地塞米松对高氧肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察地塞米松对高氧暴露大鼠肺组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)表达的影响,探讨地塞米松治疗高氧肺损伤的作用机制。方法 2周龄Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组(各16只)。高氧暴露7 d后,取两组大鼠各8只检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量和肺湿/干重比(W/D),并观察肺组织病理学改变。余16只大鼠行肺组织培养,空气组8只作为空气对照组,高氧组8只各设高氧对照组,高氧 地塞米松1×10-8、1×10-6和1×10-4mol/L组,培养24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达。结果①与空气组相比,高氧组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润;BALF中蛋白含量、W/D明显增高。②高氧对照组MMPs、TIMPs mRNA表达和MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值较空气对照组明显增高。③地塞米松能剂量依赖性下调MMP-2、MMP-9 mRNA表达;对TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达有一定程度的抑制效应;随地塞米松浓度的增加,MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值亦逐渐降低。结论 地塞米松下调MMPs mRNA表达,调节MMPs/TIMPs之间的失衡,可能是其减轻高氧肺损伤的机制之一。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-2与足月及早产新生大鼠高氧肺损伤的关系

目的 探讨高浓度氧对足月及早产新生大鼠肺发育的影响及高氧肺损伤与胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的关系.方法 将孕22 d自然出生(足月)及孕21 d行剖宫术提前娩出(早产)的新生大鼠在生后2 d随机分为足月空气组(I组)、足月高氧组(Ⅱ组)、早产空气组(Ⅲ组)、早产高氧组(Ⅳ组).Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于氧含量为85%的氧箱中,I、Ⅲ组置于同室空气中.每日记录大鼠存活率,分别于出生后4、7、10、14和21 d活杀取肺组织标本,作病理学检查、辐射状肺泡计数(RAC).用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定IGFBP-2肺表达浓度及mRNA表达.结果 高氧组自出生7 d后大鼠存活率较空气组显著下降(P均0.05).空气组肺组织无炎症病变;高氧组出生7 d和14 d时呈肺泡炎改变,21 d时肺泡炎改变明显加重,且肺泡生成受阻滞,肺泡结构囊泡化;Ⅱ、Ⅳ组各时间点RAC值较相应I、Ⅲ组显著减少(P均<0.01).高氧Ⅱ、Ⅳ组出生4 d和14 d IGFBP-2表达强度均较对应的I、Ⅲ组增强(P均<0.01);IGFBP-2 mRNA表达变化与其肽浓度变化相似.结论 长期高氧暴露可引起足月和早产新生大鼠亚急性肺损伤和肺发育阻滞,IGFBP-2异常表达;这可能是高氧导致亚急性肺损伤及肺发育阻滞的重要机制之一.     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及降钙素基因相关肽的保护作用

目的 观察高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用.方法 将原代分离培养的孕19 d早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,实验随机分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP受体拮抗剂组在高氧CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37).培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA表达.结果 与空气组比较,高氧组ROS、MDA水平及细胞凋亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均显著降低(P均<0.01).与高氧组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞凋亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均明显增高(P均<0.01).高氧CGRP受体拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 暴露于60%氧24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SPC mRNA表达下降;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SPC mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

不同时间高氧下小鼠肺组织中Bruton酪氨酸激酶的变化及意义

目的观察不同时间段高氧对小鼠肺组织中Bruton酪氨酸激酶(Btk)表达及活化的影响,初步探讨Btk在高氧所致急性肺损伤(HALI)中的作用机制。方法雄性昆明小鼠60只,建立高氧肺损伤模型(FIO2≥95%),随机分为五组:空气对照组、高氧暴露1 d组(H1 d组)、高氧暴露2 d组(H2 d组)、高氧暴露3 d组(H3 d组)和高氧暴露7 d组(H7 d组)。光镜下观察各组肺组织病理学改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)的总蛋白含量(TP)和肺湿/干重比值(W/D),应用Western blot检测各组Btk、p-Btk表达变化,并对以上数据进行统计学分析。结果随着高氧暴露时间的延长,肺组织病理程度、W/D比值和TP含量均逐渐增加,与对照组相较,H2 d组、H3 d组与H7 d组差异有统计学意义(P<0.05),而对照组与H1 d组各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高氧暴露各组中Btk和p-Btk的表达量与肺病理损伤程度呈时间依赖性,H2 d组、H3 d组与H7 d组的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),但H3 d组与H7 d组肺组织Btk和p-Btk表达差异无显著性(P>0.05)。结论随着高氧暴露的延长,小鼠肺损伤程度进行性加重,其病理形成可能与Btk的表达活化相关,并且主要在肺组织氧化损伤的早期阶段发挥作用。     

