IGF-Ⅰ在大鼠肝肌纤维母细胞增殖中的作用研究

目的 研究胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-在）在大鼠肝肌纤维母细胞（MF）增殖中的作用。方法 培养1到4代的MF（P1-4）用于研究。用Northern blot RNA印迹杂交法测定IGF-ⅠmRNA的表达。5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）核素掺入法分析DNA合成。结果 P1-4 MF表达了IGF-Ⅰ特有的mRNA的转录产物,IGF-Ⅰ和较少量的胰岛素能增加MF的DNA合成。IGF-Ⅰ与IGFBP-2或-3重组体同时作用能抑制IGF-Ⅰ刺激MF中DNA的合成。但是用IGFBP-2或-3对MF做预孵育后则进一步增强了IGF-Ⅰ刺激MF中DNA的合成。结论 IGF-Ⅰ在MF增殖的调节中起了重要的作用,可能与急性和慢性肝损伤过程中发生的肝纤维化过程有密切的关系。     

IGF-I在肝星形细胞过度表达的作用

目的:为探讨星形细胞中过度表达的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对肝细胞损害的保护作用.方法:分别选取肝星形细胞(HSC)中转基因IGF-I过度表达的转基因小鼠(TG),并以转基因IGF-I在HSC中无表达的同窝野生型小鼠(WT)对照组,用四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型,以玉米油灌胃作安慰剂对照;并检测以下指标:血浆ALT、AST水平测定,四氯化碳灌胃前后测定体重,肝脏病理组织学检查.结果:在四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型中,WT组血浆AST水平明显高于WT正常对照组(P＜0.0001),而TG组无显著差异(P=0.25);TG和WT组的血浆ALT均增高,但TG组升高程度较少;而且TG组的体重明显高于WT组(P＜0.01);进一步观察病理片,TG组仅有小面积的肝细胞坏死,炎症局限于肝小叶的中央区,肝小叶仍保持完整,损害较WT组轻.结论:小鼠的肝星形细胞中IGF-I过度表达对四化碳诱导小鼠急性肝损害有保护作用.     

IGF-I R在肝癌及癌旁肝组织中的表达及其临床意义

原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生机制的研究为众多学者倾力探索的重点.胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(Insulinlike growth factorⅠ receptor,IGF-Ⅰ R)具有广泛的生物学功能,在细胞增殖、转化及肿瘤发生、发展中发挥重要的作用.有关IGF-Ⅰ R与肝癌关系的研究报道较少,本研究旨在探讨IGF-Ⅰ R在肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达,进一步为肝癌的发生提供理论及实验依据.     

IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用

目的观察IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用。方法采用体外培养兔关节软骨细胞的方法,利用3H-TdR和35S-Na2SO4掺入分别反映软骨细胞增殖和基质蛋白多糖的合成,应用TUNEL法检测软骨细胞的凋亡。结果随年龄增加,关节软骨细胞凋亡增加,同时增殖和蛋白多糖的合成能力下降,而且对IGF-I和TGF-β1的反应性亦呈年龄相关下降。但是IGF-I和TGF-β1均可能在一定程度上以剂量依赖方式促进软骨细胞3H-TdR和35S-Na2SO4掺入增加。结论外源性IGF-I和TGF-β1在体外可促进不同年龄兔关节软骨细胞增殖和基质合成,提示外源性生长因子在骨关节炎的防治上可能有一定意义。     

IGF-I和TGF-β1在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）和转化生长因子β1（TGF—β1）在多囊卵巢综合征（PCOS）发病机制中的作用。方法40只雌性Wistar大鼠随机分为PCOS组和对照组,每组各20只。PCOS组应用来曲唑{1-[双-（4-氰基苯基）甲基]-1,2,4-三氮唑}灌胃制备PCOS大鼠模型,对照组不作任何处理。阴道涂片观察大鼠动情周期变化;运用放免法测定大鼠血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）和睾酮（T）水平;光镜观察卵巢、卵泡发育情况;免疫组化法观察卵巢组织中IGF—Ⅰ和TGF—β1的表达。结果PCOS组大鼠失去规律性动情周期变化。血清T、LH浓度高于对照组（P〈0．05）,血清E2、FSH、P浓度低于对照组（P〈0．05）。IGF-Ⅰ在PCOS组颗粒细胞的表达明显强于对照组（P〈0．05）,TGF—β1在PCOS组卵泡膜细胞和间质细胞的表达明显强于对照组（P〈0．05）。结论来曲唑诱导的大鼠动物模型是较好的PCOS模型。IGF—Ⅰ和TGF—β1与PCOS的发病密切关。     

