螺内酯对糖尿病大鼠肾小球保护作用的机制探讨

目的 观察螺内酯对糖尿病大鼠肾小球的保护作用并探讨其机制。 方法 将SD大鼠随机分为健康对照组、病理组、螺内酯治疗组。治疗30 d后处死，观察肾小球病理形态变化；RT-PCR法观察肾脏皮质纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1) 和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的变化； Western印迹法观察肾脏皮质PAI-1的表达；免疫组化方法观察肾脏皮质TGF-β1、纤连蛋白(FN)变化及检测肾皮质丙二醛(MDA) 含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 、总抗氧化能力(T-AOC)活性。 结果 与病理组比，螺内酯治疗后可下调肾皮质TGF-β1、PAI-1 mRNA与蛋白表达（P均< 0.05）；降低肾皮质MDA水平[（0.95±0.20）比（1.23±0.31） nmol/mg，P < 0.05]；增强SOD、GSH-Px、T-AOC活性[分别为（550.19±20.06）比（509.53±33.25） U/mg，（21.67±2.70）比（18.91±2.30） U/mg，（1.15±0.21）比（0.86±0.26） U/mg，P均< 0.05]；减少FN在肾小球的沉积(P < 0.01)；改善肾小球的病理状况。 结论 螺内酯可能通过下调糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1、PAI-1表达，降低肾皮质氧化应激水平，起到保护糖尿病大鼠肾脏，延缓肾小球硬化的作用。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的观察辛伐他汀对糖尿病大鼠。肾脏TGF-β1、FN的调节作用。方法将雄性SD大鼠随机分为3组,健康对照组（C组）、糖尿病组（DM组）、辛伐他丁组（DM＋S组）,每组10只。用链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病模型,DM＋S组于造模成功后给予辛伐他汀灌胃。8周末检测24小时尿蛋白排泄量、肾组织病理;免疫组化检测肾组织TGF-β1、FN的表达以及肾组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性的变化。结果辛伐他汀组大鼠24小时尿蛋白排泄量、肾小球平均面积、肾小球平均体积明显低于模型组;DM组大鼠肾脏TGF-β1、FN的表达明显高于C组和DM＋S组。模型组肾组织MDA含量明显高于对照组,而SOD、CAT、GSH—PX活性明显低于对照组,辛伐他汀可明显减轻这些变化。结论辛伐他汀可以降低糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、FN的表达。     

福辛普利对糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA表达的影响

目的 观察福辛普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22phox 亚基mRNA表达及细胞外基质（ECM）聚积的影响，并探讨其可能机制。 方法 STZ诱导的糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病非治疗组（DM组）和福辛普利治疗组（DM+Fosin组，福辛普利10 mg·kg-1·d-1），疗程12周。RT-PCR法检测肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达；免疫组织化学方法检测肾脏纤连蛋白（FN）表达；白明胶酶谱法检测肾脏基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性；并检测Scr、尿蛋白排泄量和肾质量指数等指标。 结果 实验第4 周，DM+Fosin组大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA表达较DM组减少45％（P ＜ 0.05）。第8周时，DM+Fosin组的肾小球和肾小管间质FN表达较DM组分别降低52.5％和42.9％（均P ＜ 0.05）；肾脏MMP-9的活性升高29.6％（P ＜ 0.05）。实验第12周时，DM+Fosin组大鼠Scr水平、尿蛋白量（24 h）和肾质量指数较DM组分别降低35.9％、50.2％和17.2％（均P ＜ 0.05）。DM+Fosin组和DM组血糖的差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 福辛普利可延缓糖尿病肾病的发生和发展，其机制可能与通过抑制NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA的表达有关。     

