞，免疫组化方法观察Bax、Bcl-2的表达。结果：经青蒿琥酯处理的SMMC－7721细胞拓扑异构酶活性增强，青蒿琥酯处理后，凋亡细胞明显增加，免疫组化显示，青蒿琥酯组肿瘤标本Bax蛋白阳性细胞数增多，Bcl-2蛋白阳性细胞数减少。结论：青蒿琥酯抗肝癌作用机理可能为上调Bax基因，下调Bcl-2基因， 诱导癌细胞凋亡，同时影响拓扑异构酶活性。     

黄芩素对人肺腺癌A549细胞的药效作用及机制探讨

目的:研究黄芩素对A549细胞增殖、侵袭、迁移,对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管形成的影响;观察其体内对裸鼠移植瘤的作用,通过代谢组学探讨其抑瘤机制。方法:体外实验,噻唑蓝(MTT)法检测黄芩素对A549细胞生长的影响;transwell小室法观察黄芩素对A549细胞侵袭及迁移的影响;小管生成实验观察黄芩素对HUVEC新生血管形成的影响。体内实验,移植瘤裸鼠分为模型组、顺铂组、黄芩素(50,100μmol·L~(-1))组,观察黄芩素对移植瘤的干预作用;气相色谱/质谱法对黄芩素干预后裸鼠血清样本进行代谢组学分析,寻找差异性代谢物及代谢通路。结果:黄芩素能抑制A549细胞生长,24,48,72 h的IC50分别为43.02,31.11,28.42μmol·L~(-1)。黄芩素(5,10,20μmol·L~(-1))能抑制A549细胞的侵袭及迁移。黄芩素(10,20μmol·L~(-1))能抑制HUVEC官腔样结构的形成(P0.05)。黄芩素(50 mg·kg~(-1))对移植瘤具有抑制作用;代谢组学方法检测到黄芩素组血清中差异性代谢物14种,代谢通路7条。结论:黄芩素可抑制A549细胞增殖、侵袭、迁移及HUVEC官腔样结构形成,体内对移植瘤生长具有抑制作用;黄芩素干预后,血清中氨基酸、碳水化合物、能量代谢等多条代谢通路发生变化,这些变化可能是其抗肿瘤的作用机制。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究抗癌扶正方(KFP)对肝癌抑制作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞5MMC-7721,分别予以9.72,19.44,38.88 g·L-1的3个质量浓度的KFP作用于细胞,采用MTT法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,并通过Western Blot法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:KFP以浓度及时间依赖的方式抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖;Western Blot显示KFP作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN),caspase-9的活性增强,p-AKT的表达降低,且呈剂量依赖性.结论:KFP能增加入肝癌细胞SMMC-7721 PTEN的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,继之激活下游caspase-9促凋亡分子的表达,诱导人肝癌SMMC-7721发生凋亡.该研究表明PI3K/AKT信号通路在KFP诱导的人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中起了重要作用.     

青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞侵袭能力影响及机制研究

目的研究青蒿琥酯对结肠癌细胞侵袭能力的影响以及对细胞间黏附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管内皮生长因子165(Vessel endothelium growth factor165,VEGF165)和血管生成素-2(Angiogenin-2,Ang-2)蛋白表达的影响。方法以人结肠癌细胞HCT-8为模型,采用软琼脂集落培养试验检测青蒿琥酯对肿瘤细胞侵袭抑制效应;Western blot法检测青蒿琥酯作用前后细胞ICAM-1、VEGF165和Ang-2蛋白表达变化。结果 3μmol/L青蒿琥酯即能有效抑制结肠癌HCT-8细胞诱导的软琼脂集落形成(P<0.05)。经青蒿琥酯处理后,人结肠癌HCT-8细胞ICAM-1、VEGF165和Ang-2蛋白表达呈剂量依赖性减少(3～12μmol/L,P<0.05)。结论青蒿琥酯可明显抑制结肠癌HCT-8细胞的侵袭,其作用机制可能与其下调ICAM-1、VEGF165和Ang-2蛋白表达有关。     

