人原发性肝癌病人多药耐药基因表达及意义

目的 探讨原发性肝癌（ＰＨＣ）癌组织及癌周组织ｍｄｒｌ表达与多药耐药性的关系。方法 采用敏感性高,特异性强的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,定量检测４８例ＰＨＣ病人癌组织及癌周组织中ｍｄｒｌ表达水平。其中１８例病人要前行肝动脉化疗栓塞（ＴＡＣＥ）治疗。结果 ＰＨＣ癌组织中ｍｄｒｌ阳性率为６３．３％,远高于癌周组织的２６．７％（Ｐ〈０．０１）;术前行ＴＡＣＥ组癌组织中ｍｄｒｌ阳性率为８８．９％,远比未化疗组６３．３％高。结论 ＰＨＣ存在内源性ＭＤＲ和获得性ＭＤＲ,ｍｄｒｌ高表达是ＰＨＣ病人ＭＤＲ产生的重要机制之一。     

肝癌多药耐药基因表达的临床研究

目的　探讨肝癌多药耐药基因 (MDR1)mRNA表达与癌分化、临床病理学特征、化疗效果、转移复发及预后的关系。方法　收集肝癌组织及癌旁 2cm肝组织 4 7例 ,正常肝组织 12例 ,采用荧光定量RT PCR方法检测MDR1mRNA的表达。结果　MDR1mRNA表达强度在 1 4× 10 3 ～3 6× 10 6copy/ μgRNA ,癌组织阳性率为 72 % ,明显高于癌旁肝组织 (5 1% )和正常肝组织 (4 2 % )(P <0 0 5 )。癌组织MDR1mRNA表达与癌灶直径、有无转移、Okuda分期、癌结节数目呈正相关 ,与复发时间、有无包膜及患者的生存期呈负相关关系。回归分析表明MDR1mRNA主要与癌灶转移潜能有关 (B =1 82 3,OR =6 187,P <0 0 5 )。MDR1mRNA阳性组化疗与疗效间无相关性 ,而MDR1mRNA阴性组术后局部化疗能明显改善肝癌的疗效 (r =0 773,P <0 0 5 ) ,其生存曲线明显高于MDR1mRNA阳性组。结论　MDR1mRNA基因表达与肝癌原发性耐药及癌灶转移潜能有关。     

多药耐药基因MDR1在原发性肝癌组织中表达的意义

肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性的原因有几种，其中最主要的是多药耐药基因MDR1。应用免疫组化方法测定30例原发性肝癌（PHC）癌组织和癌周组织中MDR1的表达产物Pgp（P-gly-coprotein，PgP），结果显示，PHC癌组织中MDR1基因表达阳性率（60．0％）远较癌周组织高（23．3％）。化疗后肿瘤组织MDR1阳性率（88．9％）较未化疗瘤的癌组织（47．6％）高。结合临床资料分析，MDR1基因的过度表达在我国PHC的内在性和获得性药物耐受产生中起着一定的作用。关键词:##4多药耐药基因;;原发性肝癌     

多重逆转录-聚合酶链反应方法半定量检测多药耐药基因mRNA表达

目的：建立多重逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测肝癌多药耐药（MDR）基因mRNA表达。方法：在对二重RT-PCR扩增5种MDR基因mRNA动力学观察及建立RT-PCR标准曲线的基础上，建立六重RT-PCR方法。结果：六重RT-PCR与单重或二重RT-PCR扩增体系在特异性和扩增效率等方面相同，实验重复性较好。结论：该方法对于检测肝癌组织和肝癌细胞MDR基因mRNA表达具有特异、灵敏、简便、快速（6h）、所需标本量小（5mg）及半定量等优点，能快速同时分析大量样本，具有临床应用前景。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因在肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录ＰＣＲ、流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用ＭＴＴ法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１、ＭＲＰ、ＬＲＰ、ＧＳＴＰ１和ＴｏｐｏⅡα基因。ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰ ｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍＲＮＡ≥０．８、ＧＳＴＰ１ ｍＲＮＡ≥０．７Ｔ ＴｏｐｏⅡαｍＲＮＡ≤０．４为耐药联合诊断标准,符合率为９８．００％。结论 多重ＭＤＲ是肝癌耐药的主要形式。用逆转录ＰＣＲ方法联合检测５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

