利用超数排卵技术进行优化C57BL/6J小鼠生物净化体系的研究

目的以近交系C57BL/6J小鼠为实验对象,通过注射不同剂量的孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促进腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵、体外授精和胚胎移植,确定最佳超排剂量,从而完善以C57BL/6J小鼠为背景的转基因小鼠的生物净化体系。方法将5周龄的C57BL/6J雌鼠进行5 IU、10 IU、7.5 IU、15 IU四个剂量组的超数排卵,通过超数排卵与剖宫取胎、胚胎移植两种净化方法相结合,确定C57BL/6J小鼠的净化方法所需的最佳剂量。结果剖宫取胎方法中,注射5 IU剂量组的C57BL/6J小鼠超排后合笼见栓率最高,为(89.00±19.05)%,产仔数和见栓率与其它三组均差异不显著;胚胎移植方法中,10 IU剂量组平均卵母细胞数为30.33±0.89枚,平均体内2-细胞胚胎数为23.78±0.19枚,均显著高于其它三组。结论剖宫取胎法生物净化时,5 IU剂量组可以提高C57BL/6J小鼠的交配成功率;胚胎移植法生物净化时,10 IU剂量组可以获得最多的体内和体外2-细胞胚胎,为C57BL/6J小鼠最佳超排剂量。     

调整精卵交汇时间提高C57BL6J小鼠超数排卵的受精率

目的通过调整精卵交汇时间,提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率。方法实验一以常规超排方法作为对照组,计算受精率;实验二验证C57BL/6J雄鼠受精能力;实验三在合笼后三个时间点检栓,确定超排鼠交配时间,计算精卵相遇时间;实验四将C57BL/6J雌鼠超排处理,停留6.5 h后配雄鼠,计算受精率,比较方法改进的效果。结果对照组取受精卵10.88枚/只;实验二取受精卵20.55枚/只,表明雄鼠的精子可以使卵子高比例受精,精子、卵子交汇时间是影响受精率的关键因素;实验三,在合笼后4 h雌鼠见栓鼠最多,确定对照组精卵交汇时间需7 h;根据以上实验结果,实验四将合笼时间推迟6.5 h,取受精卵22.27枚/只,比对照组提高了105%。结论调整精子、卵子交汇时间可显著提高C57BL/6J小鼠超数排卵受精率。     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖及减重手术模型的建立

 目的 建立饮食诱导的肥胖小鼠模型,研究建立肥胖小鼠胃袖状切除术模型的可行性及有效性。方法 将40只4周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组（n=20）和高脂饮食组（n=20）,均喂养20周。20周后随机分为4个亚组：普通饮食假手术组,普通饮食手术组,高脂饮食假手术组,高脂饮食手术组。定期测量体重及空腹血糖,喂养20周后检测葡萄糖耐量、血脂水平及肝组织病理学。结果 高脂饮食喂养4周后,高脂饮食组小鼠体重即开始显著高于普通饮食小鼠（P < 0.05）。喂养20周后,与普通饮食小鼠相比,高脂饮食小鼠平均体重[（42.71±2.30）g vs.（32.23±1.73）g]、血糖[（8.82±0.51）mmol/L vs.（6.74±0.31）mmol/L]及血脂水平[血清总胆固醇：（4.40±0.57）mmol/L vs.（2.31±0.35）mmol/L;血清三酰甘油：（2.26±0.25）mmol/L vs.（1.11±0.24）mmol/L]均明显升高（P均 < 0.01）。高脂饮食及普通饮食假手术组小鼠存活率为100%,高脂饮食手术组存活率为70%（7/10）,普通饮食手术组存活率为80%（8/10）。术后第1周,各组小鼠体重均显著下降（P < 0.01）;术后第4周,高脂饮食及普通饮食手术组小鼠较术前体重下降约20%;术后第3周,高脂饮食及普通饮食假手术组小鼠体重恢复至术前水平。结论 高脂饮食喂养20周可诱导肥胖小鼠模型,进一步建立胃袖状切除术模型可行且有效。     

高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖及减重手术模型的建立

目的 建立饮食诱导的肥胖小鼠模型,研究建立肥胖小鼠胃袖状切除术模型的可行性及有效性.方法 将40只4周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组(n=20)和高脂饮食组(n=20),均喂养20周.20周后随机分为4个亚组:普通饮食假手术组,普通饮食手术组,高脂饮食假手术组,高脂饮食手术组.定期测量体重及空腹血...     