槲皮素对SMMC-7721肝癌细胞PI3K/AKT信号通路影响的探讨

目的:观察槲皮素( quercetin)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞凋亡的影响,探讨其对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用MTT法检测槲皮素对SMMC-7721细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测槲皮素对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:槲皮素抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性.顺铂和槲皮素40,80,160,320 μmol·L-148 h抑制率分别为62.19％,25.47％,27.18％,36.96％,51.28％.流式细胞术结果提示,槲皮素80,160,320μmol ·L -可使SMMC-7721肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期.Western blot凋亡相关蛋白表达检测表明,药物组AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:槲皮素能诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡,其机制可能是使肝癌细胞SMMC-7721周期阻滞于G0/G1期,PTEN的过表达抑制AKT活化,激活Caspase-9从而促进细胞凋亡.     

青蒿鳖甲汤对肝癌模型小鼠代谢的影响＊

目的 采用代谢组学的方法研究青蒿鳖甲汤对肝细胞癌模型小鼠血浆代谢物的影响，由筛选出的差异代谢物来探究其相关作用机制。方法 注射鼠源肝癌细胞株H22细胞对小鼠进行造模，随机分为正常对照组、模型组和青蒿鳖甲汤组，运用UHPLC-Q-Exactive液质联用技术检测各组小鼠血浆中的代谢物变化并进行多元统计分析研究，筛选出差异性代谢物及对应的相关代谢通路。结果 多元分析结果显示，3组的代谢物存在显著差异，寻找出肝癌模型组及给予青蒿鳖甲汤干预后模型小鼠的差异代谢物15个，涉及31条相关的代谢通路，经通路富集分析发现，重要性得分在前三的代谢通路分别是胆汁分泌、鞘脂代谢、类固醇激素生物合成。结论 青蒿鳖甲汤能有效改善部分紊乱的代谢物水平，为进一步对青蒿鳖甲汤改善肝癌及后期发热的作用机制研究提供理论依据。     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡及其凋亡通路的影响

目的:研究槲皮素体外对人肝癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测细胞上清液中Caspase-3、Caspase-9及Survivin的含量。结果:槲皮素(10-320μmol.L-1)体外可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并具有浓度和时间依耐性;在40-160μmol.L-1浓度下,槲皮素可诱导SMMC-7721细胞凋亡;将细胞阻滞在G2-M期;使Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量显著增加,而Survivin蛋白表达显著减少。结论:槲皮素抑制人肝癌SMMC-7721细胞的作用机制与诱导细胞凋亡和将细胞周期阻滞在G2-M期有关,其凋亡通路涉及Caspase途径。     

斑马鱼药物代谢模型的适用性研究进展

根据相关研究及国外有关文献资料,对斑马鱼药物代谢的实验方法、代谢类型及适用性进行归纳和总结.斑马鱼较成功地模拟了哺乳动物I相代谢、II相代谢、肠道菌群代谢及多途径整体代谢,适用于微量单体化合物及其组合物的在体代谢研究,有利于代谢产物的简单、高效富集,具简单、高效、低成本、化合物用量少(毫克级)等优势,是一种早期、快速预测微量成分在体代谢的极具前景的模式生物模型.     