渴络欣联合依那普利对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的研究

目的：探讨渴络欣胶囊联合依那普利对糖尿病（DM）大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法：雄性SD大鼠43只,随机分为5组：正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）、渴络欣组（DM＋K）、依那普利组（DM＋E）及渴络欣与依那普利联合给药组（DM＋K＋E）。8周后,观测肾组织形态学和肾功能变化,尿白蛋白排泄率等指标的变化,肾组织丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-PX）以及细胞膜、细胞质蛋白激酶C（PKC）活性变化;免疫组化法检测肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）、PKC表达水平的变化,RT-PCR方法检测肾组织TGF-β1表达水平的变化。结果：（1）各给药组均可降低糖尿病大鼠肾脏肥大指数（肾重/体重,KW/BW）、平均肾小球体积（MGV）、系膜面积比（FMA）、尿白蛋白排泄率（UAER）、血肌酐（Scr）（P〈0.01）,联合组优于单药组（P〈0.05,P〈0.01）。（2）对糖尿病肾组织MDA含量增加及SOD、CAT与GSH-PX活性降低的改善作用,联合组优于单给药组（P〈0.05,P〈0.01）;对糖尿病肾组织细胞膜PKC活性增加及细胞质PKC活性降低的改善作用,联合组优于单给药组（P〈0.05）。（3）糖尿病模型组肾组织TGF-β1、PKC蛋白及TGF-β1mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0.01）,各给药组上述指标与DM组比较,则有明显的降低（P〈0.01）,联合组优于单药组（P〈0.05,P〈0.01）。结论：渴络欣与依那普利联合给药对糖尿病肾脏保护作用优于单种药物治疗,其机制可能与其对肾组织氧化应激增加及PKC、TGF-β1表达的协同抑制作用有关。     

肾茶对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制研究

目的：观察肾茶对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及探讨其可能的作用机制。方法：采用STZ注射法制作DN大鼠模型，随机分为正常对照组、糖尿病对照组、肾茶小剂量治疗组（2g／kg）、肾荼大剂量治疗组（8g／kg）。灌胃给药8周后，分别测定血糖、24h尿蛋白排泄率、肾小球滤过率、肾组织脂质过氧化物和超氧化物歧化酶及肾皮质TGF-β1、Col-Ⅳ、FN的表达。所采用的技术包括生化、分光光度法、放射免疫、免疫组化、光学显微镜及电镜超微结构等。结果：肾荼小剂量与大剂量治疗组大鼠的24 h UAER、肾小球滤过率、肾重／体重指数及肾组织MDA均显著低于DM对照组（P＜0．05或P＜0．01）；而组织SOD活性显著高于DM对照组（P＜0．05或P＜0．01）；肾茶8g/kg剂量治疗组大鼠肾皮质TGF-β1、FN、Col-Ⅳ的表达显著低于糖尿病对照组（P＜0．05）；肾茶治疗组大鼠治疗前后血糖比较及与糖尿病对照组比较均无统计学差异（P＞0．05）。结论：肾茶水煎剂对STZ糖尿病大鼠肾脏的保护机制与改善氧化应激、抗炎及抑制系膜细胞增生有关。     

夹竹桃麻素对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激损伤的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶特异抑制剂夹竹桃麻素（apocynin）对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激（OS）损伤的保护作用。 方法 自由饮用含有0.8%乙二醇的水4周建立高草酸尿症SD大鼠模型。大鼠按随机数字表法分为4个组：空白组、高草酸尿症组、apocynin干预组、apocynin对照组。后两组给予apocynin（0.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1）灌胃,对照组给予正常饮水。4周后检测大鼠肾脏OS 指标（尿H2O2和8-异前列腺素）,以及Ccr及肾脏/体质量比值。免疫组化观察NADPH氧化酶亚基p47phox在肾脏中的表达位置。RT-PCR和免疫印迹法分别检测肾组织NADPH氧化酶亚基p47phox、gp91phox、Nox-1 mRNA以及p47phox蛋白的表达水平。 结果 p47phox在各组肾脏中均有广泛的表达,包括肾皮质区、内髓区、外髓区等。与空白组比较,高草酸尿症组大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平显著升高,Ccr降低,肾脏/体质量比值增高（均P < 0.05）;肾脏p47phox、gp91phox和Nox-1 的mRNA表达均显著增加（均P ＜ 0.05）, p47phox蛋白表达也增多（P ＜ 0.01）。apocynin干预治疗可抑制肾脏p47phox、Nox-1 mRNA及p47phox蛋白的表达,但gp91phox mRNA表达未明显减少,而大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平下降,Ccr增加,肾脏/体质量比值减少,但仍高于对照组水平。 结论 NADPH氧化酶是高草酸尿症诱导大鼠肾脏OS损伤过程中活性氧形成的来源之一。使用apocynin抑制NADPH氧化酶活性可部分减轻肾脏的OS损伤程度,保护肾功能。     