还原型谷胱甘肽对C57BL/6J小鼠体外受精的影响

目的 探讨受精液中添加还原型谷胱甘肽(GSH)对C57BL/6J小鼠体外受精的影响.方法 以体外受精液(HTF)作为对照,在HTF液中添加不同浓度(0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、0.75 mmol/L、1.00 mmol/L、1.25 mmol/L和1.50 mmol/L)的GSH,对C57BL/6J近交系小鼠进行体外受精实验,观察体外受精和早期胚胎发育情况.同时,用5种C57BL/6J小鼠背景的基因工程小鼠加以验证.结果 与对照组相比,实验组的体外受精率显著升高,浓度为0.50 mmol/L时,体外受精率提高显著(P＜0.05),浓度在1.25 mmol/L时,体外受精率最高(P＜0.01).受精卵的体外囊胚发育率实验组与对照组无显著性差异(P＞0.05).C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精率和体外囊胚发育率与C57BL/6J近交系小鼠相似.结论 在HTF中添加一定浓度的GSH能够提高C57BL/6J小鼠及C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精效果.     

急性缺氧诱导C57BL/6J小鼠瘦素表达增加

目的 观察缺氧后小鼠血清和中枢神经系统瘦素水平的变化.方法 以C57BL/6J小鼠为研究对象,利用医学自动测控缺氧仓(XQ-I型)复制机体常压缺氧状态,分为正常组、缺氧24 h组、缺氧48 h组,收集小鼠血清、脑脊液和脑组织(去除大脑和小脑后)匀浆标本,利用放射免疫方法检测瘦素浓度.结果 缺氧24、48 h组小鼠血清、脑脊液和脑组织内的瘦素水平均显著高于未缺氧小鼠(P＜0.05),但缺氧24 h组和缺氧48 h组之间没有明显差别(P＞0.05). 结论缺氧可作为一种独立的诱导因素促进小鼠脂肪组织瘦素的表达,同时使进入中枢神经系统内的瘦素水平亦明显增加.     

雄性C57BL/6J小鼠不同部位脂肪组织功能的差异

目的:研究雄性C57BL/6J小鼠各部位脂肪组织的棕色化功能差异?方法:分离雄性C57BL/6J小鼠各部位脂肪组织,荧光定量PCR检测脂肪组织棕色化?成脂功能的标志基因?脂肪细胞因子?炎症因子表达情况?Western blot检测棕色化功能蛋白解偶联蛋白1(uncoupling protein-1,Ucp1)表达?结果:以肩胛间和肩胛下棕色脂肪为比较标准,其中甲状腺上?下部位脂肪的棕色化功能标志基因表达量最高,接近肩胛间和肩胛下;在肩胛间白色脂肪?腋下脂肪和肾周脂肪,上述棕色化标志基因表达量低于甲状腺周围脂肪;腹股沟皮下?附睾旁及肠系膜脂肪的上述棕色化标志基因表达最低?成脂功能的标志基因在皮下脂肪表达量明显高于附睾旁?肠系膜周围脂肪?脂肪细胞因子在白色脂肪特性的脂肪组织中表达量明显高于有棕色脂肪特性脂肪;附睾旁脂肪?肠系膜脂肪中炎症因子表达量显著升高,皮下脂肪炎症因子表达量最少?结论:甲状腺上?下部位脂肪的棕色化程度接近经典棕色脂肪?肩胛间白色脂肪?腋下脂肪和肾周脂肪较甲状腺周围脂肪的棕色化程度弱,成脂功能?脂肪细胞因子?炎症因子与肩胛间?肩胛下棕色脂肪基本一致且均较强?腹股沟皮下?附睾旁及肠系膜脂肪具有白色脂肪特性?皮下脂肪大量分泌脂肪细胞因子,炎症因子表达量小,成脂功能强?附睾旁脂肪?肠系膜周围脂肪细胞因子表达量较少,但炎症因子分泌相对较高且脂解作用较强?     

