儿童急性腹泻粪便中轮状病毒的不同检测法

<正> 人轮状病毒(HRV)是引起婴幼儿急性腹泻的主要病因。由于轮状病毒的基因组具有特异的双股RNA结构,因此利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法对其RNA片段电泳移动图型进行分析是目前研究轮状病毒感染的一种最常用方法。但是,多种因素可能影响PAGE的敏感性,因此检测HRV最好采用多种方法,以提高阳性标本的检出率。本文对1983年10月至1984年1月及1984年10月至1985年1月合肥市两个医院一部分急性腹泻病儿的大便标本用直接电镜(EM)、PAGE及酶联免疫吸附试验(ELISA)三种方法进行了比较研究,现将结果总结如下。材料与方法 1.粪便标本:1983年10月—1984年1月的标本采自住院病儿;1984年10月—1985年1月     

人巨细胞病毒IE1-GFP融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(GFP)与人巨细胞病毒(HCMV)IE1融合蛋白真核细胞表达载体,为IE1基因的表达和功能研究提供基础.方法 将质粒pNEB193-IE1和载体pEGFP-C1分别进行双酶切获得目的基因IE1片段和空载体,回收纯化后用T4连接酶将两者连接并转化E.coli JM109,用salⅠ、BamHⅠ双酶切后琼脂糖电泳鉴定阳性克隆.结果 双酶切pEGFP-C1-IE1后,琼脂糖电泳可见到大小约1476 bp的片段,与IE1预期片段大小一致,即IE1亚克隆入pEGFP-C1.结论 成功地构建了HCMV IE1-GFP融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1-IE1.     

清洁级长爪沙鼠病毒抗体ELISA检测法建立

经纯化长爪沙鼠IgG免疫家兔后获得的血清用辛酸法纯化抗体，电泳可见只有一条蛋白带，制备得酶标二抗工作浓度为1：25600。用间接ELISA对开放系统和屏障系统中长爪沙鼠进行淋巴细照脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒抗体的检测，发现其血清病毒抗体阳性率开放系统为6．0%(4/67)，22.4%(15／67)和14．9%(10／67)，屏障系统为1．3%(1／79)，1．3%(1／79)和7．6%(6／79)，如用酶标蛋白A取代酶标抗长爪涉鼠IgG抗体进行检测，则无一份血清阳性，结果表明长爪沙鼠可以自然感染LCMV、MHV和仙台病毒或其抗原相关的病毒，酶标蛋白A不宣作为酶标二抗用手长爪沙鼠抗体的检测。     

核酸电泳法检测轮状病毒(摘要)

轮状病毒(Rota Virus)引起的腹泻,粪便中含有大量轮状病毒(可达10~9—10~(11)/ml),可从粪便中直接提取RNA,用垂直板聚丙烯酰胺淀胶电泳法检测轮状病毒 RNA 基因组(简称核酸电泳法)、根据特有的电泳图型(显11条带)进行诊断。1984年我站在研究病毒性腹泻时首次建立起此方法。采用电镜观察轮状病毒阳性与阴性粪便各20份,其核酸电泳检测结果:电镜阳性者均见到清晰的11条带,即为核酸电泳阳性;电镜阴性者均未见到显带,为核酸电泳阴性。显     

弓形虫致密颗粒蛋白的免疫反应性评价

目的对弓形虫的重组蛋白谷胱甘肽巯基转移酶致密颗粒蛋白(GSTGRA7)的免疫反应性进行评价。方法异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠埃希菌BL21(pGEX4T1/GRA7)表达,表达产物进行十二烷基硫酸钠(SDS)变性蛋白质电泳,分别以人抗弓形虫阳性血清和兔抗弓形虫阳性血清为一抗进行WesternBlotting分析。用GST亲和层析柱纯化重组蛋白,以此蛋白作为包被抗原,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果重组蛋白GSTGRA7能被兔抗弓形虫阳性血清、人抗弓形虫阳性血清所识别。该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫重组蛋白GSTGRA7具有良好的免疫反应性。     

脑脊液寡克隆区带琼脂糖凝胶免疫固定电泳的实验研究

目的鉴定脑脊液寡克隆区带(oligoclonal band,OB)的存在,探讨其在中枢神经系统疾病中的临床应用。方法对脑脊液和血清标本同时进行琼脂糖凝胶电泳,使用酶标抗人免疫球蛋白G,采用免疫固定电泳技术后,用TTF3显色。鉴定是否存在寡克隆区带。结果 67例神经系统疾病患者,其中4例临床确诊为多发性硬化症(multiple sclerosis,MS),经电泳免疫固定酶标显色后,2例(50%)发现寡克隆蛋白阳性,其他为阴性。结论脑脊液免疫固定电泳是检测脑脊液中内源性合成免疫球蛋白的直观方法。OB的检查对于多发性硬化和神经系统炎症有一定的诊断价值。     

扩增结核分枝杆菌DNA的微孔杂交比色检测

目的建立简单的杂交方法特异地检测聚合酶链反应(PCR)扩增的结核杆菌DNA.方法用玻璃粉提纯结核分枝杆菌DNA,dUTP-脲DNA糖基化酶(UDG)防污染,用5'端标记生物素的引物进行PCR扩增,5'端带标记的扩增产物与固定在微孔板上特异探针杂交,然后用酶标链霉亲和素进行酶联免疫法检测.结果对100份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的痰标本检测,扩增杂交法检出40份阳性,比抗酸染色法(15/100),培养法(28/100)和PCR电泳法(35/100)检出率高,而50份来自无结核感染者的痰标本,几种方法检查均为阴性.结论该方法可灵敏、特异、客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌,比传统PCR-电泳法优越.     

