成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶MMP-2的表达及意义

:目的　探讨成釉细胞瘤局部侵袭性生长的生物学机制。方法　免疫组化 S- P法检测基质金属蛋白酶MMP- 2在成釉细胞瘤中的表达和分布。结果　成釉细胞瘤中 MMP- 2阳性染色位于肿瘤外周柱状细胞的胞浆中 ,中心星网状细胞未见表达 ;角化囊肿和含牙囊肿的上皮细胞中均未见 MMP- 2的阳性表达。结论　成釉细胞瘤细胞产生的 MMP- 2 ,导致基底膜成分 型胶原降解 ,破坏基底膜的完整性 ,这可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

基质金属蛋白酶在涎腺良、恶性多形性腺瘤中的表达

目的:检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN),在人正常涎腺组织和涎腺良、恶性多形性腺瘤中的表达,探讨其表达的生物学意义。方法:通过免疫组织化学技术SP法检测人66例正常涎腺组织、45例涎腺多形性腺瘤及42例涎腺恶性多形性腺瘤中,MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN的表达,采用χ2检验比较3种组织中MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN表达的差异。结果:MMP-2在人正常涎腺组织,涎腺良、恶性多形性腺瘤中的阳性表达率分别为9.09%、46.67%、85.71%;MT1-MMP在以上3种组织中的阳性表达率分别9.09%、53.33%、78.57%;TIMP-2在以上3种组织中的阳性表达率分别为10.61%、44.44%、59.52%;EMMPRIN在以上3种组织中的阳性表达率分别为13.64%、48.89%、83.33%。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN在涎腺多形性腺瘤中的表达显著高于人正常涎腺组织,且MMP-2、MT1-MMP及EMMPRIN在涎腺良、恶性多形性腺瘤中表达的差异有统计学意义。结论:在涎腺多形性腺瘤中,MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN的表达与MMP-2的活化有关,且MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN有可能作为判断多形性腺瘤侵袭性的有效指标。     

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤侵袭力的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭力的关系。方法：通过MMP-2活性抑制剂R031—9790降低MMP-2活性进行干预处理，采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、Western印迹、体外侵袭试验、组织学和免疫组织化学等方法，观察MMP-2活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭的关系。采用SPSS10．0统计软件包对上述数据进行χ^2检验和单因素方差分析。结果：R031-9790各处理组和对照组的生长曲线无显著差异（P〉0．05）。R031-9790对成釉细胞瘤细胞的体内、外侵袭均有显著的抑制作用（P〈0．01）。并可增加Ⅳ型胶原在瘤组织的阳性表达，减少E-钙黏素在瘤组织的异常表达，同时在体内、外均不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2的表达。结论：MMP-2活性与成釉细胞瘤的侵袭直接相关；R031-9790可通过降低MMP-2活性而抑制成釉细胞瘤的侵袭；活性MMP-2可能通过调节Ⅳ型胶原及E-钙黏素的表达。影响成釉细胞瘤的侵袭。     

成釉细胞瘤MMP-2、TIMP-2、MT1-MMP mRNA的表达和意义

目的　探讨MMP 2、TIMP 2、MT1 MMP与成釉细胞瘤局部侵袭特性的生物学关系。方法　采用RT PCR方法检测基质金属蛋白酶及其抑制剂和激活剂MMP 2、TIMP 2、MT1 MMP在成釉细胞瘤的表达及含量。结果　在成釉细胞瘤组织中 ,MMP 2、MT1 MMP、TIMP 2的mRNA均表达 ,且表达水平均显著高于正常牙囊组织 ,复发及实性成釉细胞瘤的TIMP 2、MT1 MMP相对含量均显著高于原发和囊性成釉细胞瘤。结论　在成釉细胞瘤组织中 ,MMP 2、MT1 MMP、TIMP 2转录水平的增高可能与其侵袭特性有关 ,MT1 MMP/TIMP 2表达水平可能与其侵袭能力有关。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达失衡与涎腺恶性肿瘤浸润生长的关系

