7-二氟甲基金雀异黄素对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨7-二氟甲基金雀异黄素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:采用过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞氧化应激损伤的模型,MTT法检测细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:7-二氟甲基金雀异黄素能有效拮抗40.0μmol/L的H2O2孵育24h对PC12细胞增殖活性的抑制作用和对PC12细胞凋亡的诱导作用,并能减少40.0μmol/L的H2O2诱导的PC12细胞的LDH释放。结论:7-二氟甲基金雀异黄素对过氧化氢诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

BDNF基因修饰淋巴细胞培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

[目的] 研究脑源性神经营养因子基因( brain- derived neurotrophic factor, BDNF gene)修饰淋巴细胞对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.[方法] MTT法检测 H2O2和多巴胺( dopamine, DA)对 PC12细胞生长的抑制率, Hoechst染色和 PI染色流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 H2O2和 DA对 PC12细胞凋亡的诱导作用.[结果] BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞的培养上清可降低 H2O2和 DA对 PC12细胞生长的抑制率并能抑制 H2O2和 DA诱导 PC12细胞凋亡.[结论] BDNF基因修饰淋巴细胞的培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用.     

锰超氧化物歧化酶过表达对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 揭示锰超氧化物歧化酶（MnSOD）在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用及机制。方法 转染人正义和反义MnSOD基因的PC12细胞,用50 mmol H2O2攻击已转染的细胞系,并采用MTT法、流式细胞术和 Hoechst染色方法研究H2O2的细胞毒作用。结果 转染正义MnSOD的细胞比原细胞的MnSOD酶活性提高1.3倍,而转染反义MnSOD细胞的酶活性降低67%。结论 H2O2对PC12细胞毒作用是通过诱发PC12细胞凋亡作用来实现的;MnSOD具有抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡作用,涉及线粒体的损伤,导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。     

N-硬脂酰酪氨酸对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的影响

目的研究N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）预处理对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养传代的PC12细胞分为空白对照组、H2O2损伤组（不同浓度H2O2诱导16h）和NsTyr预处理组（不同浓度NsTy预处理30min后加入100μmol／LH2O2诱导16h）。流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧类（ROS）生成,Westernblotting检测Bax和Bcl-2的表达。结果与H2O2（100μmol／L）损伤组比较,5、10μmol／LNsTyr预处理组PC12细胞存活率显著升高（P〈0．01）,凋亡细胞率降低（P〈0．05）,细胞内ROS生成减少（P〈0．05,P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论NsTyr能提高PC12细胞的抗氧化应激损伤能力,上调Bcl-2表达和下调Bax表达,抑制细胞凋亡。     

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究丹酚酸B（Salvianolic acid B,Sal B）对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1-100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达。结论在0.1-100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关。     

毛钩藤碱对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制

目的：观察毛钩藤碱（HS）对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法：选取出生1～2 d的大鼠乳鼠提取原代心肌细胞作为研究对象,用400 μmol/L浓度的H2O2刺激细胞,复制细胞氧化应激模型。将细胞分为4组：Control组、HS组、H2O2组、H2O2+HS组。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活性,采用Tunel法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测细胞形态结构,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Cleaved-caspase 3、Nrf2及HO-1的蛋白水平表达情况。结果：细胞活力检测结果发现,与Control组比,H2O2处理6、12、24 h,细胞活性均显著降低（P ＜0.01）;与H2O2 组比,H2O2+1 μmol/L HS、H2O2+10 μmol/L HS组细胞活力显著升高（P ＜0.01）;与H2O2组比,H2O2+100 μmol/L HS组细胞活力显著下降（P ＜0.01）。细胞凋亡检测结果显示,与H2O2组比,H2O2+HS组细胞凋亡显著下降（P ＜0.05）,肌节结构相对完整;与H2O2组比,H2O2+HS组细胞Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase 3/Caspase 3 蛋白比值下调（P ＜0.05）,Nrf2、HO-1 蛋白表达上调（P ＜0.05）。结论：HS对H2O2诱导的大鼠心肌细胞线粒体凋亡有保护作用,其机制可能通过Nrf2/HO-1信号通路发挥作用。     