扶正清肝饮治疗乙型慢性活动性肝炎15例临床观察

本人自1985年3月至1986年11月用自拟“扶正清肝饮”治疗乙型慢性活动性肝炎15例,取得一定效果,并对患者肝功能、蛋白电泳(主要是γ-球蛋白)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、乙型肝炎病毒(HBV)血清学抗原抗体五项标志(酶联免疫法),进行了观察,现报道如下: 一、一般资料 15例中男12例,女3例;最大55岁,最小23岁,平均35.5岁;病程最长8年,最短1年,平均3.6年。本组病例均系临床确诊为乙型慢性活动性肝炎,SGPT反复波动,γ-球蛋白持续升高,HBsAg、抗-HBc、     

血红蛋白电泳、MCV在地中海贫血筛查中的应用

目的:探讨分析血红蛋白电泳、MCV在地中海贫血筛查中的应用。方法:选取2017年1月-2018年9月在本妇幼保健院进行婚检、产检的疑似地中海贫血的319例患者为研究对象,所有患者均行血红蛋白(Hb)电泳、MCV检测、基因检测,其中以基因检测结果为地贫筛查诊断的金标准;对比分析Hb电泳、MCV检测、Hb电泳+MCV联合检测的结果、敏感度(Se)、特异度(Sp)、准确度(Ac)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果:319例患者,经基因检测阳性180例,阴性139例;经MCV检测阳性243例,阴性76例;经Hb电泳检测阳性136例,阴性183例;MCV+Hb电泳联合检测,阳性177例,阴性142例。MCV检测、Hb电泳检测、MCV+Hb电泳联合检测三种地贫检测结果(Se、Sp、Ac、PPV、NPV)比较,差异均有统计学意义(P0.05),且MCV+Hb电泳联合检测的Se、Sp、Ac、PPV、NPV均显著高于MCV检测和Hb电泳检测,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:MCV检测、Hb电泳检测对婚检、产检人群地中海贫血筛查均具有一定的临床指导意义,MCV+Hb电泳联合检测地贫较单一检测敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值更高,检测效果更佳,对临床诊断治疗更具指导性意义。     

秋泻灵加丽珠肠乐治疗不同电泳型轮状病毒性肠炎

本研究从2006年8月～2007年3月收集了56例婴幼儿肠炎的大便,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚丙烯酷胺凝胶电泳(PAGE)检测,结果ELISA阴性者45例,PAGE阴性者28例,28例PAGE阴性者中18例为电泳RNA长型,10例为电泳RNA短型,PAGE阴性者均用秋泻灵加丽珠肠乐治疗,结果发现对长型的效果优于短型轮状病毒性肠炎,提示轮状病毒性电泳RNA长型和短型的毒性有差异.     

孕妇携带乙肝病毒产前检查及疫苗阻断母婴传播

我院于1985年开始对产前检查的孕妇进行 HBV 血清学指标检测,阳性携带者的新生儿注射乙肝疫苗,随访观察,结果报告于下。材料与方法一,对象:1985年8月到1986年5月为分娩前1～3个月孕妇检查肝功、HBsAg、HBeAg、抗 HBe。选择 HBsAg 阳性(单阳)性及 HBsAg 阳性与 HBeAg 阳性(双阳性)产妇,采集部分胎盘血,脐血和新生儿血检测HBsAg。婴儿在出生后24小时内及生后1及6月分别肌注1ml 乙肝疫苗。二、疫苗;由北京生物制品所提供,每支含 HBsAg10μg/ml。     

人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究

目的 构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析.方法 用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1.将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白.用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性.结果 所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性.结论 成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E. coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白.     

聚合酶链反应微孔酶免疫法检测新型隐球菌

目的 建立一种检测脑膜炎新型隐球菌聚合酶链反应(PCR)产物的微孔酶免疫方法。方法 对PCR所用两条引物进行双标记,使扩增产物一端标记上生物素,另一端标记上地高辛,通过包被在微孔板上的亲和素捕获固定,然后用碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应后显色测定。结果 三种PCR产物检测方法的对照分析表明微孔酶免疫法敏感性最强,加样量0.038μl时即可显色,模板DNA经过10~(11)倍稀释后仍为阳性结果;聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳则分别可检测到0.312 5μl、1.25 μl及10~7、10~4稀释度。对临床脑脊液标本的检测结果微孔酶免疫法和聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为100％,二者敏感性均高于琼脂糖电泳。结论 微孔酶免疫法与常规电泳法相比灵敏准确,结果判断客观,重复性也较好,所测结果可相对反映PCR产物量的多少,此方法可取代电泳法成为常规检测PCR产物的方法。     