目的　探讨基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、9),膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)及基质金属蛋白酶组织抑 制剂1、2(TIMP-1、2)与涎腺恶性肿瘤浸润生长的关系。方法　应用免疫组化SP法和明胶酶谱法检测28例涎腺良 性肿瘤、26例涎腺恶性肿瘤中MMP-2、9,MT1-MMP及TIMP-1、2的表达及细胞定位,分析其中酶原与活性酶的含量 比例。结果　涎腺恶性肿瘤中MMP-2、9的表达强于良性肿瘤(P<0·05),TIMP-1、2的表达低于良性肿瘤 (P<0·05)。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的表达有相关性。MMP-9酶原及活性MMP-9在恶性肿瘤中的表达均高于良 性肿瘤(P<0·05)。结论　MMP-2、9在涎腺恶性肿瘤浸润性生长中扮演了重要角色。涎腺恶性肿瘤中,TIMP-1、2 抑制作用的降低导致了MMP-2、9合成、激活的增多,令MMP-2、9与其天然组织抑制剂TIMP-1、2之间的平衡失调, 从而基底膜加速降解。     

MMP-2抑制剂对成釉细胞瘤细胞体外侵袭的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶-2抑制剂Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞体外侵袭的影响。方法:通过给予Ro31-9790对体外培养的成釉细胞瘤细胞进行处理,采用明胶酶谱法、流式细胞术、体外侵袭试验、细胞粘附分析、免疫组化、MTT试验等方法,观察Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞体外侵袭等特性的影响。结果:Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的侵袭及粘附能力均有明显的抑制作用;4例成釉细胞瘤细胞均表达MMP-2,但不同肿瘤组织来源的成釉细胞瘤细胞MMP-2表达量不同。Ro31-9790能显著抑制成釉细胞瘤细胞分泌的MMP-2的活性,但不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2和TIMP-2的表达;Ro31-9790不能抑制成釉细胞瘤细胞的体外增殖。结论:MMP-2的活性及其相关的细胞粘附能力与成釉细胞瘤的侵袭能力密切相关,Ro31-9790可在体外抑制成釉细胞瘤的侵袭     

基质金属蛋白酶组织抑制剂-2过表达对人成釉细胞瘤鸡胚尿囊膜移植瘤的抑制作用

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）基因过表达对人成釉细胞瘤鸡胚尿囊膜（CAM）移植瘤的抑制作用。方法建立成釉细胞瘤的鸡胚尿囊膜移植瘤模型。将实验分组：空白对照组（Empt）,脂质体转染组（Lipo）,质粒转染组（P）。TIMP－2基因转染成釉细胞CAM移植瘤细胞后,测定移植瘤体积和瘤重;将移植瘤侵袭能力分为4个级别进行移植瘤病理检查。Western blot分析移植瘤基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及TIMP-2蛋白的表达。结果移植瘤能在鸡胚绒毛尿囊膜上生长。接种后第9天,转染质粒组的0级侵袭为7例、2级侵袭为1例、3级侵袭为0例。TIMP-2基因转染可以显著抑制成釉细胞CAM移植瘤的局部侵袭能力。质粒转染组TIMP-2表达明显高于空白组TIMP-2的表达（P＜0.05）;质粒转染组MMP-2表达明显低于空白组MMP-2的表达（P＜0.05）。结论成功建立成釉细胞瘤的CAM移植瘤模型。TIMP-2基因转染后,成釉细胞瘤CAM移植瘤的侵袭性生长被抑制。移植瘤的侵袭性生长被抑制的可能原因是由于特异性抑制MMP-2蛋白引起的。     

