急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

背景：大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关。 目的：观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达。 方法：急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例。并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组。采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达。 结果与结论：急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群 (P < 0.05);急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群 (P < 0.05),完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义。说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关。     

重症肌无力患者CD40配体mRNA表达的研究

目前一般认为 ,重症肌无力 (MG)是T细胞依赖的 ,抗乙酰胆碱受体抗体 (AchRab)介导的器官特异的自身免疫病。其发生与T细胞的异常活化有关。T细胞传递共刺激信号以活化B细胞 ,诱导B细胞产生病理性抗体[1 ] ,共刺激因子CD4 0 /CD4 0L参与活化过程中信号的传导[2 ,3] 。本研究拟检测MG患者急性期、非急性期外周血单个核细胞 (PBMC)CD4 0LmRNA的表达 ,以了解CD4 0L在MG发病中的作用。1　资料1 1　一般资料 :MG患者 2 5例 ,均为 2 0 0 0年 3月至 2 0 0 2年 3月在广西医科大学一附院神经内科病房及门诊就诊的患者 ,根据病史、体征、…     

CpG寡脱氧核苷酸对外周血单个核细胞功能的影响：1型糖尿病患者与健康者对照

背景：有研究表明CpG寡脱氧核苷酸可增强外周血单个核细胞的功能,但对1型糖尿病患者的影响至今少有报道。 目的：观察CpG寡脱氧核苷酸对1型糖尿患者患者与健康志愿者外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12,10表达的影响。 方法：将1型糖尿病患者与健康志愿者的外周血单个核细胞根据刺激物不同分为空白对照组、CpG寡脱氧核苷酸组。用RT-PCR法检测外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12 mRNA和白细胞介素10 mRNA的表达。 结果与结论：1型糖尿患者γ干扰素和白细胞介素12 mRNA的表达明显低于健康志愿者(P < 0.01)。1型糖尿患者与健康志愿者外周血单个核细胞经CpG寡脱氧核苷酸组刺激后,γ干扰素和白细胞介素12 mRNA的表达增高(P < 0.01),白细胞介素10 mRNA的表达无差异(P > 0.05)。结果提示,CpG寡脱氧核苷酸可促进1型糖尿患者外周血单个核细胞表达γ干扰素和白细胞介素12。     

CD4+CD25+ T细胞的扩增及其功能分析*☆

背景：CD4+CD25+ T细胞增殖能力低,且在人外周血中仅占单个核细胞的4%左右。若能在体外高效扩增CD4+CD25+ T细胞,并保持其免疫调节特性,将会对临床移植产生积极的影响。 目的：观察C57BL/6小鼠来源的CD4+CD25+ T细胞体外增殖情况及其扩增后的功能变化。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-10/2008-05在南方医科大学珠江医院血液科完成。 材料：SPF级C57BL/6及BALB/C雄性小鼠购自南方医科大学动物所。小鼠白血病细胞EL9611由珠江医院血液科惠赠。 方法：利用免疫磁珠法分选小鼠CD4+CD25+ T细胞;以抗鼠 CD3ε单抗、抗鼠CD28单抗、鼠重组白细胞介素2及辐射过的BALB/C小鼠脾细胞为共刺激因子,通过实时定量RT-PCR检测扩增后CD4+CD25+ T细胞FoxP3基因mRNA表达变化,以确定增殖效率;3H-TdR掺入法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的影响;LDH释放法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞杀伤小鼠白血病细胞EL9611的影响,以CD4+CD25-T细胞为效应细胞,以EL9611细胞为靶细胞。 结果：经免疫磁珠分选可获得高纯度及较强活性的CD4+CD25+ T细胞。扩增后CD4+CD25+T细胞FoxP3基因mRNA的表达平均为扩增前的5.46倍,最高可达14.39倍。扩增后CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,且随着CD4+CD25+T细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也逐渐增强,当两者比例为1:1时抑制率最大,达62.05%。与单纯CD4+CD25- T细胞对EL9611细胞杀伤率比较,效靶比为10:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率无明显变化（t=2.199,P > 0.05）;效靶比为5:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率则明显降低（t=5.839,P < 0.05）。 结论：单抗加异源性抗原能有效扩增CD4+CD25+T细胞;扩增后的CD4+CD25+T细胞比新鲜分离的CD4+CD25+T细胞能更有效地抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,其对CD4+CD25-T细胞杀伤白血病细胞的作用则取决于其与CD4+CD25-T细胞的相对比例。     

CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应

背景：CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。 目的：拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。 设计、时间及地点：观察对比实验,于2004-04/2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。 材料：取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。 方法：制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养。分别于24,48,72,96 h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96 h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92 h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。 主要观察指标：单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平。 结果：与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高（> 98%）,达摄取峰值时间更早。共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组（P < 0.05）。 结论：CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应。     

重症肌无力患者CD40配体表达的信号传导途径初步探讨

目的研究重症肌无力(MG)患者CD40配体(CD40L)的表达,探讨MG患者CD40L表达的信号传导途径.方法研究对象为急性期MG患者13例.分离血中单个核细胞,分组用刺激剂刺激进行单个核细胞培养(1)纯培养组不加任何刺激剂进行细胞培养;(2)PMA组用PMA和A23187刺激;(3)PHA组用PHA刺激;(4)BLM组加PKC抑制剂BLM后再加PHA刺激培养.培养后用流式细胞仪检测CD40L阳性细胞率及RT-PCR法检测单个核细胞CD40L mRNA表达.结果MG急性期BLM组CD40L阳性细胞率和CD40L mRNA与纯培养组差异无显著性(P＞0.05),而显著低于PMA组和PHA组(P＜0.01).结论在MG中,CD40L的表达可能依赖于PKC活性介导的T细胞活化途径.     

阿托伐他汀诱导BMDCs源性外泌体对EAMG模型大鼠临床症状的缓解及与自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的关系

目的 分析阿托伐他汀诱导骨髓来源树突状细胞(BMDCs)源性外泌体对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠临床症状的缓解及与自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的关系。方法 分别采用二甲基亚砜、阿托伐他汀与BMDCs进行共培养,分别设置对照组(二甲基亚砜与BMDCs共培养)和实验组(阿托伐他汀与BMDCs共培养),通过流式细胞术检测2组BMDCs表面共刺激分子的表达水平; 通过梯度离心法提取2组BMDCs源性外泌体,将其注射于EAMG大鼠体内,实验组给予阿托伐他汀,对照组未进行任何治疗,记录2组大鼠临床症状评分; 采用流式细胞术测定2组大鼠淋巴结单个核细胞中自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的比例。结果 实验组BMDCs表面共刺激分子CD80和CD86表达水平较对照组显著下降(P<0.01),而2组主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子表达水平无明显差异(P>0.05); 实验组免疫2、4、6周后临床症状评分较对照组均明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组大鼠淋巴结单个核细胞中自然杀伤细胞的比例明显升高(P<0.01),而2组大鼠淋巴结单个核细胞中自然杀伤T细胞的比例无明显差异(P>0.05)。结论 阿托伐他汀诱导BMDCs分泌源性外泌体可有效减轻EAMG大鼠临床症状,其作用机制可能与提高大鼠淋巴结单个核细胞中自然杀伤细胞的比例有相关     

肝移植后他克莫司血药浓度对外周血单个核细胞内HBV DNA的影响

背景：肝移植后他克莫司等免疫抑制剂的长期应用导致机体细胞免疫功能降低,并有可能影响机体对乙肝病毒的清除。 目的：分析乙肝相关肝移植患者后不同浓度他克莫司对外周血单个核细胞中的HBV DNA含量的影响。 方法：纳入乙肝相关终末期肝病肝移植受者23例,根据移植后12周清晨空腹他克莫司血药浓度,分为高浓度组(≥ 10 μg/L) 9例和低浓度组(< 10 μg/L)14例,同时用荧光标记单克隆抗体结合流式细胞技术检测外周血T细胞亚群的百分比,用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞内的HBV DNA。 结果与结论：用多元线性回归分析外周血单个核细胞内的HBV DNA含量与CD8+CD152+呈正相关,与CD8+CD28+呈负相关。高血药浓度他克莫司的患者外周血单个核细胞内的HBV DNA高于低浓度组,其改变与反映细胞免疫功能的指标CD8+CD152+和CD8+CD28+的变化有关。     

