SARS-CoV S蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达

目的 检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能。 方法 取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4~6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达。取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照。 结果 在上述各种组织中均检测到了ACE 2的表达。 结论 眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索。     

SARS-CoV S666蛋白与眼部ACE2受体的结合作用

目的研究SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)S666蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)的结合作用。方法构建SARS-CoV S666蛋白融合基因pS666-EGFP,并在哺乳动物细胞(293T细胞)中表达;酶联免疫吸附实验及流式细胞仪检测法进行SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞及心、肺组织的体外结合研究。结果构建了融合基因pS666-EG-FP,琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western Blot分析证明SARS-CoV pS666-EGFP融合基因构建正确,基因表达产物与理论推算值相符,相对分子量约为100.7×103。酶联免疫吸附实验结果经析因方差分析显示:S666-EGFP蛋白与角膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、结膜上皮细胞及结膜、角膜组织的结合能力比EGFP蛋白强(有统计学差异,P<0·001)。流式细胞仪检测结果显示:结膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、角膜上皮细胞与S666-EGFP蛋白结合,但与EGFP蛋白均无结合。上述细胞及组织的结合能力较vero E6细胞及心、肺组织的结合能力稍弱。结合反应能够被ACE2抗体所阻滞,证实其为特异性结合。结论SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞能够结合,对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。     

SARS-CoV S240蛋白与眼部ACE2受体作用机制的研究

目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)S240蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(ACE2)作用的机制。方法:构建SARS-CoVS蛋白融合基因pS240-EGFP,并在哺乳动物细胞中表达;半定量RT-PCR和免疫组化鉴定ACE2在结膜、角膜中的表达;酶联免疫吸附实验、流式细胞仪检测法进行SARS-CoVS240蛋白与结膜、角膜细胞的体外结合研究。结果:构建了融合基因pS240-EGFP;证实ACE2在结膜、角膜有表达;结膜、角膜细胞与SARS-CoVS240蛋白能够结合。结论:结膜、角膜中存在SARS冠状病毒的功能性受体,SARS-CoVS240蛋白与结膜、角膜细胞能够结合。本研究对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。     

新型冠状病毒受体血管紧张素转化酶2在眼组织表达及分布的研究进展

2019年以来,新型冠状病毒(2019-nCoV,也被称为SARS-CoV-2)在全世界范围内引起了数亿人感染,造成数百万人死亡,对人类健康及社会经济带来了极大的威胁。随着对SARS-CoV-2不断深入的研究,血管紧张素转化酶2(ACE2)被认为是SARS-CoV-2入侵人体的重要功能受体。ACE2在人体多个组织部位都有分布,不仅表达于肺、心血管、肾脏组织,而且也表达于眼部的结膜、角膜、葡萄膜、视网膜和视神经等组织。越来越多的研究发现SARS-CoV-2通过眼部感染的病例,然而眼部ACE2是否在SARS-CoV-2感染过程中发挥作用尚不完全明确,因此探讨ACE2在眼组织中的表达及分布,不但可以深入了解SARS-CoV-2感染的机制,也可以全面认识ACE2在眼组织的作用机制。本文综述关于ACE2在眼组织表达及分布的研究进展,期望能更好地理解ACE2在眼组织病理生理过程中的作用机制。     

NFkBp65、NOS2在去势雄兔角膜、结膜和泪腺中的表达及意义

基于免疫的炎症反应是各种类型干眼症发病的共同机制，本研究通过制作去势雄兔的干眼症模型，检测NFkBp65、NOS2在其角膜、结膜、泪腺组织的表达和意义，探讨干眼症组织破坏的发生机制。     

新型冠状病毒感染相关蛋白ACE2和TMPRSS2在人结膜组织中的表达及意义

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病毒感染相关蛋白血管紧张素转换酶2(ACE2)和跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)在人眼部结膜组织中的表达及其临床意义。方法收集2019年6月至2020年6月于西安市人民医院眼科手术切除的人体结膜组织标本50例, 包括正常结膜组织10例、结膜乳头状瘤组织15例、结膜色素痣组织15例和结膜囊肿10例, 并收集10例因外伤摘除眼球的角膜组织作为对照。采用免疫组织化学法对不同眼表组织标本中ACE2和TMPRSS2阳性表达进行定位, 并对其表达强度进行比较。结果 ACE2和TMPRSS2均表达于正常结膜上皮细胞、结膜乳头状瘤上皮细胞、结膜色素痣上皮细胞和结膜囊肿囊壁细胞中, ACE2主要表达于结膜上皮的表层细胞和中间层细胞, 在基底层细胞和杯状细胞不表达, TMPRSS2表达于全层细胞, 二者在结膜组织中的阳性表达率均为100%;ACE2和TMPRSS2在正常结膜组织、结膜乳头状瘤、结膜色素痣和结膜囊肿中的表达强度比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05);ACE2和TMPRSS2在角膜组织中均为弱阳性表达, 二者在不同结膜组织中中度阳性和...     

