稳定转导反义增殖细胞核抗原基因对膀胱癌细胞体外增殖活性的调控作用

目的　探讨反义增殖细胞核抗原 (PCNA)基因对膀胱癌细胞增殖活性的影响。方法脂质体介导PCNA反义真核表达载体转染膀胱癌EJ细胞 72h后 ,G41 8筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/AP ,采用SABC免疫组织化学方法和逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测PCNA基因表达 ,噻唑蓝 (MTT)比色分析、3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法、流式细胞仪、克隆形成实验检测癌细胞体外增殖活性。结果　同EJ细胞比较 ,所获亚克隆EJ/AP中PCNA蛋白及mRNA表达完全抑制 ,癌细胞体外增殖活性抑制 49.38% (P <0 .0 5) ,DNA合成速率降低 47.71 % (P <0 .0 1 ) ,细胞周期阻滞于G0 /G1 期 ,克隆形成能力抑制 64 .73 % (P <0 .0 1 )。结论　稳定转染反义PCNA基因能有效抑制膀胱癌细胞体外增殖活性 ,有望成为膀胱癌基因治疗的有效策略     

反义核酸抑制增殖细胞核抗原表达的研究进展

反义核酸是天然存在于原核生物内或根据碱基互补原理人工合成的短片断寡聚核苷酸,通过与靶基因或mRNA配对结合,阻断基因转录和翻译,从而特异性抑制靶基因的表达。1978年Zamecnik等〔1〕首次将反义技术应用于抑制病毒基因表达研究并获得成功,从而进入了应用反义技术研究基...     

脂质体介导增殖细胞核抗原反义寡核苷酸抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的 观察脂质体介导增殖细胞核抗原（PCNA）对肝癌细胞增殖的影响。方法：根据PCNA cDNA序列设计合成与PCNAmRNA AUG起始密码子后的18位碱基序列互补的PCN反义寡核苷酸，脂质体介导转染人肝癌细胞析，通过细胞生长曲线测定，MTT比色法检测PCNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生长抑制率，比较阳离子脂质体介导转染法与直接转染法的区别。结果 PCNA反义寡核苷酸作用后的肝癌细胞、生长明显受到抑制。应用阳离子脂质体介导转染能显著提高PCNA反义寡核苷酸的抑增殖效应。结论 利用阳离子脂质体介导转染PCNA反义寡核苷酸能显著提高对人肝癌细胞增殖的抑制效应。     

膀胱移行细胞癌组织端粒酶活性和增殖细胞核抗原的表达及意义

目的 探讨膀胱移行细胞癌（TCCB）组织中端粒酶活性和增殖细胞抗原（PCNA）的表达关系及临床意义。方法 采用TRAP－ELISA法及免疫组化方法测定58例TCCB组织的端粒酶活性和PCNA表达情况。结果 TCCB的端粒酶阳性率为86．2％（50／58），不同病理分级或临床分期之间差别无显著性意义（P＞0．05）；PCNA表达强度与分级或分期呈正相关（P＜0．05）；不同PC－NA表达强度的TCCB样品之间，端粒酶活性差别有显著性意义（P＜0．05），二者呈正相关。结论 TCCB组织中端粒酶活性与PCNA表达有较好的协同性，二者联合检测对TCCB的诊断治疗和估计预后有重要意义。     

膀胱癌碱性成纤维细胞生长因子表达的意义及其与增殖细胞核 …

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在膀胱癌中表达及其作用以及与增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）之间的关系。方法 应用免疫组化方法检测胶胱癌和正常膀胱组织 两者表达。结果 膀胱癌中ｂＦＧＦ表达显著高于正常组织，而且与肿瘤的病理分期分级、复发及大小之间有密切关系，但与ＰＣＮＡ表达之间无显著相关关系。结论 ｂＦＧＦ异常表达在膀胱癌发生发展过程中起重要作用，而且可以作为肿瘤生物学行为和复发的预示标记     

PCNA反义cDNA基因转导抑制人膀胱癌细胞增殖的研究

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）基因反义cDNA对人膀胱癌细胞体外增殖活性的抑制作用。方法 构建PCNA反义cDNA真核表达载体并转染膀胱癌DJ细胞,通过细胞生长曲线、MTT比色分析、H^3-TdR掺入法检测癌细胞增殖活性,流式细胞仪（FCM）分析细胞周期时相变化,SABC免疫组化观察癌细胞PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义cDNA导入后,膀胱癌DJ细胞生长速率显著减慢（P＜0．01）,增殖活性抑制率59．02％（P＜0．05）,DNA合成速率降低52．31％（P＜0．01）,S期细胞减少,细胞周期阻滞于G0／G1期,PCNA蛋白表达显著减弱（P＜0．05）,差别均有显著性意义。结论 PCNA反义cDNA基因转导能有效抑制膀胱癌细胞的PCNA蛋白表达及体外增殖活性,为肿瘤基因治疗提供了有效途径。     

