人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的：建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的方法。方法：从新鲜的人大肠癌标本上切取肿瘤组织,移植于裸鼠皮下,原代移植成功后再进行传代,观察裸鼠摄食、活动状况、成瘤时间、成瘤率、潜伏期、肿瘤生长情况、移植瘤大小及组织病理学变化。结果：原代肿瘤移植成功率为40%,传代肿瘤移植成功率为75%,原代移植肿瘤及传代移植肿瘤组织形态学特征均与患者原发肿瘤保持一致。结论：初步建立了一种有效的人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,为大肠癌的研究奠定了基础。     

肝门部胆管癌裸鼠动物模型的建立

目的建立胆管癌细胞系裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型。方法应用自制显微注射针将培养的胆管癌细胞系QBC939细胞接种于裸鼠肝门部胆管与门静脉组织间隙紧贴胆管处,15d后行种植瘤组织解剖学和病理学检查。结果每只裸鼠肝门部胆管与门静脉组织间隙内可接种浓度为1×107个/ml的胆管癌细胞悬液100μl;原位种植15d后,肝门部胆管原位种植瘤成瘤率为100%（7/7）;病理学观察显示为典型的瘤组织表现。结论成功建立了胆管癌细胞系裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型。     

p185高表达人卵巢癌裸鼠模型的建立

目的 建立高表达p185的人卵巢癌裸鼠模型。方法 BALB／c裸鼠皮下接种高表达p185的人卵巢癌细胞株SKOV3,观察成瘤情况及移植瘤病理组织学特点,并用SP免疫组织化学法测定移植瘤的p185表达情况。结果 12只裸鼠均荷瘤成功,病理组织学与免疫组化均证实移植瘤保持了原细胞系特征。结论 高表达p185人卵巢癌裸鼠模型的成功建立为抗p185抗体药物的体内药效研究提供了理想的平台。     

复方苦参液对大肠癌裸鼠皮下移植瘤的体外实验研究

目的：探讨复方苦参液对大肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤情况及相关作用机制。方法：30只裸鼠建立大肠癌皮下移植瘤动物模型,随机分为3组：空白对照组（注射生理盐水）、低浓度治疗组和高浓度治疗组.观察3组第3,7,14,21日皮下移植瘤生长情况及裸鼠体质量的变化;治疗结束时取肿瘤组织及心、肝、肺、肾等行病理组织学检查,免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和CD34,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果：复方苦参液对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,与对照组相比,瘤体质量明显降低、体积减小（P〈0.05）,坏死面积显著增加,细胞增殖降低（P〈0.05）,血管生成减少（P〈0.05）,凋亡指数明显升高（P〈0.05）,但对裸鼠体质量无明显影响,心、肝、肺、肾等组织未见明显病理学改变。结论：复方苦参液具有抑制入大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用,可能与其抑制血管生成和诱导细胞凋亡有关。     

胰腺癌裸鼠原位模型3.0TMRI表现

目的 探讨人胰腺癌裸鼠原位模型种植方法,研究其MRI表现及病理基础,为活体研究胰腺癌奠定基础.方法 采用人胰腺癌BXPC-3细胞对裸鼠进行原位种植,并使用3.0 T MRI成像,包括T1WI、T2WI及增强扫描,结合病理,分析人胰腺癌裸鼠原位模型的MRI表现.结果 18只裸鼠有15只接种成功,接种成功率为83.3％( 15/18).病理学检查符合胰腺高分化实体癌.对15只裸鼠行磁共振成像,肿瘤MR1表现为10只T1WI呈均匀稍低信号(66.7％),5只(33.3％)信号不均,以稍低信号为主;T2 WI呈均匀(26.7％,4/15)或不均匀(73.3％,11/15)稍高信号,增强扫描瘤灶边缘强化较明显,瘤灶轻度强化,坏死部分不强化.结论 3.0 T MRI能够检测出直径≥2 mm的胰腺肿瘤,并能够清晰显示裸鼠原位模型肿瘤的位置、形态、大小及其内部结构,能为胰腺癌进一步活体研究提供可视化平台.     