多药耐药基因mdr1在肝细胞性肝癌中的表达及其意义

目的　探讨肝细胞性肝癌 (HCC)中多药耐药基因mdr1的表达及其与肝癌临床病理特征、肿瘤多药耐药和患者预后的关系。方法　用免疫组化染色方法检测 5 6例HCC细胞中mdr1基因的表达 ,并结合临床病理指标进行统计分析。结果　 5 6例HCC病例中mdr1基因的表达 :癌旁组织中 19例阳性 (3 3 .9% ) ,癌组织中 3 0例阳性 (5 3 .6% ) ,两者比较差异有显著性 (χ2 =4.3 9,P<0 .0 5 )。 48例初治患者中 2 2例阳性 (4 5 .8% ) ,8例复发者均为阳性 (10 0 % )。按肿瘤大小、数目、包膜有无、癌栓有无、分化程度、HBsAg等分组 ,其间mdr1表达差异无统计学意义。mdr1表达阳性组与阴性组 1、2、3年生存率比较 ,其差异无统计学意义。结论　mdr1在HCC中表达阳性率为 5 3 .6% ,其表达与肿瘤大小、数目、包膜有无、癌栓有无、分化程度、HBsAg和肝硬变情况无关 ;HCC具有原发性耐药。     

复发及多源发大肠癌多药耐药基因检测

大肠癌是目前死亡率较高的恶性肿瘤，肿瘤耐药直接影响其化疗效果及复发率。多药耐药基因(Mdr-1)在肿瘤多药耐药中的作用已由基因转染实验所证明。本研究之目的为研究Mdr-1与复发及多源发大肠癌的关系，采用逆转录．多聚酶链式反应(RT-PCR)技术对81例复发或多源发大肠癌Mdr-1基因进行了检测，并结合疗结果，现报告如下：     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ,ＧＳＴｐ１和ＴｏｐｏⅡα基因,ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍｒｎＡ     

RNA干扰逆转肝癌多药耐药

目的 研究siRNA对肝癌耐药细胞系HepG2/mrp1中多药耐药相关蛋白基因(multidrug-resistant-associated 1,mrp1)及其蛋白产物MRP1表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果.方法 设计合成针对mrp1启动子区域的RNA干扰小片段,转染肝癌耐药细胞HepG2/mrp1.通过RT-PCR和流式细胞仪,在mRNA和蛋白质水平评估RNA干扰对mrp1表达的影响;MTT法检测RNA干扰逆转HepG2/mrp1细胞多药耐药性的变化,按照实验组和亲本组细胞的半数抑制剂量(ICso)评估RNA干扰对细胞耐药倍数的改变.结果 在耐药细胞HepG2/mrp1中,RNA干扰明显抑制了 mrp1 mRNA和蛋白产物MRP1的表达水平,在相同浓度药物作用下实验组细胞耐药性显著下降.结论 我们设计的siRNA对肝癌耐药细胞HepG2/mrp1中的mrp1基因有显著的抑制作用,具有良好的逆转多药耐药性的效果.

Abstract：

Objective To investigate the suppression of mrp1 and MRP1 induced by small interfering RNA and the restoration of sensitivity to chemotherapeutic drugs in the multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. Methods mrp1-targeted small interfering RNA duplexes were designed and composed and introduced into multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. The suppression of mrp1 mRNA and its gene product MRP1 was examined by RT-PCR and flow cytometry (FCM), respectively. MTT assay was performed to measure the reverse effect of small interfering RNA based on the results of ICs0. Results The overexpression of mrp1 mRNA and MRP1 was effectively suppressed by small interfering RNAs. The level of mrp1 mRNA in the transfected HepG2/mrp1 cells was reduced to (86.36±2.76)% and MRP1 to (89.38±3.76)%compared with those of the controls. The resistance to ADR was reversed five-fold, which indicated the restoration of sensitivity to drugs. Conclusion Small interfering RNA can inhibit mrp1 expression effectively and reverse the multidrug resistance mediated by MRP1.     