MG132可增强糖尿病大鼠肾脏抗氧化能力

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对糖尿病肾病（DN）大鼠的治疗作用及其机制。 方法 72只大鼠随机分为正常对照组（NC）、DN组和MG132治疗组（DN+MG132）,每组各24只。在治疗第4、8和12周末检测各组大鼠24 h尿蛋白排泄率（UPER）、24 h尿量和尿丙二醛（MDA）含量、肾组织26S蛋白酶体、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肾组织SOD、GSH-PX和p47phox mRNA的表达变化;Western印迹检测p47phox的蛋白表达变化。 结果 与NC组大鼠比较,在4、8和12周时,DN大鼠的UPER显著增高（均P < 0.05）;12周时病理显示DN组大鼠肾小球系膜显著增生和系膜基质积聚增多。与同期DN组大鼠比较,MG132治疗组大鼠的UPER显著降低（均P < 0.05）,肾小球系膜增生和基质积聚均减少。在4、8和12周,DN组大鼠肾组织26S蛋白酶体活性比NC组分别增高了2.14倍、2.66倍和3.68倍（均P < 0.05）。与DN组大鼠比较,MG132治疗组大鼠26S蛋白酶体活性显著下降（均P < 0.05）。与NC组大鼠相比,DN组大鼠肾组织p47phox mRNA表达分别升高了155%、149%和120%（均P < 0.05）;p47phox蛋白表达分别升高了139%、152%和186%（均P < 0.05）;尿MDA含量分别升高了1.95倍、2.04倍和2.62倍（均P < 0.05）;而DN大鼠肾组织SOD活性分别下降23.09%、33.59%和53.31%（均P < 0.05）;GSH-PX的活性分别下降28.57%、33.06%和48.76%（均P < 0.05）;SOD mRNA表达分别下降38.09%、61.44%和76.53%（均P < 0.05）,GSH-PX mRNA表达分别下降29.16%、37.26%和62.40%（均P < 0.05）。与DN组大鼠比较,MG132治疗组大鼠肾组织p47phox mRNA和蛋白表达以及尿MDA含量则显著下降（均P < 0.05）,而SOD和GSH-PX的活性和mRNA均显著升高（均P < 0.05）。 结论 MG132对DN大鼠肾脏有显著的保护作用,其机制可能与增强肾组织抗氧化能力有关。     

