白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的：观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法：采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果：白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase 3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论：白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase 3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。     

樟脑磺哑嗪诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制的研究

目的测定不同浓度的樟脑磺哑嗪对宫颈癌HeLa促凋亡作用的影响,并进一步探讨其促凋亡的机制。方法以不同浓度的樟脑磺哑嗪(0.5～10μmol/L)处理HeLa细胞24 h后,倒置显微镜检测细胞形态变化,MTT方法检测细胞生长抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT试验及细胞形态学结果显示,不同浓度的樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC50为2.6μmol/L;FCM检测表明不同浓度的樟脑磺哑嗪可使细胞早期凋亡比率增加。Western blot法检测结果显示,不同浓度樟脑磺哑嗪可使HeLa细胞p53、Cleaved-Caspase-3蛋白、89-kDa PRPP蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论樟脑磺哑嗪可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活Caspase依赖途径,并活化作用底物PARP来实现。     

芹菜素对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的:了解芹菜素对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测芹菜素在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞的周期分布;DAPI荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;Western blotting方法检测了凋亡相关信号分子caspase-3和Bcl-2的蛋白表达情况。结果:芹菜素在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。Western blotting实验结果表明,芹菜素可以诱导SGC-7901细胞中凋亡相关信号分子caspase-3活化片段的产生并抑制Bcl-2蛋白的表达。结论:芹菜素在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于caspase-3的活化及Bcl-2蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

曲古抑菌素A阻断Stat3信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的本实验研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对前列腺癌细胞DU145的抑制作用及其对信号传导与转录激活因子3(Stat3)信号通路的影响。方法采用不同浓度的TSA处理DU145不同时间后,四氮甲基唑蓝比色法测定TSA对细胞活力的抑制效应;流式细胞仪分析细胞周期的改变;蛋白印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)及Stat3信号蛋白活性(phospho-Stat3)的变化。结果 TSA时间和剂量依赖性地抑制DU145细胞的增殖,TSA处理细胞24 h和48 h后,细胞生存率分别是85.7%和68.7%;细胞经TSA处理后,细胞形态和细胞周期均发生明显的变化,细胞周期被阻断在G0/G1期,其细胞百分比从55.6%增加到68.5%;Western blot检测结果显示,TSA作用DU145细胞后,Stat3信号蛋白的磷酸化水平下降,同时IL-6对Stat3的刺激诱导作用也被TSA所阻断;Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、PARP等凋亡蛋白被TSA诱导活化,并发生显著剪切。结论 TSA能够通过抑制Stat3信号通路的活性来诱导DU145细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。     

siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用原理及caspase途径在此过程中的作用。方法:应用流式细胞法及RT-PCR检测沉默NFBD1对人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡基因组表达水平的影响。MTT法检测NFBD1 siRNA对HepG2细胞的抑制作用。结果:转染48 h后,转染组与阴性对照组和空白组相比,NFBD1mRNA表达明显减弱,转染组NFBD1 mRNA较空白组相对下降74.75%;HepG2细胞组中促凋亡基因Bc1-xl表达减少,Bid及caspase-3表达量增加(P<0.05)。MTT结果显示NFBD1 siRNA能明显抑制HepG2细胞增殖,抑制率达到92.131±0.893%。流式法检测结果显示转染组细胞凋亡明显高于阴性对照组和空白组。结论:NFBD1可通过改变Bc1-xl/Bid的表达比,激活caspase-3来诱导HepG2细胞凋亡。     

Aβ25-35诱导大鼠心肌细胞内质网应激和细胞凋亡的研究

目的 研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对培养大鼠心肌细胞的凋亡及内质网应激相关蛋白的影响,探讨内质网应激在A β25-35所致心肌损伤中的作用.方法 体外培养大鼠心肌细胞,给予不同浓度Aβ25-35刺激,用MTT方法观察心肌细胞的存活率,采用Hoechst33258染色观察心肌细胞的形态,流式细胞术检查细胞凋亡率,采用Western blot方法检测内质网应激蛋白X盒结合蛋白-1(XBP-1)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的水平,以及凋亡蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的水平.结果 Aβ25-35可以降低体外培养大鼠心肌细胞的存活率,促进凋亡,且呈现浓度依赖的方式.给予Aβ25-35后内质网应激蛋白XBP-1、GRP78和CHOP表达增加,同时凋亡蛋白cleaved caspase-3和cleaved聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)表达也增加.结论 Aβ25-35可以导致体外培养的大鼠心肌细胞发生凋亡,而内质网应激可能参与了心肌细胞发生凋亡过程,为有效防治AD相关性心肌损伤提供新思路.     