血管内皮生长因子及其受体在大鼠碱烧伤后角膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1在大鼠角膜碱烧伤后新生血管中的表达。方法:应用1mol/LNaOH制作大鼠碱烧伤新生血管模型,随机分为3组,分别于1,4,7及14d处死大鼠取出角膜,免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测大鼠角膜中的VEGF及其受体Flk-1的表达。结果:正常大鼠角膜中VEGF及Flk-1受体弱表达或不表达。二者均在角膜上皮层,基质层、内皮层及新生血管内皮细胞表达;大鼠角膜碱烧伤后各时间点VEGFmRNA和Flk-1mRNA相对表达量具有相关性。结论:大鼠角膜碱烧伤后,VEGF及其受体Flk-1结合诱导内皮细胞分化及角膜新生血管形成。     

抗凋亡基因bcl-2蛋白在葡萄膜与结膜黑色素瘤中的表达及其意义

目的：评价抗凋亡基因bcl—2(β cell lymphoma/1eukemia—2)蛋白过量表达在葡萄膜与结膜黑色素瘤发生发展过程中的意义。 方法：应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)及细胞免疫荧光染色技术对40例葡萄膜恶性黑色素瘤(uveal malignant melanoma,UMM)、5例结膜色素痣(conjunctival nevus,CN)及7例结膜恶性黑色素瘤(conjunctival malignant melanoma,CMM)的bcl-2蛋白表达进行定量检测。 结果：CMM较CN的bcl—2蛋白表达量明显增加(P<0.05);CMM及UMM的bcl—2蛋白表达阳性率分别为85.71%及72.50%;UMM的bcl-2蛋白表达与病理类型、巩膜受侵、睫状体受累、肿瘤大小均不相关(P>0.05)。 结论：bcl—2蛋白可能通过抑制细胞凋亡(apoptosls)过程而参加CMM与UMM的发生;bcl-2表达量可能有助于CN与CMM的鉴别诊断,但在UMM病理恶性程度评估上的价值不大。 （中华眼底病杂志,1997,13：73-74）     

上皮性钙黏附蛋白在人角膜上皮中的表达研究

目的 研究上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）在人角膜上皮中的分布。方法低钙培养基培养人角膜缘干细胞．并取人角膜中央上皮及角膜边缘上皮组织，分别使用免疫组织化学及免疫细胞化学方法检测E-cadherin在人角膜中央上皮、角膜边缘上皮及低钙培养的人角膜缘干细胞中的分布情况。结果E-cadherin在角膜边缘上皮全层细胞即处于分化阶段的短暂扩充细胞中大量表达，在抑制干细胞分化、促进增殖的低钙培养的人角膜缘干细胞中表达减少，在终末分化细胞即角膜中央上皮细胞中没有表达。结论E-cadherin在处于分化阶段的角膜上皮细胞中有大量的表达。     

定量测定DNA含量在角膜结膜上皮性肿瘤诊断中的意义

目的测定角膜结膜上皮性肿瘤中的DNA含量,并分析其在角膜结膜上皮性肿瘤诊断及鉴别诊断中的意义。方法用流式细胞术测定30例角膜结膜上皮性肿瘤石蜡标本(乳头状瘤10例、非典型增生8例、鳞状上皮癌12例)的DNA含量。结果乳头状瘤,非典型增生和鳞状细胞癌的DNA指数(DI)均值分别为1.01,1.38和1.75;其DNA异倍体率均值分别为10%,37.5%和91.7%;其S期百分比(SPF)均值分别为13.87%,24.18%和33.97%。在不同病变中,其DI值,DNA异倍体率及SPF均有统计学显著性差异(P<0.05)。结论应用流式细胞术进行DNA定量分析,对提高角膜结膜上皮性肿瘤的早期诊断率有一定的意义。     