4-苯基丁酸对糖尿病肾病大鼠的作用

目的 探讨化学分子伴侣4-苯基丁酸（4-PBA）对糖尿病肾病（DN）大鼠的治疗作用及其机制。 方法 54只大鼠随机分为正常对照组（NC）、糖尿病肾病组（DN）和4-PBA治疗组（4-PBA）,每组各18只。在治疗第4、8及12周末分别检测各组大鼠肾质量指数（KI）、24 h尿蛋白排泄率（UAER）、血肌酐（Scr）、尿素氮(BUN)、尿丙二醛（MDA）含量和超氧化物岐化酶（SOD）活性;观察肾脏病理改变;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肾组织p47phox mRNA的表达变化;Western印迹检测p47phox和硝基酪氨酸（NT）的蛋白表达变化。 结果 与NC组大鼠比较,在4、8和12周时,DN大鼠的KI显著增高（P < 0.05）,UAER（mg/24 h）也显著增高（4.92±0.70 比 0.26±0.07、 5.29±0.83 比0.28±0.08、5.54±0.81比0.29±0.04,均P < 0.05）。12周时病理显示DN大鼠肾小球系膜细胞增生,系膜基质积聚;而与DN组大鼠比较,4-PBA治疗组大鼠KI显著降低（P < 0.05）,UAER（mg/24 h）亦显著降低（4、8和12周分别为3.71±0.37、3.47±0.36和3.28±0.40,P < 0.05）,4-PBA能显著减轻肾脏的病理变化。在4、8和12周,与NC组大鼠比较,DN大鼠肾组织p47phox mRNA表达分别升高了154.72%、148.60%和91.95%（均P < 0.05）;p47phox蛋白表达分别升高了118.00%、140.10%和177.82%（均P < 0.05）;硝基酪氨酸蛋白表达分别升高了45.29%、59.13%和89.28%（均P < 0.05）;尿MDA含量分别增加了2.05倍、2.26倍和2.43倍;尿SOD活性分别下降了64.78%、71.29%和79.32%。与DN组比较,在8和12周时,4-PBA治疗组DN大鼠肾组织p47phox mRNA和蛋白表达均显著减少（均P < 0.05）;硝基酪氨酸蛋白表达显著减少（P < 0.05）,且与NC组差异已无统计学意义。另外,在4~12周,4-PBA治疗可显著减少DN大鼠尿中MDA含量,增加尿SOD活性（均P < 0.05）。 结论 4-PBA能显著抑制糖尿病大鼠肾脏病理变化,其机制可能与抑制肾组织氧化应激有关。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应的作用

目的 探讨血管紧张素I型受体阻断剂氯沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应及转化生长因子β1(TGF-β1)产生的影响。 方法 以大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E）为研究对象,分别给予氯沙坦（10-5 mol/L）和（或）NADPH氧化酶抑制剂联二亚苯碘锚（DPI,10-5 mol/L）预处理1 h后再加入AngⅡ（10-7 mol/L）刺激24 h,同时设立空白培养基作为对照组。实时定量PCR和Western印迹法分别检测4组细胞NADPH 氧化酶p22phox、p47phox、Nox-4 mRNA和蛋白水平及TGF-β1 mRNA水平。用2,7- 二氯荧光素双乙酸盐（H2DCF-DA）作为荧光探针,采用荧光分光光度仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平。应用比色法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）水平。 结果 AngⅡ（10-7 mol/L）刺激细胞15 min后开始产生大量的ROS,至60 min达平台期。单纯AngⅡ刺激1 h后,NRK-52E细胞上清液中SOD水平显著低于对照组（27.31 μU/L 比48.29 μU/L,P < 0.01）;经氯沙坦预处理1 h后再加入AngⅡ刺激1 h细胞上清液中SOD水平升高至36.37 μU/L,与AngⅡ组差异有统计学意义（P < 0.01）。单纯AngⅡ刺激NRK-52E细胞24 h可显著上调NADPH氧化酶p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA和蛋白水平,其mRNA水平分别为对照组的5.57倍、5.55倍和9.41倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的4.53倍、4.17倍和6.50倍（均P < 0.01）。经氯沙坦干预后,p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA水平分别为对照组的2.71倍、2.18倍和5.23倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的3.20倍、2.30倍和4.30倍（均P < 0.01）。AngⅡ刺激细胞24 h后TGF-β1 mRNA表达也显著增多,为对照组的4.36倍（P < 0.01）,氯沙坦处理细胞后TGF-β1 mRNA水平为对照组的1.57倍。 结论 氯沙坦通过抑制NADPH氧化酶的表达和增加SOD的表达减少ROS的产生,并能通过减少ROS产生,抑制AngⅡ诱导的TGF-β1 mRNA水平增高。     

