来曲唑和克罗米酚对小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:探讨来曲唑和克罗米酚对小鼠着床期胞饮泡和白血病抑制因子(LIF)表达的影响。方法:将30只小鼠随机分为3组:来曲唑(LE)组(n=10)、克罗米酚(CC)组(n=10)及对照组(n=10)。促排卵后妊娠d4．5取小鼠子宫,采用扫描电镜观察3组子宫内膜胞饮突的变化以及免疫组化技术检测子宫内膜LIF的表达强弱。结果:在3组妊娠天数一致的情况下,LE组中无论是子宫内膜胞饮突,还是LIF的表达,均与对照组相似。而CC组的表达显著弱于前二组。结论:与CC促排卵相比,LE不影响小鼠着床期子宫内膜超微结构和相关基因LIF的表达,然而CC组子宫的容受性呈现一定的抑制性。     

经后增殖方和促黄体方能诱导超促排卵小鼠子宫内膜中整合素β_3的表达

目的:观察益气血补肝肾方对控制性超促排卵小鼠子宫内膜组织中整合素β3表达的影响。方法:将实验小鼠随机分为COH模型组、中药治疗组和对照组。进入实验后,中药治疗组每日给予中药灌胃,其余小鼠以等量生理盐水代替。COH模型组和中药治疗组给予GnRHa降调节,PMSG+hCG促排。每组分别于孕第1日(pd1)、pd2、pd4、pd5、pd6处死10只动物,取子宫内膜采用实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹的方法分别在mRNA和蛋白水平定量检测子宫内膜整合素β3表达情况。于妊娠第8日(pd 8)剖腹取各组小鼠子宫(每组10只),观察胚泡着床情况。结果:整合素β3在各组小鼠子宫内膜中呈周期性的表达,从孕第1日(pd 1)开始整合素β3表达逐渐增强,pd 4显著增加,pd 6表达开始减弱。与COH模型组相比,中药治疗组小鼠子宫内膜中整合素β3表达增强,两者相比有统计学意义(P<0.05);整合素β3在中药治疗组和对照组中的表达水平相近,两者相比无统计学意义(P>0.05)。COH模型组pd 8的平均胚胎着床数与中药治疗组和对照组相比,明显减少(P<0.05),而中药治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:益气血补肝肾方可诱导小鼠子宫内膜中整合素β3的表达,并提高超促排卵小鼠的胚胎着床率,提示该方可能具有改善子宫内膜容受性的作用。     

GnRHa对改善他莫西芬诱发子宫腺肌病小鼠模型内膜容受性的作用

目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对腺肌病模型小鼠种植窗期内膜容受性的影响。方法:新生ICR小鼠滴喂他莫西芬建立子宫腺肌病模型,随机分为GnRHa降调的模型鼠组(A组)、模型对照鼠组(B组),并取同龄正常小鼠作为对照组(C组),每组8只,于100~115日龄处死,HE染色检测小鼠子宫病理变化;免疫组织化学CD31染色计算小鼠子宫微血管密度;免疫组织化学法检测种植窗期子宫内膜LIF表达及扫描电镜下观察胞饮突发育情况。结果:①口服他莫西芬法建立ICR小鼠子宫腺肌病模型造模率为100%,B组小鼠子宫肌层微血管密度高于A、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。②种植窗期子宫内膜LIF蛋白水平A组和C组明显高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);A、C组间无统计学差异(P>0.05)。③B组可见较多退化的胞饮突,分布稀疏,呈局灶性分布;A组的胞饮突较B组丰富但大小略不均;C组胞饮突分布较丰富且发育完全。结论:新生小鼠口服他莫西芬法可高效建立子宫腺肌病模型,GnRHa降调节能改善子宫腺肌病小鼠子宫内膜中LIF表达及胞饮突发育,从而提高子宫内膜容受性。     

自然排卵、促排卵和超促排卵状态下小鼠卵巢组织中生长分化因子-9(GDF-9)的表达

目的:观察自然周期排卵、促排卵与控制性超促排卵(COH)状态下小鼠卵巢生长分化因子-9(growth differentiation factor,GDF-9)表达水平的变化情况。方法:成年雌性小鼠随机分为3组每组10只,分别为自然排卵组(对照组)、孕马血清(PMSG)促排卵组(PMSG组)、控制性超促排卵组(COH组),各组小鼠取排卵期卵巢组织,采用免疫组织化学方法检测GDF-9的表达与定位,并分别采用Western blottting和实时荧光定量PCR法,定量检测GDF-9蛋白与mRNA的含量。结果:各组小鼠卵母细胞与颗粒细胞中均检测到GDF-9的表达,PMSG组与COH组GDF-9蛋白与mRNA的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),PMSG组的表达也明显弱于COH组(P<0.05)。结论:促排卵可促进小鼠卵巢GDF-9的表达,但COH降低促排卵小鼠卵巢GDF-9的表达。     

