阿司匹林对树突状细胞成熟及免疫功能的体外研究

研究阿司匹林在体外对小鼠树突状细胞(mDC)成熟及免疫功能的影响。在骨髓来源未成熟树突状细胞培养过程中,加入不同剂量(1mmol/L、2mmol/L)的阿司匹林,观察DC形态。流式细胞仪检测各组mDC表面共刺激分子CD86、CD80的表达;台盼蓝染色测细胞活力;混合淋巴细胞反应(MLR)检测mDC对T淋巴细胞刺激能力;ELISA法检测MLR上清液中细胞因子。与对照组比,阿司匹林处理的DC(aspirin-DC)表面CD80、CD86表达明显降低(P<0.01);对T淋巴细胞刺激能力减弱;MLR上清液中炎性因子(TNF-α、IL-1β)明显减少(P<0.01)。结果:在体外培养过程中给予阿司匹林干预能够抑制mDC的成熟及功能,呈剂量依赖性;阿司匹林对DC功能的抑制可能是阿司匹林抑制炎症反应,治疗冠心病的机制之一。     

黄芪多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

目的 通过体外试验研究黄芪多糖（Astragalus mongholicus, ASP） 对树突状细胞（dendritic cells，DC）功能调节的机制，为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法 应用流式细胞仪检测技术、扫描电镜技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果 本实验应用小鼠骨髓来源的DC，通过体外试验证明了黄芪多糖能够提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ的表达，并且呈黄芪多糖浓度依赖性；空白组DC的吞噬功能很强，LPS组DC和黄芪多糖处理组DC吞噬功能都明显下降；黄芪多糖能够促进DC白细胞介素-12（IL-12）的表达；电镜观察DC的超微结构，可见黄芪多糖处理组DC突起增多，形态上更加成熟。结论 本实验结果证实了黄芪多糖能促进小鼠骨髓来源的DC表型及功能的成熟。     

中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位免疫功能研究

目的探讨中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位(AAEM-30%)对小鼠树突状细胞(DC)和免疫功能的作用。方法中亚苦蒿醇提物经AB-8型大孔树脂分离得到AAEM-30%,对其多糖、黄酮和萜类含量进行测定。体外通过流式细胞术检测AAEM-30%对DC表面分子分化簇(CD)40、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测DC细胞因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;体内通过不同给药剂量(50、100 mg/kg)和不同给药方式(皮下注射、腹腔注射、灌胃)检测AAEM-30%对ICR小鼠免疫功能的影响。结果AAEM-30%中多糖、黄酮、萜类的质量分数分别为24.30%、22.50%、28.19%。体外能够增强小鼠DC表面分子CD40、CD86以及DC细胞因子IL-6和TNF-α的表达(均P<0.001)。与对照组比较,3种给药方式的小鼠体质量比较差异均无统计学意义(均P>0.05);50、100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的胸腺指数和50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的脾脏指数均增加(均P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.01),50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD11b^(+)和CD11c^(+)数量增加(P<0.05)。灌胃和腹腔注射2种给药方式均能增加CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的数量(均P<0.05)。结论AAEM-30%能够促进小鼠DC的成熟,增强小鼠免疫功能。     

HBsAg脉冲的树突状细胞对CIK细胞功能的影响

目的:探讨HBsAg脉冲的树突状细胞(DC),对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的增殖和杀伤作用的影响。方法:选择慢性乙肝患者23例,用常规方法分离外周血单个核细胞(PBMC),经HBsAg脉冲后培养为特异性的DC,用3H-TdR掺入法检测该细胞对CIK细胞增殖的刺激作用,用乳酸脱氢酶释放法检测特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用。结果:HBsAg脉冲的DC对CIK细胞的增殖具有刺激作用。由HBsAg脉冲的DC所诱导的特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用增强。结论:HBsAg脉冲的DC可增强CIK细胞的杀伤活性。     

黄芪多糖对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的:通过体外实验研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法:从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、50、100、200mg/L的黄芪多糖共孵育,24小时后收集上清液,应用酶联免疫吸附试验检测pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,5天后收集细胞,应用流式细胞仪检测树突状细胞(Dendritic cell,DC)表型CD11c、CD80、CD86阳性率、光镜观察DC的形态、扫描电镜观察DC的超微结构。结果:黄芪多糖显著提高pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,并且呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05);黄芪多糖可促进pDC向DC的分化和成熟,并呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05)。结论:黄芪多糖能够增强pDC的功能,并促进其向DC的分化和成熟。     