负向调控基质金属蛋白酶-2的表达抑制成釉细胞瘤的侵袭性

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）靶向小干扰RNA（siRNA）对成釉细胞瘤（AM）细胞MMP-2基因的负向调控作用及对AM侵袭性的抑制作用。方法培养成釉细胞瘤细胞，应用免疫荧光法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达；体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体，并转染成釉细胞瘤细胞．激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效果，流式细胞仪检测转染效率．逆转录聚合酶链反应检测MMP-2mRNA的改变，免疫印迹法检测细胞MMP-2蛋白表达．侵袭小室微侵袭分析检测细胞的侵袭性，对统计结果进行方差分析。结果成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达，siRNA质粒表达载体对成釉细胞瘤细胞的转染率为63、6％；转染后，成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达减少69．3％，MMP-2蛋白表达减少64.2％，P〈0．05，细胞的侵袭抑制率为61．2％。结论MMP-2靶向siRNA表达质粒成功转染成釉细胞瘤细胞并沉默MMP-2基因，MMP-2与细胞的侵袭性密切相关。     

口腔扁平苔藓中基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达

目的 分析基质金属蛋白酶（MMP）2，膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP），基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）2在口腔扁平苔藓（OLP）中的表达及意义。方法通过免疫组化检测其在OLP中的表达并与口腔鳞状细胞癌（OSCC）及正常口腔黏膜进行比较。结果从正常口腔黏膜（NOM）、非萎缩型OLP，到萎缩型OLP和OSCC3种酶表达依次增加。萎缩型OLP中MMP-2和MTl．MMP的表达明显高于NOM和非萎缩型OLP，与OSCC表达相似。TIMP-2的表达亦随着MMP的增高而增加，但与MMP-2和MT1-MMP相比，其增加量相对较低。结论MMP表达的高低可能成为判断OLP恶变潜能的检测指标之一。     

成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2表达的初步研究

目的:分析基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在成釉细胞瘤中的表达,比较其在成釉细胞瘤各病理类型间的差异及与侵袭性的关系.方法:收集2005—2009年于北京大学口腔医院手术所得成釉细胞瘤石蜡标本26块,对标本进行免疫组织化学(免疫组化)染色.MMP-2为一抗,在高倍镜...     

RECK在成釉细胞瘤中的表达及其与基质金属蛋白酶-2的关系

目的:研究RECK(reversion-inducing cysteine rich protein with Kazal motifs)和基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)在成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)中的表达及其相关性,探讨两者与成釉细胞瘤临床生物学行为的关系.方法:应用免疫组化EliVisionTM plus法,检测69例成釉细胞瘤(原发AB 45例,复发AB 24例)、6例成釉细胞癌和16例牙源性角化囊性瘤(keratocystic odontogenic tumor,KCOT)中RECK、MMP-2蛋白的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:RECK在KCOT、AB和成釉细胞癌中的阳性表达率依次降低,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),且复发AB的RECK表达显著低于原发AB(P<0.01).MMP-2在AB和成釉细胞癌中的阳性表达率均显著高于KCOT(P<0.05),且MMP-2的表达在AB与成釉细胞癌以及原发AB与复发AB间均无显著性差异(P>0.05).RECK与MMP-2在AB中的表达呈负相关(r=-0.431,P<0.001).结论:RECK与AB的临床生物学行为密切相关,可能通过调控MMP-2参与AB的浸润、复发和恶性转化过程.     

成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶及抑制剂表达的意义

目的研究基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)及其抑制剂(tissueinhibitorofmetalloproteinase,TIMP)在成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)中的表达,结合临床病理,探讨其与生物学行为的关系。方法用免疫组化SP法检测43例AB的MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达,同时以口腔黏膜8例、牙源性角化囊肿(odontogenic,keratocyst,OKC)10例为对照。结果MMP-2、MMP-9在正常黏膜为阴性或弱阳性表达,在OKC棘层细胞中强阳性表达2例,阴性或弱阳性8例,基底层细胞表达较弱或阴性。在AB的外周层及星网状层细胞中,强阳性表达28例和30例(在MMP-2中组间相比P<0.001)。MMP-9中AB与正常黏膜及OKC比较,P<0.05。MMP在AB间质细胞表达为阳性,且随组织学分级变化而增高,但与年龄、性别、部位、病理分型无关(P>0.05)。TIMP-1在正常黏膜、间质组织、AB及OKC中均为弱阳性或阴性表达。结论MMP-2和MMP-9蛋白的高表达与AB的复发有关,MMPs与TIMPs的蛋白表达失平衡,可能为AB侵袭性生长的重要因素之一;基质细胞产生的MMPs蛋白活性,也可能为AB利用且在侵袭性生长中起到重要作用。     