查耳酮衍生物L2H24对H2O2诱导损伤的心肌细胞的保护作用

目的：探讨查耳酮衍生物L2H24 对H2O2 诱导氧化损伤的心肌细胞的抗氧化保护作用及其相关分子机制。方法：MTT法检测大鼠心肌细胞H9c2 活性;集落克隆实验检测细胞增殖能力;倒置显微镜下观察细胞焦亡形态学变化;硫代巴比妥酸显色反应检测细胞中脂质过氧化MDA水平;Western blot法检测HO-1、核/浆Nrf2、Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平。结果：L2H24能上调H2O2氧化损伤的H9c2细胞的存活率（P ＜0.05）,促进其细胞集落形成,降低其MDA水平（P ＜0.05）,减少细胞中Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平（P ＜0.05）,改善细胞焦亡现象;能促进细胞中Nrf2易位入核,并上调其下游抗氧化蛋白HO-1的表达水平（P ＜0.05）,对H2O2诱导氧化损伤的心肌细胞起到保护作用。结论：查耳酮衍生物L2H24具有抗氧化损伤作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

H_2O_2对PC12细胞Caspase-3和NF-κB P65基因表达的影响

目的 :探讨H2 O2 对PC12细胞半胱天冬酶 3(caspase 3)和核转录因子 kappaBP6 5 (uclearfactor kappaB ,NF κBP6 5 )基因表达的影响。方法 :不同剂量H2 O2 (0～ 4 0 0nmol·L-1)处理PC12细胞 8h ,采用RT PCR检测Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达变化 ,Westernblot检测Caspase 3P 2 0活性片段和NF κBP6 5蛋白表达的变化 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。结果 :随H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达和Caspase 3P2 0活性片段及NF κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;随H2 O2 浓度从 5 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Cas pase 3相对活性增加 (P <0 .0 5 ) ,在 4 0 0nmol·L-1H2 O2 时Caspase 3相对活性达最大值。 结论 :H2 O2 可剂量依赖性的增加Caspase 3mRNA表达和Caspase 3P 2 0活性片段 ,增加Caspase 3活性 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF κBP6 5mRNA表达和NF κBP6 5蛋白表达。     

线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔（mPTP）在天麻素抗氧化应激损伤的 保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组：正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌 素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A（mPTP开放剂）观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组 细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷（ATP）试剂盒检测ATP的 含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot 检测细胞内细胞色素C（Cyt C）含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢 组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组（1.98±0.18 vs 3.08±0.14）,差异有统计学意义（P=0.014）。环孢菌素A可以阻断 氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用（P<0.05）,并且在一定程度上阻断了天 麻素的抗凋亡作用（5.77±0.75）% vs（1.97±0.82）%,两者差异有统计学意义（P<0.001）。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发 生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。     

红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号途径保护H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的 探讨红景天苷保护H2O2诱导PC12细胞凋亡的分子机制.方法 PC12细胞置于含10％马血清、5％胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中常规培养.不同浓度的红景天苷预处理细胞2h,然后H2O2作用细胞特定的时间,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP,caspase 3的表达及胞内信号分子p38,ERK和JNK的磷酸化水平;DAPI染色检测细胞核的形态改变;ROS检测试剂盒检测胞内ROS的水平;膜质分离实验检测NOX2的两个重要亚基gp91phox和p47phox在胞膜和胞质中的含量;免疫共沉淀实验检测gp91phox和p47phox的结合.结果 红景天苷浓度依赖性的抑制H2O2诱PC12细胞凋亡;减弱H2O2诱导p38,JNK和ERK的磷酸化;减少H2O2诱发的ROS释放;抑制gp91phox和p47phox的结合,进而抑制NOX2的活性.结论 红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号通路保护H2O2诱导PC12细胞凋亡.     