黄芪山甲方对UUO模型大鼠TGF-β1、FN蛋白及mRNA表达的影响

目的：通过观察黄芪山甲（ HQSJ）方对单侧输尿管结扎（ unilateral ureteral obstruction，UUO）模型中转化生长因子-β1（ transforming growth factor-β1，TGF-β1）、纤维黏连蛋白（ fibronectin，FN）表达的影响，探讨HQSJ方抑制大鼠肾间质纤维化（ renal interstitial fibrosis，RIF ）的机制。方法：采用 UUO 大鼠模型，雄性 SD 大鼠30只随机分5组：假手术组（Sham）、模型组（UUO）、中药组（UUOA）、西药组（UUOE）、中西药组（UUOAE）。观察术后第28天光镜肾脏病理改变；采用分子生物学技术检测肾脏TGF-β1和FN表达。结果：（1）与Sham组比较，UUO组肾小管间质损伤评分及TGF-β1、FN表达明显增高（ P﹤0．05）。（2）与UUO组比较，各治疗组第28天肾脏病理改变肾小管间质损伤评分及免疫组化TGF-β1、FN表达均有不同程度降低（ P﹤0．05），Western blot法检测肾脏TGF-β1、FN蛋白和RT-PCR法检测肾脏TGF-β1、FNmRNA表达均有不同程度下调（ P﹤0．05）。（3）各治疗组间比较，UUOAE组病理改变减轻程度、TGF-β1、FN蛋白及mRNA表达下调幅度最大，UUOA组次之，UUOE组最小（ P﹤0．05），提示UUOAE组优于UUOA组，UUOA组优于UUOE组。结论：HQSJ方可通过下调UUO大鼠肾组织TGF-β1、FN的表达，减轻肾小管间质损伤，抑制RIF的进展。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠残肾组织归巢因子表达的影响

目的 观察红细胞生成素(EPO)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾组织归巢因子表达的影响.方法 采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型.实验动物随机分为3组:假手术组、CRF模型组和EPO治疗组.从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO 50 IU/kg,每周3次,共6周.8周后检测各组大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白、血红蛋白(Hb)；采用实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组化方法检测残肾组织EPO及其受体(EPOR)、归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)的表达.结果 与模型组比较,EPO治疗可上调残肾组织归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05)；同时,EPO治疗还可上调残肾组织EPO及EPOR的mRNA和蛋白的表达(均P＜ 0.05).此外,EPO治疗还能下调大鼠Scr、BUN和尿蛋白水平(均P＜0.05),上调Hb水平(P＜0.05).结论 EPO能改善慢性肾衰竭大鼠的肾功能,这种作用可能与其激活残肾组织归巢因子而参与损伤肾脏的修复有关.     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的探讨

目的 探讨罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏的保护作用机制。方法 将大鼠分为正常组、糖尿病组、小剂量罗格列酮组、大剂量罗格列酮组。药物干预4周后，检测各组大鼠的血糖（BS）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、肌酐（Scr）水平及尿白蛋白定量（24h）。随后处死大鼠，测定肾组织中丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）及铜锌超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、核转录因子-κB（NF-κB）的活性。同时留取。肾脏组织作PAS染色行病理检查。RT-PCR和免疫组化法检测。肾组织中单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1）mRNA及蛋白质的表达。结果 与糖尿病组相比，大剂量罗格列酮干预组BS、TC、TG差异无统计学意义；而。肾组织MDA含量、MCP-1mRNA及蛋白质表达、NF-κB活性差异有统计学意义（P〈0．05），SOD、GSH-Px、T-AOC活性显著上升；肾小球面积及体积减小。结论大剂量的罗格列酮可显著改善糖尿病大鼠的。肾脏损害，其机制可能与其抗氧化，抑制NF-κB活性，降低MCP-1的含量有关。     