RANKL、MMP-9和MMP-2在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的：探讨RANKL、MMP-9和MMP-2与成釉细胞瘤骨吸收机制之间的关系。方法：应用免疫组化、荧光定量RT—PCR及Western印迹方法，分别在不同分子水平检测RANKL、MMP-2和MMP-9在成釉细胞瘤中的表达，所有实验数据均经SPSS11．0统计软件包进行分析处理，组间比较采用t检验。结果：在所有成釉细胞瘤标本中，3种方法均可检测到RANKL、MMP-2和MMP-9的表达。其中，RANKL各型成釉细胞瘤中均呈恒定的高表达，而荧光定量RT—PCR检测结果显示，MMP-2在基底细胞型成釉细胞瘤中的表达水平显著高于其他两型（P〈0．05）。结论：MMP-2、MMP-9及RANKL可能共同参与成釉细胞瘤引起的骨质吸收过程。与MMP-9相比，MMP-2可能与成釉细胞瘤的侵袭性更为相关。     

成纤维生长因子受体2在原发及复发成釉细胞瘤中的表达及意义

目的：检测成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）在颌骨原发及复发成釉细胞瘤中的表达,并探讨其与成釉细胞瘤临床特点尤其是侵袭和复发的关系。方法：选择手术切除的多囊型成釉细胞瘤患者64例共96例成釉细胞瘤组织,分为复发组（第1组,32例患者64例组织）和原发组（第2组,32例患者 32例组织）,以10例正常牙囊组织为对照,采用免疫组织化学方法检测96例成釉细胞瘤组织及10例牙囊组织中FGFR2蛋白的表达。应用SAS9.3软件包分析FGFR2与成釉细胞瘤的关系。结果：96例成釉细胞瘤中均检测到FGFR2的表达,复发成釉细胞瘤组织中FGFR2的表达显著高于原发成釉细胞瘤;第1组中原发成釉细胞瘤的平均直径为4.02 cm,第2组中成釉细胞瘤的平均直径为3.1 cm（P<0.05）且最大直径为3.9 cm。上颌骨复发成釉细胞瘤中FGFR2的阳性率显著高于下颌骨复发成釉细胞瘤。结论：肿瘤复发与成釉细胞瘤的大小相关,直径大于3.9 cm的成釉细胞瘤较直径小于3.9 cm者更易复发,且复发成釉细胞瘤中FGFR2的阳性率显著高于原发成釉细胞瘤,表明FGFR2的表达与成釉细胞瘤的复发相关,可能是成釉细胞瘤局部复发的机制之一。     

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤增殖生长关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系及其在成釉细胞瘤侵袭中的作用。方法 通过MMP-2抑制剂Ro31-9790抑制MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、流式细胞术、瘤体积测量和组织学检查等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系。结果 实验各组之间在同一时间点的细胞增殖活性均无显著性差异（P＞0.05）。G0/G1、G2/M期细胞比率以及凋亡细胞比率不随Ro31-9790浓度增加而增加,S期细胞比率也不随Ro31-9790浓度增加而减少。Ro31-9790治疗组瘤体积明显小于对照组（P＜0.05）,瘤体积增加也明显少于对照组（P＜0.01）。结论 Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体外增殖活性无影响,但可抑制体内移植瘤的生长,MMP-2活性与成釉细胞瘤细胞的增殖活性无关,但与成釉细胞瘤的生长密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

