缺氧对鼻息内上皮细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的 通过上皮细胞对缺氧和炎性因子刺激的主动应答作用，探讨上皮细胞和缺氧对鼻息肉早期形成的影响。方法 将鼻息肉及下鼻甲的上皮细胞分别在常氧和缺氧状态下，以及不同类性因子刺激条件下进行无血清原代上皮细胞的培养，采用原位杂交，酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent,assay，ELISA）的方法，用促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）为缺氧标志，检测上皮细胞分泌合成的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的线粒体RNA（mitochondriaRNA，mRNA）和蛋白质水平的变化。结果 ①缺氧条件下，EPO在来自于鼻息肉和下鼻甲的上皮细胞中明显表达，且两者无明显差异，表明EPO可作为组织缺氧标志；②上皮细胞合成的VEGFmRNA的能力在各种刺激下增加，而以缺氧条件下增加最为明显（P＜0．001），其中鼻息肉的合成能力要强于下鼻甲（P＜0．01）；③VEGF的蛋白质表达水平在不同的炎性因子及缺氧刺激下表达增加（P＜0．01），且随作用时间的延长而增强。其中以缺氧刺激下升最为明显（P＜0．001）。鼻息肉的表达明显高于下鼻甲（P＜0．01）。结论 上皮细胞在缺氧时可主动合成VEGF。而这种中鼻黏膜缺氧诱导的VEGF的产生和分泌是鼻息肉早期形成的重要机制。这也可能是鼻肉形成局限于中鼻道的原因。     

VEGF在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎中的表达及克拉霉素对其的调节作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎（CRSwNP）患者鼻黏膜中的表达及克拉霉素对其的调控作用。方法：收集16例CRSwNP组织及21例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜,采用实时定量RT-PCR方法检测样本中VEGF的表达。另外收集10例伴鼻息肉的慢性鼻窦炎鼻息肉组织及5例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜,采用体外组织块培养及ELISA方法,观察克拉霉素对VEGF表达的调节作用。结果：①VEGF mRNA在CRSwNP组的表达较对照组增高,差异有统计学意义（P〈0.01）;②经克拉霉素刺激前后比较,CRSwNP组织中VEGF蛋白的表达量下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：CRSwNP组织中VEGF的表达显著升高,推测VEGF在鼻息肉的发病机制中具有极其重要的作用。克拉霉素可能通过抑制VEGF的表达而达到治疗慢性鼻-鼻窦炎的作用。     

水通道蛋白-5在人鼻息肉组织中的表达及与复发的关系

目的观察水通道蛋白-5（aquaporin-5，AQP5）在鼻息肉组织及正常下鼻甲黏膜组织中不同部位的表达及分布；观察AQP5在鼻息肉术后未复发及复发患者鼻息肉组织中的表达及分布；研究AQP5在鼻息肉发病机制中的作用；初步探讨AQP5在鼻息肉中的表达程度与鼻息肉复发的关系。方法取63例鼻息肉组织和13例下鼻甲组织，应用HE染色和免疫组织化学技术检NIAQP5在下鼻甲黏膜组织和鼻息肉组织中的阳性细胞的表达及分布；检NIAQP5在未复发和复发患者鼻息肉组织中的阳性细胞的表达。结果鼻息肉上皮细胞层AQP5阳性细胞表达与下鼻甲比较，差异无显著性意义（P〉0．05）；鼻息肉固有层腺体AQP5阳性细胞表达比下鼻甲显著增高，差异有显著性意义（P〈0．05）；鼻息肉血管及血窦内皮细胞AQP5阳性细胞表达比下鼻甲增高，差异有显著性意义（P〈0．05）；AQP5在鼻息肉患者术后未复发组中的阳性细胞表达显著降低，与复发组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论AQP5可能参与鼻息肉组织黏膜水肿的形成。AQP5的高表达可能与术后鼻息肉复发有一定关系。     

