淫羊藿黄酮对APP695基因转染神经细胞β-淀粉样肽及β分泌酶的影响

目的 观察淫羊藿黄酮(EF)对APP695基因转染SH-SY5Y细胞中β-淀粉样肽(Aβ)水平的影响.方法 利用免疫沉淀+Western印迹法、放射免疫法分别检测细胞培养上清液和细胞裂解液中的Aβ水平.通过测定β-分泌酶(BACE1)切割荧光底物所得的荧光值检测BACE1活性.结果 EF 2.5～25 g/ml与APP695基因转染SH-SY5Y细胞模型共孵育24 h能明显降低模型细胞培养液中的Aβ含量( P<0.05, P<0.01).体外试验中EF 50 g/ml对BACE1活性的抑制率为95.0%.结论 EF能降低APP695基因转染细胞生成和分泌Aβ.     

阿尔茨海默病脑内β淀粉样蛋白沉淀与胆固醇和载脂蛋白E基因启动子多态性的相关性

目的:观察胆固醇与载脂蛋白E基因启动子多态性,分析其与阿尔茨海默病患者神经元内β-淀粉状蛋白质沉积的关系。方法:同时选择2000-01/2005-12美国南卡罗莱纳州立大学科学中心阿尔茨海默病尸检患者132例作为病例组,非阿尔茨海默病尸检患者132例作为对照组。病例组存在β-淀粉状蛋白质沉积( ),对照组不存在β-淀粉状蛋白质沉积(-)。血浆胆固醇含量为临床病例记录。从阿尔茨海默病病例组及匹配对照组患者尸检肝脏石蜡块中提纯Genomic DNA。采用DNA聚合酶链反应(PCR)扩增载脂蛋白E基因启动子,限制性核酸内切酶酶切消化PCR产物并电泳测定酶切结果。匹配临床记录血浆胆固醇含量指标进行统计分析。结果:两组数据患者全部进入结果。①第1轮DNA聚合酶链反应及电泳结果发现载脂蛋白E基因启动子PCR产物存在包括目的(1274bp)在内的多个条带。第2轮DNA聚合酶链反应及电泳结果发现只存在目的带(228bp)一个条带。②全部病例组和对照组载脂蛋白E基因启动子427基因型均为TT。病例组载脂蛋白E基因启动子491多态性位点基因型AA表达明显多于对照组(107,66例,P<0.01),对照组基因型AT及TT明显多于病例组,差异有显著性意义(54,20例;12,5例;P<0.01),基因型AA患者β-淀粉状蛋白在脑内沉积机会增加。③病例组血浆胆固醇含量与对照组之间差异有显著性意义[(6.05±0.17),(5.21±0.15)mmol/L,P<0.05],高血浆胆固醇含量增加β-淀粉状蛋白在脑内沉积。结论:血浆胆固醇水平与载脂蛋白E基因启动子491多态性位点与阿尔茨海默病患者神经元内β-淀粉状蛋白质沉积相关。     

阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白清除相关基因的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种以进行性认知功能减退包括记忆障碍和痴呆为特征的神经变性疾病,主要的病理特征包括神经细胞外以β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积为核心形成的老年斑(senile plaque,SP),细胞内以超磷酸化的Tau蛋白为核心形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)及神经细胞突触的丢失和脑萎缩.     

重型β地中海贫血γ珠蛋白基因启动子区甲基化状态

本研究旨在通过对广西省重型β地中海贫血患者和正常人外周血中γ珠蛋白基因启动子区CpG岛的甲基化位点的确认和对各个CpG位点甲基化率在重型β地中海贫血患者与正常人之间的差异性分析,初步筛选出可能影响γ珠蛋白表达的主要甲基化位点。采用重亚硫酸盐测序法修饰,递降PCR扩增,最后对PCR产物进行DNA克隆测序,得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况,定量检测甲基化的确切位置与程度。结果表明:重型β地中海贫血患者与正常人γ珠蛋白基因启动子区存在4个CpG甲基化位点,在序列中分别位于28、122、231和234bp,均呈高度甲基化,其中122和231 bp位点甲基化率明显低于正常对照组,差异均有统计学意义。28和234 bp位点甲基化率与正常对照组均无显著性差异。结论:证实γ基因启动子区存在甲基化位点、明确位点位置且经定量分析证实无论地中海贫血患者还是正常人各个甲基化位点均呈高甲基化状态;初步筛选出影响γ珠蛋白表达的主要位点可能在122和231 bp,为后续通过调节γ珠蛋白的表达缓解重型β地中海贫血的临床症状、靶向基因治疗研究提供了实验依据。     

乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:对乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因沉默机制进行初步探讨.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)和直接测序法检测40例乳腺癌、癌旁组织及10例正常乳腺组织中TRβ1基因启动子甲基化状态;分析其与临床病理特征间的关系.结果:乳腺癌及癌旁组织中TRβ1 基因启动子甲基化率分别为80.0%、72.5%,而正常乳腺组织仅10%;直接测序结果显示至少3个CG位点有甲基化改变.TRβ1基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、临床分期不相关.结论:甲基化可能是乳腺癌中TRβ1基因表达沉默的重要机制之一,在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

Ras相关区域家族基因启动子甲基化改变与肿瘤发生相关性的研究进展

Ras相关区域家族(Ras association domain family,RASSF)基因,作为肿瘤抑癌基因,具有调节细胞周期、凋亡、维持微管稳定的作用,但具体分子作用机制尚未明确。本文综合国内外最新研究成果,对RASSF家族基因研究进展做一综述,探讨其对肿瘤     

急性白血病细胞IGSF4基因启动子甲基化的研究

为了研究白血病细胞IGSF4基因启动子是否存在甲基化，采用RT-PCR检测IGSF4在U937，Molt4和HL-60细胞的表达，用MS-PCR检测上述白血病细胞系及21例白血病患者IGSF4基因甲基化情况，用5-杂氮胞苷对白血病细胞系进行去甲基化处理。结果表明：IGSF4启动子在正常骨髓无甲基化，在U937，Molt4和HL-60细胞IGSF4基因由于启动子甲基化而不能表达，上述细胞系经去甲基化处理后均可恢复表达IGSF4。57．1％的急性白血病患者的细胞存在IGSF4启动子甲基化，甲基化发生率在急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病无差异。结论：正常IGSF4作为一个抑癌基因可能在阻抑白血病的发生发展中起重要作用，IGSF4基因甲基化可能成为监测白血病复发的指标。     

阿尔茨海默病患者Aβ42测定与载脂蛋白E基因关系研究

目的 检测阿尔茨海默病(AD)患者血浆中Aβ42和栽脂蛋白E(ApoE)基因多态性,探讨AD患者体内Aβ42代谢异常情况.方法 随机选取AD患者55例、正常人70例,分别检测Aβ42和ApoE基因多态性,并两两进行比较.结果 AD级Aβ42(93.4±7.5)ng/L与对照组(90.5±6.3)ng/L比较,升高差异有统计学意义(P＜0.05);轻度AD组(94.7±8.5)ng/L与对照组相比,升高差异有统计学意义(P＜0.01).中重度AD组(87.6±6.9)ng/L与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AD患者Aβ42异常,与痰病的严重程度相关,与ApoE基因不相关.     

早老素-1基因内含子多态性与散发性阿尔茨海默病的相关性研究

目的:对早老素-1基因第8内含子多态性与散发性阿尔茨海默病(sporadicAlzheimerdisease,SAD)进行关联分析,为分子生物学提供理论依据。方法:以多种临床量表筛选及根据ADRDA-NINCDS临床诊断标准,收集144例临床疑诊的SAD患者(男72例,女72例,其中早发性患者40例和晚发性患者104例)及140例健康老人作为研究对象,以PCR-RELP方法检测其早老素-1基因第8内含子多态性,进行对比分析。结果:与对照组的基因型及等位基因频率比较,早发性SAD组PS-1基因第8内含子基因型、等位基因频率分布相似,而晚发性SAD组1等位基因频率(63.94%)明显增高,2/2基因型(8.65%)、2等位基因频率(36.06%)明显降低。结论:PS-1基因内含子的多态性与国人晚发性SAD发病相关联,可能是晚发性SAD的遗传性易感因素。     

半胱氨酸代谢关键酶基因DNA甲基化与动脉粥样硬化性缺血性脑卒中的相关性研究

目的:探讨半胱氨酸代谢关键酶基因表观遗传学改变与汉族人群缺血性脑卒中(IS)的发病关系。方法:采用病例-对照研究设计,以动脉粥样硬化性脑梗死(ATS)患者30例为病例组,另选择同期体检健康人群30例为对照组。寻找目的基因(基因上游5 kb的区域一直到第2外显子区域)的CpG岛区域,使用重亚硫酸盐修饰直接测序技术进行样本DNA甲基化检测,运用单因素或Logistic回归分析检测2组间DNA甲基化分布差异。结果:胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因4个CpG岛同源性非常高,放弃甲基化分析;5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因有2个CpG岛;半胱氨酸合成酶(MTR)基因有1个CpG岛。结果显示,2组这2个基因所有CpG岛都未发现DNA甲基化情况。结论:未发现MTHFR和MTR基因DNA甲基化改变与汉族人群ATS相关。     