前列腺癌增殖细胞核抗原的免疫组化研究

为了探讨增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与前列腺癌分化程度的关系及其对预后的影响，采用ＰＣＮＡ单克隆抗体及免疫组织化学链菌素－生物素标记法（ＬＳＡＢ法），对３８例前列腺癌穿刺的石蜡标本中ＰＣＮＡ的表达进行了检测，以１５例前列腺良性增生及１０例正常前列腺组织作为对照，通过观察、统计组织切片中ＰＣＮＡ表达阳性细胞数目，计算出ＰＣＮＡ表达的阳性指数。结果发现，在低分化癌、中分化癌、高分化癌、前列腺良性增生及正常前列腺组织中，其ＰＣＮＡ阳性指数依次为８．０±４．０％、５．２±１．８％、２．４±１．１％、１．１±０．３％、０．８±０．６％，呈逐渐降低趋势。３８例前列腺癌患者经去势手术后随访１年以上者２５例，其中死亡６例，死亡组ＰＣＮＡ表达平均指数为９．０±３．０％，非死亡组为５．０±４．２％。两组比较Ｐ＜０．０５。结果表明：ＰＣＮＡ是判断细胞增殖程度的重要指标，对估计前列腺癌的分化程度及推测预后具有重要参考价值。     

泌尿系肿瘤增殖细胞核抗原研究进展

肿瘤细胞增生活性与肿瘤生物学行为有关．增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｇｅｎ　，ＰＣＮＡ）是第一个可大规模用于常规石蜡包埋组织检测肿瘤细胞增生活性的生物标记物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤中的意义作一综述。     

膀胱移行上皮癌细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达研究

目的研究表浅膀胱移行细胞癌中细胞凋亡及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达情况,并初步探讨其与表浅膀胱移行细胞癌复发的关系。方法采用原位ＤＮＡ末端标记法及免疫组织化学方法检测了８７例表浅膀胱移行细胞癌中细胞凋亡及ＰＣＮＡ表达情况,计算出细胞凋亡指数及ＰＣＮＡ表达指数,并对复发组与非复发组进行比较。结果复发组与非复发组细胞凋亡指数差异无显著意义,而凋亡指数与ＰＣＮＡ指数比值在复发组小于非复发组（Ｐ＜００１）,显示在复发组癌细胞的增殖程度明显高于细胞凋亡程度。结论对凋亡指数及ＰＣＮＡ阳性指数的综合分析,即凋亡指数与ＰＣＮＡ阳性指数的比值,可更全面的反映细胞凋亡与增殖的平衡状态,对判断肿瘤的复发具有参考价值。     

泌尿系肿瘤增殖细胞核抗原研究进展

肿瘤细胞增生活性与肿瘤生物学行为有关。增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）是第一个可大规模用于常规石蜡包埋组织检测肿瘤细胞增生活性的生物标记物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤中的意义作一综述。     

PCNA反义寡核苷酸抑制人膀胱癌EJ细胞增殖活性的实验研究

目的 探讨全硫代修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对人膀胱癌ＥＪ细胞体外增殖活性及裸鼠体内致瘤性的影响。方法 ＰＣＮＡ－ＡＳＯ在脂质体介导下转染ＥＪ细胞后,运用细胞计数,ＭＴＴ法,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验,流式细胞术（ＦＣＭ）,克隆形成率（ＣＦ）,ＳＡＢＣ免疫组化,建立裸鼠动物模型等方法分析其体内外抗瘤活性及机制。结果 在脂质体介导下,０．４－２．０μｍｏｌ／Ｌ ＰＣＮＡ－ＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞     

bcl-2基因表达在人膀胱癌多药耐药现象中的意义

目的探讨ｂｃｌ２基因在人膀胱癌多药耐药中的作用。方法应用原位ＤＮＡ末端转移酶标记法（ＴＵＮＥＬ）、免疫细胞化学及逆转录多聚酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）技术,分别对阿霉素诱导的人膀胱癌耐药细胞株（ＢＩＵ８７／ＡＤＭ）及敏感细胞株（ＢＩＵ８７）的细胞凋亡及其ｂｃｌ２基因表达进行研究。结果（１）在相同条件下,与敏感细胞株相比,耐药细胞株中细胞凋亡明显受到抑制;（２）耐药细胞株中ｂｃｌ２基因表达明显强于敏感细胞株。结论凋亡抑制基因ｂｃｌ２在人膀胱癌多药耐药细胞中的高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因,对于人膀胱癌多药耐药的产生具有重要意义。     