控制性卵巢刺激中黄体期添加雌激素对小鼠子宫内膜组织胞饮突变化和白血病抑制因子表达的影响

目的 研究控制性卵巢刺激(COS)中黄体期添加雌激素对子宫内膜容受性的影响,探讨COS中不同黄体期支持方案对小鼠子宫内膜中胞饮突发育情况、白血病抑制因子(LIF)表达的影响.方法 将正常雌性昆明小鼠随机分为A组(单纯COS)、B组(COS+黄体酮)、C组(COS+黄体酮+雌激素)和D组(自然周期,未应用药物)共4组,扫描电镜下观察各组小鼠妊娠第3～5天子宫内膜胞饮突的发育情况;采用免疫组化方法 检测LIF蛋白在各组小鼠妊娠第3～5灭子宫内膜中的表达情况.结果 (1)B、C、D组小鼠妊娠第3天子宫内膜出现发育中的胞饮突,妊娠第4天出现完全发育的胞饮突,妊娠第5天出现退化的胞饮突;A组小鼠妊娠第3天可见少量完伞发育的胞饮突,妊娠第4天可见退化的胞饮突.(2)妊娠第3～5大小鼠子宫内膜LIF蛋白表达水平的平均值,C组(138.5±20.3)、D组(143.1±19.0)均明显高于A组(103.2±5.0),差异均有统计学意义(P<0.05),C、D组妊娠第4天LIF蛋白表达均最强,呈强阳性;B组表达水平(123.5±10.8)高于A组,但低于C、D组,差异也均有统计学意义(P<0.05),B组妊娠第4天LIF蛋白表达最强,呈阳性;A组小鼠妊娠第3天LIF蛋白表达最强,呈弱阳性.A组妊娠第3天小鼠与B组、C组和D组妊娠第4天小鼠子宫内膜中LIF蛋白表达水平之间两两比较,差异均有统计学意义(F=55.76,P<0.01).结论 COS中黄体期支持时添加雌激素能改善小鼠子宫内膜中胞饮突的发育及LIF蛋白的表达,从而增加子官内膜容受性.     

控制性超排卵周期的子宫内膜容受性研究

目的 研究控制性超排卵(COH)对子宫内膜容受性的影响。方法 扫描电镜观察COH后子宫内膜胞饮突的变化和免疫组化法检测整合素β3、TGFβl的表达；以正常月经周期分泌中期子宫内膜作对照。结果 COH周期，完全发展的胞饮突出现在月经周期的第18—19d，较正常周期提前l一2d出现和消失；整合素β3、TGFβl在正常月经周期第2l一23d的子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞的细胞质高表达，而COH周期在第18—20d高表达。COH周期和正常周期，整合素β3和TGFβl在子宫内膜上皮细胞的高表达与完全发展胞饮突的出现在时期上存在着一致性。结论 COH可能通过改变子宫内膜与着床密切相关的粘附分子、细胞因子和超微结构的时序性表达来影响子宫内膜的容受性，使子宫内膜着床窗的开放与胚泡的发育不同步，这可能是影响IVF妊娠率的重要原因。     

控制性超促排卵对黄体期子宫内膜胶原纤维表达的影响

目的:探讨IVF-ET妇女控制性超促排卵(COH)时着床窗期子宫内膜胶原纤维(collagen fibril,CF)对子宫内膜容受性(ER)的影响。方法:共对25个刺激周期(SC)和20个自然周期(NC)妇女分别在取卵后或排卵后的第7±1日行外周血雌、孕激素水平检测和子宫内膜活检术,常规HE染色确定组织学分期,采用透射电子显微镜观察CF增生情况和改良Masson染色进行CF定量分析。结果:SC组外周血雌、孕激素水平均显著高于NC组(P<0.05)。SC组分泌期较NC组提前1～2 d,内膜腺体扩张和间质水肿明显。SC组分泌早、中和晚期内膜间质中的CF较NC组显著升高(P<0.01,P<0.05和P<0.05),且SC组分泌早期SC明显高于分泌中期(P<0.05)。结论:COH过程中过高的雌、孕激素水平可使子宫内膜分泌期提前并刺激内膜CF的过度增生,这可能是导致COH周期ER下降和着床失败的原因。     