β淀粉样肽与阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是痴呆中最常见的类型。β淀粉蛋白(Aβ)被认为是导致该疾病的主要毒性物质,但具体是Aβ纤维丝还是寡聚体存在着争论。本综述以淀粉样蛋白级联假说为线索,阐述不同状态的Aβ的神经毒性以及它们之间的联系,对以Aβ为靶点的AD治疗有重要意义。     

成纤维细胞生长因子1基因启动子多态性与晚发型阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨成纤维细胞生长因子1（FGF-1）基因启动子多态性是否与晚发型阿尔茨海默病（LOAD）相关.方法收集206例尸体检查的样本,包括100例LOAD和年龄匹配的对照组106例.PCR-RFLP（Restriction fragment length polymorphism）法分析FGF-1基因启动子（-1385 A/G）的基因型.结果FGF-1基因启动子（-1385 A/G）的基因型频率分布是：AA型20例（10%）,GA型89例（43%）,GG型97例（47%）,在LOAD组和对照组之间,不同基因型频率分布有显著性差异（P=0.027）;GG基因型与LOAD呈正相关（odds ratio-2.02,95%CI：1.16～3.52）.结论FGF-1基因启动子（-1385 A/G）多态性与LOAD显著相关.     

胱硫醚β-合酶基因C770T基因突变与先天性心脏病的相关性研究

目的：初步探讨母亲同型半胱氨酸代谢酶胱硫醚β-合酶（CBS）基因C770T基因突变与子代先天性心脏病（CHD）发生的关系。方法运用等位基因扩增技术检测62对CHD患儿（病例组）及其生物学母亲C770T基因型,并且与62对健康儿童（对照组）及其生物学母亲C770T基因型对比。结果 CBS C770T产生C/C及C/T两种基因型,病例组母亲的C/C及C/T基因型频率分别为45．16％和54．84％,C和T等位基因频率分别为72．58％和27．42％;对照组母亲的C/C型、C/T型、C及T等位基因频率分别为59．68％、40．32％、79．84％及20．16％,两组母亲的基因型频率及等位基因频率分布比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;此外,病例组C/C型、C/T型和T等位基因频率分别为43．55％、56．45％和28．23％,对照组分别为58．06％、41．94％及29．03％,两组C/C型、C/T型及T等位基因频率分布比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论在广西人群中,母亲CBS C770T基因突变与子代CHD无明显相关性,母亲C770T突变可能不足以构成子代CHD的独立遗传危险因素。     

阿尔茨海默病行为及精神症状与认知障碍的相关性

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）行为及精神症状（BPSD）与认知障碍的关系.方法 46例AD患者在入院当天作AD病理行为评分表（BEHAVE-AD）、简易智力状态检查（MMSE）及临床痴呆评定表（CDR）评定.以CDR评分将AD分为轻、中、重三组,对不同程度AD患者BPSD发生率及其BEHAVE-AD量表分值作一比较,并将所有AD患者的MMSE分值与BEHAVE-AD量表分值之间的关系作相关分析.结果 幻觉发生率在重度AD有显著性增高;BEHAVE-AD的幻觉分量表分在AD轻、中、重三组之间差异有显著性,分值随AD严重度增加而增加;MMSE分值与幻觉分量表分呈显著负相关.结论 AD患者的BPSD与认知障碍之间存在相关性,幻觉的出现可作为AD病人痴呆严重度的预警因素.     

宫颈癌相关基因甲基化研究

DNA甲基化属于表观遗传修饰的一种,是真核细胞DNA最普遍的修饰方式,可以通过影响基因突变、表达调控、细胞增殖等调节基因转录活性和表达。研究发现基因启动子甲基化的程度直接影响基因的转录活性,并且呈负相关。由于肿瘤的形成从本质上讲就是细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活所致,所以异常的DNA甲基化在致癌作用上扮演了重要角色。     

膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态的研究

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义。方法 收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织；采用甲基化特异聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10／30、1／30，二者差异有统计学意义（P〈0．叭）；hMLH1基因甲基化阳性率在Ta-T1期、T2-T3期膀胱癌中分别为7／19、3／11，二者差异无统计学意义（P〉0．05）；在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7／18、2／9、1／3，三者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化，但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性，提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌的关系研究