γ-干扰素诱导人外周血CD4~+CD25~-T细胞转化为CD4~+CD25~+调节性T细胞的可行性研究

目的研究γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)将人外周血CD4~+CD25~- T细胞诱导为CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Tregs)的可行性。方法采用免疫磁珠法分离19名健康志愿者外周血单个核细胞中的CD4~+CD25~- T细胞,在抗CD3和抗CD28抗体存在条件下给予不同水平IFN-γ刺激72 h,以流式细胞仪检测CD4~+CD25~+T细胞比例并以real time-PCR法检测其特异性表型标志FoxP3表达水平。将诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞与自体CD4~+CD25~-T细胞共培养检测诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞抑制CD4~+CD25~-T细胞增殖的能力。结果IFN-γ刺激后CD4~+CD25~+T细胞比例上调且其FoxP3表达较诱导前明显增高,当IFN-γ水平为20、40 ng/mL时,CD4~+CD25~+T细胞上调比例最高;40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4~+CD25~+T细胞FoxP3表达最高,但不及CD4~+CD25~+Tregs。IFN-γ诱导所得CD4~+CD25~+T细胞可抑制自体CD4~+CD25~-T细胞增殖,40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4~+CD25~+T细胞抑制能力与CD4~+CD25~+Tregs相当。结论 IFN-γ可诱导CD4~+CD25~-T细胞转化为CD4~+CD25~+T细胞,当IFN-γ水平为40 ng/mL时诱导率最高且诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞表型和功能与CD4~+CD25~+Tregs相当。     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内CD4 、CD8、CD28和CD152表达的影响

目的 探讨左旋咪唑（Levamisole,LMS）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152表达的影响及其意义。方法 采用临床症状评分、病理学检查和流式细胞术，观察LMS处理和非处理条件下豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE临床表现、病理改变及脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152分子表达水平。结果 LMS同时给药促发组和预处理组EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28表达水平明显高于非LMS处理的EAE模型组（P〈0．01），病理变化更加明显。而CD8、CD152表达水平差异无统计学意义。结论 LMS可促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28的表达，提示LMS上调CD4、CD28的表达可能与LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病有关。     

CD5 B cells and CD48 T cells in neuroimmunological diseases

Using 2- and 3-colour FACS analysis we found increased levels of fetal-type CD5+ B cells and CD4-8- T cells in cerebrospinal fluid (CSF) of patients with multiple sclerosis (MS) and aseptic meningitis (AM) compared to control probands with muscular tension headache (TH). Similar differences were found for CD5+ B cells in peripheral blood, but at lower levels. CD4-8- T cells in blood exceeded those in CSF in all patient groups, with the exception of relapsing remitting MS, revealing the highest values in AM. There was a positive correlation between CD4-8- T cells and T cell receptor (TCR) gamma delta bearing T cells in blood and CSF. The double-negative T cells exceeded the TCR gamma delta T cells by about 1%. A positive correlation between CD5+ B cells and CD4-8- T cell level in CSF was found in MS and AM, but not in TH, nor in blood of any patient group. HLA-DR expression was lower in CD5+ B cells than in CD5- B cells. We conclude that fetal-type lymphocytes are enriched in CSF compartment of patients with inflammatory diseases of the central nervous system, irrespective of autoimmune mechanisms involved, but the function of CD5+ B cells is mainly to produce the autoantibodies.     