早产鼠高氧肺损伤中肺表面活性物质的代谢变化

目的：探讨早产鼠高氧肺损伤对其肺表面活性物质蛋白（SP）基因表达及肺表面活性物质（PS）代谢的影响。方法：孕21日SD早产鼠仔96只被随机分为高氧暴露组（48只,常压高氧舱中,氧体积分数＞0．95）和空气对照组（48只,正常空气中）,高氧暴露7日后,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）和双相薄层层析法（2D－TLC）观察了8只鼠肺SP mRNA水平和PS含量;对20只鼠肺支气管肺泡灌洗液（BALF）肺组织干重／湿重和10只鼠肺组织学变化也进行了分析。结果：与空气对照组比较,高氧暴露组发展为肺损伤,肺组织有明显水肿、出血;BALF中蛋白含量、细胞数和肺组织干重／湿重明显增加（P均＜0．05）,而PS含量未见明显变化（P均＞0．05）。SP－A mRNA和SP－BmRNA增加（P均＜0．05）,SP－C mRNA变化未达统计学意义（P＞0．05）。结论：早产鼠早期高氧肺损伤并不明显影响PS含量的变化,但可导致SP－A mRNA和SP－B mRNA增加,这种基因表达的向上调节可能是机体的一种保护性应激反应。     

α-平滑肌肌动蛋白在高氧肺损伤中的表达变化及意义

目的 探讨高氧暴露下大鼠肺损伤中肌成纤维细胞表面标志α-平滑肌肌动蛋白(α -SMA)的表达变化及意义.方法 将64只3周龄SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(置于空气中,吸入氧浓度0.21)和高氧暴露组(置于玻璃氧舱中,95％氧),每组于高氧暴露1、7、14、21d随机处死8只大鼠.苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变,免疫组化法观察α -SMA在肺组织中的表达与分布,蛋白质免疫印迹法( Western blotting)检测肺组织α-SMA表达.结果 HE染色发现,早期高氧肺损伤时肺组织以炎症水肿表现为主,后期则以间质纤维增生为主.免疫组化结果显示,正常对照组α -SMA在细支气管上皮、肺泡表面及肺泡间隔上表达极为微弱;高氧暴露后随时间的延长α-SMA在肺泡表面及肺泡间隔上表达逐渐增强,以21d时最为明显.Western blotting检测发现,与正常对照组相比,高氧暴露1d、7d时肺组织α-SMA表达无明显差异(1.02±0.12比1.00±0.13,1.05±0.14比0.99±0.12,均P＞0.05),高氧暴露14d、21d时α-SMA表达明显增强(1.27±0.21比1.05±0.15,2.26±0.28比1.05±0.14,P＜0.05和P＜0.01).结论 大鼠高氧暴露后随时间延长,α-SMA在肺组织中的表达逐渐升高,肺纤维化逐渐加重,说明肌成纤维细胞在肺组织纤维化重构过程中起重要作用.     