中药对急性胆管炎胆汁前列环素和血栓素变化的影响

通过人、兔口服中药茵陈胆道汤对胆汁前列环素和血栓素的稳定代谢产物6—keto—PGF_(1α)与TXB_2的检测结果的影响,探讨了急性胆管炎胆汁前列环素、血栓素的变化及其中药对其的影响。结果显示,急性胆管炎时6-keto-PGF_(1α)及TXB_2明显增高,二者比值下降,用药后则前两项明显下降,比值增高。     

多成分药物代谢理论及技术方法分析

多成分药物代谢是以多成分中各成分间的转运蛋白相互影响及药物代谢酶相互影响为核心,以多成分同时测定为原则,以多成分环境影响的代谢变化为重点研究方向,其理论内容由序贯代谢、并发代谢、多重代谢组成,在坚持多成分同时测定、代谢连续时间记录、代谢连续空间记录及定性与定量结合的研究原则下,综合运用体内实验、在体实验及离体实验方法开展研究。在直观比较分析与量化数据评价的模式下,可认为多成分药物代谢是学术基础扎实、技术手段先进的新兴科研方向。     

风寒湿刺激对家兔颈部肌肉及血液组织中氧自由基和前列腺素代谢的影响

为了探讨颈部风寒湿刺激对机体氧自由基及前列腺素的影响，将24只新西兰大白兔随机分为正常对照组,风寒湿组，低头位组，复合模型组4组，每组6只，通过给予风寒湿，低头位刺激，观察受累局部和血液组织中超氧化物歧化酶（SOD），脂质过氧化物（LPO），前列腺素E2（PGE2），6－酮－前列腺素F1α（6－keto-PGF1α)的变化，结果表明，风寒湿与低头位等颈椎病常见的致病因素可使颈部出现无菌性炎症并使受累局部组织和血液中SOD，LPO，PGE2，6－keto-PGF1α出现异常。氧自由基及前列腺素代谢异常可能是风寒湿致颈椎病的重要机理之一。     

解酒肝康颗粒对酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢影响的研究

目的：观察解酒肝康颗粒对酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢的影响。方法：用酒精性脂肪肝模型，观察不同剂量的解酒肝康颗粒对血脂代谢、肝内脂代谢、能量及氧化损伤程度的影响。结果：解酒肝康颗粒可使酒精性脂肪肝大鼠血甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白（LDL-C），丙二醛（MDA）水平显著降低，肝内组织内糖原（Gn），MDA含量显著降低，超氧化物歧化酶（SOD）活性显著升高。结论：其药物高、中、低剂量之间在药效作用强度上存在一定的剂量依赖关系。     

基于能量代谢对3味山姜属中药黄酮类成分药性归属的初步研究

目的:通过检测胃溃疡寒证模型大鼠体内能量代谢、物质代谢、脂代谢相关酶的含量,考察高良姜、大高良姜、红豆蔻的黄酮类成分对其表达的影响,以阐述其寒热属性及对胃溃疡寒证模型大鼠能量代谢的影响及作用机制.方法:采用知母水煎液和15％冰乙酸灌胃造胃溃疡寒证模型.以干姜姜辣素为阳性对照,分为空白对照组、阳性对照组、模型组、高良姜高...     

