艾芬地尔重复鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的影响

目的 观察艾芬地尔重复鞘内注射对小鼠骨癌痛的影响.方法 96只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤给药组(T组)、肿瘤对照组(C组)和假手术组(S组).将含2 ×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.T组在术后第14天开始,鞘内注射艾芬地尔5μl(10μg),每天1次,连续3天.C组和S组在相同时间点分别给予相同体积的溶媒.各组于接种前l天,接种后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第17天、第19天和第23天检测痛行为学指标,包括小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).按照分组在相应时间点处死小鼠,用Western-blotting方法检测脊髓腰膨大NR2B蛋白表达水平.结果 肿瘤细胞接种后第14天,和S组及术前基础值相比,T组小鼠自发性抬足[ (12.88 ±1.64)次]显著增加,PWMT(0.39 ±0.17)g和PWTL( 11.59±1.67)s明显下降(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白(2.12 ±0.13)显著增加(P＜0.05).肿瘤细胞接种后第17天,第19天,第23天,和第14天及C组相比,T组自发性抬足[(5.13±1.38)次,(4.70±1.58)次,(5.64±1.17)次]明显减少,PWMT[ (1.10 ±0.65)g,(0.95 ±0.56) g,(1.05 ±0.26)g]和PWTL[ (15.17±1.27)s,(15.93 ±2.18)s,(16.28±1.48)s]显著增加(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白[(1.42±0.17),(1.67±0.53),(1.14±0.79)]显著减少(P＜0.05).结论 重复鞘内注射艾芬地尔能显著改善骨癌痛小鼠的痛行为,降低脊髓NR2B蛋白.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基在骨癌痛小鼠脊髓背角和背根神经节中的表达

目的：通过观察骨癌痛小鼠疼痛行为学变化和脊髓背角与背根神经节N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（the 2B subunits of N-methyl-D-aspartate receptors,NR2B）的表达以及它们之间的相关性,探讨NR2B在癌性痛产生和维持中的作用。方法：选用45只成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组,模型组（n=15）：于小鼠股骨远端骨髓腔内接种Lewis肺癌细胞2×106个,接种体积为10 μL;假手术组（n=15）：接种等体积的D-Hank’s液;正常对照组（n=15）：不予任何处理。术后第3天始隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。术后第7,15,23天,各组任选5只取小鼠术侧后肢,HE染色,光镜下观察肿瘤生长及骨质破坏的程度;取腰段脊髓膨大（L2-4）和L4背根神经节行NR2B免疫组织化学检测。结果：通过小鼠行为学测定和组织学检测证实骨癌痛模型制备成功。NR2B在模型组术侧脊髓背角和背根神经节免疫反应阳性指数各时间点明显高于假手术组和正常对照组（P<0.05）。模型组中术侧第7与15,23天比较差异有统计学意义（P<0.05）。各组小鼠术后第23天,术侧脊髓背角和背根神经节NR2B免疫反应阳性指数与小鼠术侧后爪累计抬足时间明显正相关（分别为r=0.976,P<0.001;r=0.882,P<0.001）;与小鼠术侧机械性缩足阈值明显负相关（分别为r=-0.879,P<0.001;r=-0.760,P=0.001）。结论：骨癌痛小鼠脊髓背角和背根神经节中NR2B受体表达均增加,且与行为学表现有明显的相关性,推测脊髓背角和背根神经节的NR2B受体在小鼠骨癌痛产生和维持中起重要作用。     

脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成

目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05);与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调;与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.     

鞘内注射硫酸镁对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射硫酸镁( MgSO4)对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3 H/HeJ小鼠56只,8 ～10周龄,体质量18～22 g,随机分为7组(n=8):假手术Sham组(S组)、癌痛模型对照Control组(C组)和MgSO4及吗啡Treat组(T1 -T5组).C组和T组(T1-T5组)小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×105个NCTC 2472纤维肉瘤细胞的20μl α-MEM,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC2472细胞的20μl α-MEM.在接种肿瘤细胞后第14天S组和C组鞘内注射5μl人工脑脊液,T1 -T5组分别鞘内注射溶于人工脑脊液的MgSO4 14.4 μg/5μl、43.2 μg/5μl、86.4 μg/5μl、吗啡0.36 μg/5μl、MgSO414.4μg-吗啡0.36 μg/5 μl.各组于给药前0.5h及给药后的0.5h、2h、4h、8h检测小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).结果 鞘内给予MgSQ 14.4 μg、吗啡0.36 μg对骨癌痛小鼠痛行为无影响,鞘内给予MgSO4 43.2 μg、86.4 μg能剂量依赖性减轻小鼠痛行为反应,同时MgSO4 14.4μg-吗啡阈下剂量0.36μg组合也减轻小鼠痛行为反应,给药后0.5h各组小鼠自发抬足次数[(10.08±1.66)次、(7.35±1.36)次、(10.54±1.32)次]比C组[(13.05±2.06)次]降低,PWMT[ (0.81±0.22)g、(1.33±0.19)g、(0.93±0.26)g]、PWTL[ (10.57±1.53)s、(13.12±1.71)s、(11.46±1.83)s]比C组[(0.42±0.23)g、(8.87±1.27)s]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).作用2h达到高峰,维持到4h左右,8h后基本消失.结论 鞘内注射MgSO4能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为;同时MgSO4可增强阈下剂量吗啡的镇痛作用.     