Lycium barbarum polysaccharides alleviate kidney injury and oxidative stress in unilateral ureteral obstruction rats

Objective To investigate the effect of lycium barbarum polysaccharides (LBP) on oxidative stress in renal tissue of rats with renal interstitial fibrosis (RIF). Methods The RIF rat model was established by unilateral ureteral obstruction (UUO). A total of 108 specified pathogen free (SPF) class healthy adult male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into sham operation group, UUO model group and treatment group. The treatment group was further divided into low, medium and high dose of LBP groups and benazapril group. From the next day of the operation, the rats were given continuous intragastric administration for 3 weeks. The LBP low, medium and high dose groups were given 400, 600, 800 mg?kg-1?d-1 LBP, respectively. The benazapril group was administered with 1.05 mg?kg-1?d-1 benazepril hydrochloride. The sham operation group and UUO model group were daily fed normal saline solution by gavage. Six rats were sacrificed randomly at 7, 14 and 21 days after operation. Their blood samples were collected to detect the serum creatinine (Scr) and the kidney organ index was calculated. The pathological changes on the surgical side were observed by both HE staining and Masson staining. Meanwhile, the levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in the renal tissue were detected by colorimetry detection. The expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) protein was detected by immunohistochemical staining and the expression of TGF-β1 mRNA was detected by real time PCR. Results (1) Compared with the sham group, the Scr and kidney organ index of the UUO model group and treatment groups increased at each time point (all P＜0.05). Compared with the UUO model group, the kidney organ index of LBP low dose group in the 7th days, the LBP medium and high dose group in the 21st days as well as benazapril group in the 7th and 21st days were significantly lower (all P＜0.05). (2) Renal pathological change: compared with the sham operation group, both the renal tubular interstitial injury index and collagen positive area of the else groups were higher at each time point (all P＜0.05). Compared with the UUO group, the tubulointerstitial injury index and collagen staining positive area of LBP dose groups and benazapril group significantly decreased at different time points (all P＜0.05). (3) Compared with the sham group, in renal tissue of the other groups the level of MDA increased, SOD level decreased, while the expressions of TGF-1 mRNA and protein increased (all P＜0.05). Compared with the UUO model group, LBP low, medium and high dose group as well as benazapril group had lower MDA level, higher SOD level as well as lower expressions of TGF-1 mRNA and protein at each time point (all P＜0.05). Conclusions The pathological injury in UUO rats can be improved by the LBP. The LBP can alleviate the oxidative stress status of the kidney tissue by decreasing MDA and increasing SOD. The further study on the LBP delaying the progression of RIF is to be conducted.     

圣地红景天对糖尿病大鼠尿微白蛋白排泄率及肾脏TGF-β1表达的影响

目的：观察圣地红景天对1型糖尿病大鼠尿微白蛋白排泄率及肾脏TGF-β1表达的影响并探索其机制。方法：SD雄性大鼠45只,单侧肾切除后随机分为：对照组15只（NC组）,模型组30只,后者按55mg/kg体重单次腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病模型。待造模成功后随机分为糖尿病模型组（DC组）、糖尿病治疗组（DR组）各15只。分别于第4、8、12周时检测各组血尿素氮、肌酐及尿肌酐、尿微白蛋白排泄率,同时测肾组织中丙二醛（MDA）含量,铜锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn-SOD）及谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性,留取肾脏组织分别作光镜、电镜检查及免疫组化检查TGF-β1的表达。结果：与NC组相比,DR组24h尿微白蛋白排泄率下降,肾组织中NDA含量下降,Cu-Zn-SOD及GSH-Px活性升高;与DC组相比,DR组尿蛋白排泄率减少,早期肾小球高滤过减轻,病理检查示系膜增生明显减轻,电镜示肾小球毛细血管基底膜增厚轻于DC组,免疫组化分析示DR组TGF-β1表达较DC组明显减少。结论：圣地红景天可以有效减轻糖尿病大鼠的肾脏损害,其对糖尿病肾脏的保护作用可能与其抗氧化应激及降低肾组织TGF-β1的表达有关。     

