高效液相色谱法测定铁皮石斛中柚皮素的含量

目的:探寻铁皮石斛中指标性成分,建立指标性成分的含量测定方法,并测定浙江省不同种植基地、不同生长年限铁皮石斛中柚皮素的含量.方法:采用高效液相色谱法测定柚皮素的含量.色谱柱为XB C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.2％磷酸水溶液为流动相,检测波长为290 nm.结果:柚皮素在0.026～0.208μg线性关系良好(r=1);平均加样同收率为96.3％(RSD 1.8％).同一生长年限不同种植基地铁皮石斛中柚皮素含量波动范围较大;并且同一种植基地铁皮石斛随着生长年限的增加柚皮素的含量先增加后降低,三年生铁皮石斛中柚皮素的含量最高.结论:该方法准确、可靠,可用于铁皮石斛药材及相关产品中柚皮素的含量测定,为完善铁皮石斛药材质量标准提供参考.     

RP—HPLC法测定铁皮枫斗颗粒中柚皮素含量

目的：建立一种高效液相色谱法测定铁皮枫斗颗粒中柚皮素含量的方法。方法：色谱柱UltimateXB—C18（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为0．2％H3PO4的水溶液与甲醇采用梯度洗脱;流速为1．0mL·min^-1;检测波长为280nm;柱温30℃。结果：柚皮素的回归方程为Y=3227．6X-1．7272（r=1．000）,线性范围：0．005～0．075μg,加样回收率：100．82％（RSD=1．06％,n=6）。结论：该法准确,阴性制剂无干扰,精密度高,重复性好。可用于铁皮枫斗颗粒中柚皮素的含量测定,并为其它铁皮枫斗相关制剂质量检测提供参考。     

霍山石斛与铁皮石斛对比研究进展

本文主要通过整理分析霍山石斛和铁皮石斛的相关文献,基于鉴别、含量测定、指纹图谱、药理作用、综合开发利用等研究进展,概括霍山石斛和铁皮石斛研究的异同,为霍山石斛进一步开发研究提供参考。     

红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎不同部位主要有效成分含量测定

目的:比较西双版纳地区红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位的多糖含量、甘露糖含量、甘露糖与葡萄糖峰面积比的差异。方法:采用苯酚-浓硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比。结果:多糖含量,红杆铁皮石斛茎上、中部明显高于青杆铁皮石斛茎上、中部,而红杆铁皮石斛茎下部明显低于青杆铁皮石斛茎下部;甘露糖含量,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显高于青杆铁皮石斛;甘露糖与葡萄糖峰面积比,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显低于青杆铁皮石斛。红杆铁皮石斛的多糖含量、甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比均达到2015版《中华人民共和国药典》标准,青杆铁皮石斛仅多糖含量达到2015版《中华人民共和国药典》标准。结论:同一地区的红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位主要有效成分含量有明显的差异,建议在临床用药过程中将红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛分开使用,同时将铁皮石斛按其茎上、中、下3个部位进行分级,为铁皮石斛种质资源品质评价及临床用药提供实验基础。     

UPLC测定肝微粒体中柚皮苷和柚皮素含量

目的:建立UPLC测定大鼠肝微粒体中柚皮苷和柚皮素含量的方法,并初步考察二者于不同时间点的代谢情况.方法:采用UPLC色谱系统,ACQUITY BEH C18色谱柱(3.0 mm×100mm,1.7 μm),流动相甲醇-0.1％乙酸水溶液梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃,检测波长283,289 nm,内标为槲皮素,进样量3 μL.结果:柚皮苷及柚皮素均与槲皮素分离良好且无内源性干扰.生物样品中柚皮苷和柚皮素的线性范围分别为3.814 ～ 38.143(r=0.9992),3.586 ～ 35.857mg·L-1(r＝0.9996);柚皮苷的方法回收率95.43％ ～97.95％,绝对回收率97.33％ ～ 98.18％;柚皮素的方法回收率95.27％～99.31％,绝对回收率97.71％ ～99.73％;柚皮素在体外肝微粒体中的Ⅰ相代谢较柚皮苷显著.结论:该方法快速、灵敏、准确,可用于大鼠肝微粒中柚皮苷和柚皮素的含量测定.     