糖皮质激素对鼻息肉缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在鼻息肉组织中的表达及相关性, 探讨局部应用糖皮质激素类药物对鼻息肉的作用机制。方法 采用免疫组化SP法检测鼻息肉组织在应用丙酸氟替卡松鼻喷剂治疗前、后及下鼻甲HIF-1α及VEGF的表达变化。结果 鼻息肉组织中HIF-1α和VEGF的表达水平明显高于下鼻甲组织（P均＜0.01）;激素治疗后HIF-1α、VEGF表达下降(P＜0.05)。鼻息肉的发病与组织中HIF-1α、VEGF的表达呈明显正相关（r=0.627, P＜0.05）。结论 局部应用糖皮质激素可降低HIF 1α、VEGF的表达,有效治疗鼻息肉。     

鼻息肉组织中CD34的表达及微血管密度的临床意义

目的：探讨CD34在人鼻息肉组织中的表达硬微血管密度（MVD）的临床意义。方法：采用免疫组织化学Elivision Plus二步法,榆测30例止常下鼻甲（对照组）和60例鼻息肉（鼻息肉组）组织中CD34蛋白的表达情况,对CD34阳性血管进行MVD计数,并了解微血管的分布情况。结果：在鼻息肉组织中CD34阳性表达较广泛．在正常下鼻甲组织中CD34呈散在的弱阳性表达。鼻息肉组MVD明显高于对照组（P〈0．01）,并且在鼻息肉组中Ⅱ型3期、Ⅲ型中的MVD较Ⅱ型1期显著升高（P〈0．01）。结论：CD34的表达及微血管的增生与鼻息肉的发生、发展有关,对其检测有助于判断鼻息肉的发展趋势,为新的治疗方案的选择提供依据。     

血管内皮生长因子和CD34在鼻息肉中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、CD34在人各型鼻息肉组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法,检测67例鼻息肉（Ⅱ型1期14例,Ⅱ型2期18例,Ⅱ型3期20例,Ⅲ型15例）和20例下鼻甲（对照组）组织中VEGF、CD34蛋白的表达情况,对CD34阳性微血管进行计数[微血管密度（microvessel density,MVD）]。结果鼻息肉Ⅱ型1期、Ⅱ型2期、Ⅱ型3期、Ⅲ型中,VEGF表达分别为17．35±5．29、19．13±4．85、36．76±4．38、38．49±6．07。CD34表达（MVD）分别为13．26±2．05、14．72±3．86、26．40±2．71、27．97±3．34。11型3期、Ⅲ型鼻息肉组织中VEGF、CD34的表达较Ⅱ型1期、Ⅱ型2期鼻息肉组织中显著升高（P〈0．05）。结论VEGF、CD34表达与鼻息肉发生、发展有关,对其检测有助于判断鼻息肉的发展趋势。     

三种促炎因子在鼻息肉及术后两周紧邻术区鼻黏膜的变化

目的 研究鼻息肉及鼻内镜术后2周紧邻术区鼻黏膜中血管细胞黏附分子（vascular cell adhesion molecule，VCAM）-1、嗜酸粒细胞亲合素（Eotaxin）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及相关性，探讨鼻息肉术后复发的可能机制。方法 应用链霉亲和素-过氧化物酶（SABC）免疫组化法检测30例鼻息肉及其中22例鼻内镜术后2周患者紧邻术区鼻黏膜的VCAM-1、eotaxin和VEGF的表达情况；HE染色光镜下观察组织结构、炎性细胞浸润情况。结果 ①HE染色可见鼻息肉组织嗜酸粒细胞大量浸润，术后则明显减少（t=2．891，P〈0．05）；②VCAM-1在鼻息肉手术前后均呈阳性表达，阳性面积差异无统计学意义（t=-2．051，P〉0．05），平均吸光度术后减弱（t=3．670，P=0．05）；Eotaxin手术前后阳性面积差异无统计学意义（t=0．739，P〉0．05），平均吸光度术后明显减弱（t=4．428，P〈0．05），Eotaxin术后腺体阳性率明显增加（t=-2．899，P〈0．05）；③VEGF阳性面积及平均吸光度手术前后表达差异均无统计学意义（t值分别为-0．037、0．825，P值均〉0．05）。结论 ①鼻息肉鼻内镜手术后嗜酸粒细胞数量明显减少，说明紧邻术区水肿状组织不同于鼻息肉。②VCAM-1、Eotaxin术后紧邻术区鼻黏膜阳性表达，说明Eotaxin有可能上调VCAM-1在血管内皮的表达，促进嗜酸粒细胞黏附于内皮细胞，穿内皮细胞问隙迁移到组织中，可能是息肉复发的基础。其中Eotaxin术后腺体阳性表达明显增加，推测其可能在鼻息肉复发早期发挥重要作用。③VEGF术后高表达，提示VEGF可促进术区血管增生及通透性增强，使局部组织增生、水肿，从而可能成为息肉复发过程中的重要因素之一。     