胶质瘤CD133阳性和阴性U87细胞蛋白质组学分析

目的 通过对人脑胶质瘤U87细胞中CD133+和CD133-细胞进行配对研究,寻找差异性蛋白.方法 通过磁珠选择分离U87中CD133+和CD133-细胞,利用双向凝胶电泳(2D - PAGE)检测上述细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点.通过质谱( MALDI -TOF - MS)对蛋白点进行鉴定,建立两种细胞差异性蛋白文库.结果 CD133+和CD133-细胞配对比较,蛋白质组学检测结果中,差异有统计学意义(P＜0.05)的2D - PAGE蛋白点共有73个,＞1.5倍差异蛋白点有46个,＞2倍差异蛋白点有27个,＞3倍差异蛋白点有8个.在CD133+ U87细胞中,有10个蛋白表达增多(上调),63个蛋白表达下降(下调).共得到44张高质量质谱肽质量指纹图谱(PMF),鉴定了35种蛋白质.结论 CD133+和CD133-细胞是同一细胞株中两种不同的细胞,蛋白方面存在的差异,将成为进一步研究它们相互关系的重要靶点.     

High cell surface expression of CD4 allows distinction of CD4(+)CD25(+) antigen-specific effector T cells from CD4(+)CD25(+) regulatory T cells in murine experimental autoimmune encephalomyelitis

Analysis of T regulatory cells (Treg) and T effector cells (Teff) in experimental autoimmune encephalomyelitis is complicated by the fact that both cell types express CD4 and CD25. We demonstrate that encephalitogenic T cells, following antigen recognition, up-regulate cell surface expression of CD4. The CD4(high) sub-population contains all of the antigen response as shown by proliferation and cytokine secretion, and only these cells are capable of transferring EAE to naive animals. On the other hand, a FACS separable CD25(+) sub-population of cells displayed consistent levels of CD4 prior to and after antigen stimulation. These cells displayed characteristics of Treg, such as expressing high levels of the Foxp3 gene and the ability to suppress mitogenic T cell responses.     

CD4+CD25+ regulatory T cells and CD1-restricted NKT cells do not mediate facial motoneuron survival after axotomy

CD4+ T cells rescue facial motoneurons (FMN) from axotomy-induced cell death. The objective of this study is to determine if the CD4+ T regulatory subsets, CD4+CD25+ T or CD1d-restricted NKT cells are critical for FMN survival after facial nerve axotomy. Surviving FMN within facial motor nuclei from axotomized and control sides 4 weeks after axotomy were counted to determine percent FMN survival. Data generated by applying this paradigm to recombination activating gene-2-deficient mice reconstituted with CD4+ T cells depleted of CD4+CD25+ T cells and to CD1-/- mice, deficient in CD1d-restricted NKT cells, suggest that neither regulatory CD4+ T subset is critical for FMN survival.     

细胞因子诱导杀伤细胞/自然杀伤细胞培养过程中CD16及CD11a的表达变化

背景：由于细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上表达的CD16和CD11a均与其介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和直接接触杀伤的抗肿瘤效应密切相关,因此了解两种细胞扩增过程中这两种分子表达的强弱,对根据免疫效应细胞的最终用途决定两种细胞的最佳收获时机具有重要意义。 目的: 了解细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞在培养过程中的CD16和CD11a表达的变化规律。 设计、时间及地点：细胞移植免疫学动态观察,于2006-09/2008-03在中山大学附属第二医院完成。 材料：脐血来自本院健康足月妊娠产妇。 方法：采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞,接种于含体积分数为0.15胎牛血清的IMDM,双抗生素青、链霉素各1×105 U/L 24孔培养板中,在培养体系中加入白细胞介素2、白细胞介素7、白细胞介素15、干细胞因子及FLT3L制备细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞,每隔3天半量换液及全量补充上述细胞因子。 主要观察指标：流式细胞仪检测CD3+CD56+细胞因子诱导杀伤细胞以及CD3-CD56+自然杀伤细胞在4周培养过程中CD16和CD11a表达的变化。 结果: CD16在细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上的表达随着培养时间的延长逐渐增加,在两类细胞上均在培养的第4周达到最高峰,分别为（55.99±3.90）%和（7.86±1.66）%,但CD16在自然杀伤细胞上表达比例较低,整个培养过程中自然杀伤细胞上CD16的均数表达没有超过8%。CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞培养的第3周,自然杀伤细胞培养的第2 周达到最高峰,分别为（49.32±6.32）%和（82.31±11.33）%,之后逐渐出现下降,到培养第4周几乎消失。 结论:CD16和CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞上的表达随培养时间呈动态变化,使用单克隆抗体联合细胞因子诱导杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用效应时,细胞的收获期可在细胞培养的第4周,利用细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞的直接杀伤效应进行细胞过继免疫,那么收获细胞的时间以细胞培养的第3周为宜。     

