结核分枝杆菌药敏试验方法改进的探讨

目的 探讨改进结核分枝杆菌药敏试验方法。方法 以ＢＡＣＴＥＣ法７Ｈ１２Ｂ液体培基分离５０例临床结核分枝杆菌菌株，经不同稀释后，直接接种于改良罗氏药敏培基上，与ＢＡＣＴＥＣ法药敏结果对比，观察其耐药性。结果 １．７Ｈ１２Ｂ液体培基中结核分枝杆菌菌液ＧＩ值５００～９００时，１ｍｌ相当于１ｍｇ结核分枝杆菌湿重的活菌（菌数１０＾６～７）。２．取７Ｈ１２Ｂ液体培基的菌液直接接种于罗氏药敏培养基，其耐药结果与     

442株结核分枝杆菌药敏试验结果分析

结核病是当今全球范围对人类最具威胁性的感染性疾病之一 ,是传染性疾病中死亡率最高的疾病 ,全球约有三分之一人口 (约 2 0亿 )感染了结核分枝杆菌。尤其是耐多药结核病(MDR- TB)的出现 ,使全球约三分之二的结核患者处于耐多药危险中。为了解我院的 MDR- TB流行情况 ,现将 2 0 0 2年结核分支杆菌临床分离株药敏试验结果进行分析。1　材料和方法1.1　菌株　以本院全年临床痰标本分离出的结核分枝杆菌菌株作为试验对象 ,共 4 4 2株。1.2　培养基的制备　 1药物敏感性测定所用对照和基础培养基为新改良罗氏培养基 ,配方和制备方法按《结…     

耐利福平结核分枝杆菌30株对利福喷丁的药敏试验

利福喷丁 (RFT)为利福平 (RFP)的环戊衍生物 ,又名环戊基哌嗪利福霉素 ,理论上与利福平有交叉耐药。我们对 30例株耐利福平结核分枝杆菌进行利福喷丁药敏试验 ,结果如下。1.菌株来源30株结核分枝杆菌菌株由本院细菌室提供 ,取自 2 0 0 0年1月至 2 0 0 1年 3月 30例患者痰标本 ,经改良罗氏培养基培养阳性为耐利福平菌株 ,鉴定为人型结核分枝杆菌 ,其耐药浓度为目前国家暂行规定的 5 0 ug～ 2 5 0 ug/ ml[1 ] 。30例患者在治疗期中 ,均有 RFP用药史 ,用药时间 3个月至 1年。但无 RFT用药史。2 .材料与方法(1)该试验用 RFP及 RFT均为原…     

利福平和异烟肼结核分枝杆菌药敏表型和基因型的关系

目的 对利福平（RFP）和异烟肼（INH）进行药敏检测,分析相应的结核分枝杆菌药敏表型与基因型的关系。 方法 对2009年至2012年深圳市第三人民医院结核病门诊和住院的137例结核病患者晨痰标本进行结核分枝杆菌培养,利用膜基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因的突变情况（基因型检测）,同时以绝对浓度法进行异烟肼和利福平药敏试验（表型检测）,计算两种方法检测结果间的符合率,验证膜基因芯片方法的准确性,用Kappa检验分析两种方法的一致性。 结果137株结核分枝杆菌标本,表型检测利福平和异烟肼耐药率分别为27.01%（37/137）和22.63%（31/137）;基因型检测利福平和异烟肼耐药率分别为26.28%（36/137）和23.36%（32/137）;以绝对浓度法药敏结果为金标准,膜基因芯片检测利福平耐药的敏感度为83.78%(31/37),特异度为94.06%(95/101),符合率为91.97% (126/137),Kappa值为0.79,P<0.05;异烟肼耐药的敏感度为80.65%(25/31),特异度为94.29%（99/105）,符合率为90.51%(124/137),Kappa值为0.73,P<0.05;两种药物药敏结果总符合率为91.24%(250/274)。 结论 结核分枝杆菌耐药性基因型检测和表型检测结果高度一致,且基因型的检测方法能快速准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,有望在临床治疗中广泛应用。     

手工MGIT法检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药的效果评价

目的 评价MGIT手工荧光判读法在检测结核分枝杆菌耐药的基层应用价值。方法 以常规L-J比例法为参照方法,比较分析手工荧光MGIT液体药敏法检测300株临床结核分离株异烟肼和利福平药敏效果。结果 手工MGIT液体药敏法检测异烟肼和利福平灵敏度和特异度分别为94.7%和92.6%、95.6%和98.8%。两种药敏方法的异烟肼符合率95.7%,利福平符合率97.7%,两种方法检测异烟肼和利福平敏感性的差异无统计学意义(P>0.05)。液体药敏阳性报告时间平均7.6 d,比传统比例法报告时间提前20.4 d。结论 手工MGIT液体药敏法与常规L-J比例法检测异烟肼和利福平敏感性结果一致性高,能快速、准确检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药,适合基层推广。     