鞘内注射miR-212反义锁核酸对骨癌小鼠痛行为的影响

目的研究骨癌痛发展和维持过程中小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律及连续鞘内注射miR-212反义锁核酸LNA．anti—miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响。方法本实验分为两个部分：（一）骨癌痛小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律：C3H／HeJ雄性小鼠36只,随机分为假手术组（sham组,n=18）和肿瘤组（T组,n=18）。sham组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的仪一MEM,T组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射纤维肉瘤细胞NCTC2472,建立骨癌痛模型。在术前1d,术后4d、7d、10d、14d、21d,sham组和T组各随机取三只小鼠处死,取脊髓腰膨大标本,用Real-timePCR的方法检测脊髓水平miR一212的表达情况。（二）连续鞘内注射LNA—anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响：C3H／HeJ雄性小鼠24只,随机分为四组：L组（鞘内注射LNA-anti—miR一212,n=6）、L’组（鞘内注射LNA＇-negativecontrol,n=6）、C组（鞘内注射溶媒无核酸酶水,n=6）和S组（假手术处理,n=6）。L组、L’组和C组小鼠在右侧股骨远端注射纤维肉瘤细胞NCTC2472,S组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的仪一MEM。所有小鼠于术前1d、术后4d、7d、10d、14d测小鼠痛行为指标,包括自发抬足次数和机械缩足阈值（PWMT）,术后14d,L组、L’组、C组小鼠分别鞘内注射LNA—anti—miR-21212pmol／5山、LNA＇-negativecontrol12pmol／5I＊1和无核酸酶水5I＊1,连续鞘内注射7d,1次／d,每天测小鼠痛行为指标,至术后第21天。结果miR-212的表达变化表现为：与基础值相比,sham组和T组小鼠在术后第4天,脊髓水平miR一212明显升高（P〈0．05）;与基础值和sham组相比,T组小鼠脊髓水平miR-212在术后7d、10d、14d、21d均明显升高（P〈0．05）。连续鞘内注射LNA—anti—miR-212改善骨癌痛小鼠痛行为：术后19d至21d,与L’组和c组相比,L组小鼠PWMT[19d（1．07-4-0．16）g,20d（1．13±0．21）g,21d（1．27±0．21）g）]明显升高（P〈0．05）,自发抬足次数明显降低[19d（6．674-1．04）,20d（6．62±1．39）,21d（6．47±1．17）]（P〈0．05）。与14d给药前相比,L组小鼠术后19d至21d的PWMT明显升高（P〈0．05）,自发抬足次数明显降低（P〈0．05）。结论骨癌痛发展过程中,脊髓水平miR-212表达量升高。连续鞘内注射LNA-anti—miR一212可以缓解骨癌小鼠痛行为。     

鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响

目的 观察脊髓水平氟代柠檬酸(fluorocitrate)对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响,探讨脊髓星形胶质细胞在伤害性信息传递中的作用.方法 C3H/HeJ 小鼠48只,随机分为6组(n = 8) :假手术组( Sham组),骨癌组,骨癌 生理盐水组,骨癌 氟代柠檬酸0.25 nmol/5 μl、0.50 nmol/5 μl、0.75 nmol/5 μl组.骨癌组和Sham组测定术前及术后7、12、17、21天小鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);骨癌各剂量组在第17天鞘内给予不同剂量的氟代柠檬酸,测定给药前和给药后15 min、30 min、1 h、2 h MWT和TWL值.结果 骨癌组从术后12天开始直到本实验观察的术后21天,MWT和TWL均明显降低,与Sham组相比具有显著性差异( P＜0.01＝;骨癌 生理盐水组小鼠在各个时间点上与给药前相比MWT和TWL无明显改变( P＞0.05);骨癌 氟代柠檬酸各个剂量组小鼠在给药后MWT和TWL均逐渐增加,具有剂量依赖性,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平;骨癌 氟代柠檬酸0.75 nmol/5 μl组在给药后30 min时作用最明显,与给药前和盐水组相比 P＜0.01.结论 鞘内注射氟代柠檬酸能明显减轻骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏,提示星形胶质细胞在脊髓水平参与疼痛信息传递.     

