不同含糖浓度腹膜透析液对腹膜间皮细胞紧密连接影响的动物实验

目的观察含不同葡萄糖体积分数的商用乳酸盐腹膜透析液对大鼠腹膜功能和腹膜间皮细胞紧密连接的影响。方法正常清洁级SD雄性大鼠36只,随机分为对照组(0.9%氯化钠溶液)、低糖组(葡萄糖体积分数为1.50%)和高糖组(葡萄糖体积分数为4.25%),腹腔内灌液后8周检测腹膜透析超滤量、腹膜对尿素氮、肌酐清除率和蛋白丢失量,苏木精-伊红(H～E)染色光学显微镜下观察腹膜结构,透射电子显微镜观察腹膜紧密连接的形态,采用免疫组织化学法观察大鼠腹膜间皮细胞封闭蛋白-1(ZO-1)表达的阳性细胞数。结果与对照组相比,低糖组、高糖组腹膜透析8周后腹膜透析液超滤量均减少(P值均<0.05);高糖组腹膜透析8周后的尿素氮清除率较对照组明显降低(P<0.05);3组间肌酐清除率的差异无统计学意义(P值均>0.05)。低糖组、高糖组腹膜透析8周后的腹膜引流液蛋白含量均较对照组明湿增加(P值均<0.05)。光学显微镜下,低糖组、高糖组大鼠腹膜组织出现不同程度的问皮细胞损伤、炎性细胞渗出,以高糖组更加明显。电子显微镜下,高糖组腹膜透析8周后紧密连接消失。腹膜透析4周后,3组间ZO-1阳性表达细胞数的差异无统计学意义(P值均>0.05);腹膜透析8周后,高糖组的ZO-1阳性表达细胞数为10.88±0.99,明显低于对照组的12.80±2.10(P<0.05),低糖组与高糖组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论用含葡萄糖的乳酸盐透析液尤其是高糖透析液进行长期的腹膜透析可对腹膜间皮细胞的形态和功能造成损伤,破坏细胞间的紧密连接,抑制ZO-1的表达,导致腹膜透析超滤量减少,尿素氮和肌酐清除率降低,蛋白丢失增加。     

黄芪注射液拮抗腹膜透析液诱导腹膜间皮细胞凋亡的研究

目的:了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞凋亡的影响。方法:培养液中添加含不同浓度黄芪注射液的1.5%葡萄糖腹膜透析液(PDS),观察细胞caspase-3活性变化,应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪方法以及末端标记技术(TUNEL)观察各组腹膜间皮细胞凋亡的情况。结果:以对照组caspase-3活性为1,PDS组细胞caspase-3相对活性为3.26±0.91,显著高于黄芪一组(1.87±0.43)和黄芪二组(1.67±0.32),P<0.05。An-nexin V-FITC/PI双标记结果显示,PDS组细胞凋亡率和死亡率分别为(46.8±14.2)%和(25.7±12.4)%,显著高于对照组的(9.04±4.86)%和(7.96±4.28)%,P<0.05;黄芪一组和黄芪二组的细胞凋亡率和死亡率显著低于PDS组(P<0.05)。TUNEL研究结果显示,PDS组细胞凋亡明显高于对照组、黄芪一组和黄芪二组。结论:黄芪注射液可抑制PDS诱导的腹膜间皮细胞凋亡的发生。     

黄芪液拮抗乳酸盐腹透液对人腹膜间皮细胞的损伤作用

目的 :研究黄芪液对乳酸盐腹透液致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响。方法 :采用胰蛋白酶 -ED TA消化法 ,从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,并建立体外人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型。以MTT法测定HPMC增殖程度 ,采用自动生化分析仪检测 ,培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)水平示细胞损伤程度。结果 :2 .5 %乳酸盐腹透液中加用黄芪液 (1mg/ml)与HPMC作用 4 5min ,其培养液中LDH水平较腹透液对照组明显降低(P <0 .0 1) ,HPMC增殖能力明显增强 (P <0 .0 1)。结论 :黄芪液能拮抗乳酸盐腹透液致HPMC的损伤。     

