粘性放线菌对牙面粘附机理的研究──Ⅰ．实验性全唾液获得性膜蛋白组份的分离纯化

采用羟基磷灰石柱层析形成实验性获得性膜的体外模型，研究全唾液获得性膜蛋白的组成成份。结合离子交换及分子筛层析分离获得８种获得性膜的蛋白成份。根据层析用谱、等电点、氨基酸组成及免疫扩散分析，其中６种可确定为富脯糖蛋白、淀粉酶、ＳＩｇＡ、酸性富脯蛋白、富酪蛋白及富组蛋白。实验结果表明唾液中的蛋白质选择性吸附到羟基磷灰石上，分离纯化的获得性膜蛋白为筛选促进致龋菌在牙面粘附的唾液蛋白受体提供了直接的研究材料。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究Ⅳ.粘性放线菌唾液蛋白受体的研究

采用 3H-标记的粘性放线菌不同菌株 ,对 7种唾液蛋白包被羟基磷灰石的粘附实验 ,来筛选菌毛 及菌毛 的唾液蛋白受体。结果发现 :富脯糖蛋白 (PRPG)、酸性富脯蛋白及富酪蛋白是粘性放线菌菌毛 的受体 ;PRPG、SIg A是菌毛 的受体 ;PRPG是两种菌毛共同的受体 ;同时还发现不同唾液蛋白成份对不同的菌株粘附影响有差异 ,新分离的粘性放线菌菌株的粘附能力比参考株强。     

粘性放线菌对芽面粘附机理的研究：Ⅳ.粘性放线菌唾液蛋白受…

采用＾３Ｈ－标主民的粘性放线菌不同菌株，对７种唾液蛋白包被羟基磷灰石的粘附实验，来筛选菌毛Ⅰ及菌毛Ⅱ的路液蛋白受体。结果发现：富脯糖蛋白、酸性富脯蛋白及富酪蛋白是粘性放线菌菌毛Ⅰ的受体；ＰＲＰＧ、ＳＩｇＡ是菌毛Ⅱ的受体。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究：Ⅲ.粘性放线菌变异株的鉴…

利用粘性放线菌的变异株制备全菌抗血清，采用免疫吸附、疏酸铵沉淀及离子交换层析制备了抗菌毛Ⅰ、ⅡＩｇＧ，并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测定其分子量，ＥＬＩＳＡ证明其特异性，为确定菌毛Ⅰ、Ⅱ在粘附中的作用，筛选粘性放线菌的粘结素成份奠定基础。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究──Ⅱ．与牙面粘附有关的粘性放线菌粘结素的研究

本实验通过采用粘性放线菌不同菌株（包括培养上清液蛋白）对唾液包被羟基磷灰石的粘附实验及抗菌毛Ⅰ，Ⅱ的ＩｇＧ的粘附抑制实验来判断粘性放线菌粘结素存在部位，并确定不同菌毛在粘附中的作用。结果发现：１．粘性放线菌的粘结素主要位于菌毛上，并进一步证实两种菌毛共同参与粘性放线菌对牙面的粘附；２．上清蛋白中不含粘结素成份，可能含有有利于细菌凝集的成份；３．粘性放线菌地方株与参考株的菌毛有相同的抗原决定簇，为预防粘性放线菌地方株的粘附提供了实验依据。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究：Ⅲ.粘性放线菌菌毛粘附与凝 …

目的 了解粘放菌两种菌毛在粘附牙面和与链球菌３４凝集中的生物活性,方法 采用粘放菌Ｉ型和ＩＩ型菌毛提取及两种抗菌毛抗体,通过它人对粘放菌粘附唾液包被的羟磷灰石（ＳＨＡ）的抑制实验来判断两种菌毛的粘附活性,通过粘放菌与血链球菌３４的凝集实验及两种抗菌毛抗体对凝集反应的抑制实验来确定两种菌毛的凝集活性。结果 （１）粘放菌Ｉ型和ＩＩ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体均能抑制粘放菌对ＳＨＡ的粘附,（２）只有ＩＩ     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究：Ⅰ.粘性放线菌菌毛？…