结核分枝杆菌126株药敏结果分析

在日常工作中．我们发现有些结核分枝杆菌有药物依赖现象．尤其是耐多药菌．其菌落生长旺盛程度和数量．往往是高浓度药物培养基大于(或等于)低浓度药物培养基以及大于(等于)对照组培养基。为此特进行试验研究．以分析结核分枝菌依赖抗结核药物的发生率及特点。     

BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌直接药敏试验的研究

目的探讨BACTEC MGIT 960系统在结核分枝杆菌直接药敏试验的临床应用价值。方法对200株临床涂阳痰标本应用BACTEC MGIT 960系统进行一线抗结核药（链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇）结核分枝杆菌直接药敏试验,并与同步进行的BACTEC MGIT 960间接药敏试验及传统改良罗氏（L-J）比例法药敏试验进行比较,从结果报告时间和符合率等方面进行评价。统计学分析分别采用配对资料的t检验和Kappa检验。结果 BACTEC MGIT960直接药敏试验报告时间为（9.7±3.1）d,与BACTEC MGIT 960间接药敏试验报告时间（17.5±6.6）d比较差异有统计学意义（t=14.7,P〈0.01）,与L-J法报告时间（50.4±8.6）d比较差异有统计学意义（t=73.4,P〈0.01）;4种一线抗结核药物链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏BACTEC MGIT 960直接法与BACTEC MGIT 960间接法药敏结果总符合率为97.3%,BACTEC MGIT 960直接法与L-J法药敏结果总符合率为96.2%。结论 BACTEC MGIT 960直接药敏试验快速、准确,可用于结核分枝杆菌的药物敏感性检测,利于耐药结核病的早期诊断和治疗。     

安徽省420株结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物药敏结果分析

目的研究并分析安徽地区420例结核分枝杆菌对一线、二线抗结核药物菌耐药情况,为结核病临床治疗和结核病控制提供科学依据。方法采用绝对浓度法对420例结核分枝杆菌临床分离株进行一线、二线抗结核药物敏感试验。结果对一线抗结核药物总耐药率和耐多药率分别是29．05％和14．52％;其中初治耐药率和耐多药率分别是15．93％、6．79％,复治耐药率和耐多药率分别是52．86％、30．0％;RIF、INH、SM、EMB耐药率分别是22．14％、20．0％、17．38％和0．95％。抗二线结核药物总耐药率为22．62％,其中左氧氟沙星和丙硫乙烟胺的耐药率较高,分别为13．33％（56／420）和12．86％（54／420）,年龄段41～60岁耐药率均显著高于其他年龄段（P〈0．05）;男性和女性病例组间均无统计学显著性差异（P〉0．05）。结论安徽地区结核菌耐药情况仍然十分严重,应加强抗结核药物的耐药性监测,同时根据药敏试验结果选择科学有效的化疗方案。     

结核分枝杆菌耐药性检测新进展

结核分枝杆菌(MTB)的耐药形势日趋严重,耐药结核病的及时诊断对患者的治疗结局及结核病的控制十分重要.MTB传统的培养及药敏结果回报需时2～3个月,MTB耐药性的快速准确诊断是一个急需解决的问题.本文总结了MTB耐药性检测的传统技术包括罗氏培养及快速培养,并对比分析了其优缺点.综合国内外文献阐述了显微镜观察药物敏感性测定法的研究进展及分子生物学快速诊断技术包括线性探针杂交技术、Xpert MTB/RIF检测技术、基因芯片诊断技术及滚环扩增技术对于MTB及其耐药性检测的最新动态、各种检测方法的适用范围,并对比分析了各种检测方法的优缺点,为临床医师选择快速准确的诊断工具提供最佳的选择.     

基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药性

目的研究基因芯片法快速检测结核分枝杆菌（MTB）异烟肼（INH）、利福平（RFP）耐药性的可能性及其临床应用价值。方法应用基因芯片技术同时检测62株MTB临床分离株对INH、RFP的耐药性,并与比例法结果进行比较。结果以比例法药敏结果为判断标准,基因芯片法测定INH耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）及准确性分别为75％（12／16）、78．3％（36／46）、54．5％（12／22）、90％（36／40）、77．4％（48／62）;测定RFP耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）及准确性分别：83．3％（15／18）、86．4％（38／44）、71．4％（15／21）、92．7％（38／41）、85．5％（53／62）。结论基因芯片法测定MTB对INH、RFP耐药性和比例法结果有较高的相符率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法,是传统药敏方法的补充。     

