LXRβ调节海马突触可塑性改善APP/PS1小鼠认知功能的研究

目的 探讨肝X受体(LXR)β激动剂T0901317对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马突触可塑性及认知功能的影响.方法 共纳入30只9个月龄雄性小鼠,其中10只野生型(WT)小鼠作为WT组,20只APP/PS1转基因AD模型小鼠分为AD组和AD+T0组.采用新物体识别实验、Morris水迷宫、免疫组织化学及Wester...     

人源性BACE2对阿尔茨海默病小鼠海马区淀粉样斑块形成及空间学习记忆能力的影响

目的:探讨引入人源性β位点APP剪切酶2(BACE2)基因对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织海马区淀粉样斑块及空间学习记忆功能的影响.方法 20只3月龄雄性SPF级APP/PS1 dE9转基因小鼠分为AAV-BACE2组和阴性对照组,每组10只.采用侧脑室立体定位注射法感染小鼠,AAV-BACE2组和阴性对照组小鼠双...     

小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.     

胃旁路手术对阿尔茨海默病模型小鼠认知功能的影响

目的观察胃旁路手术对APP/PS1/Tau三转基因阿尔茨海默病模型小鼠(AD模型小鼠)认知功能的影响。方法 2018年2月—2019年3月在武汉大学人民医院中心实验室及动物实验中心进行实验,选取来自亲代APP/PS1/Tau三转基因型的子代小鼠(6月龄)随机分为AD胃旁路手术组(n=6)、AD模型组(n=6),另取相同月龄同窝生的C57小鼠随机分为WT正常对照组(n=6)、WT正常胃旁路手术组(n=6)。胃旁路手术2个月后进行APP/PS1/Tau三转基因小鼠的基因鉴定,鉴定后4组行Morris水迷宫实验检测认知功能,最后取4组小鼠海马部位组织用Western-blot方法检测P-Tau(Ser396)和P-Tau(Thr231)蛋白的表达,了解各组小鼠Tau蛋白磷酸化水平情况。结果AD模型组和AD胃旁路手术组的小鼠均携带APP、PS1及Tau 3种基因,即为APP/PS1/Tau三转基因小鼠,造模成功。在水迷宫定位航行实验中,AD胃旁路手术组小鼠较AD模型组平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),而与WT正常对照组比较,AD胃旁路手术组逃避潜伏期延长(P<0.05);空间探索实验中,AD胃旁路手术组较AD模型组跨越平台次数明显增加(t=3.376,P=0.007)。AD胃旁路手术组小鼠较AD模型组Tau蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.01)。结论胃旁路手术能明显改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能。     

琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1双转基因 AD小鼠的作用研究

目的 探讨琐琐葡萄黄酮(flavones from Vitis vinifera L.,VTF)对APP/PS-1双转基因AD小鼠神经保护作用研究。方法 选用6月龄雄性APP/PS-1双转基因AD小鼠75只,随机分为模型组、阳性对照组(多奈哌齐组,0.7mg/kg)和琐琐葡萄总黄酮(VTF)低、中、高剂量组(70、210、420mg/kg),另取15只同龄雄性C57BL/6小鼠为空白对照组,模型组和空白对照组给予等量0.5%CMC-Na灌胃,8周后采用Morris水迷宫观察小鼠空间认知能力,应用HE染色和免疫组化学染色(IHC)观察小鼠海马CA1区神经元细胞形态以及APP和Aβ1~42 蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠逃逸潜伏期显著延长(P<0.01),有效区域进入次数显著减少(P<0.01);与模型组比较,VTF各剂量组逃逸潜伏期显著缩短(P<0.05),VTF低和中剂量有效区域进入次数显著增多(P<0.05)。镜下观察结果显示,与空白对照组比较,模型组存在大量呈凋亡趋势的神经元细胞,排列不规则,胞质萎缩出现间隙,CA1区APP和Aβ1~42蛋白表达量增加;阳性对照组及VTF各剂量组海马神经元大多数较正常,排列较规整紧密,核仁清晰,核固缩浓染减轻,APP和Aβ1~42蛋白表达量减少。结论 VTF可改善APP/PS-1双转基因AD小鼠学习记忆能力,对小鼠大脑神经元细胞有良好的保护作用,可减少APP和Aβ1~42在小鼠脑内的过表达,对APP/PS-1双转基因AD小鼠具有较好的防治作用。     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