Recombinant human erythropoietin treatment protects the cardio-renal axis in a model of moderate chronic renal failure

Chronic kidney disease (CKD) patients develop anemia because of the low kidney erythropoietin (EPO) production, thus promoting cardiovascular complications. The degree of renal insufficiency might determine the moment to start recombinant human erythropoietin (rhEPO) therapy, but the molecular basis for these options deserves better elucidation. This study aimed to clarify the cardio-renal effects of earlier rhEPO therapy in rats with moderate chronic renal failure (CRF). Four groups of rats were evaluated for 15 weeks (control; rhEPO ? 50 IU/kg/week; CRF ? 3/4 nephrectomy; CRF + rhEPO) to assess renal and hematology data, EPO levels, blood pressure, heart rate, peripheral catecholamines contents, serum-transforming growth factor-β1 (TGF-β1), kidney gene expression of EPO, Caspase 9 (Casp9), and vascular endothelial growth factor (Vegf). This model of moderate CRF showed moderate and corrected anemia, hypertension, tachycardia, sympathetic overactivity, and increased serum TGF-β1 content. The remnant kidney showed a proliferative profile, with hypertrophy, downregulated gene expression of EPO, and upregulated gene expression of Vegf and Casp9. rhEPO treatment promoted erythrocytosis and prevented tachycardia and catecholamines increment, with a rise of serum TGF-β1. Furthermore, the decreased kidney gene expression of EPO and the overexpression of Casp9 were prevented, demonstrating a renoprotective action on the remnant kidney. In conclusion, rhEPO therapy promotes a protective effect on the cardio-renal axis, which might be mainly attributed to its pro-proliferative and anti-apoptotic properties. These findings might recommend its use in earlier stages of CRF, acting as an erythropoiesis stimulating agent, to efficiently correct not only the anemia, one of the major complications in these patients, but also the succeeding adverse cardio-renal effects.     

红细胞生成素对模拟急性肾损伤微环境下培养骨髓间充质干细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察经红细胞生成素（EPO）干预后,体外模拟急性肾损伤（AKI）微环境下培养骨髓间充质干细胞（MSC）的分裂增殖情况,并探讨产生这种变化的可能机制。 方法 抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出小鼠MSC（mMSC）,以流式细胞仪鉴定。夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30 min再开放30 min的方法制作AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作缺血再灌注（IR）肾脏匀浆上清。取扩增第3代的mMSC分组培养：A组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;B组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清,体外模拟AKI微环境干预mMSC;C组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清+不同浓度EPO（1、5、10、50 U/ml）。培养1、3、5、7 d。CCK-8法检测各组培养mMSC的增殖,TUNEL法检测mMSC凋亡,Western印迹法检测mMSC表面EPO受体（EPOR）及增殖凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 CCK-8法检测显示,经IR肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSC的增殖效应显著减弱（P ＜ 0.01）,而TUNEL检测表明其胞核染色阳性细胞的百分比显著高于A组（P ＜ 0.01）;给予EPO干预后,mMSC的增殖能力增强,胞核染色阳性细胞百分比降低,具有浓度依赖效应。Western印迹结果显示,第3代mMSC表面存在EPOR表达,培养5 d后EPOR相对表达量为0.092±0.015。EPO以剂量和时间依赖性降低AKI微环境下凋亡相关蛋白caspase-3的表达,同时上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。用10 U/ml EPO干预5 d后,相对于B组,磷酸化蛋白酪氨酸激酶2及磷酸化信号转导和转录因子的表达均显著上调（均P < 0.01）。 结论 EPO能促进体外AKI微环境干预下培养mMSC的增殖,减轻其凋亡,该效应经EPOR介导,并与增殖凋亡相关信号通路蛋白有关。     