甲型流感病毒感染致人血管内皮细胞凋亡的初步研究

目的探讨甲型流感病毒感染对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响。方法 用纯化的甲型流感病毒体外感染人血管内皮细胞后,用RT-PCR法检测病毒整合细胞并复制状况,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及免疫印迹检测细胞凋亡。结果琼脂糖电泳结果显示,H1N1病毒能感染血管内皮细胞且能复制。MTT结果显示,尽管H1N1病毒不能完全抑制血管内皮细胞的增殖,但能使细胞增殖能力明显下降。流式细胞术结果显示甲型流感病毒感染组的Annein V染色阳性的血管内皮细胞比例明显高于对照组。免疫印迹结果显示病毒感染24、32 h后,细胞出现断裂的PRAP蛋白条带。结论甲型流感病毒能感染人血管内皮细胞及增殖,并能诱导血管内皮细胞凋亡。     

中医药对大肠癌信号通路的调控作用

目的 探讨丫蕊花甾体皂苷（YB16）对人结肠癌细胞HCT15凋亡的作用及其机制。 方法 体外培养HCT15细胞,以不同浓度的YB16（0.125～16.000 μmol/L）干预24 h,噻唑蓝（MTT）法检测HCT15细胞存活率,光镜下观察细胞形态变化,吖啶橙（AO）染色观察细胞凋亡情况,JC-1染色观察细胞膜电位改变,蛋白免疫印迹检测细胞内B 淋巴细胞瘤 – 2（Bcl-2）、多聚ADP – 核糖聚合酶（PARP）、激活型PARP（cleaved-PARP）、半胱氨酸蛋白酶 – 3（caspase-3）、激活型caspase-3（cleaved-caspase-3）蛋白表达。 结果 与对照组比较,各剂量YB16组细胞存活率明显下降,呈剂量效应关系（P < 0.05）;与对照组比较,YB16组细胞出现凋亡特征性改变,凋亡细胞明显增多;与对照组比较,0.500、1.000 μmol/L YB16组HCT15细胞内Bcl-2蛋白表达[分别为（0.542 ± 0.04）、（0.351 ± 0.03）]明显下降,cleaved-PARP、cleaved-caspase-3 蛋白表达[分别为（0.647 ± 0.05）、（0.686 ± 0.03）和（0.677 ± 0.03）、（0.762 ± 0.04）]均显著上升,差异有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 YB16可抑制HCT15细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调cleaved-PARP、cleaved-caspase-3蛋白表达有关。     

ShRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响

  目的  探讨shRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1（GASP-1）对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响。  方法  将GASP-1-shRNA1、2和3用Lipofectamine 2 000转染到肺癌A549细胞。选择转染GASP-1-shRNA1的细胞,建立空白对照组、空载体转染组和GASP-1-shRNA1转染组,采用菌落形成试验和流式细胞术分别检测肺癌A549细胞增殖和调亡;采用Western Blot检测ki67、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。将转染GASP-1-shRNA1细胞注射裸鼠后腿建立原位异种移植小鼠模型。检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测ki67和caspase-3蛋白表达量。  结果  GASP-1-shRNA1、2和3转染A549细胞后GASP-1 mRNA和蛋白表达量均显著下调,尤其转染GASP-1-shRNA1组。GASP-1下调能抑制A549细胞增殖,并促进A549细胞凋亡;在体内试验中,下调GASP-1能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。  结论  GASP-1的下调可抑制肺癌细胞增殖、促进凋亡,并抑制肿瘤生长。     