外源性TSG-6干预对支气管肺发育不良新生大鼠高氧肺损伤的保护作用及相关机制

目的 探讨外源性肿瘤坏死因子刺激蛋白6(TSG-6)干预对支气管肺发育不良新生大鼠高氧肺损伤的保护作用,并分析其机制。方法 将80只新生大鼠按照随机数字表法分为4组,分别为空气对照组、高氧肺损伤模型组、TSG-6预防组和TSG-6治疗组,每组各20只。空气对照组不建模,其他3组通过吸高氧建立高氧肺损伤新生大鼠模型。其中,高氧肺损伤模型组置于高氧箱内持续吸高氧14 d; TSG-6预防组在置于高氧箱前2 h实施气管内注入TSG-6剂量0.25μg/g TSG-6,然后进行高氧肺损伤吸氧; TSG-6治疗组进行高氧肺损伤吸氧,在吸高氧第5天开始在气管内注入剂量0.25μg/g TSG-6,直至14 d。分别于干预后7 d和14 d,苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理学情况并进行放射状肺泡计数(RAC),酶联免疫吸附试验试剂盒检测大鼠肺组织中TSG-6、血管内皮生长因子(VEGF)和血清白细胞介素6(IL-6)水平,脂质过氧化丙二醛试剂盒检测血清丙二醛含量,总超氧化物歧化酶(SOD)活性试剂盒检测各血清SOD活性。结果 干预7～14 d后,相较于高氧肺损伤组,TSG-6预防组和治疗组支气...     

不同压力高压氧对实验性脑出血大鼠出血灶周围水肿及水通道蛋白4表达的影响

目的:观察不同压力高压氧对实验性脑出血大鼠出血灶周围水肿及水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法:应用胶原酶诱导法建立大鼠脑出血模型,将90只雄性脑出血SD大鼠随机分为对照组(18只)、常压氧(1.0ATA)治疗组(18只)和高压氧治疗组(54只),高压氧治疗组再按不同的高压氧治疗压力分为1.8ATA组、2.0ATA组、2.2 ATA组3个亚组,每组18只,按不同治疗压力1次/d,对照组为脑出血模型组,不进行HBO/常压氧治疗,各组分别于第1、3、5天断头取脑,每个时间点各6只.干湿比重法测定脑组织的水含量,免疫组织化学染色法测定AQP4的表达.结果:脑组织水含量:①常压氧治疗组较脑出血对照组减少,于各时间点比较差异均无显著性意义(P＞0.05);②高压氧治疗各组较常压氧组及对照组水肿减轻明显,于第1天时2.0ATA组与常压氧组及对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);于第3、5天时高压氧治疗各组与常压氧组及对照组比较均有显著性意义(P＜0.05),但2.0ATA组较1.8ATA组及2.2ATA组减轻明显(P＜0.05). AQP4表达:①常压氧治疗组较脑出血对照组表达减少,但于各时间点比较差异均无显著性意义(P＞0.05);②高压氧治疗各组较常压氧治疗组及脑出血对照组表达减少,于各时间点比较均有显著性意义(P＜0.05),但于3d、5d时2.0ATA组较1.8ATA组及2.2ATA组表达减少更明显(P＜0.05).结论:HBO治疗可减少出血灶周围脑组织水含量及AQP4表达,其中2.0ATA治疗压力优于1.8ATA及2.2ATA.     

雌激素对海水淹溺型肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白表达影响的研究

目的 观察雌激素对海水淹溺型肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白表达的影响.方法 90只健康雄性SD大鼠随机分为三组,即对照组、海水淹溺组及雌激素治疗组.海水淹溺组用气管吸入海水法建立模型;对照组除不吸入海水外,其他处理同海水淹溺组;雌激素治疗组在海水吸入后30 min给予腹腔注射17β-雌二醇5 mg/kg.分别于海水致肺损伤后1、2、4 h时间点取大鼠颈动脉血做血气分析观察动脉血氧分压(PaO2)的变化,测肺组织湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理变化情况,采用RT - PCR方法检测AQPs mRNA的表达.结果 成功复制了大鼠海水淹溺型肺损伤模型:海水淹溺组在吸入海水后PaO2显著下降,各时间点PaO2显著低于对照组.雌激素治疗组PaO2显著上升,各时间点均高于海水淹溺组.海水淹溺组W/D比值显著高于正常对照组及雌激素治疗组.光镜下可见海水淹溺组肺组织有灶性出血,肺泡腔内渗出增多、少量中性粒细胞浸润和肺泡间质稍有增厚;对照组未见明显病理变化;雌激素治疗组肺组织充血、水肿有所减轻.海水淹溺组肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达高于对照组,AQP3 mRNA及AQP4 mRNA无明显变化;雌激素治疗组AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达减少.结论 吸入海水可引起大鼠肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达增加,但对AQP3 mRNA及AQP4 mRNA表达无明显影响.雌激素通过抑制海水吸入引起的大鼠肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达上调,影响大鼠海水淹溺型肺损伤时肺组织水的转运.     