黄芪注射液对大鼠腹膜透析效能及腹膜超微结构的影响

目的通过动物实验观察黄芪注射液对大鼠腹膜透析效能及腹膜超微结构的影响,并初步探讨其作用机理。方法采用空白及实验对照设计,将30只雄性SD大鼠平均分为单纯腹透组（A）。黄芪注射液常规浓度组（B）及高浓度组（C）,观察各组大鼠尿素氮清除率（CBUN）、肌酐清除率（CCr）、尿素氮D／P值、排液量及透出液蛋白质浓度及腹膜超微结构的变化。结果黄芪注慑液常规浓度组、黄芪注射液高浓度组的CBUN及CCr值、排液量均显著高于单纯腹透组（P〈0．05）,B、c组问比较无显著性差异（P〉0．05）。黄芪注射液常规浓度组、高浓度组透出液蛋白质浓度和单纯腹透组相比差异无显著性（P〉0．05）。B、C两组腹膜间皮细胞及间皮细胞之间连接的损伤程度较A组为轻。结论黄芪注射液确能提高大鼠腹膜透析效能,提高小分子物质的清除率,对透出液中蛋白质浓度无明显影响,对大鼠的腹膜问质细胞的完整性有保护作用。     

黄芪注射液对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞水孔蛋白1表达的影响

【目的】观察黄芪注射液对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞水孔蛋白1（AQP—1）表达的影响。【方法】选用雄性SD大鼠25只,分正常对照组（N=7）、模型组（N=9）和黄芪组（N=9）。除正常对照组外,其他两组分别腹腔注射含42．5马／L葡萄糖的腹透液和含42．5g／L葡萄糖的愎透液＋黄芪注射液（20mg／mL）,剂量为25mL／d,连续10d。于第11天观察大鼠透析超滤量（UF）与净超滤量（Net UF）、腹膜钠转运（D／P Na）、腹膜组织光镜病理形态及AQP-1免疫组化的表达．【结果】透析液留腹60min时黄芪组UF、Net UF与模型组比较显著增加（P〈0．05）。透析液留腹30min、60min时黄芪组D／P Na较模型组显著减低（P〈0．05）。黄芪组大鼠腹膜层增厚、间皮细胞脱落情况较模型组减轻,AQP—1在腹膜间皮细胞的表达较模型组显著增多（P〈0．05）【结论】黄芪注射液可减轻高浓度葡萄糖腹透液对间皮细胞的损伤,升高AQP—1在腹膜间皮细胞的表达,改善透析液留腹早期跨细胞水转运功能．从而提高腹膜对水的清除．增加透析超滤量。     

黄芪注射液对高通透性腹膜透析大鼠透析效能及腹膜结构的影响

目的?探讨不同浓度黄芪注射液对高通透性腹膜透析大鼠透析效能及腹膜结构的影响。方法?40只SD雄性大鼠,分空白对照组（A组）、单纯腹透组（B组）、黄芪注射液低浓度组（C组）与黄芪注射液高浓度组（D组）。除A组外,余3组分别腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液、低浓度黄芪腹透液、高浓度黄芪腹透液25mL/d,连续10d。于第11天进行腹膜功能试验,观察各组大鼠透析液留腹0、30、60 、90、120 min尿素氮D/P值（D/P urea）、肌酐D/P值（D/P Cr）、葡萄糖D/D₀值（D/D₀Glu）的变化,以及透析液留腹120min时尿素清除率（Curea）、肌酐清除率（CCr）、透析超滤量（UF）、净超滤量（NetUF）,并采集腹膜组织观察腹膜形态结构的改变。结果?①各透析组（B、C、D组）各时点D/P Cr高于A组、D/D₀Glu低于A组（P<0.05）,B组UF、NetUF 低于A组（P<0.05）;②C、D组D/P urea留腹60min后各时点均高于B组（P<0.05）,D组D/P Cr 留腹60、90min较B组高（P<0.05）、D/D₀ Glu留腹60min较B组低（P<0.05）;③D组与C组比较,D/P urea、D/P Cr（30、60、90min）与D/D₀Glu（30、60min）的变化更明显（P<0.05）;④D组Curea、CCr、UF、NetUF均高于 B组（P<0.05）;⑤C、D组腹膜增厚及间皮细胞脱落情况较B组改善。结论?4.25%葡萄糖腹透液可造成腹膜间皮层损伤,腹膜的通透性增高,超滤量减少,腹透液中加入黄芪可以保护腹膜间皮层,提高腹膜对尿素、肌酐的清除,提高透析效能,但不增加腹膜对葡萄糖的吸收,高浓度含黄芪腹透液尚能提高腹膜对水的清除,增加透析超滤量。      

腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响

目的:通过在腹膜透析液(PDF)中添加黄芪注射液后观察患者腹腔巨噬细胞功能的变化。　方法:采用自 身对照的方法,在28例连续性不卧床腹膜透析(CAPD)治疗患者的PDF中添加黄芪注射液(20ml/2L)后,比较患 者透出液巨噬细胞活性、吞噬功能及肿瘤坏死因子α(TNF α)和一氧化氮(NO)分泌的变化情况,以及在不同剂量 黄芪注射液的作用下,巨噬细胞活性和细胞因子分泌改变的影响。　结果:用药前后患者透出液中TNF α含量未 出现显著变化,分别为(100±63)ng/Lvs(116±60)ng/L(P=0.192);腹腔巨噬细胞噬菌率分别为(34.8±12.7)% vs(43.4±9.3)%(P<0.01),杀菌率分别为(23.6±7.7)%vs(32.1±10.2)%(P<0.01);巨噬细胞经脂多糖 (LPS)刺激其噻唑蓝(MTT)还原能力检测值(A值)分别为0.156±0.051vs0.230±0.097(P<0.01)。上清液中 NO含量分别为(7.72±2.36)μmol/Lvs(12.22±2.81)μmol/L(P<0.01)。上清液中TNF α含量分别为(1406± 358)ng/Lvs(1925±389)ng/L(P<0.01)。分离的巨噬细胞在不同条件下共同孵育后,PDF组和RPMI1640组巨 噬细胞上清液中TNF α、NO含量和沉渣MTT还原能力较含黄芪注射液各组明显降低(P<0.01);黄芪组上清液中 TNF α、NO含量和沉渣MTT还原能力以1%和2%黄芪组改善较为明显,两组间比较     

黄芪注射液对实验性大鼠腹膜透析并发腹膜炎的影响

[目的]在普通腹透液中加入黄芪注射液,进行腹膜透析,观察其对透析并发腹膜炎的疗效及对腹腔防御机制的影响.[方法]按随机法将40只清洁级SD大鼠分为黄芪透析模型组、常规透析模型组、黄芪透析正常组、常规透析正常组4组,每组10只,以腹腔注入大肠杆菌的方法造成腹膜炎模型,分别以含生药8g/L黄芪注射液的腹透液和不合黄芪注射液的普通腹透液对模型和正常大鼠透析,连续7 d,并观察各组动物的一般情况,包括精神状态、进食、大小便,以及有无寒战、烦躁等临床症状,透析结束后检测腹透液常规、腹透液细菌培养+菌落计数及大鼠腹腔巨噬细胞功能.[结果]黄芪透析模型组、黄芪透析正常组及常规透析正常组腹透液白细胞总数、中性粒细胞数均显著低于常规透析模型组(P＜0.05或P＜0.01),而前3组间差异无显著性;各组腹透液蛋白质浓度无明显差异(均P＞0.05);常规透析模型组的巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数显著低于黄芪透析模型组、黄芪透析正常组及常规透析正常组(P＜0.05或P＜0.01);黄芪透析正常组的吞噬百分率显著高于常规透析正常组,而两组的吞噬指数则无显著性差异.[结论]含黄芪注射液的腹透液透析确能减轻腹膜透析腹膜炎的发病程度,其机理可能通过免疫调节途径,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,提高腹腔防御机制,同时,未见该剂量的黄芪注射液对腹腔有明显的刺激性.     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液改善脂多糖-高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的 评估丹参酮ⅡA磺酸钠注射液（STS）减轻脂多糖-高糖腹膜透析液（LPS-PDS）诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）损伤以及抑制腹膜纤维化的作用。方法 HPMCs来自腹腔外科手术患者腹膜细胞的原代培养。以LPS-PDS诱导的HPMCs损伤为模型,通过观察STS对HPMCs增殖活性、转化生长因子-β（TGF-β1）分泌、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP1）等的影响,阐明STS对HPMCs的保护作用及抗腹膜纤维化的机理。结果 LPS-PDS可造成HPMCs损伤,表现为活性下降,STS可明显减轻LPS-PDS对HPMCs的毒性,改善其造成的细胞活性下降,减轻LPS-PDS诱导的TGF-β1、TIMP1 mRNA上调和MMP-9 mRNA表达下降。结论 STS可以减轻LPS-PDS诱导的HPMCs损伤,可能是通过调节TGF-β1、TIMP1、MMP-9等蛋白的表达,发挥保护腹膜细胞和拮抗腹膜纤维化的作用。      