膀胱癌患者血清IGF-I、IGFBP-3 水平及其临床意义

目的 探讨膀胱癌患者血清胰岛素样生长因子- Ⅰ（IGF- Ⅰ）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3 （IGFBP-3）水平,及其与膀胱癌病理特征的关系。方法 选取在该院泌尿外科行手术治疗的膀胱癌患者200 例 作为膀胱癌组,同期健康体检者200 例作为对照组,测定血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平。结果 膀胱癌组患 者血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平低于对照组（P <0.05）,IGF- Ⅰ /IGFBP-3 比值高于对照组（P <0.05）。膀 胱癌患者术后血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平高于术前（P <0.05）,IGF- Ⅰ /IGFBP-3 比值低于术前（P <0.05）。 低级别膀胱癌患者血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平高于高级别（P <0.05）;高、低级别胱癌患者IGF- Ⅰ / IGFBP-3 比值比较,差异无统计学意义（P >0.05）。肌层浸润性膀胱癌患者血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平低 于非肌层浸润性（P <0.05）;肌层浸润性与非肌层浸润性膀胱癌患者IGF- Ⅰ /IGFBP-3 比值比较,差异无 统计学意义（P >0.05）。T3、T4 期患者血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平低于Ta ～ T2 期（P <0.05）;淋巴结转 移患者血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平低于无淋巴结转移患者（P <0.05）。结论 膀胱癌患者血清IGF- Ⅰ、 IGFBP-3 水平下降,血清IGF- Ⅰ、IGFBP-3 水平有望成为膀胱癌诊断和预后评价的检测指标。     

IGF-Ⅰ对庆大霉素诱发大鼠肾损伤保护作用的实验研究

目的 探讨胰岛素样生长因子－Ⅰ（IGF－Ⅰ）对庆大霉素（GM）致大鼠肾脏损伤时肾功能变化以及血丙二醛（MDA）、古胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）变化的影响。方法 采用GM腹腔注射制备肾损伤动物模型,以IGF－Ⅰ作为保护因素,分别检测血尿素氮、肌酐水平以及血MDA含量、GSH－Px活性。结果 IGF－Ⅰ组大鼠肾功能及形态学损伤与GM组相比明显减轻,全血GSH－Px活性增高。结论 IGF－Ⅰ能促进GM肾损伤肾小管上皮细胞再生修复,减轻肾脏损伤,改善肾功能,对GM肾脏损伤具有一定的保护作用。     

白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-I R的关系

目的 探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-I R的关系.方法 以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-I受体mRNA与蛋白表达水平.结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P＜0.05),给予...     

细胞因子IGF-1及IGF-1R在不同程度肝纤维化的表达

目的：对不同程度慢性乙型肝炎病人肝脏组织中IGF-1及IGF—1R表达进行免疫组织化学法，探讨IGF—1及IGF—1R在肝纤维化不同程度的表达及分布。探讨细胞因子IGF-1及IGF-1R在肝纤维化形成中的作用，明确肝纤维化成因。方法：选择52例不同程度肝纤维化组织标本。采用免疫组化方法检测各个标本IGF-1及IGF-1R的表达及分布进行定位度半定量研究。结果：IGF-1阳性细胞主要定位于肝星状细胞及枯否细胞胞浆，阳性产物呈棕黄色，未见细胞核着色。IGF—1R的分布与IGF-1类似。IGF-1随着病理损伤的加重而逐渐增加，S3期和S4期IGF-1水平明显高于S3期，与肝脏病理炎症程度呈正相关。IGF—1R的表达与IGF—1呈类似趋势。结论：在慢性肝炎肝组织中有IGF-1及IGF—1R的阳性表达。IGF-1及IGF-1R在肝组织内的表达强度与肝纤维化程度呈正相关。     

IGF—Ⅰ，IGF—IR在胃癌中的表达及其与临床病理的关系

目的研究胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）、胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（IGF—IR）在胃癌中的表达及其与临床病理的关系：方法对40例胃癌患者的癌组织、距原发灶5cm以上胃组织和10例正常胃组织标本进行IGF—Ⅰ,IGF—IR免疫组织化学染色将结果与患者的临床病理指标进行综合分析。结果①胃癌组织中IGF—Ⅰ的表达率显著高于切缘组织和对照组（P〈0．05）。切缘组织和对照组中表达率差异无显著性（P〉0．05）。PTNM分期中Ⅰ,Ⅱ期及Ⅲ,Ⅳ期两组比较差异有显著性（P〈0．05）;无淋巴结转移组及有淋巴结转移组相比差异有显著性（P〈0．05）;未侵及全层组及侵及全层组相比差异有显著性（P〈0．05）。②胃癌组织IGF—IR的表达率显著高于切缘组织和对照组（P〈0．05）。切缘组织和对照组中IGF—IR的表达率差异无显著性（P〉0．05）。PTNM分期中Ⅰ,Ⅱ期及Ⅲ,Ⅳ期两组相比差异有显著性（P〈0．05）。无淋巴结转移组及有淋巴结转移组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论IGF—Ⅰ,IGF—IR的高表达与胃癌的发生有关,且均参与了胃癌的侵袭和转移。     