基质金属蛋白酶-2/9及其组织抑制剂比例失衡在高氧所致急性肺损伤中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)及其组织抑制剂(TIMP-1/2)在高氧所致急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用.方法 将54只小鼠置于含体积分数大于98%氧气的密闭室中,以18只呼吸正常空气的小鼠作为对照组.分别于暴露24、48和72 h活杀各组小鼠,取肺组织标本,测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量及胸腔积液,以评价肺损伤程度.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织MMP-2/9和TIMP-1/2的mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中MMP-2/9及TIMP1/2的蛋白含量.结果 高氧能引起ALI,各实验组的肺W/D比值、BALF中蛋白浓度及胸腔积液均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).RT-PCR结果显示,高氧组肺组织MMP-2/9及TIMP-1的mRNA表达均较对照组明显增高(P<0.05或P<0.01),TIMP-2 mRNA表达无明显变化;MMP-2/TIMP-2的mRNA比值在高氧组中均明显升高(P均<0.01).ELISA结果显示,高氧组BALF中MMP-2/9和TIMP-1蛋白含量较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而TIMP-2蛋白含量同样无明显变化;MMP-2/TIMP-2的蛋白比值在高氧组中也明显升高(P均<0.01).结论 高氧能引起ALI伴MMP-2/9和TIMP-1的表达增高,而MMP-2/TIMP-2平衡失调导致细胞外基质降解在其发生过程中起重要作用.     

高浓度氧对未成年大鼠肺部炎症反应的影响

目的 探讨高浓度氧对未成年大鼠肺部炎症反应的影响.方法 将40只出生21 d的SD大鼠按随机数字表法分为空气对照组及高氧暴露12、24、48、72 h组,每组8只,分别将大鼠置于空气和常压高氧箱(氧含量达92%～94%)中.于相应时间点采用放血法处死大鼠后取肺组织,并行支气管肺泡灌洗.采用硫代巴比妥酸法和比色法分别测定肺组织丙二醛(MDA)含量及髓过氧化物酶(MPO)活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-10含量;观察肺组织病理改变,并进行肺损伤评分.结果 与空气对照组比较,高氧暴露12 h肺组织MDA含量(mmol/g)即显著升高(2.24±0.43比1.57±0.31),MPO活性(U/g)于高氧暴露24 h显著升高(1.24±0.25比0.69±0.22),并均随高氧暴露时间延长逐渐增加(P<0.05或P<0.01).BALF中TNF-α、IL-6和IL-10含量于高氧暴露24 h时较空气对照组显著增加[TNF-α(ng/L):135.2±44.0比94.5±22.3,IL-6(ng/L):73.1±14.2比55.7±17.3,IL-10(ng/L):67.9±21.7比48.2±7.6,P<0.05或P<0.01];但高氧暴露48 h时较24 h时显著降低(48 h时BALF中TNF-α、IL-6、IL-10分别为105.4±17.0,54.3±17.4,50.9±6.9,均P<0.05).高氧暴露12 h时肺损伤评分(分)即较空气对照组显著升高(4.5±1.4比1.3±0.5),并随高氧暴露时间延长进一步升高(P<0.05或P<0.01).结论 高浓度氧可引起未成年大鼠肺部炎症损伤;炎症细胞因子的出现高峰均在高氧暴露24 h.     