血府逐瘀汤联合西药对结核性胸膜炎肺功能及外周血细胞的影响

目的：通过检测胃溃疡寒证模型大鼠体内能量代谢、物质代谢、脂代谢相关酶的含量,考察高良姜、大高良姜、红豆蔻的黄酮类成分对其表达的影响,以阐述其寒热属性及对胃溃疡寒证模型大鼠能量代谢的影响及作用机制。方法：采用知母水煎液和15%冰乙酸灌胃造胃溃疡寒证模型。以干姜姜辣素为阳性对照,分为空白对照组、阳性对照组、模型组、高良姜高低剂量组、大高良姜高低剂量组、红豆蔻高低剂量组,给药2 d,留取血清、肝组织、胃组织,观察大鼠胃组织病理学变化,通过测定Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶水平考察其黄酮类成分对胃溃疡寒证模型大鼠能量代谢的影响,测定琥珀酸脱氢酶（SDH）、肝糖原水平考察对物质代谢的影响,测定游离脂肪酸（FFA）、脂蛋白脂酶（LIPD）、肝脂酶（LIPC）水平考察对脂代谢的影响。同时测定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH,以及FFA、LIPD、LIPC、SOD水平显著降低（P<0.05,P<0.01）,肝糖原水平和血清中MDA水平显著升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,给药组能显著升高肝组织中Ca2+-Mg2+-ATP酶及血清中FFA、SDH水平（P<0.05,P<0.01）;除大高良姜低剂量组、红豆蔻低剂量组外,其余给药组能显著升高肝组织中Na+-K+-ATP酶（P<0.05,P<0.01）;除大高良姜高低剂量组、红豆蔻低剂量组外,其余给药组能显著升高血清SOD水平(P<0.05,P<0.01);除高良姜低剂量组、大高良姜低剂量组外,其余给药组能显著升高LIPD、LIPC水平（P<0.05,P<0.01）;给药组能显著降低肝糖原水平,以及血清MDA水平（P<0.05,P<0.01）。结论：3味山姜属中药黄酮类成分能够促进能量代谢、物质代谢、脂代谢,可初步判断3味山姜属中药黄酮类成分温热属性,也说明其可调节胃溃疡寒证大鼠能量代谢和物质代谢、脂代谢紊乱,同时通过增强抗氧化能力而发挥抗溃疡作用。     

52例阴虚阳虚患者外周血混合白细胞糖皮质激素受体的实验观察

按“虚证辨证参考标准”,筛选出52例典型的阴虚或阳虚患者,另设正常组20例。分别测定3组外周血白细胞、血浆皮质醇及外周血混合白细胞糖皮质激素受体(GR)。结果表明,3组间白细胞、血浆皮质醇差异无显著性(P>0.05),而阴虚、阳虚两组GR值明显低于正常组,差异均有显著性((P<0.01),且阳虚组与阴虚组比较,差异亦有显著性(P<0.05)。提示GR减少可能是典型阴虚阳虚证发展到一定程度的共同病理改变,而GR减少幅度上的差异可能是两者临床表现不一致的病理基础之一。     

基于代谢组学的痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎作用机制研究

目的 利用代谢组学技术探究痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法 建立II型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠模型,并进行痹祺胶囊给药干预,取空白组、模型组、给药组大鼠血清,采用UPLCQ-TOF-MS技术对血清进行代谢组学分析,筛选潜在生物标志物,结合人类代谢组学数据库（human metabolomics database,HMDB）和京都基因与基因组百科全书数据库（Kyoto encyclopedia database of genes and genomes,KEGG）富集相关代谢通路并分析痹祺胶囊对生物标记物的干预作用,进而解析其作用机制。结果 代谢组学分析共筛选到18个潜在生物标志物,涉及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成及苯丙氨酸代谢、醚脂代谢、组氨酸代谢、三羧酸循环、精氨酸生物合成等11条代谢通路;痹祺胶囊可改善模型大鼠代谢轨迹的偏离。结论 痹祺胶囊主要通过调节氨基酸代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢及能量代谢等多条代谢通路,改善内源性代谢物的水平,在机体供能、抗炎及免疫调节过程中发挥作用。     

束缚所致肝郁证动物模型肝组织蛋白质组的差异表达研究

目的：通过运用组织蛋白质组学技术和方法,寻找肝郁证动物模型肝组织差异表达蛋白质.方法：以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型,采用组织溶解方法分步抽提大鼠肝脏组织蛋白质,对获得的蛋白质进行二维凝胶电泳（2-DE）分离、胶体染色,分析模型组和对照组蛋白质分子的差异表达,并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）检测肽质量指纹,在数据库中检索出相应的蛋白质.结果：在大鼠肝组织胶体考染的2-DE图谱上,约能辨识出300余个清晰的蛋白质斑点,共找出3个与肝郁证辨证相关的肝组织差异表达蛋白,质谱出峰率达100%,检索结果分别为芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白.结论：肝主疏泄功能的正常可能和实体肝组织中的特异表达蛋白质--芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白的不同表达密切相关.