细胞外信号调节激酶信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人系膜细胞纤连蛋白表达的影响

目的　探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路与醛糖还原酶（AR）在非高糖条件下对转化生长因子（TGF）β1诱导人系膜细胞（HMC）细胞外基质成分纤连蛋白（FN）表达的影响。 方法　应用醛糖还原酶抑制剂（ARI）、ERK信号通路抑制剂U0126、转染pCDNA3-AR及AR-siRNA分别作用于HMC后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后HMC表达FN的情况。Western印迹检测HMC内FN和AR的变化,实时定量PCR鉴定转染和干扰效果。 结果 HMC在TGF-β1作用后,AR、FN 和磷酸化ERK（p-ERK）蛋白表达升高,与对照组比较,分别升高了1.8、1.9倍（均P < 0.05）和5.1倍（P < 0.01）。使用ARI孵育后,再用TGF-β1刺激,与单独使用TGF-β1刺激组比较,FN蛋白表达量约为对照组的30%（P < 0.01）;用ERK信号通路抑制剂后,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达量约为对照组的10%（P < 0.01）;转染pCDNA3-AR后,HMC中AR mRNA表达增多,为对照组10倍以上（P < 0.01）,FN蛋白表达增加到对照组的2.5倍（P < 0.05）,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达增加到对照组的3.6倍（P < 0.05）;转染AR-siRNA后,HMC中AR mRNA表达减少,干扰效率大于80%（P < 0.01）,AR、FN及p-ERK蛋白表达减少,分别约为对照组的20%、24%、7%（均P < 0.01）,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达仍然减少,为对照组的25%（P < 0.01）。 结论　AR基因参与TGF-β1诱导的HMC细胞外基质表达过程的调控,在肾小球硬化过程中起一定作用,且这一过程与ERK信号通路的活化有关。     

Protective effects of liraglutide on renal tissues and related mechanism in diabetic rats

Objective To explore the effects of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogues liraglutide on renal tissues of diabetic rats and its mechanism. Methods Forty male SD rats were randomly divided into four groups: normal control rats (NC group), normal control rats with liraglutide treatment (NCL group), diabetic rats (DM group) and diabetic rats with liraglutide treatment. The body weight, glycosylated hemoglobin (HbA1c), albuminuria/creatinine (A/C), kidney index (KI, kidney mass/body mass) were detected after 8 weeks treatment. The gene expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α), and interleukin-6 (IL-6), interleukin-1β (IL-1β), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), type IV collagen, and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) were measured by real time PCR. The protein expression of COL-Ⅳ, NF-κB, GLP-1R and phosphorylation levels of ERK, JNK and p38MAPK were evaluated by Western blotting. Results Compared to NC group, the body weight in DM group was reduced, and HbA1c, KI, A/C levels were significantly increased (P＜0.05). The gene expression of TNF-α, IL-6, IL-1β, MCP-1, TGF-β1 and COL- IV was increased (P＜0.05). Moreover, the protein expression of NF-κB in the nucleus of the kidney tissues and the phosphorylation levels of ERK, JNK and p38MAPK were significantly increased in DM group, accompanied by the decline of GLP-1R protein level (P＜0.05). After 8 weeks of liraglutide treatment, the urinary protein excretion was reduced, and the gene expressions of TNF-α, IL-6, IL-1β, MCP-1, TGF-β1, COL-IV were inhibited. Importantly, the phosphorylation levels of ERK and JNK were significantly inhibited and the expression of NF-κB protein in the nucleus of the kidney tissue was reduced (P＜0.05). These changes may be associated with the increased expression of GLP-1R after liraglutide treatment. However, blood glucose and the body weight in DML group rats had no significant changes after liraglutide treatment. Conclusion Liraglutide has a protective effect on renal tissues through inhibiting ERK and JNK phosphorylation and related inflammation in diabetic rats.