姜黄素逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的实验研究

目的:通过观察姜黄素作用人卵巢癌A2780/Taxol细胞株后,逆转该细胞株对紫杉醇的耐药作用,研究卵巢癌细胞对紫杉醇耐药的原因及姜黄素逆转耐药机制。方法:人卵巢癌A2780/Taxol细胞株在体外培养,将细胞分为对照组（A组）和实验组（不同浓度姜黄素组作用细胞）。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测2组细胞与相同浓度紫杉醇联用后细胞的生长抑制情况;Westernblot方法检测2组细胞内P-糖蛋白（P-gp）和蛋白激酶C-α（PKC-α）的表达情况。结果:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法得出联合用姜黄素各组细胞生长抑制率均高于A组（P<0.05～P<0.01）;Western blot检测联合用姜黄素各组多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α表达均较A组显著降低（P<0.01）。结论:姜黄素通过阻碍卵巢细胞中多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α的表达,增加紫杉醇对细胞的毒性,降低细胞的耐药性。     

γ-干扰素对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响

目的 :研究γ 干扰素 (IFN γ)对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株 3AO增殖的影响。方法 :采用MTT法计算细胞存活率、Giemsa染色观察细胞形态变化及凋亡情况、流式细胞术检测细胞周期变化。结果 :姜黄素可明显抑制 3AO细胞的生长 ,其半数生长抑制率 (IC50 )约为 1 8.5 μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2 /M期并可诱导细胞凋亡。IFN γ与姜黄素联用后 ,使上述作用明显增强 ,与两药单用组相比有统计学差异(P <0 .0 5 )。结论 :IFN γ可协同姜黄素抑制人卵巢癌细胞株 3AO增殖     

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖的作用及机制的探讨

目的:研究植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制. 方法:应用MTT法检测不同浓度染料木黄酮对3AO细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞的超微结构改变,TUNEL法确定凋亡,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,免疫细胞化学技术检测雌激素β受体的表达. 结果: 3AO细胞经不同浓度染料木黄酮处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用随时间延长及浓度增高而增强,10 mg/L和20 mg/L染料木黄酮作用72 h后,抑制率分别达到54.24%和65.99%. 染料木黄酮阻断3AO细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性. 电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征. TUNEL法观察到大量阳性凋亡细胞. 免疫细胞化学法检测到用药后,ERβ表达明显加强. 结论:染料木黄酮对3AO细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,并诱导其发生凋亡. 染料木黄酮可能通过雌激素β受体途径发挥药理作用,诱导卵巢癌细胞发生凋亡.     

姜黄素对人QBC939细胞生长抑制与凋亡的影响

目的 :研究姜黄素 (Curcumin)对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制与促凋亡作用。方法 :采用MTT法检测姜黄素对胆管癌细胞的抑制作用 ;相差显微镜 ,电镜下观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定DNALadder ;流式细胞术分析DNA含量。结果 :1,2 ,4 ,8,和 16mg·L-1姜黄素均能抑制人胆管癌细胞QBC939的生长 ,且抑制率具有浓度和时间依赖性 ,IC50 为 5 6mg·L-1。 8mg·L-1姜黄素作用后 ,QBC939细胞出现典型的凋亡形态特征 ,DNALadder出现 ,并检测到亚二倍体凋亡峰。结论 :Curcumin能有效地抑制QBC939细胞生长并促进其凋亡。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨紫杉醇 (PTX)对人卵巢细胞凋亡的影响。方法 :应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果 :癌细胞在PTX作用下 ,首先表现为G2 /M期阻滞 ,一定时间后出现细胞凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚或断裂。细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Bcl- 2在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应 ,而调亡诱发基因Bax先呈高表达后表达降低。结论 :PTX诱发人卵巢癌细胞的凋亡与细胞分裂阻滞密切相关 ,Bcl- 2和Bax在PTX引起人卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