caspase-3基因在染铝小鼠神经细胞凋亡中的作用

[目的]通过观察染铝小鼠海马的线粒体膜电位、组织形态以及脑组织内活化的caspase-3蛋白含量表达的变化,研究caspase-3 siRNA在铝致神经细胞凋亡中的作用。[方法]取3月龄雄性昆明小鼠,按体重随机分为4组,即空白对照组（生理盐水4μL）、染铝组（0.5%AlCl3.6H2O 4μL）、Al＋RNAi组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋目的siRNA表达载体1μL）、空载体组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋对照siRNA表达载体1μL）,通过侧脑室注射进行染毒,连续染毒5 d,各组小鼠海马的凋亡率用流式细胞术检测;线粒体膜电位用罗丹明123（Rhl23）染色流式方法检测;观察小鼠组织学变化;脑组织中活化的caspase-3蛋白的含量用蛋白印迹（Western blot）技术检测。[结果]凋亡率结果显示：与空白对照组相比,染铝组、空载体组的细胞凋亡率升高有统计学意义（P〈0.05）,Al＋RNAi组凋亡率尚无差别（P〉0.05）;线粒体经Rhl23染色呈现明亮绿色的荧光,染铝组和空载体组荧光强度较对照组明显减弱（P〈0.05）,Al＋RNAi组与空白对照组差异无统计学意义;常规HE染色镜下可见空白对照组小鼠海马神经元排列整齐,染铝组细胞排列零乱,细胞连接松解,空载体组细胞数量减少,siRNA处理后细胞状态与空白对照组相似;活化的caspase-3蛋白表达量结果显示染铝组高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组、空载体组、Al＋RNAi组之间尚无差别（P〉0.05）。[结论]RNA能通过下调caspase-3基因的表达,从而对铝致小鼠神经细胞凋亡产生抑制作用。     

子痫前期患者外周血中性粒细胞凋亡及Mcl-1、caspase-3表达的研究

目的:研究子痫前期患者外周血中性粒细胞凋亡情况及其机制。方法:选取2003年10月~2004年9月在我院产科住院的子痫前期患者、正常妊娠孕妇各20例,分离外周血中性粒细胞并体外培养24 h,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR检测Mcl-1 mRNA的表达,免疫印迹法检测caspase-3蛋白的表达。结果:子痫前期组外周血中性粒细胞凋亡率(16.51%±3.84%)明显低于正常妊娠组(30.62%±6.27%),子痫前期组中性粒细胞Mcl-1 mRNA表达增加,caspase-3蛋白活化降低。结论:子痫前期患者外周血中性粒细胞存在凋亡延迟,Mcl-1表达上调和caspase-3活化抑制可能是凋亡延迟的重要机制。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响机制研究

目的探讨马鞭草总黄酮诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及机制。方法采用不同质量浓度的马鞭草总黄酮处理体外培养的肝癌HepG-2细胞,CCK-8检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法分析Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Apaf-1和Survivin蛋白表达水平;比色法检测caspase-3、caspase-9相对活性,caspase-3、caspase-9抑制剂(Ac-DEVD-CHO和Z-LEHD-FMK)验证相关的调控信号通路。结果与对照组比较,马鞭草总黄酮呈剂量依耐性抑制肝癌HepG-2细胞的活性,促进HepG-2细胞凋亡,能提高Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1蛋白水平,降低Survivin蛋白水平,能增加caspase-3、caspase-9的活性,差异均有统计学意义(P0.05),马鞭草总黄酮对Caspase-8蛋白水平影响不明显,差异无统计学意义(P0.05);caspase-3、caspase-9抑制剂能逆转马鞭草总黄酮对HepG-2细胞的活性的抑制(P0.05)。结论马鞭草总黄酮诱导细胞凋亡可能与增强Caspase-3、Caspase-9酶相对活性有关。     