187例结核性胸膜炎胸膜结核分枝杆菌药敏检测探讨

目的了解结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌的耐药情况,为指导临床制定合理化疗方案提供科学依据。方法采用胸膜活检技术获取胸膜组织接种在改良罗氏培养基内进行结核分枝杆菌的培养及药物敏感性测定。结果306例结核性胸膜炎胸膜组织结核分枝杆菌培养阳性者187例,阳性率61.1%。187例药敏测定结果对6种抗结核药物均敏感者148例,敏感率79.1%;耐药39例,耐药率20.9%。结论结核性胸膜炎与肺结核都同样存在着初始耐药性和继发耐药性的问题,同样必须高度重视其化疗原则和管理水平。     

MODS技术快速检测结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性研究

目的探讨MODS技术快速检测左氧氟沙星耐药性的效果。方法用24孔细胞培养板进行结核分枝杆菌（MTB）液体药敏检测,并对最佳检测条件进行探讨;将建立的MODS技术用于测定60株MTB临床分离株左氧氟沙星耐药性,并与传统罗氏绝对浓度法药敏结果进行比较。结果本法与罗氏绝对浓度法药敏结果相符58株,不符2株;符合率为96．7％;如以罗氏绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS检测左氧氟沙星耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为100％、96．0％、83．3％、100％、96．7％。结论MODS技术检测左氧氟沙星耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,可作为结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的检测新方法之一。     

噬菌体生物扩增法与改良罗氏比例法在结核杆菌药敏检测中的比较

目的　采用噬菌体生物扩增法 (PhaB法)与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法。方法 分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测 52株结核分枝杆菌临床株对利福平、异烟肼的敏感性,将二者结果进行比较。结果 比例法检测结果为利福平耐药株的 34株中,噬菌体生物扩增法检测结果为 32株耐药,2株敏感 ;18株敏感株中噬菌体方法检测结果为 17株敏感,1株耐药。噬菌体方法检测结核菌对利福平的灵敏度为 94.1%(32/34),特异度为 94.4%(17/18),符合率为 94.2%(49/52)。比例法检测为异烟肼耐药的 38株菌中,噬菌体方法检测 35株耐药,3株敏感;14株异烟肼敏感株中,噬菌体方法检测 11株敏感,3株耐药。噬菌体方法检测异烟肼敏感性的灵敏度为 92.1%(35/38),特异度为 78.6%(11/14),符合率为 88.5%(46/52)。结论 用噬菌体生物扩增法可快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性,灵敏度高,与WHO推荐使用的比例法符合率高,可在 48h得到结果。异烟肼耐药性检测用噬菌体方法的特异度不如利福平,有待进一步探讨其原因。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

不同年龄组结核分支杆菌耐药性的研究

目的 了解近阶段不同年龄组结核分支杆菌耐药情况,探讨当前耐药发展趋势。方法 根据年龄将1948例肺结核患者分为青年组（18－39岁）,中年组（40－59岁）和老年组（≥60岁）;采用绝对浓度法进行抗结核药物耐药性测定。结果 青年组、中年组、老年组原发耐药率分别为36．1％、46．8％和40．2％,各组间差异无显著性（P＞0．05）。青年组、中年组、老年组获得性而药率分另为81．3％、70．1％和62．1％,青年组和老年组差异有显著性（P＝0．0916）。原发耐药频度各年龄组从高到低均依次为H、E、S、P,中年组耐R最高达10．6％。获得性耐药顺序青、中年组为H、R、S、E,老年组为H、S、R、E,其中青年组耐R率最高达63．3％。原发耐多药率以中年组最高为5．3％,显著高于青年组（P＝0．0112）和老年组（P＝0．0085）。获得性耐多药率青年组最高达55．2％,显著高于中年组（P＝0．0319）和老年组（P＜0．001）。既往用1－3个月者耐药58．7％,显著高于未用药者（P＜0．001）和用药＜1月者（P＝0．0472）,而未用药和有药＜1月者耐药率差异无显著性（P＝0．02929）。此外,在各年龄组中青年组发生耐药的速度最快。结论 不同年龄组无论原发耐药还是获得性耐药均有所不同,建议应重视不同年龄组耐药率的监测,为修订国家结核病规划提供依据。     