鞘内注射大麻素受体2激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射大麻素受体2(CB2)激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3H/HeN小鼠32只随机分为4组(n=8):空白组(C),假手术组(s),DMSO(D,二甲基亚砜)组和JWH015(J)组.D组和J组在小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种溶于最小必需培养基(α-MEM)的NCTC2472谘骨性纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;s组接种不含细胞的α-MEM;c组不予任何处理.在接种肿瘤细胞后的第14天按照分组D组和J组分别鞘内注射DMSO 5μl和溶于20%DMSO的JWH015 1 μg;S组注射DMSO.各组于接种前,接种后的3d、5d、7d、10d、14d以及给药后的1h、6h、24h、48h、72h测定小鼠的机械性缩足阈值(FWMT)和热缩腿潜伏期(FWTL).结果 与术后14d给药前的基础值[PWMT(0.45±0.09)g,PWTL(11.87±1.1)s]相比,鞘内注射JWH015后6h小鼠骨癌痛即缓解[PWMT(1.20±0.21)g,PWTL(15.35±2.42)s](P<0.05);24h缓解作用达到高峰[PWMT(1.85±0.28)g,PWTL(18.80±2.93)s](P<0.05);在72h作用衰退到给药前水平[PWMT(0.48±0.10)g,PWTL(11.83±1.19)s]P>0.05).结论 鞘内注射JWH015能够显著改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓CXCL13表达的影响

目的 探讨胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓趋化因子CXC配体13（CXCL13）表达的影响。方法 成年雌性SD大鼠60只,体质量200~220 g,采用随机数字表法分为3组：假手术组（A组）、骨癌痛组（B组）、骨癌痛+胍丁胺组（C组）,各20只。B、C组采用大鼠胫骨上端骨髓腔内注入Walker 256癌细胞的方法建立骨癌痛模型,A组胫骨髓腔内注射等量生理盐水,B、C两组鞘内置管。造模成功后,C组鞘内注射胍丁胺160 mg/kg,连续6天;B组鞘内给予等量生理盐水,连续6天;A组不作处理。于造模后第12天用von Frey丝测定3组大鼠机械缩足反射阈值（MWT）;痛阈测定结束后,麻醉处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测CXCL13在神经元中的表达;采用Western blot法分析CXCL13蛋白表达及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测CXCLl3 mRNA的表达。结果 建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠MWT明显低于A组,与B组比较,C组MWT高于B组,差异均有统计学意义（P<0.05）。建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达增加,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显增加（P<0.05）;与B组比较,C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达降低,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显减少（P<0.05）。结论 鞘内注射胍丁胺可有效改善大鼠骨癌痛痛觉过敏行为,其机制可能与抑制大鼠脊髓CXCL13表达有关。     

鞘内注射ERK1/2抑制剂对骨癌痛大鼠的镇痛作用研究

目的 研究鞘内注射细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）抑制剂（SCH772984）对骨癌痛Sprague-Dawley（SD）大鼠疼痛行为学及脊髓背角Fos蛋白表达的影响,探讨ERK-P90RSK-Fos信号通路在骨癌痛中的作用。方法 取鞘内置管后5天的雌性SD大鼠40只,随机分成5组（n=8）,包括Sham假手术组和BNP模型组（分别为对照组,SCH772984给药组SCH 0.1组,SCH 1组,SCH 10组）。在造模后第9天,Sham组不给药,BNP模型组鞘内分别给5% DMSO 10μl、SCH772984抑制剂 0.1、1.0、10μg（SCH772984抑制剂溶于10μl 5%的DMSO中）。测定造模前1天、造模后3、6、9、12、15、18天以及给药后1、3、6、9、12、18、24h的机械缩足阈值（MWT）、热缩足潜伏期（PWL）以及2min自发缩足次数。取鞘内置管后5天的SD大鼠40只,随机分为5组（n=8）,其中B1、B2、B3组在造模后第9天,鞘内注射SCH772984抑制剂10μg后分别于1、9、24h取材,M组为模型对照组,鞘内注射5% DMSO后9h取材,S组为空白对照组。通过免疫印迹（Western blot）法及免疫荧光测定脊髓背角p-ERK、p-p90RSK以及Fos蛋白表达情况。结果 鞘内注射ERK1/2抑制剂（SCH772984）对骨癌痛大鼠有镇痛作用,并且该效应随着剂量的增加而增大;鞘内注射ERK1/2抑制剂（SCH772984）10μg可明显减少脊髓背角Fos蛋白的表达。结论 ERK-p90RSK-Fos通路可能影响骨癌痛。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基拮抗剂对帕金森病运动并发症大鼠行为及相关信号蛋白的影响