植酸对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Fas、Bax及Caspase-3表达的影响

目的:研究植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法:采用MTT实验法观察植酸对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;DNA琼脂糖凝胶电泳实验(DNA Ladder)观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;Western blotting检测凋亡相关蛋白Fas、Bax及caspase-3的表达。结果:MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;经3.5mmol/L植酸处理72h的细胞出现了典型的DNA片断的梯形条带;植酸能够诱导caspase-3的活化,植酸处理组细胞中Fas、Bax蛋白比对照组表达增加,且呈现剂量-反应关系。结论:植酸对SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,Fas、Bax及caspase-3参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。     

黄连素对体外培养siha细胞增殖的影响

目的:观察黄连素(berberine,ber)对人子宫颈癌siha细胞生长的抑制作用及其对凋亡基因caspase-9、caspase-3的影响,以及caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量的变化。初步探讨ber抑制siha细胞增殖的机制。方法:体外培养人宫颈癌siha细胞,将其分为对照组(二甲亚砜)及ber 20、40和80μmol.L-1,实验组,分别用二甲亚砜、ber处理细胞24、48、72和96 h后,经MTT法检测ber对siha细胞增殖的影响;RT-PCR、Westem blotting、免疫细胞化学染色法观察凋亡相关基因caspase-9、caspase-3的转录、蛋白表达情况。结果:实验组MTT值高于对照组,即实验组细胞增殖受到明显抑制;与对照组相比,实验组凋亡相关基因caspase-9、caspase-3的转录水平均上调(P<0.01)、两基因蛋白表达水平明显上调(P<0.01),活化形caspase-3含量增加。结论:ber可抑制体外培养siha细胞增殖,诱导siha细胞发生凋亡。其机制可能与激活caspase家族级联反应有关。     

LL-37诱导人鼻黏膜上皮细胞凋亡的潜在机制研究

目的 研究抗菌肽LL-37对人鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。 方法 体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用不同浓度的LL-37处理细胞后,CCK-8法鼻黏膜上皮细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)和Bax蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的分泌量。 结果 与0 μg/ml组细胞比,添加LL-37能够抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,且呈浓度依赖性,诱导鼻黏膜上皮细胞发生凋亡,上调鼻黏膜上皮细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的表达,有效降低鼻黏膜上皮细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 LL-37能够在体外抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,诱导细胞凋亡,其可能的作用机制与上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平,促进细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌有关。     

曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用

目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

Nimesulide诱导胰腺癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能分子机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同浓度Nimesulide对PANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）及DNA梯状电泳（DNA ladder）检测PANC-1细胞凋亡的改变;Western blotting法检测Nimesulide不同浓度作用下PANC-1细胞COX-2蛋白水平的改变,RT-PCR法检测COX-2 mRNA水平的变化。结果：MTT、流式细胞术及DNA ladder显示Nimesulide呈剂量依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖,并诱导其凋亡;Western blotting和RT-PCR法显示随着药物浓度的增加,COX-2蛋白及mRNA表达降低。结论：Nimesulide可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡,从而抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长。     

miRNA-21靶向作用于maspin及其对胆管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的通过抑制miRNA-21的表达观察对胆管癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨miRNA-21可能调控的靶基因。方法以人胆管癌细胞RBE细胞为研究对象,根据处理方法不同,细胞分为四组：正常细胞组、脂质体组（仅予脂质体）、阴性对照组（转染相关阴性对照试剂）、miRNA-21抑制组（转染miRNA-21抑制剂）。应用MTT方法检测细胞增殖活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测RBE细胞中maspin基因表达的改变。结果 miRNA-21在经转染miRNA-21抑制剂后在RBE细胞中的表达得到有效抑制,荧光定量PCR结果显示与正常细胞相比,其表达下降了0.02倍。MTT结果显示RBE细胞在抑制miRNA-21表达后增殖活性明显受到抑制（P〈0.05）,流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为2.29%、2.43%、2.89%、19.35%,miRNA-21的表达降低后,RBE细胞的凋亡率明显增高（P〈0.05）,并且荧光定量PCR及western blot结果显示maspin mRNA及其蛋白的表达明显上调（P〈0.05）。结论通过抑制miRNA-21的表达可抑制RBE细胞的增殖,促进RBE细胞的凋亡,miRNA-21可通过靶向抑制maspin的表达发挥生物学作用。