NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

COX-2抑制剂NS398通过抑制前列腺素E2诱导肾癌细胞的凋亡

目的:揭示环氧合酶2(COX-2)在肾癌细胞中的表达情况,通过COX-2抑制剂NS398作用肾癌细胞探讨非甾体抗炎药(NSAID)对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。方法:采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以25,50,100,150及200μmol/L的剂量加入细胞中作用24及48h后,MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响;作用24h后,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,EIA法测定细胞中前列腺素E(2PGE2)含量的变化,Western blotting测定COX-2蛋白表达的情况。结果:NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);NS398作用肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度升高,凋亡峰亦越来越增高(P<0.05);NS398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。结论:NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖;NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡作用机制可能是通过抑制COX-2的表达,降低肾癌786-0细胞PGE2的合成,减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的。     

肾癌细胞中环氧合酶-2的高表达及NS398对肾癌细胞生长抑制和凋亡作用机制的研究(英文)

目的揭示COX-2选择性抑制剂NS398对肾癌细胞的增殖和凋亡作用的影响，及其可能的作用机制。方法采用标准的细胞培养方法对人肾癌786—0细胞进行培养，将NS398分别以不同浓度剂量加入细胞中作用24及48h后，应用流式细胞仪检测凋亡，应用RT-PCK和Western blotting检测COX-2和Bcl-2表达的改变。结果NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用，且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大，呈浓度依赖关系（P〈0．05）；RT—PCR和Western Blot结果表明，不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中，COX-2和Bcl-2的表达明显减弱，且呈剂量梯度下降。NS398作用于肾癌786-0细胞24h后。在细胞周期G0／G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，随着浓度的升高，凋亡峰亦越来越高（P〈0．05）。结论肾癌786—0细胞中存在着COX-2的过表达；选择性COX-2抑制剂NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786—0细胞的增殖，其机制可能是通过抑制COX-2的表达及下调Bcl-2来完成的。     

环氧化酶-2抑制剂NS398对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨环氧化酶-2(Cyelooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-0增殖和凋亡的影响.方法:不同浓度NS398作用体外培养的786-0细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96 h后肾癌细胞786-0的增殖活性.终浓度为30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72 h后,免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;RT-PCR法检测COX-2mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型.RT-PCR法检测显示NS398作用后能降低COX-2mRNA表达.免疫细胞化学结果显示NS398作用后能降低COX-2蛋白表达.流式细胞仪检测表明,30、180 μmol/L NS398处理组凋亡率分别为14.3%±1.4%、31.5%±2.1%,与对照组凋亡率2.1%±0.4%比较,凋亡率显著上升(P<0.05).结论:NS398可能通过降低COX-2表达,抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡.     

Akt1在环氧合酶-2抑制剂抑制宫颈癌Hela细胞增殖中的作用

目的研究Akt1在环氧合酶2抑制剂NS398抑制宫颈癌Hela细胞增殖过程中的作用。方法以不同浓度的NS398或Akt1选择性激动剂IGF-1与NS398共同处理Hela细胞,采用噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长抑制率,Western blotting免疫印迹技术分别检测Akt1蛋白表达的变化。结果与对照组比较,不同浓度的NS398处理Hela细胞后,细胞生长抑制率（IR）增加（P〈0.05）;NS398呈浓度和时间依赖性下调Hela细胞Akt1蛋白质的表达（P〈0.05）;与单独用NS398组比较,Akt1激动剂与NS398共同处理细胞后,细胞IR值逐渐下降,并且其作用呈浓度依赖和时间依赖性（P〈0.05）。结论 NS398呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的增殖,其作用机制可能与下调Akt1蛋白的表达有关。     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

NS398通过环氧化酶-2依赖途径诱导肾癌细胞786-O凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响及其机制。方法同浓度NS398作用体外培养786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,RT-PCR法检测COX-2 mRNA表达;免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法和免疫细胞化学检测显示NS398作用后能降低COX-2 mRNA和蛋白表达。ELISA检测显示NS398作用后PGE2释放水平呈下调趋势;流式细胞仪检测表明,30、180μmol/L NS398处理组凋亡率分别为(14.3±1.4)%、(31.5±2.1)%,与对照组凋亡率(2.1±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