铁皮石斛中芪类成分的分离及含量测定

目的分离制备铁皮石斛质量指标性成分,并建立其含量的高效液相测定方法。方法硅胶、Sephadex LH-20等色谱学方法分离纯化铁皮石斛,波谱学特征鉴定化合物的结构;高效液相色谱法测定3,4-二羟基-5,4’-二甲氧基联苄(DDB-1)的含量,Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.60 mm,5μm),以乙腈-水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为230 nm。结果共分离得到四个芪类化合物,分别为:3,4-二羟基-5,4’-二甲氧基联苄;3,4’-二羟基-5-甲氧基联苄;5-羟基-3,4’-二甲氧基联苄;4’-羟基-3’,5’-二甲氧基联苄。从中选取3,4-二羟基-5,4’-二甲氧基联苄(DDB-1)作为指标性成分,其在0.044~0.44μg范围内呈现良好的线性关系(R2=0.999 9);不同种植基地的DDB-1含量差异较大,不同采收月份(3月份到5月份)的铁皮石斛中DDB-1含量差异不太明显。结论本研究建立的含量测定方法准确、可靠、简便,可用于铁皮石斛中DDB-1含量测定,为铁皮石斛质量评价提供了参考依据。     

不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法,比较不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量.方法 采用HPLC法测定,以甲醇-0.2%磷酸水(60∶40) 为流动相,检测波长为372nm(柚皮素)和290 nm(异甘草素).结果 柚皮素在0.948～4.740 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9;异甘草素在1.432～10.024 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9.降香中的柚皮素含量在2.585～5.429 mg/g之间;异甘草素含量在7.526～28.329 mg/g之间.结论 不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量差异较大.该方法操作简便、快速、重复性好,适用于降香的质量控制.     

铁皮石斛甘露糖含量与其颜色的相关性研究

目的 使用超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography, UPLC)对铁皮石斛甘露糖分离色谱条件进行优化,并将色差法原理与其主要活性成分甘露糖含量相关联,探讨铁皮石斛颜色与含量的相关性,为铁皮石斛药材质量建立一种快速测定及判断的方法。方法 使用UPLC测定甘露糖含量,使用CIE L^*a^*b^*色差法原理定量茎粉末色泽,使用R软件及SPSS进行相关性及聚类分析。结果 建立了一套UPLC-TUV快速分离及测定铁皮石斛甘露糖的方法,可在8 min内使甘露糖快速出峰且完全分离,比传统高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)方法快3～10倍;铁皮石斛甘露糖含量与茎粉末明暗色度L^*、黄绿色度b^*以及总色差E^* ab存在极显著负相关关系(P<0.01),说明其茎粉末L^*值越小即偏暗黄且b^*值越小即偏黄棕时甘露糖...     

霍山石斛HPLC特征图谱研究

目的建立霍山石斛(霍山米斛)HPLC特征图谱分析方法,拟定黄酮类成分指标群。方法采用Kromasil100-5 C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长为340 nm;柱温为35℃;体积流量1.0m L/min。结果霍山石斛标示出24个黄酮类特征共有峰,10批样品的相似度为0.918⁰.990,相似度较高。结论方法准确可靠,重复性好,本研究为霍山石斛的质量控制提供了方法依据。     