Eotaxin和Eotaxin-2在鼻息肉病和鼻息肉组织中的表达及意义

目的：了解嗜酸粒细胞（EOs）趋化因子Eotaxin、Eotaxin-2在人鼻息肉病和鼻息肉组织中的表达情况，探讨鼻息肉与鼻息肉病发病机制上的异同。方法：采用免疫组织化学方法（SP法）检测15例鼻息肉病患者（鼻息肉病组）、13例鼻息肉患者（鼻息肉组）的息肉组织和8例行鼻中隔偏曲矫正术患者的中鼻甲组织（对照组）中Eotaxin和Eotaxin-2的表达。结果：Eotaxin-2在对照组、鼻息肉组和鼻息肉病组3组间呈递增表达，且每2组间比较均差异有统计学意义（均P〈0．05）；Eotaxin在鼻息肉病和鼻息肉组中的表达均显著高于对照组（均P〈0．05），而在鼻息肉病组与鼻息肉组间表达差异无统计学意义。结论：Eotaxin和Eotaxin-2可能均参与了鼻息肉病与鼻息肉的炎症反应过程，Eotaxin-2在鼻息肉病和鼻息肉组织之间的不同表达提示它可能是鼻息肉病与鼻息肉发病机制不同的重要原因之一。     

鼻息肉中血管内皮生长因子mRNA的检测与意义

目的 :检测鼻息肉组织和鼾症下鼻甲粘膜组织中的血管内皮生长因子 (VEGF) m RN A水平的表达 ,了解其在慢性炎症过程中的作用。方法 :取 6例行下鼻甲切除术的下鼻甲粘膜和 7例鼻息肉切除术的鼻息肉标本 ,用半定量的反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测 VEGF的 m RNA表达。结果 :RT- PCR结果显示在鼻息肉组织中 V EGF的表达较鼾症患者下鼻甲粘膜组织明显升高。结论 :鼻息肉组织中 VEGF的表达显著升高 ,推测 VEGF在鼻息肉的形成、生长及复发过程中具有极其重要的作用。     

Hypoxia effects on vascular endothelial growth factor derived epithelial cells of nasal polyps]

OBJECTIVE: To understand the role of nasal mucous epithelial cells to hypoxia in early stage of nasal polyps(NP) formation. METHODS: Epithelial cells of NP and inferior turbinate (IT) were cultured without serum under normal oxygen and hypoxia, and stimulus of inflammatory cytokines. Erythropoietin (EPO) was regarded as hypoxia mark, and expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) mRNA and protein derived from epithelial cells were detected respectively by in situ hybridization and ELISA. RESULTS: 1. Under hypoxia, EPO mRNA was expressed intensely in epithelial cells from NP and IT, and there was no significant difference between both of them. This result suggested that EPO might be regarded as a hypoxic mark. 2. The ability of producing VEGF mRNA increased with cytokines stimulation, especially under hypoxia. Protein level of VEGF from epithelial cells of NP and IT increased with cytokines stimulation, especially in hypoxia and was time-dependent. CONCLUSION: Epithelial cells actively produce vast VEGF under hypoxia. The VEGF induced by hypoxia of the mucosa in middle meatus is of importance in the formation of nasal polyps(NP) in early stage, which may be the major cause of NP formation in middle meatus.     