OCT对急性闭角型青光眼治疗前后角结膜结构的改变

目的：利用光学相干光断层扫描技术(optical coherence tomography,OCT)观察急性闭角型青光眼治疗前后角膜和结膜厚度及形态的变化。

方法：收集急性闭角型青光眼患者25例,对初诊、治疗第1、2、3d的眼压与角膜结膜特征对比分析。

结果：急性闭角型青光眼发作时角膜上皮厚度、全层厚度分别为72.76±11.95、589.40±66.91μm; 结膜上皮层厚度、结膜固有层厚度和结膜全层厚度为58.88±12.87、299.76±94.86、358.64±102.55μm; 治疗第1d角膜上皮厚度、全层厚度分别为69.28±12.65、579.04±67.88μm; 结膜上皮层厚度、结膜固有层厚度和结膜全层厚度为57.04±12.05、282.44±91.47、339.48±100.28μm; 治疗第2d角膜上皮厚度、全层厚度分别为66.76±11.42、563.32±63.87μm; 结膜上皮层厚度、结膜固有层厚度和结膜全层厚度为54.76±11.01、267.00±98.54、322.16±106.12μm; 治疗第3d角膜上皮厚度、全层厚度分别为65.16±12.25、550.36±71.48μm; 结膜上皮层厚度、结膜固有层厚度和结膜全层厚度为53.36±10.29、252.76±99.32、306.52±107.31μm; 治疗前、治疗第1、2、3d时4个测量时间点的眼压、角膜上皮厚度、角膜全层厚度、结膜上皮厚度、结膜固有层厚度和结膜全层厚度差异都有统计学意义(P<0.05)。

结论：青光眼急性发作时角膜结膜水肿厚度增加,并随眼压的降低而变薄。     

Expression of interleukin-1 receptor antagonist in human cornea

The purpose of this study was to confirm the expression of interleukin-1 receptor antagonist (IL-1 Ra) in the human cornea. Four samples of human ex vivo corneal epithelium were obtained from patients undergoing photorefractive keratectomy. RT-PCR was performed using mRNA isolated from the corneal epithelium and oligo-dT primers. PCR was performed on the cDNA products using primers specific for human IL-1 Ra. The PCR products were subcloned and sequenced. Human cornea sections were prepared from eyes enucleated for choroidal melanoma. Immunocytochemistry was performed using goat anti-mouse polyclonal IL-1 Ra IgG and NL-577 conjugated donkey anti-goat IgG. IL-1 Ra mRNA was expressed in all ex vivo corneal epithelium samples as confirmed by sequencing of the PCR products. Immunofluorescence studies revealed strongest expression of IL-1 Ra in the superficial apical layer of corneal epithelium. Expression of IL-1 Ra may represent an endogenous mechanism of down-regulating the effects of epithelial- and tear-derived IL-1α and IL-1β on the intact epithelium in the unwounded cornea and stromal cells after injury.     

Expression of the interleukin 1 receptor antagonist in the normal human cornea

The human cornea has been shown to express a number of inflammatory cytokines including IL-1, IL-6 and IL-8. In view of the potent proinflammatory activities of interleukin-1 (IL-1), regulatory mechanisms should be present in the human cornea to control IL-1 mediated inflammatory and immune responses. This is important for the maintenance of the integrity and transparency of the cornea. To test this hypothesis, the authors determined the presence of IL-1 receptor antagonist (IL-tra) in the normal human cornea using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IL-tra is a natural antagonist of IL-1 and competes with IL-1 for the binding to its receptors thereby blocking the inflammatory response. Corneas were either tested immediately or after a 24-hour culture period. Furthermore, the authors separately analyzed the three layers of the cornea. Their results present evidence for the constitutive expression of the IL-tra protein in the normal human cornea and show that both epithelial and stromal cells produce IL-1ra. The epithelial cells are the major source of corneal IL-1ra immunoreactivity, and secrete IL-1ra during culture. Stromal cells contain detectable, albeit low amounts of cell associated IL-1ra. No IL-1ra was detected in the endothelial cell layer. A more accurate understanding of the balance between IL-1 and IL-1ra in ocular tissues and the role of the IL-1ra under physiologie and pathophysiologic conditions will be necessary for an eventual use of IL-1 receptor antagonist as a therapeutical tool