不同种植年限铁皮石斛多糖、甘露糖含量的测定及其它化学成分比较研究

目的:比较不同种植年限铁皮石斛的多糖及甘露糖含量,并对其正丁醇部位及乙醚部位化学成分进行比较研究,为铁皮石斛种植年限的确定提供参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖的含量,RP-HPLC结合二极管阵列检测器(DAD)法分析铁皮石斛正丁醇部位(360 nm)及乙醚部位(280 nm)分别随不同种植年限的变化情况。结果:铁皮石斛多糖含量随种植年限不同而变化,2年生3年生4年生,2~4年生铁皮石斛随种植年限增加,多糖含量减少。甘露糖含量随种植年限的变化也呈现与多糖相同的变化趋势。铁皮石斛正丁醇部位中黄酮类成分在360 nm下随种植年限变化有一定的变化,2年生中黄酮类化合物相对极性较小,且较集中。3年生极性分布较广,且含量相对较大。4年生主要分布在极性大的黄酮类化合物,含量相对较低。铁皮石斛乙醚部位在280 nm下随着种植年限增加,色谱图峰强度增加明显。结论:从多糖及甘露糖含量考虑,以2年生铁皮石斛含量最高,宜以两年生为用;而结合酚类及黄酮类成分却与此有所背离,具体有待进一步深入研究。     

霍山石斛糖蛋白的分离纯化和毒活性研究

霍山石斛是名贵中药材,其多糖的抗肿瘤活性是中药资源领域的研究热点,该研究旨在探究霍山石斛多糖抗肿瘤活性的物质基础。实验以霍山石斛为原料,通过低盐溶液浸提和硫酸铵分级沉淀得到不同的霍山石斛蛋白组分,经SDS-PAGE电泳染色确定糖蛋白组分,再经DEAE离子柱和Sephadex凝胶柱进一步分离纯化糖蛋白组分,同时采用MTT比色法检测不同产物对人肝癌细胞Hep G2的毒活性;结果获得3种相对分子质量为22.5,19.8,15.6 k Da的糖蛋白组分RG1,RG2,RG3,测得三者复合物对Hep G2的IC50为534.23 mg·L-1,而组分RG1,RG2的IC50分别为432.96,413.91 mg·L-1,组分RG3对Hep G2无毒活性。总之,实验结果提示霍山石斛多糖抗肿瘤活性的物质基础之一是相对分子质量为22.5,19.8 k Da的2种糖蛋白组分,且具有协同效用。     

铁皮石斛2种采收方式的比较

为了规范铁皮石斛采收方式,提高药材质量与产量,通过田间试验、多糖与浸出物含量的测定,比较保留母条与全采2种采收方式对铁皮石斛农艺性状、产量与质量的影响。结果表明,采收方式显著地影响铁皮石斛生长,保留母条能显著地促进铁皮石斛萌蘖数和茎长、茎节数、茎节间距的生长,提高单位面积茎鲜重、叶鲜重、总鲜重、茎干重,对茎粗、茎中多糖含量没有促进作用。铁皮石斛采收过程中,适度保留部分母条,有利于促进新芽萌动与生长,提高铁皮石斛药材的产量,并可通过调整栽培密度与光照保证多糖含量。     

铁皮石斛多糖和醇溶性浸出物动态累积规律研究

为了揭示铁皮石斛多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律, 为铁皮石斛科学采收提供依据。采用苯酚-浓硫酸法和醇溶性浸出物热浸法测定铁皮石斛3个优良品系一至三年生萌条的多糖和浸出物含量。结果表明, 不同采收期铁皮石斛多糖、浸出物含量及其总量均存在极显著差异, 与铁皮石斛的物候密切相关, 其中多糖含量变化与开花密切相关, 醇溶性浸出物含量与新芽形成、萌动密切相关。根据多糖与醇溶性浸出物含量的动态变化, 以多糖为采收目标时在二年生开花前采收, 以醇溶性浸出物为采收目标时以新芽萌动前采收最佳, 以多糖与醇溶性浸出物总量为目标时以春芽萌动至开花前采收为宜。     

铁皮石斛中总氨基酸的含量测定及提取工艺优选

目的:优选铁皮石斛中总氨基酸提取工艺,并建立其含量测定方法.方法:以天冬氨酸为对照品,采用UV测定铁皮石斛中总氨基酸含量;在单因素试验基础上,采用L9(34)正交试验考察提取时间、提取次数及溶剂用量对铁皮石斛中总氨基酸提取工艺的影响.结果:最佳提取工艺为加20倍量0.1 mol· L-1 HCl超声提取30 min,提取1次.结论:优选的提取工艺稳定可行,建立的含量测定方法简便、准确、重复性好.     