目的探讨DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌发生的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测33例肝细胞癌及相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态,分析上述组织中两种基因甲基化状态与临床资料的关系。结果DKK-3和WIF-1基因在癌组织中甲基化率明显高于癌旁组织和正常组织(P<0.05,P<0.05),而癌旁组织和正常组织中DKK-3和WIF-1基因甲基化率相比无明显差异;癌组织中DKK-3基因甲基化与临床资料中年龄及肝硬化有关;癌组织中WIF-1基因甲基化与临床资料中乙肝表面抗原、肝硬化有关。结论DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生相关;DKK-3和WIF-1基因致肝细胞癌的发生机制可能与肝硬化致肝细胞癌的发生机制不尽相同,两者是否有相互作用尚不清楚。     

阿尔茨海默病认知功能与海马区MRI表现的相关性

目的评价MRI对阿尔茨海默病(AD)患者诊断的价值,探讨海马区MRI表现与其认知功能损害的相关性。方法使用MRI对30例临床诊断AD的患者进行扫描,采用线性与体积测量的方法对海马高度、体积、颞角宽度、岛叶厚度进行定量评估,同时用临床量表进行认知功能检查,并对海马区MRI表现与临床脑功能评定指标做相关性分析。结果双侧颞角宽度:左(5.6±2.4)mm;右(5.2±2.2)mm、海马高度:左(9.4±3.5)mm;右(9.4±3.6)mm与海马体积:左(2210±420)mm3;右(2488±360)mm3。同对照组比较差异均有显著性意义(P<0.01),MMSE评分与颞角宽度、海马高度、海马体积以及WMS评分与颞角宽度有显著相关性(r=0.652～0.894,P<0.01)。结论采用MRI线性与体积测量对海马萎缩量化评估,均能为AD诊断提供客观依据,与临床认知功能评估有较好的一致性;MRI是临诊断AD有价值的影像检查方法。     

DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌的关系研究

目的探讨DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌发生的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测33例肝细胞癌及相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态。分析上述组织中两种基因甲基化状态与临床资料的关系。结果DKK-3和WIF-1基因在癌组织中甲基化率明显高于癌旁组织和正常组织（P〈0．05,P〈0．05）,而癌旁组织和正常组织中DKK-3和WIF-1基因甲基化率相比无明显差异;癌组织中DKK-3基因甲基化与临床资料中年龄及肝硬化有关;癌组织中WIF-1基因甲基化与临床资料中乙肝表面抗原、肝硬化有关。结论DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生相关;DKK-3和WIF-1基因致肝细胞癌的发生机制可能与肝硬化致肝细胞癌的发生机制不尽相同,两者是否有相互作用尚不清楚。     

RASSF1A 基因甲基化与胃癌的相关性分析

目的：探讨 RASSF1A 甲基化与胃癌临床病理资料的关系。方法通过计算机检索 PUBMED （1998．01～2012．07）、中国知网（1998．01～2012．07）、万方数据库（1998．01～2012．07）等数据库,收集RASSF1A 甲基化与胃癌关系的相关文献,按纳入与排除标准筛选病例对照试验。评价质量及提取资料后,采用 RevMan 5．1软件对数据进行 Meta 分析。结果共检索到36篇,经筛选最终纳入9篇,共506例胃癌组织。Meta 分析结果显示,早期（Ⅰ期-Ⅱ期）与中晚期胃癌（Ⅲ期-Ⅳ期）患者胃癌组织中 RASSF1A 甲基化阳性率合并的 OR 值为0．36[95％CI（0．22,0．60）,P ＜0．01],中高分化与低分化胃癌组织中 RASSF1A 甲基化率合并的 OR 值为0．73[95％CI（0．39,1．34）,P ＞0．05],淋巴结转移与无转移患者胃癌组织中 RASSF1A 甲基化阳性率合并的 OR 值为2．07[95％CI（1．19,3．60）,P ＝0．01],男性与女性患者 OR 值为1．09[95％CI（0．68,1．73）,P ＞0．05],＜60岁与≥60岁患者胃癌组织中 RASSF1A 甲基化阳性率合并的 OR 值为0．77[95％CI （0．47,1．25）,P ＞0．05],肠型与弥漫型患者胃癌组织中 RASSF1A 甲基化阳性率合并的 OR 值为0．95[95％CI（0．37,2．46）,P ＞0．05]。结论胃癌患者病理分期、有无淋巴结转移与胃癌组织 RASSF1A 甲基化密切相关,中晚期胃癌患者 RASSF1A 甲基化阳性率高于早期胃癌患者,有淋巴结转移的胃癌患者 RASSF1A 甲基化阳性率较高。而胃癌患者的性别、年龄、分化程度、Lauren 分型与胃癌组织中的 RASSF1A 甲基化阳性率无显著相关性。