宫腔粘连模型大鼠子宫内膜胞饮突发育和整合素β3表达

目的:建立宫腔粘连大鼠模型,观察子宫内膜胞饮突的发育和整合素β3的表达,探讨宫腔粘连对子宫内膜容受性的影响。方法:选取健康SD大鼠30只,将每只大鼠左侧子宫作为模型组(宫腔注入95%无水乙醇,持续5min),右侧子宫作为对照组(注入等量生理盐水)。术后两个动情周期取子宫,光镜观察子宫内膜形态学变化及纤维化程度,扫描电镜观察大鼠子宫内膜胞饮突的发育情况,免疫组化法检测子宫内膜整合素β3表达。结果:模型组大鼠子宫内膜明显变薄,上皮细胞排列紊乱,间质内胶原纤维增多,子宫内膜纤维化评分为(4.69±0.22)分,明显高于对照组。扫描电镜观察,对照组大鼠子宫内膜可见大量发育完全的胞饮突,而模型组子宫内膜胞饮突分布稀少,表面皱缩,发育不同步。模型组的整合素β3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:注射无水乙醇可建立稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,抑制子宫内膜胞饮突和整合素β3表达,降低子宫内膜的容受性。     

促性腺激素释放激素激动剂降调节方案对子宫内膜容受性的研究进展

辅助生殖技术(ART)中,子宫内膜容受性(ER)是影响女性妊娠成功与否的重要因素。促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)在控制性卵巢刺激(COS)过程中得到广泛应用,GnRHa一方面解决了单纯促排卵导致的早发黄体生成激素(LH)峰造成卵子质量下降、周期取消率高的问题,另一方面能够通过调控激素及生物活性分子(雌、孕激素及其受体、整合素、转化生长因子等)的分泌、胞饮突的数量、HOXAl0等基因的表达影响ER,本文总结了GnRHa调节ER的机理,综述了不同的GnRHa降调节方案(GnRHa超长方案、GnRHa长方案、GnRHa短方案、GnRHa超短方案)对ER的影响,为临床上制定合理、科学的个体化GnRHa降调节方案提供参考。     

GnRHa超排卵对小鼠着床期子宫内膜厚度及整合素α_v、β_1表达的影响

目的:观察GnRHa长周期辅助超排卵对小鼠子宫内膜组织厚度及整合素αV、β1 表达的影响,探讨提高IVF ET妊娠率的方法。方法:随机将36只小鼠分成3组。对照组为生理盐水(NS)组,单纯促排卵组为HMG+HCG组,GnRHa+促排卵组为Gn RHa+HMG+HCG组。促排卵和排卵后24h、48h,利用多功能图像分析仪检测子宫内膜厚度,用免疫组化技术检测子宫内膜整合素αV、β1 的表达。结果: 3组的子宫内膜厚度差异无显著性(P>0. 05)。整合素αV、β1 表达对照组呈强阳性,单纯促排卵组稍弱于对照组,两组差异无显著性(P>0 .05);GnRHa+促排卵组弱于前两组,与前两组分别比较差异有显著性(P<0. 05)。结论:控制性超排卵药物可以影响着床期子宫内膜整合素αV、β的表达,从而影响子宫内膜容受性,导致临床妊娠率偏低。     

GnRH-a控制性超促排卵(COH)对小鼠着床期Hoxa-10基因表达的影响

目的:研究GnRH-a长方案控制性超促排卵(COH)对小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期HOXA-10基因表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制。方法:实验动物随机分为实验组(GnRH-a+hMG+hCG)和对照组(生理盐水),雌、雄合笼后观察小鼠阴栓率,于着床期取小鼠子宫,观察妊娠率及胚胎着床数,计算着床率;应用RT-PCR、Real-time PCR方法及免疫组织化学法分别检测小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10 mRNA及蛋白的表达。结果:实验组小鼠阴栓率及妊娠率均明显低于对照组(P<0.01),实验组胚胎着床数高于对照组(P<0.01),但胚胎着床率较对照组显著降低(P<0.05),着床期小鼠子宫内膜Hoxa-10mRNA及蛋白表达下降,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:GnRH-a长方案COH可引起小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10表达下降,导致子宫内膜容受性降低,从而影响小鼠妊娠及胚胎着床。     