二甲双胍和紫杉醇对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：研究二甲双胍联合紫杉醇在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明二甲双胍与紫杉醇的药物协同效应。方法：将卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、不同浓度（0.01、0.50、1.00、5.00和10.00 mmol·L^-1）二甲双胍组和联合用药组（不同浓度二甲双胍及紫杉醇联合用药）。MTT法检测各组SKOV3细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SKOV3细胞凋亡率及细胞周期变化;MTT法检测各组SKOV3细胞增殖抑制率。结果：MTT法检测,不同浓度二甲双胍组SKOV3细胞增殖抑制率明显升高,并呈浓度和时间依赖性,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测,不同浓度二甲双胍作用下SKOV3细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较,随着二甲双胍浓度的增加,药物作用48h后实验组SKOV3的细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;同时细胞周期发生明显变化,随着二甲双胍浓度的增加,G₀/G₁期细胞百分率降低（P<0.05）,而 G₂/M期细胞百分率升高（P<0.05）。MTT法检测,1.00 mmol·L^-1二甲双胍与紫杉醇联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于0.50 mmol·L^-1二甲双胍与紫杉醇联合用药组（P<0.05）;二甲双胍与紫杉醇联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于单独紫杉醇组（P<0.05）。结论：二甲双胍通过诱导细胞凋亡抑制卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖,二甲双胍能够增强紫杉醇对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制作用,二者具有药物协同效应。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨三氧化二砷对人卵巢癌细胞株3AO细胞体外增殖和凋亡的影响作用。方法 人卵巢癌细胞株3AO细胞体外培养。实验组三氧化二砷浓度分别为0．5、1．0、2．0、4．0、8．0μmol/L,设加入空白培养液为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）及流式细胞技术（FCM）,计算各组细胞的生长抑制率、细胞凋亡率,并进行细胞周期分析。结果 三氧化二砷有效地抑制3AO细胞生长,具有时间及浓度依赖性,P＜0．01;三氧化二砷作用后,3AO细胞凋记随时间及浓度升高而升高,P＜0．01;三氧化二砷使3AO细胞S期增加。结论 三氧化二砷抑制3AO细胞生长,诱导其凋亡,并使其S期阻滞。     

姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

姜黄素及其联合化疗对卵巢癌细胞株3AO体外增殖的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin熏Cur)及其联合化疗对人卵巢癌细胞株3AO细胞体外生长的抑制作用。方法:将Cur单独应用或与临床上常用的卵巢上皮癌化疗药物顺铂(cDDP)、卡铂(CBP)、拓扑替康(TPT)联合应用,观察对3AO细胞生长抑制率的影响,药物敏感实验采用MTT法。结果:Cur抑制3AO细胞的生长,其半数抑制浓度(IC50)为23.4μmol/L;Cur与各种浓度的cDDP、CBP或TPT联用,可提高各种药物对3AO细胞的生长抑制率(P<0.05～0.01)。结论:Cur在体外对人卵巢癌3AO细胞具有抑制作用,与cDDP、CBP或TPT联合应用,可提高3种药物的化疗效果。     

紫杉醇联合木黄酮对人卵巢癌细胞系OC_3的作用

目的利用Chou-Telalay联合指数(即中效原理)体外定量分析紫杉醇及染料木黄酮联合应用时对人卵巢癌细胞系OC3细胞的效应,并判断联合用药的效果是协同、相加还是拮抗。方法 采用MTT法观察药物的抗癌作用,并用中效原理计算两药的中效浓度和合用指数(CI),判断联合用药的效果。结果两种药物单独使用时随着药物剂量的增加,其抑制效应也增加,紫杉醇的中效浓度为9.44 mol/L,染料木黄酮的中效浓度为263.02 mol/L,两药合用时的中效浓度为60.53 mol/L。当两者在本实验所用浓度范围内合用时,CI<1,为协同作用。结论紫杉醇联合染料木黄酮对人卵巢癌细胞系OC3细胞生长有抑制效应,两种药物适当剂量合用为协同作用。     

热处理与顺铂、5-FU联用对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的:探讨不同温度热处理对顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及其各种联用方式对人卵巢癌细胞株3A0生长的抑制作用。方法:采用细胞培养及MTT方法检测在41、43及45℃温度条件下全量、半量DDP和5-FU及各种联用方式对3A0细胞株的生长抑制作用。结果:温度升高可显著抑制3A0细胞生长,且呈明显的温度依赖性;热处理可显著增强DDP及以DDP为主的联合化疗药物组的细胞生长抑制效果;43℃热处理对5-FU有一定的增强效应。热处理后DDP和5-FU的各种全量和半量联用方式均可达到同温度下全量DDP的细胞抑制效果。结论:DDP和5-FU联合应用及各种联用方式对人卵巢癌3AO细胞均有明显的杀伤作用,热处理可显著增强其杀伤作用。     

人卵巢上皮癌细胞原代培养及细胞系BUPH:OVSC-1的建立

目的:为人卵巢上皮癌的研究提供更多体外研究模型,确立卵巢上皮癌原代培养的条件,建立细胞系.方法: 将25例卵巢上皮癌手术切除的肿瘤组织或腹水标本进行体外培养,比较不同组织培养方法的效果.对所建卵巢癌细胞系的形态学、染色体核型、生长增殖及裸鼠种植情况进行观察.结果: 建立一套人卵巢上皮癌原代培养方法,使其体外培养传代数扩展至10～15代.经原代培养得到一株人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1,其形态学、染色体核型分析、接种致瘤性的观察结果表明,该细胞系符合人体恶性细胞特征.裸鼠种植瘤病理切片该细胞呈肉瘤样细胞形态,电镜及角蛋白免疫组化证实其为上皮起源.结论:应用改良的卵巢上皮癌原代培养方法能改善细胞的体外生存期.BUPH:OVSC-1是一株特殊的人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型.     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