骨髓问充质干细胞联合胰岛移植对受体鼠树突状细胞成熟和功能的影响

目的:研究骨髓问充质干细胞(MSCs)对骨髓细胞(BMC)分化为成熟树突状细胞(DCs),以及MSCs联合胰岛移植对受体鼠BMC来源DCs成熟和功能的影响,以探讨MSCs如何通过DCs发挥免疫抑制作用的机制.方法:将BALB/c小鼠分离纯化骨髓MSCs按比例加入C57BL/6小鼠BMC,在含重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组鼠白介素4(rmIL-4)的培养条件下制备DCs,加脂多糖(LPS)促DCs成熟,检测各组DCs免疫表型的变化,抗原摄取及其分泌白细胞介素-12的能力.观察MSCs联合胰岛移植的同种异基因糖尿病模型小鼠的血糖和组织学变化,并取受体鼠BMC体外诱导为DCs,检测成熟DCs免疫表型、抗原摄取和分泌IL-12能力.结果:体内外实验证明MSCs可使BMC来源的DCs表型CD11c,成熟表面标志CD83、协同刺激分子CD86和I-A<'b>表达明显降低(P<0.05),抗原摄取和分泌IL-12能力显著下降(P<0.01).MSCs联合胰岛移植,可抑制同种异基因受体鼠免疫排斥反应的发生.结论:MSCs可通过抑制BMC来源的DCs的成熟和功能,降低DCs抗原摄取和分泌IL-12能力,诱导免疫耐受,减轻对移植胰岛的排斥反应的发生.     

未成熟树突状细胞对T细胞功能及其IL-10和TGF-β1表达的影响

目的探讨未成熟树突状细胞(DC)对T细胞功能及其IL-10和TGF-β1表达的影响。方法通过诱导大鼠骨髓前体细胞,获取未成熟(iDC)和成熟(mDC)2种状态的DC;将2种DC用乙酰胆碱受体(AChR)负载后进行T细胞重复刺激、交叉刺激和无关抗原刺激试验,采用MTT法观察T细胞增殖情况,采用RT-PCR方法测定T细胞IL-10 mRNA的表达水平,采用Western blot方法检测T细胞TGF-β1的表达水平。结果①AChR负载的iDC可明显抑制T细胞增殖,且这种被抑制的T细胞对AChR负载的mDC的交叉刺激也不引起增殖,但对无关抗原OVA负载的mDC的刺激可产生明显增殖。②与mDC组比较,AChR负载的iDC初次和重复刺激均明显增强T细胞IL-10和TGF-β1的表达。结论 iDC可诱导抗原特异性T细胞耐受,耐受机制可能与IL-10和TGF-β1的表达增强有关。     

人外周血单核细胞来源树突状细胞的成熟诱导

目的：探讨诱导树突状细胞成熟的最优方法。方法：以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞，分别采用CD40L、LPS、TNF-α、细胞因子鸡尾酒法（TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2）诱导成熟，24小时后收获DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86、HLA-DR和FITC-Dextran的内吞能力，ELISA法检测其IL-12的分泌，MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果：CD40L、LPS、TNF-α、鸡尾酒法均可诱导DCs的成熟，其中以鸡尾酒法诱导成熟的效果最优，CD83的表达率为66.91%（P〈0.05）；成熟DCsFITC-Dextran的内吞能力明显下降；成熟DCsIL-12分泌量明显高于未成熟DCs，其中鸡尾酒法诱导成熟的DCs的IL-12分泌量最高，成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力。结论：细胞因子鸡尾酒法是诱导DCs成熟的最佳方法。     

Th细胞的活化与树突状细胞

树突状细胞（dendritic,DC)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），具有很强的抗原呈递能力，并能有效激发T细胞应答。DC在免疫学及肿瘤学乃至其它各学科中的作用也日益受到重视。选择性激活Th1和Th2是许多免疫反应发生的关键，而Th的分化由DC所控制，本文就免疫应答中DC和T细胞相互作用方面的最新研究作一综述。     

microRNA-27a对树突状细胞表型及功能的影响

目的:研究microRNA-27a(miR-27a)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠树突状细胞(Dendritic cell,DC)的成熟和细胞因子分泌的影响。方法:小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,im DC)转染miR-27a的模拟物(miR-27a mimics)后,用LPS刺激24 h,采用流式细胞仪检测其表面共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达,ELISA方法检测其上清中的IL-12p70及IL-10蛋白水平,RT-PCR方法检测其细胞内IL-12p40及IL-10 mRNA水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激T细胞增殖能力。结果:与未处理的im DC比较,LPS刺激24 h后的DC表面的共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达均显著增高(均P0.001);LPS刺激24 h后,与对照组比较,转染miR-27a mimics细胞的共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达均显著降低(均P0.001),且显著抑制IL-12分泌(P0.01)、促进IL-10分泌(P0.05),并显著减弱LPS刺激的DC促CD4+T细胞增殖的能力(P0.01)。结论:miR-27a影响小鼠树突状细胞的成熟以及细胞因子的分泌。     

Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞的提取与鉴别

背景：树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能,它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微,这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。目的：提取鉴别Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞。方法：从Lewis大鼠骨髓中分离骨髓前体细胞,应用20 ng/m L粒细胞集落刺激因子、10 ng/m L白细胞介素4培养7 d诱导为未成熟树突状细胞,然后在未成熟树突状细胞中加入1μg/m L脂多糖继续培养2 d诱导为成熟树突状细胞。采用荧光倒置显微镜观察树突状细胞形态,流式细胞仪鉴定成熟和未成熟树突状细胞表面特异性分子,ELISA检测成熟和未成熟树突状细胞培养上清白细胞介素10、白细胞介素12和白细胞介素17A因子的分泌水平,混合淋巴细胞反应检测成熟和未成熟树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应。结果与结论：(1)普通荧光倒置显微镜下观察树突状细胞具有明显的突起结构;(2)流式细胞仪可见未成熟树突状细胞低表达CD40、CD86等共刺激分子;相反,成熟树突状细胞高表达上述共刺激分子;(3)未成熟树突状细胞的白细胞介素10、白细胞介素17A...     

雷公藤内酯醇对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外试验研究雷公藤内酯醇(triptolide)对浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、5、10、30 μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24 h后收集上清液,ELISA检测pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α量,5 d后收集细胞,流式细胞仪检测树突状细胞表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著降低pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05);雷公藤内酯醇可抑制pDC向DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇能够降低pDC的功能,并抑制其向DC的分化和成熟.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of immunomodulatory activity of triptolide on healthy volunteers peripheral blood mononuclear cells (PBMC)-derived plasmacytoid dendritic cells (pDCs). Methods Healthy volunteers-derived pDCs were sorted by flow cytometry, then incubated with triptolide (0, 5, 10, 30 μg/L). After 24 hours, we detected the concentration of IFN-α, IL-6, TNF-α using ELISA. After 5 days, the cultrural cells were collected and analyzed by flow cytometry, light microscope and electron microscope scanning. Results Triptolide-treated pDCs secreted lower level of IFN-α,IL-6 ,TNF-α, triptolide could inhibit pDCs differentiation to DCs which displayed more immature morphology and immunophenotypes than untreated-pDCs. Conclusion Triptolide could decrease the immune function of pDCs, inhibit differentiation and maturation of pDCs.     

树突状细胞成熟及其信号传导基因表达谱的研究

目的利用多种细胞因子及肿瘤细胞裂解物刺激诱导树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟,并利用基因芯片技术对其信号传导基因表达谱进行研究。方法外周血单个核细胞在体外用细胞因子GM-CSF(100 ng/m l),IL-4(1 000 U/m l)诱导下获取DC,以乳腺癌MCF-7细胞反复冻融的裂解物冲击DC,通过形态学和FCM检测来确定DC。再用基因芯片技术检测其细胞因子及信号传导相关基因表达的变化。结果DC在细胞因子的诱导下,形态上伸出许多伪足样突起,在摄取抗原后可见内吞样小泡。FCM检测呈现成熟DC的标志:CD40、CD83、CD80、CD86、HLA-DR等高表达。芯片扫描发现16种信号传导因子发生5倍以上的改变,其中包括钙调磷酸酶结合蛋白1、TGF-β3受体、FKBP-雷帕霉素相关蛋白、小分子细胞因子A(Cys-Cys)、人T细胞特异蛋白(RANTES)等。结论通过体外细胞因子诱导及抗原冲击的成熟DC不但在形态和表型上存在明显差异,而且在功能和信号传导方面也存在显著变化。     

Th细胞的活化与树突状细胞

树突状细胞 (dendritic ,DC)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞 (APC) ,具有很强的抗原呈递能力 ,并能有效激发T细胞应答。DC在免疫学及肿瘤学乃至其它各学科中的作用也日益受到重视。选择性激活Th1和Th2是许多免疫反应发生的关键 ,而Th的分化由DC所控制 ,本文就免疫应答中DC和T细胞相互作用方面的最新研究作一综述     

004 Th细胞的活化与树突状细胞

树突状细胞(dendritic，DC)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞(APC)，具有很强的抗原呈递能力，并能有效激发T细胞应答。DC在免疫学及肿瘤学乃至其它各学科中的作用也日益受到重视。选择性激活Th1和Th2是许多免疫反应发生的关键，而Th的分化由DC所控制，本文就免疫应答中DC和T细胞相互作用方面的最新研究作一综述。     