不同月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元线粒体的动态变化

目的:检测不同月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠海马神经元中线粒体自噬的动态变化,并探讨其意义.方法:选取20只雄性APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象,分为3月龄组、6月龄组、9月龄组和12月龄组,以C57小鼠为对照组.获取海马组织,通过电镜观察海马区神经元中线粒体的形态变化,用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达水平;线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和Miro1的表达水平;线粒体外膜蛋白Tom20的表达水平.结果:电镜观察结果显示:随着月龄增大,APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元中线粒体损伤的病理变化呈逐渐加重的过程,即线粒体明显水肿、透明,嵴排列不规则,断裂,甚至消失.Western blot结果显示,与野生小鼠组比较,LC3、P62、PINK1和Parkin蛋白表达水平在6月龄组、9月龄组和12月龄组小鼠中明显增高(P＜0.05),而Miro1蛋白却明显降低(P＜0.05),Tom20的表达水平无明显差异(P＞0.05).结论:随着APP/PS1双转基因AD小鼠月龄的增加,其海马区神经元线粒体病理改变呈动态,线粒体自噬呈动态增强但伴随线粒体清除障碍.     

APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆功能与超微结构的对照研究

目的观察APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠的记忆功能与超微病理改变。方法采用水迷宫实验检测记忆功能,透射电镜观察海马区超微病理改变。结果APP/PS1双转基因AD小鼠的水迷宫潜伏期比对照组小鼠明显延长,而在探索实验中两者差异无统计学意义;电镜观察到APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元肿胀,突触稀松形态不一。结论APP/PS1双转基因AD小鼠能够较好的模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。     

G-CSF联合VEGF增加APP转基因小鼠AD模型海马CD133及SYN的表达

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合血管内皮生长因子(VEGF)对APP转基因AD小鼠模型突触可塑性的影响.方法 54只10月龄APP转基因小鼠随机分为G-CSF联合VEGF干预组(联合组)、G-CSF干预组及对照组3组.联合组:腹腔注射VEGF(8 μg/kg·d)连续3 d,之后皮下注射G-CSF(50μ...     

活血开窍方对转基因AD模型小鼠IL-1、IL-6及TNF-α的影响

目的:研究活血开窍方对转基因AD模型小鼠IL-1、IL-6及TNF-α的影响,探讨其作用机制。方法:3月龄APP swe/PS1d E9双转基因(APP转基因)AD模型小鼠,随机分为活血开窍大剂量组、活血开窍小剂量组、盐酸多奈哌齐组、模型组,C57BL/6J小鼠为正常对照组,每组10只,连续灌胃给药3个月,采用Morris水迷宫实验观测APP转基因AD模型小鼠学习记忆能力的变化,ELISA测定小鼠血清中IL-1、IL-6及TNF-α含量。结果:Morris水迷宫实验结果表明,与正常对照组相比,3月龄模型组小鼠穿越原平台位置的次数、第四象限游泳时间及路程均显著缩短和减少(P0.05);药物治疗后,小鼠在Morris水迷宫中穿越原平台位置次数、第四象限游泳时间及路程均较模型组显著提高(P0.05)。ELISA实验结果表明,与正常对照组相比,模型组小鼠血清中IL-1、IL-6及TNF-α含量显著升高(P0.01);与模型组相比,活血开窍组小鼠IL-1、IL-6及TNF-α血清含量显著降低(P0.05)。结论:活血开窍方可在一定程度上改善APP转基因AD模型小鼠学习记忆能力,并且通过降低APP转基因AD模型小鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α的含量改善其炎性状态。     

Effect of valproic acid on autonomous behaviors and cerebral morphology and structure in APP/PS1 double transgenic mice

目的 研究丙戊酸钠( valproic acid,VPA)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠自主活动及脑组织形态结构的影响,探讨VPA对AD的保护作用及可能机制.方法 将3月龄APP/PS1双转基因小鼠及同窝野生型小鼠分为VPA处理组和生理盐水对照组,运用VPA[30 mg/(kg·d)]和等量生理盐水腹腔注射4周.旷场实验观察各组小鼠的自主活动能力;尼氏染色、透射电镜观察各组小鼠脑组织的病理改变.结果 行为学结果显示:与野生型小鼠相比,AD模型小鼠自主活动明显减少(P＜0.05);野生型小鼠VPA处理组与对照组自主活动无明显差异(P＞0.05);而AD模型小鼠VPA处理组比对照组的自主活动明显减少(P＜0.05).尼氏染色显示:AD模型小鼠脑内神经元密度显著低于野生型小鼠.AD模型小鼠中,对照组脑内神经细胞明显肿胀,尼氏小体明显减少而致细胞质淡染,神经细胞密度降低(85.2±13.3);而VPA处理组脑内神经元肿胀程度明显减轻,神经元数量显著回升(116.9±16.2,P＜0.05),但VPA不影响野生型小鼠脑内的神经元数量及形态(VPA处理组:142.2±24.4 vs 生理盐水对照组:136.7±23.1,P＞0.05).电镜结果显示AD模型小鼠对照组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡肿胀明显,突触结构稀松;而AD模型小鼠VPA处理组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡的水肿明显减轻,突触结构清晰.结论 VPA可显著减少APP/PS1双转基因AD模型小鼠的自主行为,显著减轻躁狂症状;VPA可改善APP/PS1双转基因小鼠脑内神经细胞的形态结构,减少肿胀的神经元并抑制神经元数量的减少.     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。     