免疫固定电泳法检测尿本-周蛋白的临床应用

目的探讨免疫固定电泳检测尿本-周蛋白(BJP)的临床价值。方法采用免疫固定电泳及热沉淀反应法检测尿液BJP,并比较二者的灵敏度和特异性。结果 140例晨尿样本用免疫固定电泳检测,检出尿BJP阳性42例,其中IgGκ型BJP 26例,IgMλ型BJP 16例;用热沉淀反应法检测,检出尿BJP阳性24例。76例十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)提示尿蛋白异常的样本经免疫固定电泳的BJP检出率为55.3%,热沉淀反应法的检出率为31.6%。结论免疫固定电泳检测尿BJP具有较高的灵敏度和特异性。     

用纸上电泳法测定红细胞碳酸酐酶及其在甲亢诊断中应用的初步探讨

在红细胞溶血液电泳分析研究中,除了三种血红蛋白 A、A_2及A_3(亦称A_1)外,在某些电泳条件下还能显示出碳酸酐酶。1967年 Lie-Injo Luan Eng 氏等用酶活性测定法证明甲状腺机能亢进患者(以下简称甲亢)红细胞碳酸酐酶缺乏。同年 Weatherall 和 McIntyre 用淀粉胶电泳也发现此酶在甲亢患者中显著减低和在甲状腺机能减低患者中增多,并且在治疗后恢复到正常水平的现象。本文作者介绍一种用纸上电泳测定红细胞碳酸酐酶的方法(用纸上电泳法测定碳酸酐酶国内尚未见报导)并探讨其在甲亢患者诊断中应用的可能性。     

延边地区婴幼儿轮状病毒的基因RNA分析

本文作者用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对延边地区1985年10月～1987年12月收集的200份婴幼儿腹泻粪便标本进行了婴幼儿轮状病毒的基因RNA分析。1985年和1986年以电泳长型为主,而1987年则为电泳长型和电泳短型各占一半左右,表明婴幼儿轮状病毒电泳型的变异较大。另外,发现长-长电泳型混合感染2例,说明同一宿主可以同时感染不同电泳型的婴幼儿轮状病毒株,表明了婴幼儿轮状病毒在自然界发生基因重组的迹象。     

大鼠MeCP2基因HSV-1型反义表达载体的构建与鉴定

目的以真核表达载体单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)质粒型载体(pHSV)作为表达载体,构建大鼠MeCP2基因反义表达载体.方法用PCR方法扩增出大鼠MeCP2 cDNA部分片段,将其反向插入表达载体pHSV,并以PCR、酶切电泳以及DNA测序等方法对重组质粒进行鉴定.结果经过PCR、酶切电泳以及DNA测序,鉴定出连接方向和插入序列正确的反义表达载体.结论成功构建了大鼠MeCP2基因HSV-1型反义表达载体,为进一步研究该基因的功能打下了基础.     

乙型肝炎免疫球蛋白预防母婴传播乙型肝炎病毒效果的初步观察

本文报道用乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)预防母婴传播乙型肝炎病毒的初步效果。对129例HBsAg阳性携带母亲的婴儿进行对照研究,在64例试验组内用HBIG多次被动免疫新生儿,用酶标检测技术;观察半年,只有12例为HBsAg阳性(18.75％)。而在65例对照组内,婴儿HBsAg阳性数为32例(49.23％),两组婴儿HBsAg阳性率差别有极显著意义(P<0.001)。另外在试验组中有20例母亲为HBeAg阳性,6个月内只有7例婴儿为HBsAg阳性(35％),而对照组有21例母亲为HBeAg阳性,其婴儿有19例是HBsAg阳性(90.48％)。两组婴儿HBsAg阳性率差别也有极显著意义(P<0.001)。本结果初步表明:用1∶2048(PHA)的国产HBIG预防母婴乙型肝炎病毒(HBV)传播具有良好的近期效果。     

输血后丙型肝炎病毒感染的危险性下降

输血最常见的严重并发症是输血后由于丙型肝炎病毒(HCV)而患肝炎。现在血库用非甲非乙肝炎及抗HCV抗体的标记物对供血者的血液进行筛选,但当前对输血后丙型肝炎的危险性尚未认识。 1985～1991年从心脏手术后,前6个月和至少6个月的病人获得血液标本及病史进行预测。储备的血清用酶免疫测定法测定抗HCV抗体,如属阳性,再用重组免疫印迹法测定。     

1341例真菌培养结果分析

1985～1990年,我科真菌室对1341例拟诊为皮肤真菌病者进行了真菌学检查。共培养出8个菌种982株,现报告如下。方法与结果对象为本科门诊和住院真菌病患者,对镜检阳性的1341例进行培养,由于(1)镜检出的是污染菌或糠秕孢子菌,有少数诊断不准确;(2)已经用