C57BL/6J小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立

目的 通过慢性束缚应激(CRS)建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照(NC)组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终进行糖水偏好检测和强迫游泳检测。结果 CRS组小鼠在水中不动的时间为(131.70±21.65)s,明显长于NC组的(68.88±8.43)s(P=0.0304)。CRS组小鼠0～24 h和0～48 h的糖水偏好百分比分别为(66.21±3.24)%和(73.25±1.50)%,均明显低于NC组的(79.46±3.85)%(P=0.0196)和(80.20±2.26)%(P=0.0248)。结论 通过慢性束缚应激成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。     

C57BL/6J小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立

目的通过慢性束缚应激(CRS)建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照(NC)组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终进行糖水偏好检测和强迫游泳检测。结果 CRS组小鼠在水中不动的时间为(131.70±21.65)s,明显长于NC组的(68.88±8.43)s(P=0.0304)。CRS组小鼠0~24 h和0~48 h的糖水偏好百分比分别为(66.21±3.24)%和(73.25±1.50)%,均明显低于NC组的(79.46±3.85)%(P=0.0196)和(80.20±2.26)%(P=0.0248)。结论通过慢性束缚应激成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。     

SPF级C57BL/6J小鼠生长发育和繁殖性能指标的测定

目的 在SPF级动物饲养条件下，对本中心饲养的SPF级C57BL／6J小鼠生长发育和繁殖性能指标进行测定。方法 挑选80～90日龄C57BL／6J小鼠40只（雌、雄各半），采取1：1间歇同居，兄妹近交繁殖，并统计其生长发育和繁殖性能参数指标。结论 SPF级C57BL／6J小鼠离乳后体重增长较慢；第2、3胎繁殖性能较好，第5胎最差，种鼠连续繁殖5胎后要更换。     

降植烷诱导C57BL/J6狼疮性肾病鼠模型的建立和生物学鉴定

目的构建C57BL/J6狼疮性肾病（LN）鼠模型,探讨降植烷在其发病机制中的生物学作用。方法 C57BL/J6小鼠随机分为两组,实验组予一次性腹腔注射降植烷0.5ml,对照组予一次性腹腔注射生理盐水0.5ml。注射后第5、10天分别检测脾脏中吞噬细胞、树突状细胞及B细胞表面分子的变化情况;每月定期检测血清中抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（dsDNA）及尿蛋白,7个月后观测肾脏HE染色和免疫复合物（IC）的沉积情况。结果小鼠腹腔注射降植烷第5、10天后,脾脏中的吞噬细胞、树突状细胞不同程度活化（P〈0.05）,B细胞表面CD21、CD86、MHC-Ⅱ等分子表达也不同程度上调（P〈0.05）;4个月后血清ANA、dsDNA有不同程度的表达（P〈0.05）;7个月后,78%的小鼠出现蛋白尿（≥＋）,肾脏HE切片显示肾脏出现肾小球肿胀,淋巴细胞浸润等典型的肾病改变,IC沉积。而对照组中血清ANA、dsDNA阴性,未见蛋白尿,肾脏组织未见病理改变。结论降植烷成功地诱导了C57BL/J6LN鼠模型。     

C57BL/6小鼠系膜增生型肾小球肾炎的复制

目的：探索一种复制小鼠系膜增生型。肾小球。肾炎动物模型的方法。方法：80只C57BL／6小鼠随机分为4组（每组20只）：A-正常对照组；B-竹叶青蛇毒2mg／kg注射组；C-竹叶青蛇毒4mg／kg注射组；D-竹叶青蛇毒6mg／ks注射组。按照分组要求计算B、C、D3组小鼠中每只小鼠需注射的竹叶青蛇毒的总量，配制3种不同浓度的竹叶青蛇毒液，B、C、D3组小鼠分别尾静脉注射不同浓度的竹叶青蛇毒液0．2mL，A组小鼠尾静脉注射生理盐水0．2mL以进行对照。结果：竹叶青蛇毒注射后的小鼠均出现中毒性症状。C、D组小鼠因蛇毒注射剂量较大，死亡率高达50％，且集中于前3d内死亡，3d后中毒小鼠的活动基本如常。B组与正常对照组小鼠无死亡。中毒小鼠的肾功能与正常对照组相较无明显差别，但均出现了肾小球系膜细胞增生，系膜基质增多，肾小球及间质内炎性细胞浸润等病理学改变。结论：竹叶青蛇毒尾静脉注射是一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的较好的方法。     

C_(57)BL/6无毛小鼠皮肤组织学研究

目的：观察Ｃ５７ＢＬ／６无毛小鼠皮肤组织学结构。方法：１０％甲醛固定,行石蜡切片,ＨＥ染色。结果：动物表皮有一层角化过度的角质层,毛干消失,毛球结构不正常,毛囊内为一些角化物质,有的变为空囊腔。真皮深层及皮下组织内含有大量黑色素细胞,并有树突状突起。结论：Ｃ５７ＢＬ／６无毛小鼠真皮深层及皮下组织内含有大量黑色素细胞,可用于黑色素沉着疾病及黑色素瘤的研究。     