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂CP-101.606对帕金森病运动并发症大鼠的行为效应及相关信号蛋白的影响.方法 将6-羟多巴胺立体定向注射于大鼠前脑内侧束建立帕金森病(PD)动物模型.对模型成功的PD大鼠接受每日2次左旋多巴(每公斤体质量50mg左旋多巴加每公斤体质量12.5mg苄丝肼)腹腔注射,持续22d.在第23天左旋多巴注射前,PD大鼠给予CP-101.606处理.评估旋转反应时间,采用蛋白印迹法检测纹状体区磷酸化NR2B、磷酸化钙调激酶Ⅱ( CaMKⅡ)及磷酸化谷氨酸受体1( GluR1 S831)表达情况.结果 NR2B拮抗剂CP-101.606逆转了左旋多巴所诱导的PD大鼠旋转时间的缩短;左旋多巴长期作用后引起磷酸化NR2B及下游相关信号蛋白磷酸化CaMKⅡ与磷酸化GluR1 S831升高至(145.3±6.5)％、(132.5±5.7)％及(105.6±6.3)％,而CP-101.606能下调三者磷酸化水平,其表达量分别为(102±4.9)％、(98.4±3.9)％与(49.5±4.2)％.结论 NR2B磷酸化可能通过介导N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能上调并激活其下游相关信号蛋白参与了帕金森病运动并发症的发生,抑制NR2B的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.     

鞘内注射驱动蛋白17反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10和NR2B蛋白表达的影响

目的 探讨鞘内重复注射驱动蛋白17（Kinesin superfamily 17,KIF17）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10（mammalian orthologue of the caenorhabditis elegans LIN-10,mLin10）和NR2B（the 2Bsubunits of N-methyl-D-aspartate Receptor,NR2B）蛋白表达的影响.方法 56只雄性C3H/HeJ小鼠,4～6周龄,体质量20～25 g,随机数字表法分为假手术组（S组,n=20）和骨癌痛组（T组,n=36）.T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射约含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必须培养基（α-MEM）20μl制备骨癌痛模型,S组小鼠注射不含肿瘤细胞的α-MEM 20μl.各组于接种前（base）、接种后第4,7,10,14天行痛行为学测试并在相应时间点取24只小鼠用western blot法测定脊髓KIF17、mLin10和NR2B蛋白含量.再将T组剩余24只小鼠随机分为T1,T2,T3组,每组8只.接种后第14天起,连续6d同一时间行鞘内穿刺给药,S组和T1组注射5μl生理盐水,T2组和T3组分别注射KIF17正义、反义寡核苷酸5μg/5μl.连续给药,第2～6天行痛行为学测试,第6天再次测定脊髓相关蛋白含量.结果 接种后7～14d,与S组和基础值相比,T组小鼠自发抬足次数增多,机械缩足阈值降低（P＜0.05）,与基础值[（0.65±0.15）、（1.06±0.06）、（1.01±0.14）]相比,T组小鼠脊髓水平KIF17、mLin 10和NR2B蛋白表达[14 d：（1.13±0.06）、（2.17±0.37）、（1.85±0.32）]增多（P＜0.05）;给药期间,与T1和T2组相比,T3组小鼠自发抬足次数减少,机械缩足阈值升高（P＜0.05）,给药后脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[（0.88±0.08）、（0.96±0.11）、（1.03±0.08）]减少（P＜0.05）.结论 重复鞘内注射KIF17反义寡核苷酸能明显改善骨癌痛小鼠的痛行为,并抑制了脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达上调.     