The activation of memory CD4(+) T cells and CD8(+) T cells in patients with multiple sclerosis

To reevaluate whether an association exists between the clinical course of multiple sclerosis (MS) and the activation of memory T cells, we investigated the phenotype of T cells in peripheral blood and cerebrospinal fluid (CSF) of patients with MS using five-color flow cytometry. A cross-sectional study with 39 relapsing-remitting MS patients demonstrated that the percentage of CD25(+)CD45RO(+)CD4(+)CD3(+) cells was significantly increased in peripheral blood as well as in CSF of active MS patients compared with inactive MS patients. A longitudinal study with 11 relapsing-remitting MS patients also showed a higher percentage of CD25(+)CD45RO(+)CD4(+)CD3(+) cells in peripheral blood at the phase of exacerbation than during remission. On the other hand, regardless of the disease activity, the percentage of CD25(+)CD45RO(+)CD8(+)CD3(+) cells in peripheral blood was significantly higher in patients with MS than in healthy control subjects. A lower percentage of CD25(+)CD45RO(+)CD8(+)CD3(+) cells in CSF was observed in active MS patients compared with inactive MS patients. These results suggest that the activation of memory CD4(+) T cells is associated with the exacerbation of MS and activation of memory CD8(+) T cells reflects systemic immunological dysregulation in MS patients. Transient as well as continuous activation of T cells by recall antigens may be involved in the disease course of MS.     

CD16+CD57- natural killer cells in multifocal motor neuropathy

We analyzed the CD16+CD57- lymphocyte subset, which is considered to have strong natural killer (NK) cell activity, in peripheral blood from patients with chronic immune-mediated neuropathies and patients with other neurological diseases. We found that the ratio of CD16+CD57- NK cells to total lymphocytes was increased in 4 of 6 patients with multifocal motor neuropathy (MMN) with persistent conduction block. Since the CD16 molecule is an Fc receptor for immunoglobulin G (IgG), high-dose intravenous immunoglobulin (IVIg) may interfere with CD16+CD57- NK cells via Fc receptor blockade. In addition, cyclophosphamide (Cy) is often used to suppress NK cells. Therefore, our findings may partly account for the effectiveness of IVIg or Cy, which is the current treatment of choice for MMN.     

CD8(+) T cells from Theiler's virus-resistant BALB/cByJ mice downregulate pathogenic virus-specific CD4(+) T cells

Theiler's murine encephalomyelitis virus (TMEV) is a picornavirus which induces an immune-mediated demyelinating disease in susceptible strains of mice and serves as a relevant animal model for multiple sclerosis. Treatment with low dose irradiation prior to infection with the BeAn strain of TMEV renders the genetically resistant BALB/cByJ (C/cByJ) mice susceptible to disease. Previous studies have shown that disease resistance in the C/cByJ is mediated by a 'regulatory' CD8(+) T cell population, which does not appear to function via a cytolytic mechanism. We show here that TMEV-specific CD4(+) T cell blasts transferred into susceptible, irradiated C/cByJ accelerate clinical disease and enhance TMEV-specific DTH and proliferation in these animals. Significantly, CD8(+) cells from infected, resistant C/cByJ mice specifically downregulate the in vivo disease potentiation and diminish virus specific DTH, and proliferative and pro-inflammatory cytokine responses (IFNgamma and IL-2) in recipients of TMEV-specific CD4(+) T cell blasts. These results indicate that TMEV infection of resistant C/cByJ mice induces a radiosensitive population of regulatory CD8(+) T cells which actively downregulate inherent Th1 responses which have disease initiating potential.