甲基化芯片检测APP/PS1双转基因小鼠基因组DNA甲基化分布

目的研究阿尔茨海默病(AD)动物模型APP/PS1双转基因小鼠基因组DNA甲基化分布。方法采用最新发展的甲基化DNA免疫共沉淀(Me DIP)结合高通量测序方法,检测APP/PS1双转基因小鼠皮层脑组织DNA甲基化分布。结果只在AD小鼠脑组织中存在的DNA甲基化片段有2 346个,涉及485个基因,这些DNA甲基化片段分布在不同的染色体上。部分甲基化基因具有一定家族聚集性。结论 APP/PS1双转基因小鼠与相应的野生型小鼠脑组织的DNA甲基化位点存在明显差异,提示DNA甲基化可能参与了AD的发生和发展。     

肝脏X受体激动剂TO901317对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠认知功能的影响及其机制

目的：肝脏X受体(liver X receptor,LXR)是核受体超家族中的一员,其中LXR-β是脑细胞内胆固醇含量的重要感受器,而LXR-β/类视黄醇X受体(retinoic X receptor,RXR)-α/ATP结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)胆固醇跨膜转运体系与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生、发展密切相关。LXR激动剂TO901317能影响APP/PS1双转基因小鼠脑组织中β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的生成,但其具体机制尚未阐明。本研究旨在观察LXR激动剂TO901317对高胆固醇饲料饲喂的AD小鼠的认知功能的影响,并从胆固醇代谢的角度探讨其可能的机制。方法：选取24只雄性6月龄APP/PS1双转基因AD小鼠,并随机分为4组,即普通饲料(control)组、高胆固醇饮食(cholesterol rich diet,CRD)组、CRD联合LXR激动剂TO901317饲喂组(TO901317组)以及CRD、TO901317联合LXR拮抗剂GSK2...     

丙戊酸钠对APP/PS1转基因小鼠自主活动及脑形态结构的影响

目的研究丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠自主活动及脑组织形态结构的影响,探讨VPA对AD的保护作用及可能机制。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠及同窝野生型小鼠分为VPA处理组和生理盐水对照组,运用VPA[30 mg/(kg.d)]和等量生理盐水腹腔注射4周。旷场实验观察各组小鼠的自主活动能力;尼氏染色、透射电镜观察各组小鼠脑组织的病理改变。结果行为学结果显示:与野生型小鼠相比,AD模型小鼠自主活动明显减少(P<0.05);野生型小鼠VPA处理组与对照组自主活动无明显差异(P>0.05);而AD模型小鼠VPA处理组比对照组的自主活动明显减少(P<0.05)。尼氏染色显示:AD模型小鼠脑内神经元密度显著低于野生型小鼠。AD模型小鼠中,对照组脑内神经细胞明显肿胀,尼氏小体明显减少而致细胞质淡染,神经细胞密度降低(85.2±13.3);而VPA处理组脑内神经元肿胀程度明显减轻,神经元数量显著回升(116.9±16.2,P<0.05),但VPA不影响野生型小鼠脑内的神经元数量及形态(VPA处理组:142.2±24.4 vs生理盐水对照组:136.7±23.1,P>0.05)。电镜结果显示AD模型小鼠对照组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡肿胀明显,突触结构稀松;而AD模型小鼠VPA处理组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡的水肿明显减轻,突触结构清晰。结论 VPA可显著减少APP/PS1双转基因AD模型小鼠的自主行为,显著减轻躁狂症状;VPA可改善APP/PS1双转基因小鼠脑内神经细胞的形态结构,减少肿胀的神经元并抑制神经元数量的减少。     

PS1/APP双转基因阿尔茨海默病模型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析

目的对所获的PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型小鼠进行基因鉴定,进一步对其进行组织学分析,检测老年斑(senile plaque,SP)的形成情况.方法设计特定的引物,PCR扩增转入基因组DNA中的APP基因,对转入PS1/APP的小鼠应用刚果红染色结合免疫组化观察Aβ沉积、小胶质细胞和星型胶质细胞的活化.结果与未转入的阴性对照相比,在PS1/APP双转基因的AD小鼠皮质和海马内可见Aβ斑块形成,围绕在Aβ斑块周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,形成典型的SP结构.结论我们获得的PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD患者脑内的主要病理过程,提供有效的实验动物模型.     