ManLAM对树突状细胞成熟及下游免疫的影响

目的:研究结核分枝杆菌(MTB)成分带甘露聚糖帽的脂阿拉伯甘露聚糖(mannose-capped lipoarabinomannan,ManLAM)对树突状细胞(dendriticcells,DCs)成熟及下游免疫的影响。方法:分离健康人外周血单个核细胞,用GM-CSF和IL-4诱导DCs生长,培养至第五天换液加细胞因子,第六天分三组,按实验设计加ManLAM和LPS。第七天收集细胞送流式检测DC-SIGN、HLA-DR、CD86、CD83表达水平;ELISA检测DCs培养上清液中IL-12和IL-10水平;混合淋巴细胞反应检测DCs诱导CD4+T淋巴细胞增值能力;DCs与初始CD4+CD45RA+T细胞共培养48小时后,ELISA检测培养上清液中IFN-γ水平。结果:(1)ManLAM组DCs表达CD86、CD83等成熟标志物较成熟DCs组下降,差异有统计学意义(P0.05);(2)ManLAM组DCs培养上清液中IL-10水平较成熟组升高,IL-12水平较成熟组下降,差异有统计学意义(P0.05);ManLAM组DCs刺激淋巴细胞增殖能力及刺激初始CD4+CD45RA+T细胞向Th1细胞分化能力较成熟组下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:ManLAM干扰DCs成熟,下调DCs诱导的淋巴细胞增殖能力和激活初始CD4+CD45RA+T细胞向Th1细胞分化能力。     

吗啡持续刺激对小鼠树突状细胞成熟的影响

为研究吗啡持续刺激对C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响.体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞,在培养过程中给予吗啡刺激,应用流式细胞术检测细胞表型CD11c、Ia、CD86的变化.吗啡干预各组树突状细胞中细胞表型CD11c、Ia、CD86表达较对照组显著升高.吗啡持续刺激能够促进小鼠树突状细胞的...     

慢性乙型肝炎患者外周血来源树突状细胞的功能状态

通过比较细胞因子诱导的外周血来源的慢性乙型肝炎患者树突状细胞 (DC )和正常人DC在免疫分子表达和免疫功能等方面的差别 ,探讨慢性乙型肝炎患者DC所处的功能状态。以细胞计数、间接荧光表型分析、MTT法测定DC对同种异体淋巴细胞的刺激作用、ELISA法测定DC分泌IL 1 2、IL 6等方法进行研究。实验结果表明 :慢性乙型肝炎患者相同数量的前体细胞经诱导分化形成的DC数量明显减少 ;在培养的 3、 6、 9d,与同期正常人相比 ,慢性乙型肝炎患者的DC表达CD1、CD83、CD80和HLA DR分子水平均较低 ,而CD1 4分子表达水平较高 ;刺激同种异体淋巴细胞增殖能力也低于同期正常人 ;在培养的第 6天DC分泌的上清液中 ,慢性乙型肝炎患者DC分泌的IL 1 2水平低于正常人 ,而分泌的IL 6水平高于正常人。结果提示 ,慢性乙肝患者外周血来源的DC免疫功能处于抑制状态 ,细胞因子表达异常。     

LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的　研究LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞 (DC)成熟的影响。方法　小鼠骨髓细胞用GM CSF培养 7d ,持续刺激组全程加入LPS ,短期刺激组在最后 48h加入LPS ,对照组不加LPS。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力 ,ELISA检测细胞产生的细胞因子 ,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果　用LPS持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86、CD80和CD11c等分子和分泌TNF α和IL 12 (p70 )的能力并未增加 ,吞噬FITC OVA的能力显著升高 ,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力亦显著低于LPS短期刺激组。结论　LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟 ,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因     

MBL对树突状细胞体外分化成熟的影响

目的: 探讨甘露聚糖结合凝集素 (MBL)对人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (MoDC)分化成熟的影响。方法: 以天然人MBL刺激MoDC, 在倒置显微镜下观察DC的形态; 用FACS分析DC的表型; 用 3H- TdR掺入法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力; 以酵母多糖颗粒吞噬试验评估DC的抗原摄取能力; 用ELISA检测DC培养上清中IL- 12和TNF- α的含量。结果: MBL刺激的DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80、CD86和MHC DR的表达均上调,摄取酵母多糖颗粒的能力降低, 激发初始T细胞增殖的能力加强, 分泌的IL- 12增多但几乎不分泌TNF- α。结论: MBL能诱导DC分化成熟, 提示其可能通过调节DC的功能而参与获得性免疫应答。