C57BL/6J小鼠冻融胚胎移植后所得小鼠及其子代生物学特性数据测定与分析

目的探讨C57BL/6J(B6)小鼠冷冻复苏胚胎移植后所得小鼠及其子代的平均体增长和血液生化等部分生物学特性数据的变化。方法实验分为3组。实验组Ⅰ:冻融胚移植组,B6小鼠体外受精后的2-cell胚胎采用EFS法冷冻,复苏后移植到受体(ICR小鼠)输卵管内所产的小鼠(雄鼠30只,雌鼠20只);实验组Ⅱ:冻融胚胎移植所产的小鼠成熟后经自然交配得到的子一代(雄鼠26只,雌鼠17只);对照组:正常饲养和自然交配所得的子代(雌雄小鼠各20只)。3组小鼠饲养至16周龄,每周定时测定体质量,至16周龄时采血,测定各组小鼠血清生化值,并进行分析比较。结果实验组Ⅰ雌雄小鼠初生重和1~16周的平均体重均显著高于对照组(P0.01),实验组Ⅱ雌鼠体重从12周开始均显著高于对照组(P0.01),而雄鼠只有部分周龄与对照组有差异,其余周龄则差异无显著性;实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠的血清生化值与对照组相比除AST、TP和Ca等项目无变化外,其余项目均发生了显著或极显著的上调或下调。结论冷冻对胚胎移植所得小鼠及其自然繁殖子一代的平均体增长和血清生化值有一定影响。     

乙酰基亚硝基脲对C57BL/6J雄鼠毒性作用的研究

目的 观察乙酰基亚硝基脲（ENU）对C57BL/6J雄鼠的毒性作用及对睾丸等组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠的最佳处理浓度.方法 将8～10周龄的C57BL/6J 雄鼠分为实验组和对照组.实验组又分为A、B、C、D 4组,分别腹腔注射ENU 150、100、75、50 mg/kg,每周1次,共3次.对照组腹腔注射生理盐水.首次注射ENU后的第1周至12周,每周分别取实验组和对照组小鼠2 只进行剖检并行组织病理学观察,取其睾丸、附睾称重,记录死亡小鼠数量.结果 实验组小鼠剖检发现胸腔纵隔内有巨大肿块,明显压迫心脏;组织切片观察发现睾丸和肝、肾有不同程度的病理改变.结论 ENU为小鼠的一种强诱变剂,纵隔肿瘤是导致雄鼠死亡的主要原因,ENU对睾丸的毒性作用最强,主要表现为曲精小管组织结构破坏,生精细胞减少.ENU处理雄鼠的最佳浓度为150 mg/kg.     

克拉霉素对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化及炎症反应的影响

目的观察肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae,Cpn）与动脉粥样硬化的关系以及克拉霉素的抗炎作用。方法 60只健康雄性C57BL/6J小鼠根据喂养的饲料及是否感染Cpn分为4组：对照组（n=6）、高脂组（n=6）、感染组（n=24）和感染＋高脂组（n=24）。Cpn感染组于试验开始每隔2周1次,共6次,分别经鼻内接种0.05ml Cpn（6.6×106IFU/ml）。对照组及高脂组以同样方法接种链球菌蛋白G（SPG）缓冲液。感染Cpn后（感染组、感染＋高脂组）依据有或无克拉霉素的治疗及治疗的时间进一步分为未治疗、早期及延迟治疗亚组。全自动生化分析仪检测小鼠的血脂,免疫荧光法检测Cpn IgG抗体。12周后处死小鼠,放免法测定IL-6、IL-8的水平,并取升主动脉大血管检测主动脉动脉粥样硬化的情况。结果高脂组的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）明显高于对照组（P均〈0.01）。各组与对照组比较IL-6、IL-8的水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01）;未治疗组高于早期及延迟治疗组（P〈0.01）,且延迟治疗组高于早期治疗组（P〈0.01）。与延迟治疗组比较,克拉霉素早期治疗组可以延缓动脉粥样硬化的发生。结论 Cpn协同高脂血症与动脉粥样硬化的形成密切相关。克拉霉素治疗能够减轻Cpn感染所致动脉粥样硬化的炎症反应。