NS398通过环氧合酶-2非依赖途径诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法观察不同浓度的NS398对BxPC-3细胞增殖的影响;流式细胞术、悬浮细胞/贴壁细胞比值测定BxPC-3细胞凋亡的改变,并检测Caspase-3活化情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度NS398作用下BxPC-3细胞COX-1、COX-2 mRNA水平的变化,Western blot法检测COX-1、COX-2及Caspase-3蛋白水平的改变.结果MTT及流式细胞术结果显示,NS398呈剂量依赖性地抑制BsPC-3细胞增殖,并可诱导其凋亡;随着NS398处理浓度的增加,悬浮细胞/贴壁细胞比值显著上升,Caspase-3活性上调,在高浓度时尤为明显.RT-PCR和Western blot结果显示,COX-1 mRNA及蛋白表达不受NS398药物作用影响,COX～2 mRNA及蛋白表达在各浓度组中亦无明显变化,Caspase-3蛋白水平在高药物浓度时表达上调.结论选择性COX-2抑制剂NS398对胰腺癌BxPC-3细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,这种效应与COX-2表达无明显相关,而与Caspase-3的活化密切相关.     

NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:研究NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:通过实验细胞培养、MTT试验、细胞形态变化、A549细胞survivin的mRNA表达、A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达来对NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制进行分析研究。结果:NS398对A549细胞增殖的影响受到浓度的影响,NS398浓度越大,A549细胞增殖抑制率越大;A549细胞在不同浓度的NS398试剂中表现出不同的细胞形态;survivin的mRNA表达随着NS398浓度的增加而减弱,A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达随着NS398浓度的增加而增强。结论:NS398对A549细胞的凋亡具有诱导作用,使肿瘤生长受到抑制,其抗肿瘤机制与AKT磷酸化的抑制、survivin蛋白表达的下调有关。     

c-Myc小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨c-Myc 小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响.方法 采用MTT检测10058-F4对肾癌786-0细胞增殖的影响,FCM检测 10058-F4对细胞周期及凋亡的作用,Western blot法进一步检测10058-F4对c-Myc及其靶基因p21、p27和 Bcl-2蛋白表达改变.结果 10058-F4可抑制786-0细胞增殖且呈浓度、时间依赖性,阻止细胞周期于G0/G1期,且可诱导细胞凋亡,能明显分别下调和上调c-Myc及其靶基因p21、p27及Bcl-2蛋白表达. 结论 c-Myc 小分子抑制剂10058-F4能抑制肾癌786-0细胞增殖并诱导其凋亡,并呈时间依赖性和浓度依赖性.     

缺氧诱导因子及其抑制因子调控肾癌细胞生长的实验研究

目的 检测缺氧诱导因子抑制因子（FIH-1）在肾癌细胞中的基因和蛋白表达情况,以进一步了解FIH-1对肾癌细胞生长调控的机制。方法 选取人肾癌细胞株786-0及OS-RC-2,运用real-time PCR（RT-PCR）和Western blot方法检测细胞株中FIH-1、缺氧诱导因子1α（HIF- 1α）、 缺氧诱导因子2α（HIF- 2α）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平。并人工构建FIH-1过表达质粒,将其转入上述的两种细胞株中,运用RT-PCR和Western blot方法观察转染后FIH-1、HIF及VEGF的表达情况;同时运用MTT方法分析转染后两种肿瘤细胞的增殖情况。结果 RT-PCR和Western blot检测结果都显示,786-0和OS-RC-2细胞中都能检测到FIH-1和VEGF的表达;OS-RC-2细胞中同时存在HIF-1α和HIF-2α表达,而786-0细胞中只有HIF-2α的表达;786-0细胞中FIH-1表达比OS-RC-2细胞高,VEGF的表达比OS-RC-2低; 转染FIH-1过表达质粒后,OS-RC-2细胞内的FIH-1表达量明显升高,下游蛋白HIF-1α的表达量降低,VEGF的表达量也降低,而HIF-2α的表达量前后不变;在786-0细胞内的FIH-1表达量明显升高时,HIF-2α的表达量不变,VEGF的表达量也不变。在OS-RC-2细胞中,转染FIH-1过表达质粒后细胞的增殖变缓,而786-0细胞的增殖则没有明显的变化。结论 在肾癌细胞中存在FIH-1/HIF-1α/VEGF信号通路,FIH-1反向调节HIF-1α的表达,HIF-1α正向调节VEGF的表达。在HIF-1α及HIF-2α都存在时,FIH-1可通过对HIF-1α调控影响HIF-1α下游基因表达,抑制肾癌细胞的增殖。     