IGF-2和IGF-1R在子宫内膜腺癌的表达及临床意义

目的检测子宫内膜癌中IGF-2及其相应受体IGF-1R蛋白的表达情况,探讨IGF-2及其相应受体在子宫内膜癌变中的表达及作用。方法采用免疫组化PV法检测20例正常增生期子宫内膜（对照组）、30例子宫内膜腺癌（腺癌组）组织中IGF-2I、GF-1R的表达情况。结果IGF-2的过阳性表达在子宫内膜腺癌要显著高于正常子宫内膜且随病理分级的增高而表达增强,随手术病理分期的增高逐级增强I。GF-1R的过阳性表达在子宫内膜腺癌显著高于正常子宫内膜,且随病理分级的增高而表达增强。结论IGF-2及IGF-1R的异常高表达在子宫内膜癌的发生发展过程中起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠胰腺干细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胰腺干细胞增殖的影响。方法大鼠胰腺干细胞经体外纯化、扩增,观察其生长特性,免疫组化法检测CK-19和PDX-1的表达。研究不同浓度的bFGF对大鼠胰腺干细胞生长曲线的影响。结果原代培养的细胞经差速贴壁后,得到纯化的胰腺干细胞。免疫组化显示大鼠胰腺干细胞呈CK-19阳性和PDX-1阴性。对照组(无bFGF)、bFGF浓度分别为5,10,20 ng/ml各组的细胞数分别是3.29×105/ml,3.47×105/ml,3.83×105/ml和3.83×105/ml。加bFGF 3组的细胞数与对照组比较均有显著性差异(均P<0.01),10,20 ng/ml bFGF组细胞数与5 ng/ml bFGF组细胞数比较差异有显著性(P<0.01);10 ng/ml和20 ng/ml bFGF组差异无显著性(P>0.05)。结论5,10,20 ng/ml浓度的bFGF可明显促进SD大鼠胰腺干细胞增殖。     

血清胰岛素样生长因子-Ⅰ水平对癌性恶病质的影响

目的 通过癌性恶病质动物模型探讨血清中胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）水平在癌性恶病质中的作用。方法 将小鼠结肠腺癌26细胞悬液接种于肝脏特异性IGF-Ⅰ基因缺失（LID）组鼠和对照组鼠皮下，各30只接受了肿瘤细胞接种。接种后监测两组小鼠的一般情况、体重和皮下肿瘤大小以及自然生存时间。结果 LID鼠和对照鼠进入恶病质的时间分别为（14．6±1．3）d、（24．1±2．5）d；生存时间分别为（19．3±1．3）d、（31．9±2．7）d，两者差异有极显著性意义（P〈0．01）。结论血清中低水平的IGF-Ⅰ虽然可以延缓肿瘤的生长，但是却促进了癌性恶病质的发生和发展。     

胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在子宫内膜异位症中的表达

目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及其受体与子宫内膜异位症的关系。方法：应用免疫组织化学法（常规S-P法）对子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜(17例)、异位子宫内膜(30例)进行IGF-Ⅰ及其受体的检测， 取25例正常子宫内膜组织作为对照。 结果：IGF-Ⅰ及其受体在3组子宫内膜的腺细胞强表达，IGF-Ⅰ在3组子宫内膜间质弱表达，IGF-Ⅰ受体在子宫内膜间质不表达。IGF-Ⅰ在子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜、异位子宫内膜的表达均强于对照组正常子宫内膜（P<0.01）。IGF-Ⅰ受体在子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜的表达强于其在位子宫内膜和对照组正常子宫内膜（P<0.01）。 结论：IGF-Ⅰ在子宫内膜异位症的发生、发展中起促进作用。     

The influence of insulin on secretion of IGF-Ⅰ and IGFBP-Ⅰ in cultures of human endometrial stromal cells