高氧致大鼠急性肺损伤Toll样受体2和4的变化及意义

目的 探讨Toll样受体(TLRs)在高氧致急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用.方法 将32只SD大鼠按随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露24、48、72 h组,每组8只.分别于相应时间点活杀8只大鼠,取肺组织标本,测定肺湿/干重(W/D)比值并行肺组织病理评分,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织TLR2和TLR4的mRNA表达,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定肺组织TLR2和TLR4的蛋白表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)含量.结果 各高氧暴露组肺W/D比值均较空气对照组明显增高(P均<0.01).高氧暴露48 h、72 h肺组织病理评分[(2.69±0.53)分,(3.94±0.62)分]均明显高于空气对照组[(0.41±0.38)分,P均<0.01].RT-PCR结果显示,高氧暴露组肺组织TLR2和TLR4 mRNA表达均明显高于空气对照组(0.67±0.15和0.63±0.19),并均于24 h达高峰(1.82±0.33,1.35±0.26,P均<0.05).Western blotting结果显示,高氧暴露组TLR2和TLR4蛋白表达均较空气对照组[(7.20±0.51)%和(14.26±0.19)%]明显增高,分别于48 h、72 h达峰值[(28.12±0.24)%,(81.35±0.82)%,P均<0.05].ELISA结果显示,高氧暴露组肺组织匀浆IL-6含量较空气对照组[(639.38±95.24)pg/L]明显增高,于72 h达高峰[(1 300.58±442.24)pg/L,P<0.05].结论 在高氧引起的ALI中,TLR2和TLR4在肺组织炎症启动和维持中起重要作用.     

N-乙酰半胱氨酸对高氧肺损伤保护机制与p38丝裂素活化蛋白激酶途径的相关性研究

目的 观察p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在高氧肺损伤中的表达,探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧肺损伤中的保护作用及机制.方法 将30只幼年Wistar大鼠按随机数字表法分为空气对照组(A组)、高氧暴露组(B组)、高氧+NAC干预组(C组)、高氧+p38MAPK特异性抑制剂(SB203580)干预组(D组)、高氧+NAC+SB203580联合干预组(E组),每组6只.实验7 d后,光镜下观察肺组织病理改变,并行肺损伤评分;测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量、肺通透系数;采用免疫组化法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在肺组织中的分布;用蛋白质免疫印迹法检测p-p38MAPK蛋白含量.结果 与A组比较,高氧各组均有不同程度的肺损伤,但药物干预各组(C、D、E组)肺损伤均较B组有所减轻.免疫组化显示,高氧各组p-p38MAPK阳性表达较A组明显增强,尤高表达在炎性浸润细胞;药物干预后(C、D、E组)p-p38MAPK阳性细胞较B组明显减少.蛋白质免疫印迹法显示,B组p-p38MAPK蛋白含量明显高于A组(0.20±0.03比0.11±0.01,P<0.05);干预后C、D、E组p-p38MAPK蛋白含量低于B组(0.16±0.02、0.15±0.01、0.14±0.02比0.20±0.03,均P<0.05),但仍高于A组(均P<0.05),而C、D、E组间则无明显差异.各组肺W/D比值、BALF中TP含量、肺通透系数改变与p-p38MAPK蛋白含量变化趋势一致.结论 高氧应激可激活损伤肺组织p38MAPK活性;NAC抗氧化肺保护作用机制可能是通过下调高氧诱导p38MAPK的激活而对肺损伤起保护作用.     

富氢生理盐水对新生SD大鼠高氧肺损伤白介素-8含量及病理的影响

目的观察富氢生理盐水对新生SD大鼠高氧肺损伤的预防作用。 方法将新生SD大鼠随机分为3组,空气对照组、高氧对照组、高氧＋氢水组。高氧对照组、高氧＋氢水组大鼠置于氧浓度为90%~95%的氧气箱中,高氧＋氢水组每日腹腔注射富氢生理盐水2次（10 ml/kg）,空气对照组、高氧对照组每日腹腔注射生理盐水2次（10 ml/kg）,高氧暴露后第1、3、7、10天分别测量各组白介素（IL）-8水平,并观察肺部病理切片。 结果与空气对照组对比,高氧对照组IL-8含量明显升高,且肺部病理切片出现肺出血、肺泡间隔变薄,并出现大量肺泡融合现象;与高氧对照组比较,高氧+氢水组IL-8含量明显降低,病理图示肺出血、肺泡融合明显减少。 结论富氢生理盐水可一定程度减轻高氧对新生SD大鼠的肺部炎症损伤。     