环氧合酶-2及其特异性抑制剂NS-398对膀胱癌细胞体外生长与侵袭能力的影响

目的 研究环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)及其特异性抑制剂NS-398在膀胱癌细胞生长和侵袭转移中的作用。方法 利用转基因技术将COX-2 cDNA基因导入低表达COX-2的膀胱癌细胞株EJ，获得高表达COX-2的永久转染细胞EJ-COX2。观察转染前后细胞生长速度的变化；在NS-398作用下，Boyden小室检测细胞的侵袭能力的改变，用RT-PCR和Western blotting检测uPA的表达变化。结果 转染COX-2的EJ-COX2细胞体外增殖能力增强；穿过人工基底膜的体外侵袭能力增强；尿激酶型纤溶酶原激活因子(Urokinase plasminogen activatoi，uPA)的表达上升；NS-398能呈剂量依赖地抑制COX-2、uPA的表达和EJ-COX2细胞的侵袭能力。结论 COX-2能促进膀胱癌细胞生长，并通过促进uPA的表达从而促进其侵袭转移的能力，NS-398能呈剂量依赖地抑制COX-2、uPA的表达和EJ-COX1细胞的侵袭能力。     

抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用

目的：筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法：采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。 结果：与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G₀-G₁期细胞比例显著增加,S和G₂-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论: 786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。     

5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞survivin、p65和bcl-2mRNA的影响

目的：研究5F对非小细肺癌NCI—H460细胞survivin、p65和bcl-2mRNA水平的影响。方法：MTT法检测5F对NCI—H460细胞的生长抑制作用;用半定量RT—PCR方法检测survivin、p65及bcl一2mRNA水平的变化。结果：5F抑制NCI—H460细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC50分别为：21．40、4．52、1．02μg·mL^-1：100μg·mL^-1。5F作用NCI—H460细胞6h后能引起survivinmRNA水平显著的降低（P〈0．05）,24h后出现增加（P〈0．05）;p65和bcl-2mRNA水平在作用3h就发生明显减少（P〈0．05）。结论：5F诱导NCI—H460细胞凋亡的机制可能是通过抑制survivin、p65和bcl-2mRNA水平来发挥作用的。     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

Effect of NS398 on inducing apoptosis and down-regulating Bcl-2 protein in human osteosarcoma cell MG-63 line

Objective： This study investigated the effect of NS398 on anti-proliferation and the mechanism of inducing apoptosis of human osteosarcoma cell MG-63 line in vitro. Methods： Growth suppression was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rates were quantified by flow cytometry （FCM）. And Bcl-2 protein level were detected by Western Blotting assay. Results： Different concentration NS398 inhibited the cell growth. Through TEM and DNA electrophoresis, the special morphological changes were observed after 24, 48 and 72 h treatment with NS398. The apoptotic rates of MG-63 cells treated with NS398 were respectively, significantly higher than that of the control group（ P 〈0.01 ）. Western blot assay showed that NS398 reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion： NS398 suppressed the proliferation of human osteosarcoma cell MG-63 line and induced apoptosis. The mechanism may be associated with down-regulation expression level of bcl-2 protein.     

微小RNA-1180转染对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾癌细胞系786-O和ACHN生长的影响.方法 肾癌细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组.实时定量(qRT)-PCR检测p21 mRNA的表达变化.Western blot检测p21、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达变化.流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,使用多靶扫描法(MTS)和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,转染miR-1180后786-O和ACHN细胞中p21 mR-NA水平分别上调2.54倍(P＜0.01)和2.49倍(P＜0.01).p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调.FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在Go/G1期.MTS结果显示,与dsControl组相比,转染miR-1180后,两种肾癌细胞活力明显降低.集落形成实验显示,miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低.结论 miR-1180能显著激活肾癌细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾癌细胞786-O和ACHN的生长.     

5-氟尿嘧啶诱导肾癌细胞凋亡对Fas/FasL途径依赖性的研究

目的 探讨Fas/FasL凋亡途径在5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的肾癌细胞凋亡中的作用.方法 运用Western blot及TUNEL、MTT技术,检测肾癌细胞株786-0在化疗药物5-FU作用下Fas、FasL的表达变化,分析5-FU、抗Fas单抗CH11、中和性抗FasL单抗NOK-2对癌细胞凋亡与增殖活性的影响.结果 Fas、FasL蛋白产物在786-0中均有表达,不同浓度5-Fu作用后,中等剂量5-FU 70μg/ml作用肾癌细胞株48 h时Fas、FasL的表达最显著;786-0在化疗药物5-FU作用下,细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡指数显著增加;抗Fas单抗CH11作用于786-0后,细胞凋亡指数显著增加,增殖活性显著降低;CH11与5-FU共同作用于786-0细胞可显著抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡;抗FasL单抗NOK-2阻断786-0 FasL与Fas相互作用后,细胞的凋亡指数及增殖活性均无显著变化.结论 5-FU诱导肾癌细胞凋亡可能不依赖于Fas/FasL凋亡途径.