第四次全国结核病流调分支杆菌药敏试验的方法学探讨

目的　探讨比例法和绝对浓度法测试分支杆菌耐药性的一致性和可比性,对乙胺丁醇的效价计算方法进行分析探讨。方法 对第四次全国结核病流调分离的 453株分支杆菌用比例法和绝对浓度法同时进行 4种抗结核药物(INH、SM、RFP、EMB)的耐药性测定,并用二种效价计算方法对乙胺丁醇的耐药性进行对比试验。结果 402株结核分支杆菌用二种方法测试的四种药物的耐药率均无显著性差异 (P＞0.05),51株非结核分支杆菌中,除EMB用比例法测试的耐药率明显高于绝对浓度法外 (P＜0.01),其余 3种药物二种方法测试的耐药率无显著性差异。H、S、R、E二种方法测试结果的一致率分别为 96.2%、97.1%、98.7%和 96.9%。EMB用二种效价计算方法检测结果的一致率为99.1%。结论 用比例法和绝对浓度法进行结核分支杆菌耐药性测定的一致性较高,药敏试验方法向比例法转轨,不会影响与我国既往资料的连续性和可比性。建议今后工作中对EMB的效价计算方法加以改进。     

结核分枝杆菌对对硝基苯甲酸耐药性的研究

目的 观察和分析MTB对对硝基苯甲酸(PNB)的耐受情况,为实验室鉴定分枝杆菌菌种提供依据.方法 菌株来源为广州市胸科医院门诊和住院患者,从1449株分枝杆菌中确定MTB菌株1114株,对PNB培养基上生长的分枝杆菌,采用MPB64单克隆抗体试剂或进行传统生化试验,以区分MTB和非结核分枝杆菌群(NTM).实验组菌株58株为在PNB培养基上生长的分枝杆菌,但经传统生化试验义疑似MTB,经传统生化试验证实为MTB菌株后,再进行PNB最小抑菌浓度(MIC)试验,以观察其对PNB的耐受性;对照组菌株10株为在PNB鉴别培养基上不生长,经传统生化试验证实为MTB菌株;另选择H37Rv标准株和鸟分枝杆菌标准株及5株临床NTM分离株进行PNB药物的MIC值检测.两组间比较采用成组t值检验.结果 MTB菌株对PNB的耐药率为5.21%(58/1114),实验组菌株PNB的MIC值为1.0～1.5 g/L,而对照组PNB的MIC值为0.25～0.5 g/L,H37Rv标准株PNB的MIC值为0.25g/L,鸟分枝杆菌标准株和5株NTM临床分离株PNB的MIC则＞2.0g/L,实验组与其他各组比较,差异均有统计学意义(t值为4.87～6.68,均P＜0.01).结论 在采用PNB培养基进行分枝杆菌菌群初筛时,如出现菌株对PNB耐药,但菌落形态呈米黄色、粗糙呈菜花样 等,以及对一线抗结核药物敏感等符合MTB的特征时,必须进行传统的生化试验,或使用MPB64单克隆抗体试验进行菌型鉴定,或利用MTB对温度较为敏感的特点及药敏结果进行判断,以免将MTB误判为NTM导致误诊.

Abstract：

Objective To investigate the resistance of Mycobacterium tuberculosis ( MTB ) to p-nitrobenzoic acid ( PNB ), in order to provide the scientific basis for reliable identification of laboratory strains of mycobacterium. Methods Strains of mycobacterium grown in PNB media were identified with additional traditional biochemical tests, according to the standard protocols of laboratory diagnostics for tuberculosis by the Chinese Antituberculosis Association. For mycobacteria grown in the PNB media but highly suspected as MTB by traditional biochemical tests, MPB64 monoclonal antibody was used for the differentiation between MTB and non-tuberculosis mycobacteria group ( NTM ). Minimal inhibitory concentrations ( MIC ) of PNB was further determined for culture-confirmed MTB, 10 strains of clinically isolated MTB ( control ), H37 Rv standard strain, mycobacterium avium standard strain, and 5 strains of clinically isolated NTM. Results A total of 1114 strains of MTB were confirmed, among which 58 PNB manifested resistance. The rate of resistance was 5.21% ( 58/1114 ), with an MIC ranging for 1. 0 - 1.5g/L. The MICs of control MTB and H37 Rv standard strain were 0. 25 - 0. 5 g/L and 0. 25 g/L, respectively.Both mycobacterium avium standard strain and clinically isolated NTM showed an MIC of ＞ 2. 0 g/L.Differences between groups were statistically significant ( t = 4. 87, 5.09, 6. 68, respectively, P ＜ 0. 01 ).Conclusion In order to avoid laboratory misdiagnosis, for primary screening with NTB with PNB culture,the presence of MTB characteristics, including cream-colored broccoli-like colony morphologies, as well as clinical response to first-line anti-tuberculosis medications, despite PNB tolerance, warrants further investigations of traditional biochemical tests, differentiation with MPB64 monoclonal antibodies, or simply by the use of temperature manipulation or drug-sensitivity test results.