不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究

目的建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考。     

铁皮石斛悬崖附生栽培技术研究

以铁皮石斛设施栽培投入大、药材功效不如野生等问题为导向,通过水分调控、崖壁坡度选择,研究悬崖附生铁皮石斛生长情况、农艺性状、产量、多糖及醇溶性浸出物含量.结果表明,将铁皮石斛附生于85 ～ 90°悬崖表面,在生长季节喷水1 ～2 h·d-1的条件下,即使在裸露的环境中,不用基质,不施肥料也能够较好的生长,获得较高的产量,其形态与悬崖上野生铁皮石斛无异;多糖与醇溶性浸出物含量显著高于设施基质栽培,并与萌蘖生理年龄密切相关,逆境有利于铁皮石斛多糖与醇溶性浸出物等功效成分的积累.     

基于多糖和黄酮类成分的铁皮石斛优良内生真菌筛选

为了揭示铁皮石斛内生真菌与功效成分的关系,该研究利用HPLC和紫外分光光度法测定21种铁皮石斛内生真菌菌丝及发酵液提取物中糖类和黄酮类成分。结果表明:21个供试菌株发酵产物乙酸乙酯提取物中均可检测到黄酮类成分,对比色谱保留时间和紫外光谱特征,发现DO49可产柚皮素,DO23,DO81,DO83可产芦丁;21个供试菌株发酵产物水提取物中均检测到多糖,但不同菌株单糖的组成存在差异,参照单糖种类以及甘露糖/葡萄糖的峰面积比,筛选与铁皮石斛多糖相关的优良菌株DO23,DO26,DO81,DO54,DO55,DO83。综合糖类和黄酮类两类成分,筛选出优良菌株DO23,DO81,DO83,既能产生与铁皮石斛相同的黄酮成分,又能产生单糖组分与铁皮石斛相近的多糖。     

铁皮石斛品系与部位对氨基酸含量的影响

通过揭示铁皮石斛氨基酸在不同品系与部位的变异规律,为优良品种选育和药(食)用部位扩大应用提供理论依据.研究结果表明:铁皮石斛11个品系的叶片中总氨基酸平均质量分数为7.43％,茎为1.91％,叶片显著高于茎,且氨基酸组成接近FAO/WHO提出的理想蛋白质的标准,具有良好的功能食品开发前景;其中产量高、多糖含量高的9×66优良品系叶片和茎中各种氨基酸含量均为最高,表明通过杂交育种可选育综合性状优良的品种.此外,铁皮石斛2个主要采收期的样品氨基酸含量有显著差异,铁皮石斛叶片适合随茎一同在开花前采收.     

铁皮石斛悬崖峭壁生长的生态基础

为了使铁皮石斛回归自然,在临安市天目山野生铁皮石斛自然分布区域建立不同坡度、不同坡向岩壁模型,用MHWS01温湿度自动记录仪全天候自动记录温度和湿度,结果表明:岩壁的坡度显著地影响岩壁表面的极端温度,夏季,水平的岩壁表面极端温度可高达69.4℃以上,垂直岩壁表面温度不高于50℃,冬季,垂直岩壁表面温度较高,低温持续的时间更短;岩壁坡度还显著地影响岩壁表面的湿度,垂直岩壁表面月均湿度都在80%RH以上;岩壁的坡向对岩壁表面的温度有显著的影响,但对垂直岩壁的日均温与极端温度影响不显著,对岩壁表面的湿度也有显著的影响。岩壁坡度通过影响岩壁表面的极端温度影响铁皮石斛生存,还通过影响岩壁表面的湿度影响铁皮石斛生长,岩壁坡度的选择是铁皮石斛岩壁附生栽培成败的关键。