本实验旨在建立一套提取和鉴定粘性菌菌毛的方法。方法采用粘性放线菌变异株５５１９（１＾＋２＾－）和５９５１（＾－２＾＋）分别提取Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。首先用机械搅动法分离菌毛与菌体,进一步用凝胶过滤柱层析提取、纯化两种菌毛,并通过电镜观察和对流免疫电泳进行初步鉴定。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究Ⅲ.粘性放线菌变异株的鉴定及兔抗菌毛Ⅰ及菌毛ⅡIgG的制备

利用粘性放线菌的变异株制备全菌抗血清 ,采用免疫吸附、硫酸铵沉淀及离子交换层析制备了抗菌毛 、 Ig G,并用 SDS- PAGE电泳测定其分子量 ,EL ISA证明其特异性 ,为确定菌毛 、 在粘附中的作用 ,筛选粘性放线菌的粘结素成份奠定基础     

含氟表面活性剂对变形链球菌和粘性放线菌对实验性唾液膜粘附的影响

许多含氟表面活性剂已显示了明显的控制菌斑作用．本文研究了5种表面活性剂对变链菌JBP和粘性放性菌LY-7对唾液实验性膜粘附的影响．结果表明，5种表面活性剂都不同程度地减少了JBP和LY-7的粘附，有的还对已粘附的细菌有一定的解吸作用．提示表面活性剂控制菌斑的作用与其减少细菌粘附有关．     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究：II.粘性放线菌菌毛化 …

目的 了解采用机械搅拌法提取的粘性放线菌Ｉ型,ＩＩ型两种菌毛的化学组成,方法 首先制备出抗Ｉ型菌毛抗血清和抗ＩＩ型菌毛抗血清,鉴定两种菌毛纯化物纯度后,采用考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定两种菌毛中蛋白质和糖的含量,并进行氨基酸组成分析,结果两种菌毛的主要成分是蛋白质,糖含量较低,两种菌毛均是天门冬氨酸,谷氨酸,丙氨酸,赖氨酸和甘氨酸含量较多,两种菌毛中,非极性氨基到百分含量最高,碱性氨基酸百分含量     

对氨基苯甲酸影响粘性放线菌在唾液获得性膜粘附的体外研究

粘性放线菌 (Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｖｉｓｃｏｓｕｓ,ＡＶ ,简称粘放菌 )是最早粘附于牙面上的细菌之一。目前研究[1] 认为 ,粘放菌与根面龋的发生有关 ,粘放菌的致病作用与其在牙面的粘附有关。细菌在牙面的初始粘附 ,就是细菌在唾液获得性膜上的粘附。研究[2 ] 证明口腔中早期定植的先锋菌血链球菌(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓａｎｇｕｉｓ,Ｓ .Ｓ ,简称血链菌 )产生对氨基苯甲酸(ｐａｒａ＿ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ ,ＰＡＢＡ) ,且ＰＡＢＡ在一定浓度范围内促进粘放菌的生长。本实验旨在研究ＰＡＢＡ处理粘放菌对该菌在唾液…     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅰ.粘性放线菌菌毛的提取和鉴定

目的：本实验旨在建立一套提取和鉴定粘性放线菌菌毛的方法。方法：采用粘性放线菌变异株５５１９（１＋２－）和５９５１（１－２＋）分别提取Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。首先用机械搅动法分离菌毛与菌体,进一步用凝胶过滤柱层析提取、纯化两种菌毛,并通过电镜观察和对流免疫电泳进行初步鉴定。结果：证实分别提取到Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。结论：两种菌毛的提取为进一步分析研究它们的生化特征和生物活性奠定了基础。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅲ.粘性放线菌菌毛粘附与凝集活性的研究

目的：了解粘放菌两种菌毛在粘附牙面和与血链球菌３４凝集中的生物活性。方法：采用粘放菌Ⅰ型和Ⅱ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体,通过它们对粘放菌粘附唾液包被的羟磷灰石（ＳＨＡ）的抑制实验来判断两种菌毛的粘附活性,通过粘放菌与血链球菌３４的凝集实验及两种抗菌毛抗体对凝集反应的抑制实验来确定两种菌毛的凝集活性。结果：①粘放菌Ⅰ型和Ⅱ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体均能抑制粘放菌对ＳＨＡ的粘附;②只有Ⅱ型菌毛能间接引起肉眼可见的血链球菌３４的凝集反应,抗Ⅱ型菌毛抗体能抑制凝集反应,抗Ⅰ型菌毛抗体无此抑制作用。结论：Ⅰ型和Ⅱ型菌毛均有粘附性能;Ⅱ型菌毛有凝集性能,Ⅰ型菌毛无凝集性能;本课题所采用的菌毛分离法未破坏菌毛的生物活性。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅱ.粘性放线菌菌毛化学组成的分析