两种正畸力作用下大鼠牙周组织中胶原相关蛋白的表达

目的观察不同正畸力作用下大鼠牙移动过程中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶-1（matrix metalloprotein-ase-1,MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）在上颌第一磨牙牙周组织中的表达变化。方法建立大鼠正畸牙移动模型,分为加力50 g组和加力150 g组,随机选择加力侧,对侧不加力作为对照组,分别于术后3、6、12 h和1、3、7、14 d处死,用免疫组织化学方法观察各组中Ⅰ型胶原和MMP-1、TIMP-1表达的变化。结果Ⅰ型胶原和MMP-1、TIMP-1在加力组的阳性表达明显强于对照组,且表达有时间依赖性。多元回归分析发现MMP-1、MMP-1与TIMP-1比值（MMP-1/TIMP-1）有与Ⅰ型胶原表达量呈负相关的趋势,TIMP-1有与牵张区Ⅰ型胶原表达量呈正相关的趋势。结论 MMP-1和TIMP-1参与了正畸牙周组织改建过程中Ⅰ型胶原代谢的调节,其表达的平衡性对维护牙周组织的生理健康、正常改建起着非常重要的作用。     

过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20（MMP-20）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组和给氟组。8 周后处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果 MMP-20和TIMP-2 在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达,给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;TIMP-2在两组的表达无显著性差异（P>0.05）。结论 过量氟可抑制MMP-20的表达, MMP-20和TIMP-2表达失衡,TIMP-2的抑制作用加强,致使釉基质蛋白清除延迟,导致矿化不全和釉质缺损。     

干扰MT1-MMP表达对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响

目的：检测膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在口腔鳞癌（OSCC）中的表达,探讨其对OSCC细胞增殖、侵袭的影响。方法：选取40例OSCC及癌旁组织样本,实时荧光定量PCR检测样本中MT1-MMP及上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA表达。采用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰HSC3细胞MT1-MMP基因,实验分为siControl、siMT1-MMP、siControl+转化生长因子-β1(TGF-β1)及siMT1-MMP+TGF-β1组。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测MT1-MMP、E-cadherin、TGF-β信号通路相关蛋白CUTL1及Wnt5a的表达。结果：相对于癌旁组织,OSCC组织中MT1-MMP mRNA水平为高表达,E-cadherin为低表达（P<0.05）;在干扰MT1-MMP表达后,HSC3细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）;与siControl和siMT1-MMP组比较,siControl+TGF-β1组和siMT1-MMP+TGF-β1组细胞侵袭能力...     

E-钙粘素表达与成釉细胞瘤生物学特性的关系研究

目的探讨E-钙粘素与成釉细胞瘤复发和侵袭的关系。方法采用免疫组织化学LABC方法,检测28例成釉细胞瘤组织中E-钙粘素蛋白的表达。结果28例成釉细胞瘤中,12例E-钙粘素正常表达(42.9%);正常表达者的阳性物在肿瘤外层(周边)细胞的染色较强,内层(中央)细胞染色相对减弱;而在E-钙粘素异常表达者,肿瘤内层细胞阳性染色较强,外层细胞阳性染色较弱或缺失;异常表达病例的复发率明显高于正常表达者(P<0.01)。结论E-钙粘素异常表达与成釉细胞瘤复发密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

MMP-2靶向siRNA对成釉细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:构建裸鼠皮下人成釉细胞瘤移植瘤模型,研究MMP-2靶向siRNA对成釉细胞瘤侵袭性的抑制作用。方法:取新鲜成釉细胞瘤组织标本,剪切成1～2mm3组织小块,接种于裸鼠前肢根部的背侧皮下。实验分为3组:空白对照组不加任何处理因素;脂质体组注射脂质体混合物;siRNA组注射MMP-2靶向siRNA表达质粒混合物。组织块接种后第2周末开始施加处理因素,记录移植瘤体积和实验终止时的肿瘤重量。采用SPSS10.0统计软件包对数据进行t检验,并对移植瘤进行组织病理学分析。结果:所有移植瘤均成活,病理证实移植瘤为成釉细胞瘤,siRNA组和对照组之间肿瘤的体积有显著性差异,P<0.05。结论:裸鼠皮下接种成釉细胞瘤组织块构建成釉细胞瘤移植瘤动物模型是可行的,MMP-2靶向siRNA可在体内抑制成釉细胞瘤的侵袭性和生长。