内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

硫化氢对MPP+诱导 PC12 细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以MPP＋损伤PC12细胞作为帕金森病的细胞模型,甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度;双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧水平变化;应用硫化氢钠（sodium hydrosulfide,NaHS）作为H2S的供体。结果 200μmol/L和400μmol/L硫氢化钠呈浓度依赖性阻断MPP＋引起PC12细胞存活率的降低;400μmol/L硫氢化钠能明显抑制400μmol/L MPP＋诱导的PC12细胞LDH的漏出,以及抑制MDA和活性氧的产生。结论硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

PC12细胞应激损伤中能量限制的效应及SIRT3的表达

目的 研究H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤中,能量限制(CR)及SIRT3参与的调控效应.方法 实验分4组:H2O2组,H2O2+CR组,CR组和正常对照组;MTT法检测不同浓度H2O2作用下CR对细胞生存率的影响;TUNEL染色法检测过氧化氢作用后CR对细胞的凋亡的影响;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT3的表达定位;RT-PCR及Western印迹检测SIRT3、Caspase-3的表达变化.结果 60μmol/L H2O2作用6 h后,H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%可维持在70%以上,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);120μmol/L H2O2作用下,H2O2组的细胞活力显著下降(38.22±3.34)%,后续研究选取60μmol/L H2O2浓度作为应激源;60μmol/L H2O2作用6 h后H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%与CR+H2O2组(97.26±1.92)%间比较差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL凋亡检测H2O2+CR组凋亡率较H2O2组显著降低.免疫荧光双染色证实PC12细胞中SIRT3为一种线粒体蛋白.Western印迹显示与正常对照组(5256±144)比较,CR组中SIRT3表达升高(6857±157),差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(3786±160),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(3786±160)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(5056±121),差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较(5342±420),H2O2组中Caspase-3表达升高(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).CR+H2O2组(5750±438)中Caspase-3表达较H2O2组表达下降(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).RT-PCR显示与正常对照组(6204±134)比较,CR组(7214±148)中SIRT3表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(4807±143),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(4807±143)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(6195±166),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PC12细胞中,CR具有抗氧化应激损伤及凋亡的效应;CR可上调PC12细胞中SIRT3的表达,在H2O2诱导的PC12应激损伤中CR-SIRT3的调控具有保护效应,SIRT3是否具有延缓神经元衰老作用值得进一步研究.

Abstract：

Objective To study the regulation effects of CR (caloric restriction) and SIRT3 in the H2O2-induced oxidative stress injury of PC12 cell. Methods The cells were divided into four groups:H2O2, H2O2+CR, CR and control (high glucose). For control and H2O2 group, cells were cultured in DMEM containing 0.45% glucose; for group in CR condition, cells were treated with the medium containing 0.1% glucose. For groups with H2O2, the H2O2 was diluted in EMEM medium to obtain the final concentration containing 60 μmol/L. Viability of PC12 cells were measured by MTT assay. The medium was refreshed with different concentration of H2O2 (from 10 to 120 μmol/L). The absorbance of the samples was measured at 492 nm using a microtiter plate reader. We detected TUNEL-positive cells using the In Situ Cell Apoptosis Detection kit pretreated with CR and H2O2. Immunofluorescence double staining detected the expression and localization of SIRT3. RT-PCR and Western-blot mehtods detected the expression of SIRT3,Caspase-3. Results After pretreating with 60 μmol/L H2O2 for 6 h, the viability of PC12 cells in H2O2 group (74.01±2.21)% retained above 70%, and have statistical significance contrasted with control group (P＜0.05); After pretreating with 120μmol/L H2O2, the viability of PC12 cells declined significantly (38.22±3.34)%. So 60μmol/L H2O2 is our experiment concentration . The viability of H2O2 group (74.01±2.21)% was much lower than CR + H2O2 group (97.26±1.92)% (P＜0.05). After pretreating with H2O2, TUNEL staining showed the apoptosis cells of CR+H2O2 group decreased significantly contrasted with H2O2 group. The immunofluorescence double staining results showed that SIRT3was a mitochondria protein. Western-blot showed the expression of SIRT3 in CR group (6857±157) (P＜0.05) increased and decreased in H2O2 group (3786±160) (P＜0.05) contrasted with control group (5256±143). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group(5056±121)(P＜0.05)increased contrasted with H2O2 group(3786±160). We also detected that Caspase-3 in H2O2 group(8499±426)(P＜0.001 )was much higher than control group than (5342±420), but in the CR + H2O2 group (5750±438 ) theexpression of Caspase-3 was much lower than H2O2 group(8499±426) (P＜0.001). RT-PCR also showed that the expression of SIRT3 in CR group (7214±148) increased and decreased in H2O2 group (4807±143 ) (P＜0.05) contrasted with control group (6204 ± 134 ). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group (6195 ± 166) increased contrasted with H2O2 group (4807 ± 143 ) ( P＜0.05). Conclusion CR causes anti-oxidative injury and has apoptotic effects in PC12 cell. It up-regulates the expression of SIRT3 and the effects of CR-SIRT3 can prevent PC12 cell from H2O2-induced apoptosis. And SIRT3 may be a novel molecule of regulating target in the delay of neuronal senescence.     