腹腔注射NR2B抗体对大鼠慢性神经病理性痛的镇痛效应

目的 评价N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基(NR2B)抗体治疗对大鼠慢性神经病理性痛的镇痛效应. 方法 50只成年雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(n=7),大鼠不进行任何处理;SNI组(n=7),大鼠左后肢行保留性神经损伤术(spare nerve injury,SNI);NR2B组(n=12)和ifenprodil组(n=12),分别于SNI术后6 d、11 d腹腔注射10 mg/kg的NR2B单克隆抗体(mAbNR2B)或ifenprndil(选择性NR2B拮抗剂);morphine组(n=12),于术后2-4周每次痛阈测试前15 min腹腔注射10 mg/kg的吗啡.持续观察大鼠痛行为学,分别于SNI术前、术后1-4周内每周测定大鼠的机械缩爪阈值(MWT)和热缩爪持续时间(TWD).于术后4周测痛后取大鼠L4-6脊髓组织,Western-blot法和免疫组织化学法检测NR2B的含量及表达的变化. 结果 与对照组比较,SNI组术后1周大鼠出现痛行为学改变,MWT降低(P<0.05)和TWD延长(P<0.05),并持续至术后4周(P<0.05).术后2周,NR2B组和ifenprodil组大鼠痛行为学症状明显减轻,MWT升高(P<0.05)和TWD缩短(P<0.05),持续至术后4周(P<0.05).morphine组大鼠有痛行为学改变,术后1-4周MWT和TWD与对照组比较无统计学差异(P>0.05).术后4周,SNI组大鼠脊髓组织中NR2B的表达及含量升高.与SNI组比较,NR2B组和ifenprodil组大鼠NR2B的表达及含量降低,morphine组NR2B的表达及含量未见降低. 结论 SNI诱导的慢性神经病理性痛大鼠腹腔注射NR2B抗体,可通过下调脊髓组织中NR2B的高表达产生镇痛效应.     

氯胺酮对神经痛大鼠模型海马NR2B亚单位表达的影响

目的研究亚麻醉剂量氯胺酮对神经痛（NP）大鼠模型的镇痛作用及对海马NR2B亚单位的影响。方法采用坐骨神经慢性压迫法（CCI）制备大鼠NP模型。大鼠随机分为4组（n=6）：假手术组（SO组）、模型组（NP组）、K1、K2组。K1和K2组于CCI术后7～31d每天分别腹腔注射氯胺酮10、20mg／kg。各组分别于术前1d和术后3、7、21、31d测定大鼠术侧后爪痛阈;术后第31天,用RT—PCR和Westernblot的方法检测大鼠海马组织中NR2BmRNA和蛋白的表达水平。结果与SO组比较,NP、K1组和K2组术后痛阈明显降低（P〈0．05）。手术对侧海马组织中NR2B表达水平增高（P〈0．05）。与NP组比较,K1组和K2组术后痛阈升高（P〈0．05）,海马的NR2B蛋白表达降低（P〈0．05）。结论亚麻醉剂量氯胺酮可以部分反转NP模型痛觉过敏和海马的NR2B亚单位表达增高。     

鞘内注射代谢性谷氨酸受体亚型5拮抗剂对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨代谢性谷氨酸受体亚型5(mGluR5)拈抗剂MTEP的抗癌痛作用及其机制.方法 C3H/HeNCrlVr雄性小鼠60只,随机分为:(1)正常组:正常饲养21d;(2)MTEP+Tumor组:癌痛组从第14d开始鞘内注射MTEP150nmol,1次/d,共7次;(3)生理盐水+Tumor组:以等体积的生理盐水代替MTEP;(4)MTEP+Sham组:用等剂量MTEP给予假手术组;(5)生理盐水+Sham组:用等体积的生理盐水给予假手术组.每组12只小鼠.用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期(PWTL).各组小鼠均在第21d行为学测试后取脊髓标本,分别应用Real-time PCR和western blot检测胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA及蛋白的表达.结果 各组小鼠基础PWTL差异无统计学意义(P＞0.05).在术后14d,与正常组相比,假手术组PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),而癌痛组PWTL明显降低(P＜0.05).在术后21 d,和正常组相比,MTEP+Sham组、生理盐水+ShaT组PWTL、脊髓GFAP表达差异均无统计学意义(P＞0.05);生理盐水+Tumor组PWTL[(6.18±1.29)s]明显低于正常组[(15.91±1.65)s]、生理盐水+Sham组[(16.57±1.86)s]和MTEP+Sham组[(17.05±2.43)s](P＜0.05),脊髓水平GFAP表达则高于上述3组;MTEP+Tumor组PWTL[(9.39±1.94)s]高于生理盐水+Tumor组,脊髓水平GFAP表达则低于生理盐水+Tumor组(P＜0.05).结论 鞘内注射MTEP具有抗癌痛作用,抑制脊髓水平星形胶质细胞活化可能是其机制之一.