Effects of COH on the expression of connexin43 in endometrial stromal cells

ObjectiveThe purpose of this study was to investigate the effect of controlled ovarian hyperstimulation (COH) on gap junction, and to induce the effect of an estrogen level overdose on gap junction in vitro by COH. Here, we mainly focus on connexion43 (Cx43), progesterone receptor (PR) and prolactin-related protein (PRP), and CyclinD3 genes expression, as well as the expression of Cx43 protein, were investigated.Materials and methodsMature BDF-1 mice were divided into different COH, and the mouse uterus was isolated, Paraffin sections evaluate the effect of COH on mouse uterine endometrial morphology. The other part was used for the extraction of mouse uterine endometrial stromal cells (ESC), some related gene changes are detected. Human ESC were isolated from human endometrium by primary culture, the estrogen concentrations 10⁻⁶ mol/L, 10⁻⁷ mol/L were added, the changes of Cx43 gene and related proteins were detected, too.Results(1) HE staining showed that in the ovulatory endometrium of mice in the high super ovulation group, uterine glands in the stromal layer were significantly increased, the relative vascular tissues was less abundant. (2) In three groups of COH mice, the expression of Cx43, PR, and PRP genes in ESC was significantly different (P < 0.05). (3) In vitro ESC in the COH group showed significant differences in Cx43, PR, and CyclinD3 gene expression (P < 0.05), and showed an obvious dose effect. In addition, Western blot analysis showed that the Cx43 protein and Cx43 gene expression were similar.Conclusions(1) Animal experiments study showed that Cx43 gene expression in ESC was significantly decreased in hyper COH, in addition, the advance in gene expression was significantly earlier, suggesting decidualization appeared significantly earlier. (2) In vitro COH demonstrated when the estrogen concentration used was higher, the expression level of Cx43 gene and protein was lower. Combined with animal experiments, the endometrium decidualization was advanced in mice that were underwent hyper COH, which may reflect the endometrial receptivity.     

补肾调经方、逍遥丸对小鼠卵母细胞GDF-9表达的比较研究

目的:观察补肾法、疏肝法对小鼠卵母细胞生长分化因子-9(growth differerntiation factor-9,GDF-9)蛋白及mRMA表达的影响。方法:将300只小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组;疏肝高、低剂量组;控制性超促排卵(COH)组和空白对照组,每组50只,应用Western blotting和Real-time PCR方法分别测定卵母细胞中GDF-9蛋白和mRNA的表达,并对比各组小鼠卵母细胞数量及优质卵泡率。结果:各治疗组卵母细胞中GDF-9蛋白及mRNA表达显著高于空白对照组及COH组,其中高剂量组优于低剂量组(P0.05),COH组的GDF-9蛋白及mRNA表达较空白对照组降低(P0.05);各治疗组及COH组卵母细胞数量高于空白对照组(P0.05),治疗组中高剂量组卵母细胞数量高于低剂量组(P0.05);各治疗组及空白对照组优质卵泡率优于COH组(P0.05),治疗组中高剂量组的优质卵泡率优于空白对照组(P0.05)。结论:补肾调经方、逍遥丸在促性腺激素应用的基础上能增加卵母细胞数量及优质卵泡率,其机制可能与调控卵母细胞中GDF-9的蛋白及mRNA表达有关。     

控制性超促排卵过程中血清LH低于正常时添加rLH或hMG的效果比较

目的:比较控制性超促排卵(COH)过程中血清促黄体生成素(LH)低于正常时添加基因重组LH(rLH)或人绝经期尿促性腺激素(hMG)的效果。方法:选取因输卵管因素不孕行常规IVF-ET患者85例,全部采用长方案超促排卵,均给予基因重组促卵泡激素(rFSH)进行超促排卵,超促排卵第6日时如血清LH≥1.2 mIU/ml,继续用rFSH,作为对照组(rFSH组,n=37);如血清LH<1.2 mIU/ml,则随机纳入到hMG组(rFSH+hMG,n=30)或rLH组(rFSH+rLH,n=18)。结果:3组间在促性腺激素(Gn)用量、COH天数、获卵数、双原核率、优质胚胎率、临床妊娠率方面均无统计学差异。hMG组的rFSH用量显著低于rLH组(P<0.01)。结论:在黄体期降调节长方案超促排卵第6日,如血清LH<1.2 mIU/ml时,添加hMG或rLH,可获得与对照组(rFSH组)相似的临床结果。与添加rLH组相比,添加hMG组降低了rFSH用量,减少了患者的费用。     

HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr在控制性超排卵小鼠围着床期子宫内膜表达的研究

目的:检测同源框基因HOXA-10、HOXA-11以及雌激素受体Esr2、孕激素受体Pgr在控制性超排卵(COH)小鼠围着床期子宫内膜中的表达,探讨COH对子宫内膜容受性的影响。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为模型组(GnRH-a+HMG+HCG)和对照组(生理盐水),每组15只,造模成功后,计算子宫脏器指数,光学显微镜观察子宫内膜组织学变化;应用RT-PCR和Real-time PCR方法检测小鼠子宫内膜中HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr mRNA的表达。结果:模型组围着床期小鼠子宫脏器指数较对照组显著降低(P<0.05),子宫内膜发育延迟,子宫内膜成熟度及厚度降低;模型组小鼠HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),而Esr2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:COH引起HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达下降,Esr2mRNA表达升高,致使围着床期内膜准备不足,子宫内膜容受性下降。     

短效达必佳两种降调节方案在控制性超排卵中的效果比较

目的:比较短效达必佳2种降调节方案在控制性超排卵(COH)中的效果。方法:回顾性分析比较本中心接受COH降调节方案的261个周期,根据达必佳用量及用法的不同分成A组:部分半量方案,95个周期;B组:半量方案,166个周期,比较组间的超促排卵情况及妊娠结局。结果:A组Gn用量(75IU/支)、Gn总天数、IVF受精率和优质胚胎率均较B组高(P<0.05);Gn启动日FSH水平和hCG注射日LH水平较B组低(P<0.05);着床率、临床妊娠率、继续妊娠率A组与B组比差异无统计学意义(P<0.05),但有增高趋势。结论:黄体中期短效达必佳0.1mg/d×14d降调节效果比0.05mg/d降调节好。     

血管内皮生长因子与抑制素B和促排卵结局的相关研究

目的探讨不同控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)方案中血清及卵泡液(follicular fluid,FF)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与抑制素B(inhibin B,INHB)及COH结局的相关性。方法应用酶联免疫吸附方法分别检测长方案组(A组,n=38)及非降调节方案组(B组,n=38)患者血清及FF中VEGF和INHB水平并行相关性分析。结果 1降调节足够长时间(≥18 d)时,血清VEGF水平显著下降,且促性腺激素(Gn)启动日A组VEGF水平[(81.50±32.59)ng/L]明显低于B组[(123.64±53.90)ng/L](P0.01)。2 Gn启动后A、B组血清VEGF水平呈上升趋势,h CG注射日后A组继续上升,而B组先下降后上升;且h CG注射次日A组VEGF水平[(165.69±38.25)ng/L]明显高于B组[(136.49±39.19)ng/L](P=0.002);A、B组其它时间血清VEGF水平无统计学差异(P0.05)。3 Gn第5日血清VEGF水平与COH结局相关性最好(P0.01)。4 A、B组FF中VEGF水平随卵泡直径增大而升高,大、中卵泡VEGF水平无统计学差异(P0.05),但B组小卵泡VEGF水平[(889.86±268.95)ng/L]明显高于A组[(728.45±291.88)ng/L](P=0.014);且大卵泡VEGF水平与COH结局显著呈负相关。5 A、B组血清及FF中VEGF水平与INHB呈显著负相关。结论 COH过程中,血清及大、中卵泡VEGF水平与卵巢反应性及COH结局负相关,并且可能对INHB分泌起抑制作用。     

长、短效GnRH激动剂在控制性超排卵长方案中应用效果比较

目的通过比较短、长效两种GnRH激动剂（gonadropin releasing hormone agonist,GnRH-a）在控制性超排卵长方案中应用效果,探讨同一种药物不同剂型对体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization andembryo transfer,IVF-ET）临床结局的影响。方法对使用长方案超排卵实施IVF-ET治疗的患者,根据使用不同剂型的GnRH激动剂,随机分成GnRH-a短效组及长效组。对两组间垂体降调节效果、促排卵过程中激素水平、促性腺激素（Gn）使用剂量、时间及IVF-ET结局进行比较。结果GnRH-a短效组与长效组相比,Gn使用天数及总剂量降低,分别为[（8.58±1.45）d,（10.17±1.4）d]和[（29.52±12.22）支,（38.83±10.95）支],差异具有统计学意义（P〈0.000 1）;短效组HCG日LH水平明显高于长效组,分别为[（2.56±1.71）U/L,（1.34±1.03）U/L,P〈0.000 1];取卵个数低于长效组[（14.68±7.44）个,（19.46±10.60）个,P〈0.005];两组间临床妊娠率、胚胎种植率及流产率,差异均无统计学意义（P〉0.05）,持续妊娠率在短效组明显高于长效组（52.08%,34.21%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在控制性超排卵长方案中应用短、长效GnRH激动剂对垂体均有满意的降调节效果,但长效GnRH-a可能对垂体产生过度抑制,导致Gn的用量增加,在超促排卵过程中LH水平过低,持续妊娠率降低。