高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白（connexin43）表达的影响。方法分离培养人腹膜间皮细胞,细胞分为3组：正常糖组（含5．5mmol／L葡萄糖）、高糖组（含140mmol／L葡萄糖）和渗透压对照组（含5．5mmol／L葡萄糖加24．5mmol／L甘露醇）,培养24、48h后,应用Northernblot、Westernblot方法检测connexin43mRNA和蛋白质表达,比较3组之间的差异。结果正常糖组腹膜问皮细胞表达丰富的connexin43,高糖环境下培养的腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达均较正常糖组显著下降（P〈0．05）。渗透压对照组与正常糖组之间无明显差异（P〉0．05）。结论高糖可抑制腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达,可能为腹膜透析（PD）中腹膜间皮层完整性损伤的机制之一。     

肝素在高糖影响大鼠腹膜间皮细胞的增殖及其表达白细胞介素-1中的作用

目的:初步观察肝素在高糖影响大鼠腹间皮细胞(Rat peritoneal mesothelial cells,RPMC)增殖及其表达白细胞介素-1,(Interleukin-l,IL-l)中的作用,从而为持续性非卧床腹膜透析(Continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)中肝素的临床应用打下一定的理论基础。方法:建立RPMC的体外培养;并用四四氮唑蓝(MTT)细胞增殖实验和酶联免疫吸附方法(ELISA),来分析肝素对高糖(3.86％葡萄糖)影响RPMC增殖及其分泌IL-l的作用。结果:3.86％葡萄糖能显著抑制RPMC的增殖,而1.25U/ml肝素能部分逆转高糖对RPMC增殖的抑制作用(P <0.01),3.86％葡萄糖能显著增加RPMC表达IL-1β,而1.25U/ml肝素能部分减少高糖增加RPMC表达IL-1β的作用(P<0.01)。结论:本文结果提示,肝素可能通过逆转高糖对RPMC的增殖抑制作用及减少高糖增加RPMC表达促炎细胞因子IL-l的作用,而延缓CAPD相关性腹膜纤维化的发生,最终有益于CAPD进行。     

黄芪对腹膜透析病人腹膜超微结构的影响

目的探讨黄芪对腹膜透析(腹透)病人腹膜,间皮层超微结构的影响及其意义。方法采用光镜、扫描电镜和透射电镜对4组患者的腹膜活检标本进行形态学观察。结果尿毒症非腹透患者腹膜超微结构与正常对照者相似,而应用黄芪腹透患者的腹膜超微结构的退行变化较非应用黄芪的腹透患者为轻。结论长期腹透可引起腹膜功能衰竭,而腹膜形态结构的改变是最重要原因之一,应用黄芪进行干预对腹膜结构有一定的保护作用。     

高糖对人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白及纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法 利用HPMC体外培养模型，HPMC分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48h后，用ELISA法检测HPMC分泌FN及PAI-1的情况。结果 ①1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中的FN明显高于对照组（P〈0．05），且FN增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系。②2．5％、4．25％的葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中PAI-1明显高于对照组（P〈0．05），且增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系，1．5％葡萄糖液与对照相比没有差别（P〉0．05）。结论 高糖促使HPMC分泌FN、PAI-1增加，在腹膜纤维化的进程中起一定作用。     