PCNA反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖活性的影响

目的为探讨基因治疗膀脱癌的新途径,使用增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡聚核苷酸（ASODN）作用于膀优癌细胞系BIU-87。方法应用细胞生长曲线和MTT比色法检测细胞增殖活性,并采用免疫组织化学方法（SABC法）检测PCNA蛋白的表达。结果ASOND（30urn）处理组细胞与对照组比较生长曲线差异有显著性,增殖显著受抑（P＜0．05）,PCNA蛋白表达完全抑制。而SODN组则无此作用（P＞0．05）。结论PCNA反义寡聚核苷酸可以显著抑制BIU-87细胞体外增殖活性,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现。     

反义增殖细胞核抗原联合p16基因转染抑制膀胱癌细胞生长的研究

目的 探讨膀胱癌联合基因治疗的新策略。方法 反义增殖细胞核抗原(PCNA)联合p16转染膀胱癌细胞，观测共转染1—7d后癌细胞增殖活性、DNA合成速率、细胞周期时相、克隆形成能力、细胞凋亡和PCNA、p16基因表达情况。结果 联合转染后癌细胞PCNA表达减弱，p16表达显著增强，增殖活性抑制15．45％—68．47％(P＜0．01)，DNA合成速率减慢65．77％(P＜0．01)，细胞周期阻滞于G0／G1期，克隆形成率抑制64．49％(P＜0．01)，凋亡率为22．00％(P＜0．01)。结论 反义PCNA与p16共转染具有抑制增殖、诱导凋亡的双重作用，有望成为膀胱癌联合基因治疗的新途径。     

PCNA反义寡核苷酸对人不同恶性肿瘤细胞体外增殖活性的影响

目的：探讨增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(ASO)对人不同恶性肿瘤细胞体外生长的影响。方法：PCNA—ASO在脂质体(1ipofectin)介导下转染膀胱癌EJ细胞、结肠癌HCT—8细胞、肺癌GLC—82细胞及恶性胶质瘤BT—325细胞，运用细胞计数、MTT、流式细胞术、克隆形成及免疫组织化学方法分析其抗瘤活性及机制。结果：PCNA—ASO对上述4种肿瘤细胞的体外生长均有明显抑制作用；不同细胞敏感性差异较大，其中以GLC—82细胞最敏感，HCT—8细胞最不敏感；4种细胞生长均受阻于Gl期。结论：PCNA在恶性肿瘤细胞的增殖中是必需的。PCNA—ASO体外对不同肿瘤细胞具有抗瘤活性。     

反义寡核苷酸防治移植物动脉硬化的作用

目的　探讨防治移植物动脉硬化的途径。方法　通过大鼠胸腹主动脉移植简化模型 ,用各种增殖细胞核抗原 (PCNA)寡核苷酸在脂质体介导下转染大鼠胸主动脉后 ,移植到大鼠腹主动脉 ,于术后 15、3 0和 60d取移植动脉作病理学检查及PCNA逆转录PCR检测。结果　病理学结果示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组移植动脉再狭窄率 (8.3 %、12 .4%、19.5 % )均显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。逆转录PCR结果显示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组PCNAmRNA的表达(5 9.2 4、80 .16、18.5 8)均明显低于对照组 (P >0 .0 5 )。结论　PCNA反义寡核苷酸可明显抑制移植动脉PCNA蛋白的表达 ,抑制动脉内膜增生 ,防治移植物动脉硬化。     

表浅膀胱移行细胞癌中PCNA表达及其与复发的关系

采用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法，观察８７例表浅膀胱移行细胞癌中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及其对肿瘤复发的影响。结果表明ＰＣＮＡ表达与肿瘤复发有相关性（Ｐ＜０．０５），而与癌肿数目、大小及手术方式等因素无显著关联性。据此可筛选出表浅膀胱移行细胞癌术后复发高危人群，加强随访以提高治愈率。