神经干细胞联合神经生长因子纳米粒海马移植对阿尔茨海默病转基因鼠的影响

目的:观察神经生长因子(NGF)纳米粒对神经干细胞(NSC)在APP/PS1转基因鼠脑内存活、迁移、分化的影响,以及NSC联合NGF纳米粒移植对基底前脑胆碱能神经元及海马、皮层3-淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法:36只12月龄雄性APP/PS1转基因小鼠采用随机数字表法分为AD对照组、NSC移植组、联合移植组,每组12...     

H102对APP转基因小鼠脑内IDE和NEP表达的影响

目的:观察H102对β淀粉样蛋白前体(APP)转基因小鼠脑内胰岛素降解酶(IDE)及脑啡肽酶(NEP)的影响.方法:将APP转基因小鼠随机分为模型组和给药组,每组10只;并设10只同月龄同背景C57BL/6J小鼠为对照组.对照组、模型组每日侧脑室注射生理盐水,给药组每日注射H102(80 μmol/L)生理盐水溶液.4周后行Morris水迷宫测试.之后采用免疫组化方法观察小鼠脑组织内IDE及NEP阳性细胞的表达变化及蛋白质免疫印迹技术半定量检测两者的含量.结果:(1)Morris水迷宫测试:给药组小鼠比模型组小鼠学习记忆能力提高(P＜0.05,P＜0.01).(2)免疫组化测试:给药组及对照组小鼠脑内IDE及NEP阳性细胞表达均比模型组增强(P＜0.01).(3)蛋白质免疫印迹检测结果:对照组及给药组小鼠脑组织内Aβ42与APP含量均低于模型组(P＜0.01),且IDE与NEP含量均高于模型组(P＜0.01).结论:H102可提高APP转基因小鼠脑内IDE及NEP的活性及含量,改善学习记忆能力,降低Aβ及APP的水平,有助于改善阿尔茨海默病(AD)病情,为治疗AD提供前景.     

早老素增强子-2在APP/PS1双转基因小鼠脑内的分布及表达

目的 研究γ-分泌酶组件早老素增强子-2(presenilin enhancer-2,Pen-2)在APP/PS1双转基因小鼠脑内的表达及分布,以进一步明确Pen-2与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的关系.方法 对APP/PS1双转基因小鼠交配后产下的子代进行基因分型,用免疫组化方法检测Pen-2和老年斑在APP/PS1双转基因AD模型小鼠和同窝野生型正常小鼠脑内的分布和表达情况.结果 Pen-2广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内各区域,包括大脑皮质、海马、基底核、小脑、嗅脑、脑室脉络丛等,而老年斑则选择性地出现在大脑皮质、海马、嗅脑等区域,并且Pen-2的分布范围广于老年斑的分布.AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2阳性神经元的着色程度(2.09±0.33)显著高于正常小鼠(1.29±0.31,P ＜0.05),且AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2免疫阳性物质主要分布于细胞膜和细胞质,而正常小鼠大脑新皮质内的Pen-2阳性神经元仅细胞膜周围染色较深,而细胞质染色极浅甚至不着色.结论 Pen-2在AD模型小鼠和正常小鼠脑内的表达存在差异,这种差异可能与老年斑的形成和AD的发生相关.     

姜黄素对9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠行为学的影响

目的 应用Morris水迷宫,测试AD模型APPswe/PS1dE9双转基因小鼠定位航行及空间搜索等学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法 将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg?kg-1?d-1)、姜黄素高(400 mg?kg-1?d-1)、中(200 mg?kg-1?d-1)、低剂量组(100 mg?kg-1?d-1),每组6只;并以同月龄遗传背景相同的C57/BL6J小鼠作为对照组。每天灌胃给药1次,连续灌胃6个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果 姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间学习记忆能力障碍有改善作用,尤以姜黄素中剂量组效果比较明显。结论 姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的认知功能。