目的：了解采用机械搅拌法提取的粘性放线菌Ⅰ型、Ⅱ型两种菌毛的化学组成。方法：首先制备出抗Ⅰ型菌毛抗血清和抗Ⅱ型菌毛抗血清,鉴定两种菌毛纯化物纯度后,采用考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定两种菌毛中蛋白质和糖的含量,并进行氨基酸组成分析。结果：两种菌毛的主要成分是蛋白质,糖含量较低。两种菌毛均是天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸含量较多。两种菌毛中,非极性氨基酸百分含量最高,碱性氨基酸百分含量最低。结论：本实验结果有助于了解两种菌毛的化学组成与其生物性能的关系。     

粘性放线菌Ⅱ型菌毛粘附与凝集活性的研究

目的:研究粘放菌Ⅱ型菌毛在细菌粘附与凝集过程中的作用。方法:制备粘放菌Ⅱ型菌毛多克隆抗体抗血清,检其对粘放菌变异株5519、5951、T14V的粘附抑制率,同时肉眼观察它对粘放菌与血链菌34间凝集反应的影响。结果:抗Ⅱ型毛多克隆抗体能减少5519、5951、T14V对玻壁的粘附量,并抑制5951、T14V与血链菌34间的凝集反应。结论:粘放菌Ⅱ型菌具有粘附与凝集的活性。     

葡萄籽原花青素对粘性放线菌影响的实验研究

目的:观察葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对粘性放线菌生长、黏附和产酸的影响.方法:选用粘性放线菌ATCC15987为实验菌株.采用液体稀释法测量GSPE对粘性放线菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC...     

唾液富酷蛋白对致龋细菌粘附的影响

目的：探讨唾液富酪蛋白（statherin）对致龋细菌变形链球菌和血链球菌粘附的影响。方法：用高效疏水色谱分离提纯30名个体唾液富酪蛋白并观察不同浓度唾液富酪蛋白与变开链球菌和血链球菌粘附的关系。结果：唾液富酪蛋白明显促进变形链球菌对羟磷灰石的粘附且其促进作用的大小与其浓度有关（P＜0．05）;而对血链球菌的粘附无明显影响（P＞0．05）。结论：唾液富酪蛋白可促进变形链球粘附于羟磷灰石上。     

转基因番茄防龋疫苗的基础研究：I.变形链球菌pac基因唾液粘附区 …

目的 构建变形链球菌表面蛋白基因（ｐａｃ）唾液粘附区的植物表达质粒ｐＲＯＰ１和ｐＲＰＢ１。方法 用ＰＣＲ扩增的含变形链球菌表面蛋白唾液粘附区Ｐ１片段（１８４－１９４６ｂｐ）与植物的高效表达质粒ｐＲＯＫＣＰ结合,构建ｐＲＯＰ１表达质粒;且将此质粒与Ｂａｒ基因（抗除草剂基因）连接,构建表达质粒ｐＲＰＢ１,酶切电泳检测。结果 从ｐＰＣ４１中扩增的Ｐ１片段整合到ｐＲＯＫＣＰ的适当部位,构成重组质粒ｐＲＯＰ     

变形链球菌对唾液获得性膜粘附机理的研究Ⅰ.变形链球菌表面粘结素粗提方法的比较

用冷乙醇沉淀法从变形链球菌培养上清液或用0.5mol/L磷酸盐缓冲液、6mol/L脲和2%SDS溶液从变形链球菌细胞表面分别粗提变形链球菌表面粘结索。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和细菌粘附抑制实验比较4种粘结素粗提物的种类及粘附活性，结果表明4种粘结素粗提物蛋白组成相似，且4种粗提物均有较强的粘附抑制活性，而从培养上清液中提取变形链球菌粘结素地蛋白生物活性损伤水，方法简便易行，更具优越性。