Abstract：

Objective To investigate effects of metabotropic glutamate receptor subtype 5 (mGluR5) antagonist MTEP on the nociceptive behavior and the expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in spinal cord associated with bone cancer pain. Methods C3H/HeNCrlVr 60 male mice were randomly divided into 5 groups: ( 1 ) normal control group: the mice were given food and water ad libitum; ( 2 ) MTEP + Tumor group: the mice were treated by intrathecal gdministration ( once daily on the days 14 ～20 after inoculation of tumor cells)with MTEP (150 nmol); (3) physiological saline + Tumor group:the tumor mice were treated with the same volume of physiological saline; (4) MTEP + Sham group: the sham mice were treated with the same dose of MTEP;(5) physiological saline + Sham group: the sham mice were treated with the same volume of physiological saline.the mice pain behaviors were assessed with the paw withdrawal thermal latency (PWTL) at the corresponding time points, then the mice were killed and the samples of spinal cord were used to real-time PCR and western blot detection of GFAP mRNA and protein expression. Results The basic values of PWTL had no significant differences among all groups (P＜0.05). At day 14 after operation,no significant difference was found in the PWTL value between normal control group and the sham operation group. But in tumor group, the PWTL value was significantly lower than in the normal control group (P＜ 0.05 ). At day 21 after operation,the PWTL and the level of GFAP expression in the spinal cord had no significant differences among normal control group, MTEP + Sham group and physiological saline + Sham group (P ＞ 0.05 ); the PWTL ( (6. 18 ± 1.29 ) s) in physiological saline + Tumor group was significantly lower than in normal control group ( ( 15.91 ± 1.65 )s), physiological saline + Sham group ( ( 16.57 ± 1.86) s) and MTEP + Sham group ( ( 17.05 ± 2.43 ) s) (P ＜ 0.05 ), but the level of GFAP expression was higher than in the above three groups. In MTEP +Tumor group ,the PWTL (9.39 ± 1.94s) was higher than in physiological saline + Tumor group, and the level of GFAP expression was lower than in physiological saline +Tumor group (P ＜ 0.05 ). Conclusion Inhibiting spinal activation of astrocytes may be one of the MTEP anticancer pain mechanisms.     

LV-GlyT2 siRNA 对骨癌痛大鼠 吗啡耐受形成的影响

目的 观察鞘内注射GlyT2 siRNA 慢病毒载体（LV-GlyT2 siRNA）对骨癌痛大鼠吗啡耐受形 成的影响。方法 将骨癌痛模型大鼠随机分为生理盐水组（NS 组）、阴性对照病毒组（LV-NC 组）和阳性 病毒组（LV-GlyT2 siRNA 组）,每组10 只。骨癌痛第7 天,3 组大鼠分别鞘内注射生理盐水、阴性对照病毒 （LV-NC）及GlyT2 siRNA 慢病毒载体（LV-GlyT2 siRNA）;骨癌痛第9 天开始大鼠均鞘内注射吗啡,连 续7 d。分别于癌细胞接种前及接种后7 d 测量大鼠术侧后肢机械缩足阈值（MWT）;注射吗啡后1 d、3 d、 5 d、7 d 测量大鼠甩尾潜伏期,并计算%MPE 值;注射吗啡第7 天采用Western blotting 检测脊髓GlyT2 蛋白 的表达。结果 3 组大鼠癌细胞接种前及接种后7 d 的术侧后肢MWT 在不同时间上有差异（P <0.05）,不同 组间及变化趋势无差异（P >0.05）。3 组大鼠接种后7 d 的MWT 较接种前下降（P <0.05）。3 组大鼠注射吗 啡后1 d、3 d、5 d、7 d 的%MPE 在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,注射吗啡后5 d 和 7 d,LV-GlyT2 siRNA 组大鼠%MPE 值较其他组升高（P <0.05）。LV-GlyT2 siRNA 组GlyT2 蛋白相对表达 量低于LV-NC 组和NS 组（P <0.05）。结论 下调GlyT2 表达可缓解骨癌痛大鼠吗啡耐受的形成。