银杏叶提取物对6-OHDA致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨6-羟基多巴胺（6-OHDA）对PC12细胞的损伤作用，观测银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，GBE）对该损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用细胞培养的方法，建立PC12细胞的6-OHDA损伤模型。MTT比色试验检测细胞活性，Hoechst33342荧光染色观察细胞形态变化，ELISA法检测胞质多巴胺（DA）的含量，免疫印迹法检测caspase～3观察细胞凋亡。结果40mg／LGBE对100umol／L6～OHDA作用于PC12细胞24h具有一定的保护作用，GBE可明显升高6-OHDA诱导的PC12细胞DA的含量（与损伤组比较，P〈0．05），GBE可减少6-OHDA诱导的PCI2细胞caspase-3过度表达。结论GBE可减轻6-OHDA诱导的PCI2细胞损伤和凋亡，其作用可能与抑制caspase-3蛋白酶的激活有关。     

AMPK/STAT1通路参与土木香内酯改善H2O2引起的神经细胞PC12凋亡

目的：研究土木香内酯（ALA）对H2O2诱导神经细胞PC12凋亡的影响。方法：用不同浓度（1、5、10、20、50和100 μmol/L）的ALA处理细胞后进行MTT检测细胞增殖;用不同浓度（1和5 μmol/L）的ALA预先处理细胞后加入H2O2刺激细胞,进行流式和MTT检测细胞增殖情况;设立对照组、H2O2（100 μmol/L）组、ALA（1和5 μmol/L）组,ALA干预H2O2处理的细胞进行细胞流式检测细胞凋亡情况,MTT检测细胞增殖情况,Western blot检测AMPK和STAT1的磷酸化;利用siRNA沉默AMPK表达后再用ALA处理,Western blot检测STAT1的磷酸化的表达。结果：高浓度ALA抑制PC12细胞增殖;与对照组比,经H2O2刺激后PC12细胞凋亡增高;与H2O2组比较,ALA组细胞凋亡明显降低,并呈剂量依赖性;沉默AMPK表达不影响H2O2诱导PC12细胞STAT1的磷酸化表达;在沉默AMPK后再用ALA处理,与单沉默AMPK比较,STAT1的磷酸化的表达差异无统计学意义。结论：ALA可通过AMPK的激活调控H2O2诱导PC12细胞的STAT1的磷酸化表达,从而影响细胞凋亡。     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

Mechanism of the neuronal apoptosis induced by NOS,p38 MAPK and Caspase-3 after hypoxia injury

Objective To study the mechanism of the neuronal apoptosis induced by NOS, p38 MAPK and Caspase-3 after hypoxia injury. Methods The apoptosis of PC12 cells intoxicated by hypoxia was determined by using MTT assay,fluorescent staining, and FCM. RT-PCR was used to detect the pro-portion of nNOS, iNOS, p38 MAPK and Caspase-3 mRMA expression. Results MTT assay indicated that hypoxia-induced suppression of growth of PC12 cells was negatively related to hypoxia time.[第一段]     

北五味子总木脂素对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的： 探讨北五味子总木脂素(SCL)对过氧化氢(H₂O₂) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)凋亡的保护作用及其机制。方法： PC12细胞分为对照组、模型组及SCL高（SCL₁）、低（SCL₂）剂量组,用H₂O₂刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,免疫组化方法检测与凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果：与模型组比较,SCL组随着剂量的增加PC12细胞存活率升高（P<0.05),凋亡率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01), bcl-2表达增加(P<0.05),bax的表达降低(P<0.05)。结论:SCL可抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。