Protein kinase C in eosinophil proliferation and infiltration in nasal polyp tissue]

OBJECTIVE: To explore the significance of protein kinase C (PKC) in eosinophil (EOS) proliferation and infiltration in nasal polyp tissues. METHODS: With the methods of in situ hybridization and immunohistochemistry staining, PKC and apoptosis gene (Bcl-2, Bax) expression were measured between nasal polyps from 26 patients and inferior turbinate mucous membrane tissue (ITMMT) from 20 normal persons. EOS was identified with May-Grünwald-Giemsa (MGG) staining. RESULTS: In EOS, the positive cell expressive rate of Bcl-2 mRNA and its protein were significantly higher in group of nasal polyps than that in group of ITMMT (P < 0.01). Although the positive cell expressive rate of Bax mRNA and its protein were slightly higher in group of nasal polyp tissue than that in group of ITMMT, the difference was not significant (P > 0.05). PKC was expressed in EOS of all 26 cases from nasal polyp tissues, but in 20 cases from ITMMT, only 7 cases showed occasional PKC expression. In both groups, PKC positive cell expression was significantly different, and the expression of PKC and Bcl-2 mRNA as well as their protein in EOS of nasal polyps showed remarkably positive relation (r1 = 0.0875, r2 = 0.0823, P < 0.01). CONCLUSION: PKC expression increasing in EOS of nasal polyp tissues was closely associated with apoptosis inhibiting. So we presumed that EOS inhibiting in nasal polyp tissues was obtained by activating PKC signal transduction pathway.     

天然免疫蛋白PLUNC在鼻息肉中的表达及与鼻息肉临床特征的关联性

目的：探讨天然免疫蛋白腭、肺、鼻上皮克隆（PLUNC）在鼻息肉组织中的表达情况,分析PLUNC蛋白浓度与鼻息肉大小（鼻内镜记分）和手术后复发的关联性。方法：采用免疫组织化学和实时定量PCR检测鼻息肉组（28例鼻息肉患者,其中13例为术后复发患者）和对照组（16例钩突黏膜对照）PLUNC的组织染色定位和mRNA的表达情况,同时采用ELISA检测初发和复发鼻息肉组织中PLUNC的蛋白浓度差异,评估PLUNC蛋白浓度与息肉大小、鼻塞、流涕症状记分的相关性。结果：鼻息肉组织中PLUNC主要定位在黏膜上皮和腺体,染色强度记分显著低于对照的钩突组织（P〈0．01）;PLUNCmRNA表达水平也显著低于对照的钩突组织（P〈0．01）。初发和复发鼻息肉组织中PLUNC蛋白OD值分别为0．33±0．11和0．15±0．05,差异有统计学意义（P〈0．01）。小型和大型鼻息肉PLUNC蛋白OD值分别为0．32±0．14和0．19±0．07,差异有统计学意义（P〈0．05）。鼻息肉组织中PLUNC蛋白浓度与鼻塞和流涕记分存在显著负相关（r=-0．51和r=-0．57,P〈0．01）。结论：PLUNC的表达降低提示鼻息肉的发生可能与天然免疫反应的减弱有关,因此,上调天然免疫分子如PLUNC等的表达可作为干预鼻息肉发病的一个新策略。     

Immunological features of patients with polypous ethmoiditis

34 patients with nasal polyps (NP) and 12 normal individuals were studied immunologically to investigate association of nasal polyp formation with disorders of general and local immunity. In NP patients there were decreased preoperative and early postoperative levels of peripheral blood T- and B-lymphocytes, functional activity of lymphocytes and neutrophils. In contrast to normal individuals, nasal secretion of NP patients contained degenerative epithelial cells and neutrophils, activated lymphocytes, monocytes and eosinophils. Nasal polyp tissues obtained after polypectomy contained more B-lymphocytes than T-lymphocytes. Lymphocytes and neutrophils in nasal polyps had elevated functional activity in tissue culture. We conclude that local hyperactivation of T- and B-lymphocytes as well as neutrophils contribute much to nasal polyp formation.