一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的通过观察一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶（AR）活性的影响，探讨一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞（HPMC）的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定。第2-3代细胞用于实验。以硝普纳为一氧化氮供体，硝普纳（0．5mmol／L、1mmol／L、2mmol／L）＋1．5％葡萄糖培养液为实验组，以无一氧化氮1．5％葡萄糖培养液为对照组，观察剂量及时间对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响。应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处吸光值的下降表示醛糖还原酶活性。结果高糖状态下各浓度一氧化氮组醛糖还原酶活性均高于对照组，且醛糖还原酶活性随一氧化氮浓度的增加而增加；一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性随着时间的延长而逐渐增加。各时点一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性均高于葡萄糖组。结论一氧化氮以时间及剂量依赖的方式使腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性增加。     

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的 观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）表达的影响。方法 通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers（K-R）液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2 h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果 空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低（P<0.05）。结论 黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。     

不同浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞表达p21WAF1的影响

【目的】观察不同浓度的葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞p2 1WAF1表达的影响。【方法】大鼠腹膜间皮细胞在含糖13 8g/L和 38 6g/L的无血清培养基培养 2 4h后 ,用流式细胞仪分析细胞周期分布 ,用RT PCR法测定p2 1WAF1的表达水平。【结果】经含糖 13 8g/L和 38 6g/L培养基培养 2 4h后腹膜间皮细胞大多出现细胞肥大和停滞于细胞周期的G1期 ,以 38 6g/L组明显。高浓度葡萄糖刺激p2 1WAF1mRNA表达 ,38 6g/L组表达明显增高 (P <0 0 5 ) ;无血清常规培养基组和甘露醇组几乎无表达。【结论】高糖可刺激间皮细胞p2 1WAF1的表达 ,且可能与高糖作用下细胞肥大及G1期阻滞有关。     

丙酮酸乙酯对急性肝损伤大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响

目的:通过观察急性肝损伤(acute liverinjury,ALI)时丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1(zonula occluden-1)表达的影响,探讨EP对ALI的保护作用.方法:雄性Wister大鼠30只,随机分为对照组:腹腔注射2 mL生理盐水;ALI组:按D-Galn/LPS 700 mg/5(μg·kg),2 mL生理盐水稀释腹腔注射;EP组:与ALI组注射等量D-GalN/LPS,注射前1 h,先给EP 40 mg/kg,2 mL生理盐水稀释腹腔注射.各组于注射后48 h自腹主动脉采血,检测血清ALT及内毒素(Endotoxin,ET);留取一段结肠组织HE染色观察、并采用免疫组化方法测定肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的表达水平.结果:ALI组血清ALT、ET含量显著高于对照组(P<0.01),EP组ALT、ET含量虽高于对照组,但显著低于ALI组(P<0.05).HE染色可见对照组大鼠肠黏膜表面结构完整;ALI组大鼠肠黏膜间质充血水肿,绒毛顶端下间隙增宽,绒毛脱落坏死;EP组改变较ALI组减轻.免疫组化结果显示,对照组ZO-1均匀致密地分布于小肠上皮细胞连接处的尖端;ALI组ZO-1分布不均、染色明显变淡,EP组ZO-1的分布和表达与对照组相似.结论:EP可上调ALI时肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1表达,减轻肠源性内毒素血症,对ALI有保护作用.     

不同浓度腹透液对大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的探讨非感染状态下,腹透液（PDF）对腹膜间皮细胞（PMCs）产生单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响,及其与持续性不卧床腹膜透析（CAPD）相关性腹膜硬化的关系。方法将40只大鼠随机分为5组,除正常对照组外分别给予1.5%、2.5%和4.25%PDF及NS腹腔注射,40ml/d,第15天取标本检测PMCs中MCP-1mRNA表达,血清和PDF中MCP-1浓度,腹膜纤维连接蛋白（FN）的表达。结果3个腹透液实验组PMCs中MCP-1mRNA表达,4.25%腹透液组高于2.5%组和1.5%组,差异具有显著性（P〈0.05）;PDF中MCP-1水平和腹膜中FN表达,4.25%腹透液组最高,但与2.5%和1.5%组比较差异没有显著性。血清中的MCP-1水平在5组中未见显著差异（P〉0.05）,且均低于PDF中。FN水平与PMCs中MCP-1mRNA表达和PDF中MCP-1蛋白质水平均呈正相关。结论高浓度PDF可使PMCs中MCP-1mRNA表达升高。MCP-1升高可能是CAPD相关性腹膜硬化的原因之一。大量NS灌入腹腔也可导致腹腔炎症状态。