多药耐药基因在原发性肝癌的表达及其临床意义

目的 探讨多药耐药基因（MDR）在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法 取肝细胞癌标本64例，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法半定量检测肝癌多种多药耐药基因的基因表达情况，分析其临床意义。结果 （1）各多药耐药基因的表达率高，各耐药基因的表达率差异无统计学意义。（2）各多药耐药基因的表达量差异无统计学意义。（3）MDRl、多药耐药相关蛋白（MRP）、谷胱甘肽S转移酶（GST）-π和肺耐药蛋白（LRP）的mRNA表达量有随分级而增高的趋势；DNA拓扑异构酶（TOPOⅡ）的mRNA表达量有随分级而下降的趋势。（4）肝癌MDR基因mRNA表达量与肿瘤大小、有无转移、有无包膜和结节数目有关，与AFP水平、肝硬化情况、肝功能状况无关。（5）在有效组中MDR1、MRP、GST-Ⅱ LRP mRNA的表达量低于无效组；TOPOⅡ mRNA的表达量有效组高于无效组，差异无统计学意义。结论 在肝癌多药耐药基因mRNA的表达率高；在肝癌多药耐药的基因mRNA的表达与肿瘤大小、有无转移、结节数目、有无包膜相关，与化疗的疗效相关。     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞多药耐药的影响

目的观察乙肝病毒（HBV）X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响，探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3／HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株，噻唑蓝（MTr）法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率，An—nexin／PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用后的凋亡指数（AJ），逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下，转染了peDNA3／HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组（P〈0．05）。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是（9．83±1．50）％VS（17．79±1．70）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞，转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190％、68％、95％；而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64．3％、87．5％和90．8％。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达，从而促进肝癌多药耐药性的产生。     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

人肝癌HepG2多药耐药细胞系的部分生物学性状研究

目的　研究人肝癌多药耐药 (MDR)的机制 ,建立HepG2多药耐药细胞系并研究其部分生物学性状。方法　应用HepG2细胞系 ,通过培养液中阿霉素 (ADM )的浓度梯度增加法 ,得到肝癌多药耐药株HepG2 /ADM。Westernblot增强化学发光法 (ECL)检测细胞株表面多药耐药基因(MDR1)的表达产物P 糖蛋白 (P 170 )、多药耐药相关蛋白 (MRP)及肺耐药蛋白 (LRP)的表达水平。结果　耐药细胞的倍增时间延长 2 .0 5倍。该耐药模型的P 170表达水平较亲本细胞升高3 .90倍 (P <0 .0 1) ,但MRP及LRP无明显变化。结论　HepG2 /ADM同其亲本细胞相比 ,其耐药性、倍增时间有明显改变 ;多药耐药性主要与MDR1的高表达有关。     

9种耐药相关蛋白在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞癌（HCC）及癌旁肝组织中9种多药耐药（MDR）相关蛋白表达的差异，并结合肿瘤的病理学特征进行分析。方法未经化疗的98例肝癌及其癌旁肝组织构建组织芯片，应用免疫组织化学方法检测P-gp、MRP3、LRP、GST-π、Cycfin D1、Cycfin E、p16^INK4a、p21^WAF1和p27^Kip1共9种耐药相关蛋白的表达水平。结果除Cyclin D1外，其余8种耐药相关蛋白在HCC与癌旁肝组织中的表达差异均有统计学意义（P〈0．01）；CyclinD1在伴门静脉癌栓HCC中的表达显著高于不伴癌栓组（P〈0．01）。结论HCC的天然耐药现象具有复杂性和多样性，CycfinD1的高表达可能与HCC的转移和预后有关。     