人卵巢癌3AO细胞不同转移潜能克隆株的建立

目的:建立不同转移潜能的卵巢癌克隆细胞株。方法:通过克隆技术和细胞电泳,从卵巢癌细胞系3AO中筛选出3个电泳率差异较大的克隆亚系(A1、A5和A11)。并通过生长曲线、软琼脂集落形成实验、移动实验、体外侵袭实验,比较它们的生物学特性及其侵袭转移能力。结果:A1的电泳速度最快, 为(15.30±0.67)μm/s,细胞群体倍增时间为20.55 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数多于其他两者,为高转移潜能克隆株。A11的电泳速度为(6.20±0.72)μm/s,群体倍增时间为38.48 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数少于其他两者,为低转移潜能克隆株。结论:此异质性克隆系统来自同一肿瘤母系,遗传背景相似,却具有不同的转移潜能,为研究肿瘤转移机制和克隆肿瘤转移相关基因提供了良好模型。     

紫杉醇纳米粒腹腔给药对大鼠卵巢癌的抑制作用及淋巴靶向性

目的:探讨紫杉醇纳米粒(PLA)腹腔给药对大鼠卵巢癌的治疗效果及作用机制,并研究PLA在大鼠体内的分布.方法:用超声乳化法合成PLA.制备大鼠腹腔种植性卵巢癌模型,将40只荷瘤鼠随机分为4组,PLA组及市售紫杉醇(PTX)组各15只,生理盐水及PLA空白支架组各5只.每周腹腔给药5 mg/kg,共5次.末次给药后处死大鼠,比较荷瘤量及腹水量,用免疫组化法检测肿瘤组织增殖与凋亡.以高压液相色谱(HPLC)方法检测大鼠血浆及肝、心、肿瘤组织及盆腔淋巴结中的药物浓度.结果:合成的PLA包封率达70%,粒径分布为185～385 nm.PLA组大鼠荷瘤量及腹水量分别为(4.55±0.11) g及(3.55±0.50) mL,显著低于PTX组(10.13±0.52) g 及(30.45±1.55) mL,P＜0.01.免疫组化检测PLA组TUNEL阳性细胞数为(105±15),PCNA 阳性细胞数为(20±5),与PTX组[分别为(55±10)及(85±10)]相比,差异有统计学意义(P＜0.01).HPLC结果显示,末次给药后48 h PLA组肿瘤及盆腔淋巴结紫杉醇的药物含量分别为(1.53±0.35) μg/g及(0.75±0.05) μg/g,明显高于PTX组[(0.0636±0.015) μg/g及(0.188±0.045) μg/g, P＜0.01].结论:PLA腹腔给药可显著抑制大鼠卵巢癌生长,并具有淋巴靶向性.     

骨桥蛋白促进卵巢癌细胞SKOV3侵袭潜能的实验研究

目的检测卵巢癌细胞株SKOV3中骨桥蛋白（OPN）的表达,探讨OPN对卵巢癌细胞侵袭潜能的影响。 方法pcDNA3.1(-)/OPN重组质粒转染SKOV3细胞,以空质粒转染作对照。采用RT PCR及Western blot法检测OPN mRNA和蛋白表达水平,并用基质凝胶侵袭实验检测两组细胞侵袭力。 结果重组质粒转染SKOV3细胞后OPN mRNA和蛋白表达明显升高。侵袭实验证实重组质粒转染组细胞侵袭力明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论OPN对卵巢癌细胞的侵袭潜能有促进作用。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系(3AO)的诱导分化作用

目的　观察不同浓度的地塞米松 (Dex)对人卵巢癌细胞系 ( 3AO)增殖及分化的影响 ,在 3AO细胞中是否有糖皮质激素受体 (GR)的表达。方法　以不同浓度Dex( 1× 10 -10 ～ 1× 10 -6 mol/L)处理培养 3AO细胞后 ,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况 ,采用氨基安替比林法测定碱性磷酸酶 (AKP)活性 ;采用酶联免疫法测定 3AO细胞分化标志抗原CA12 5水平的变化 ;测定GR拮抗剂RU486作用于 3AO细胞后能否阻断糖皮质激素的效应 ,用放射配体结合分析法和定量RT PCR法检测 3AO细胞中GR的表达。结果　Dex对 3AO细胞的增殖有明显抑制作用 ,1× 10 -6 mol/LDex作用 5d后活细胞计数为对照组的 5 6.78% ,同时伴有细胞形态的变化 ;Dex还可使 3AO细胞AKP活性增高 ,这种作用具有时间和剂量依赖性 ;1× 10 -6 ～ 1× 10 -10 mol/LDex作用于3AO细胞后 ,明显抑制卵巢癌细胞标志抗原CA12 5的表达 ;RU486可完全阻断Dex对 3AO细胞活性的诱导作用 ;在细胞中存在高亲和力、低容量GR。结论　Dex对 3AO细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用 ,在 3AO细胞中存在GR ,Dex调节 3AO细胞增殖分化的作用通过GR介导