不同时程电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障水通道蛋白-4及紧密连接蛋白-5的影响

目的观察不同时程电针（取穴百会、水沟）预处理对继发脑缺血再灌注大鼠血脑屏障水通道蛋白-4（AQP4）及紧密连接蛋白-5（CLN5）表达的影响。 方法采用随机数字表法将64只雄性SD大鼠分为模型组、假手术组、电针预处理7d组及电针预处理15d组,电针预处理7d组及电针预处理15d组分别给予持续7d、15d的电针（取穴百会、水沟）预处理。待上述预处理结束后,参照Longa改良线栓法将模型组、电针预处理7d组及电针预处理15d组大鼠制成单侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,假手术组大鼠术中仅分离颈总动脉,不栓塞中动脉血流。各组大鼠于大脑中动脉栓塞90min后进行再灌注。于制模24h后采用免疫组化法、荧光定量PCR法检测各组大鼠血脑屏障AQP4、CLN5阳性细胞及其mRNA表达情况。 结果与假手术组比较,模型组及各电针预处理组大鼠血脑屏障AQP4阳性细胞及其mRNA表达均明显上调（P<0.05）,CLN5阳性细胞及其mRNA表达均明显下调（P<0.05）;与模型组比较,电针预处理7d组及15d组AQP4阳性细胞及其mRNA表达均明显下调（P<0.05）,CLN5阳性细胞及其mRNA表达均明显上调（P<0.05）;与电针预处理7d组比较,电针预处理15d组AQP4阳性细胞数［(25.15±0.55)个/每高倍镜视野］及其mRNA表达（1.16±0.04）下调幅度、CLN5阳性细胞数［(62.88±0.61)个/每高倍镜视野］及其mRNA表达（0.80±0.03）上调幅度均更显著（P<0.05）。 结论不同时程电针（取穴百会、水沟）预处理可抑制脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP4阳性细胞及其mRNA表达,促进CLN5阳性细胞及其mRNA表达;以电针预处理15d对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用相对较好;电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受可能与调节脑缺血再灌后血脑屏障AQP4、CLN5及其mRNA表达有关。     

TGF-β1、siRNA对BPD模型鼠肺损伤的干预研究

目的 探讨核糖核酸（RNA）干扰在支气管肺发育不良（BPD）模型鼠干预治疗中的作用及相关机制。方法体外化学合成转化生长因子-β1（TGF—β1）序列特异性双链小干扰RNA（siRNA）,在高氧（≥95％,7d）诱导下体内导入新生SD大鼠,应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术和酶联免疫吸附法（ELISA）技术测定干预前后肺组织TGF—β1信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色对照观察干预前后肺组织形态结构变化。结果干预后TGF—β1mRNA和蛋白表达水平降低。高氧干预组肺组织病理形态分析,与正常组相比较,高氧组干预后较未干预组明显好转,肺泡大小变得较为均一,肺间隔开始增厚,肺泡数增多。结论体外合成的siRNA可有效抑制高氧肺组织中TGF—β1基因的高表达,减轻高氧所致肺泡化阻滞。     

间质胶原酶在高氧所致急性肺损伤中的表达

目的 研究间质胶原酶(interstitial collagenase)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用,探讨急性肺损伤的发病机理.方法 将72只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、高氧24 h组、高氧48 h组、高氧72 h组,每组18只;正常对照小鼠呼吸室内空气,高氧小鼠置于密闭的氧气室(氧浓度＞95%).评价肺损伤程度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法测定肺组织间质胶原酶的表达及组织分布.统计分析采用单因素方差分析和q检验.结果 高氧能引起急性肺损伤;RT-PCR结果显示肺组织间质胶原酶mRNA表达量在暴露于高氧24 h后达(0.59±0.13)较对照组(0.07±0.01)明显增加(q≥3.15,P＜0.01),72 h达最高(0.68±0.12,q=3.78,P＜0.01);免疫组织化学研究显示间质胶原酶蛋白主要表达于气道上皮细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和血管平滑肌细胞的胞浆中;间质胶原酶蛋白在气道上皮细胞的表达在高氧环境下24 h达(28.54±9.60)较对照组(13.48±4.32)明显升高(q≥2.62,P＜0.05),于48、72 h表达逐渐降低,分别为(20.32±5.68)和(15.24±4.65).结论 高氧能引起急性肺损伤伴间质胶原酶的表达增高,它们通过降解细胞外基质在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.