耐药相关蛋白在肾癌中的表达

为探讨耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在肾癌中表达的意义，应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测２０例肾癌组织中ＭＲＰ表达。结果：ＭＲＰ阳性表达率为６０％，在胞浆和胞膜上均见表达，但以胞浆中（粗颗粒状）更显著。晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ期）阳性表达率为８９％，明显高于早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ期）的３６％，Ｐ＜００５。结果认为ＭＲＰ与肾癌浸润转移相关，并可能是其内源性耐药的重要机制之一     

人胆囊癌细胞系GBC-SD的多药耐药机制

目的 探讨人胆囊癌细胞系GBG-SD耐药性产生的机制,建立先天性耐药的人胆囊癌细胞模型。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测GBC-SD细胞多药耐药相关蛋白(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)基因扩增;免疫细胞化学染色检测该细胞系P-糖蛋白(P-gp)、MRP和LRP蛋白表达;流式细胞术测定P-gp、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测该细胞对8种抗癌药物的敏感性。结果 人胆囊癌GBC-SD细胞中MDR1、MRP和L,RP基因呈阳性扩增,P-gp、MRP、LRP蛋白表达阳性;GST-π和TOPOⅡ的表达水平与对照组细胞差异无显著性。四唑盐比色结果显示,GBC-SD细胞对8种抗肿瘤药物均有程度不同的耐受性。耐药倍数从5．3倍到42倍不等。结论 人胆囊癌细胞系GBC-SD是一株先天性耐药的恶性肿瘤细胞系,其耐药性的产生与MDR1、MRP、LRP基因扩增有关。     

胃癌细胞多药耐药相关蛋白质筛选鉴定的蛋白质组学研究

目的 在胃癌细胞株SGC7901及稳定的耐药细胞株SGC7901/VCR中寻找与胃癌多药耐药(MDR)直接相关的蛋白质,观察其功能.方法 胃癌细胞株SGC7901和稳定的耐药细胞株SGC7901/VCR培养后提取总蛋白,采用蛋白质组学技术(双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱鉴定)筛选并鉴定差异表达的蛋白质,并应用蛋白印迹试验法对鉴定出的部分蛋白质在胃癌细胞株中的表达进行验证.结果 在两种细胞株中找到表达差异明显的蛋白质点9个,经质谱分析,7种蛋白质得到鉴定,为S60核糖体蛋白L23、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1、锌指蛋白394、角蛋白Ⅰ型细胞骨架9、核糖核酸3'-端磷酸化酶1、matrin型锌指蛋白2、Sideroflexin-1.这些蛋白质与胃癌MDR直接相关.蛋白印迹试验法检测部分蛋白质在胃癌细胞株中的表达,与蛋白质组学所得结果一致.结论 胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR蛋白质表达存在差异.

Abstract：

Objective To investigate multidrug resistance related proteins in human gastric carci noma cell lines SGC7901 and SGC7901/VCR by comparative proteomics.Methods After culture,the holoproteins of human gastric carcinoma cell lines SGC7901 and GC7901/VCR were extracted,and then measured by two-dimensional gel electrophoresis and matrix assisted laser desorption/ionization time-offlight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS).Some proteins obtained through proteomics were tested by Western blotting in the cell lines.Results There were different proteins in these 2 human gastric carcinoma cell lines.Nine different protein spots were found in these 2 gastric carcinoma cell lines,and 7 spots were identified by MALDI-TOF-MS,and these proteins were 60S ribosomal protein L23 ( RL23),voltagedependent anion-selective channel protein-1 (VDAC1),zinc finger protein (ZNF) 394,keratin,type Ⅰcytoskeletal 9 ( KIC9),RNA 3' -terminal phosphate cyclase 1 ( RTC1 ),zinc finger matrin-type protein 2,Sideroflexin-1.These proteins had a direct relationship with multidrug resistance in gastric carcinoma.Results of Western blotting about protein expression were in consonance with those of proteomics.Conclusion Different proteins were found in human gastric carcinoma cell lines SGC7901 and SGC7901/VCR.