Objectives To study the influence of insulin on IGF-Ⅰ and IGFBP-Ⅰ secretion of the human endometrial stromal cells. Methods Late proliferative phase endometrial stromal cells were isolated from endometrium tissues and then cultured for 24 h in Hams F-12 only as a control and in Hams F-12 with different concentrations of estradiol (E2) and insulin (INS) as treated groups. Simultaneously, the endometrial stromal cells from late secretory phase endometrium were cultured for 24 h in Hams F-12 only as a control and in Hams F-12 supplemented with different concentrations of progesterone (P) and insulin as treated groups. After 24 h of culturing, the mediums were collected for either IGF-Ⅰ or IGFBP-Ⅰ assays. Result The concentrations of IGF-Ⅰ in medium from cultured endometrial stromal cells in the proliferative phase were 0.78±0.47 ng/ml in the hormone-free control group; 1.44±0.59 ng/ml and 1.39± 0.33 ng/ml in 100 pg/ml E2 group and 20 μU/ml INS group, which was higher than that of the control group (P&lt;0.05 and P&lt;0.01, respectively). The IGF-Ⅰ concentration in the 100 μU/ml INS group was 2.03±0.53 ng/ml, which was higher than that of the 20 μU/ml INS group (P&lt;0.01). Levels of IGF-Ⅰ in the 100 pg/ml E2 plus 20 μU/ml INS group was 2.18±0.36 ng/ml, which was significantly higher than that of the 20 μU/ml INS and 100 pg/ml E2 group (P&lt;0.01), but lower than that of the 100 pg/ml E2 plus 100 μU/ml INS group (3.42±0.75 ng/ml), P&lt;0.01. The concentration of IGFBP-Ⅰ in medium from cultured endometrial stromal cells in the secretory phase was 2.50±1.39 ng/ml in the hormone-free control group and 5.44±2.09 ng/ml in the 10 pg/ml P group, which was significantly higher than that of the control (P&lt;0.01). IGFBP-Ⅰ concentration in 20 μU/ml INS group was 0.16±0.58 ng/ml, which was lower compared with control, but higher compared with the 100 μU/ml INS group (P&lt;0.01). The level of IGFBP-Ⅰ in the 10 ng/ml P plus 20 μU/ml INS group was 2.10±1.17 ng/ml, lower compared with the 10 ng/ml P group, but higher compared with the 10 pg/ml P plus 100 μU/ml INS group, P&lt;0.01. Conclusions Insulin can stimulate basal (without hormone) and E2-stimulated IGF-Ⅰ secretion in cultured stromal cells from human late proliferative endometrium in a dose-dependent manner. Insulin can suppress basal (without hormone) and P-stimulated IGFBP-Ⅰ secretions in cultured stromal cells from human secretory endometrium in a dose-dependent manner.     

人胰岛素样生长因子-1的真核表达及其生物学功能研究

目的构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)分泌型真核表达载体,并检测表达产物的生物活性.方法从人肝细胞克隆IGF-1基因,并将其连入Psec Tag/FRT/V5-His载体,用脂质体法转染CHO细胞,将转染细胞上清培养骨髓基质干细胞,用MTT法测定骨髓基质干细胞的增殖情况.结果成功扩增210bp的IGF-1基因,表达产物经SDS-PAGE分析及Western bolt检测具有7.7KD特异性条带.骨髓基质干细胞的增殖随转染细胞上清的浓度、转染细胞上清培养时间的增加而增加.结论成功构建分泌型IGF-1真核表达载体,其表达产物对骨髓基质干细胞具有促增殖作用.     

角质细胞生长因子对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响

目的 研究角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响.方法 MTT法检测不同浓度的重组人角质细胞生长因子(K102)对CBRH-7919细胞增殖的影响;免疫细胞化学技术检测角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor, KGFR)在CBRH-7919细胞中的表达.结果 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中均有表达,MTT实验显示K102对CBRH-7919细胞增殖作用与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中存在表达,但K102对肝癌细胞CBRH-7919的增殖无明显作用.     

人角化上皮生长因子基因(hKGF)达载体对大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖的影响

目的:构建人角化上皮生长因子基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,为以后的hKGF基因功能和基因治疗研究提供实验材料.方法:提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增hKGF基因全长cDNA序列,经与pMD18-T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的hKGF基因cDNA全长序列插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建hKGF基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF.载体转染后大鼠肺泡Ⅱ型细胞进行免疫细胞化学及荧光显微镜鉴定,并进行细胞记数,绘制生长曲线.结果:经RT-PCR获得609bp含限制性内切酶位点的DNA片段,T载体克隆后经双酶切、测序,确定该片段为hKGF基因cDNA,进而构建hKGF真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,经双酶切,测序确证.转染载体后,有hKGF的阳性表达并随时间逐渐增加,大鼠肺泡Ⅱ型细胞也随时间出现明显分裂增殖.结论:成功构建hKGF基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,为进一步应用于基因治疗研究提供工具.     

神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分别及联合作用对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,与不同浓度的NGF、bFGF或NGF+bFGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDLC增殖的情况.结果 不同浓度的NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,这种促进作用呈一定的浓度依赖性.NGF与bFGF联合应用对人PDLC的增殖有协同作用,且与单独应用相比具有统计学差异.结论 NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,且二者联合具有协同作用.