茶多酚对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的：通过观察茶多酚在体内对人鼻咽癌细胞的抑制作用,探讨其可能的抗癌机制。方法以人鼻咽癌细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型,以茶多酚腹腔注射干预,在观察抑瘤率基础上,以实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测裸鼠移植瘤VEGF在mRNA及蛋白水平上的表达变化。结果茶多酚具有显著抑制鼻咽癌细胞 HONE1移植瘤生长的作用,与模型对照组相比,低、高剂量茶多酚组体内抑瘤率分别为18．82％、47．66％,呈浓度相关性（P＜0．05）;荧光定量 PCR及Western blot结果示,茶多酚可下调VEGF的mRNA和蛋白表达水平,且呈浓度依赖性,其中高剂量组变化明显,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论茶多酚对人鼻咽癌HONE1细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,机制可能与调节VEGF表达,从而抑制肿瘤血管生成等作用有关。     

裸鼠人大肠癌模型的建立及其特征

本文报告用NC裸小鼠建立的人大肠癌移植瘤模型、定名为HCANZ-901。来源于病人的原代大肠癌块,接种成功率100％(6/6),现已传至19代,传代成功率为97％。移植瘤生长无潜伏期,倍增期6～7d,对移植瘤的光镜、电镜、CEA组化等检查表明该肿瘤模型保持了人大肠癌的恶性特征。     

AdMax腺病毒介导c-kit RNA干扰对胃肠间质瘤裸鼠移植瘤株生长的影响

目的 构建转导c-kit基因RNA干扰(RNAi)重组AdMax腺病毒,探索一种新的胃肠间质瘤(GIST)治疗手段.方法 合成带有限制性内切酶酶切序列c-kit shRNA.T4 DNA聚合酶作用下,c-kit shRNA插入穿梭质粒PDC316-EGFP-U6,形成PDC316-EGFP-U6-C-KIT.AdMax腺病毒包装系统同源重组生成腺病毒AdEGFP-U6-C-KIT.建立GIST裸鼠异位移植瘤株.实验组与对照组分别给予AdEGFP-U6-C-KIT和空病毒瘤内注射,比较两组瘤株体积、抑瘤率及CD117免疫组化表达差异.结果 琼脂糖电泳证实c-kit shRNA长度约50 bp.PDC316-EGFP-U6-C-KIT测序显示含有目的基因.AdEGFP-U6-C-KIT感染293细胞可见绿色荧光.纯化后重组腺病毒AdEGFP-U6-C-KIT物理滴度为5×1011vp/ml,感染性滴度(TCID50)为1.26×1010 pfu/ml.实验结束时,实验组肿瘤体积平均为(75±23)mm3,对照组平均为(989±31)mm3,差异有统计学意义(P=0.000).实验组抑瘤率为59.6%.CD117阳性表达率实验组为20%,对照组为100%,差异有统计学意义(P=0.001).结论 重组腺病毒AdEGFP-U6-C-KIT可高效转导c-kit RNAi、抑制c-kit基因表达及GIST裸鼠移植肿瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate a novel therapeutic regiment for gastrointestinal stromal tumor (GIST) based on c-kit RNA interference (RNAi) under the mediation of AdMax adenovirus. Methods c-kit shRNA, whose lateral sides were decorated with restriction endonuclease sequences, was designed. The joining of c-kit shRNA and PDC316-EGFP-U6 was catalyzed by T4 DNA ligase to construct PDC316-EGFP-U6-C-KIT. Homologous recombination of AdEGFP-U6-C-KIT was performed with AdMax system.Heterotopic transplantation of GIST in nude mice was established. AdEGFP-U6-C-KIT was intratumorally injected in experimental group while blank admax adenovirus AdEGFP-U6 in control group. The volume,inhibition ratio of tumor and CD117 expression of graft tumor were compared between test and control groups.Results The length of c-kit shRNA was around 50 bp in agarose electrophoresis. Gene sequencing revealed the designed c-kit RNAi sequence in PDC316-EGFP-U6-C-KIT. After transfection with AdEGFP-U6-C-KIT,293 cells presented green fluorescence. The physical and infective titer of AdEGFP-U6-C-KIT was 5 × 1011vp/ml and 5.67 × 107 pfu/ml respectively. At the end of test, the mean volume of graft tumor was significantly smaller in test group than in control group [(75 ±23) vs (989 ±31 ) mm3, P =0. 000]. The inhibition ratio of tumor was 59.6% in test group. Two cases(20% )in test group and 10( 100% )in control group had a positive expression of CD117 ( P = 0. 001 ). Conclusion c-kit RNAi mediated by Admax vector system can inhibit effectively the expression of c-kit gene and the growth of GIST in nude mice.     

人表皮癌细胞在裸鼠体内的移植

将人表皮癌细胞ＫＢ－３－１及其阿霉素抗性细胞ＫＢ－Ａ－１接种于裸小鼠ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ前肢左腋下,经８～９ｄ的潜伏期,在小鼠左前肢长出肿瘤,建立了裸小鼠人表皮癌模型。     

腺病毒介导的p27mt基因转染对肝癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的:研究携带突变型p27的重组腺病毒(Ad-p27mt)基因转染对肝癌的体内、外抑制作用,并探讨其抑癌机制。方法:⑴将Ad-p27mt转染人肝癌细胞SMMC-7721,Western blotting检测P27、Bcl-2、Bax的表达;流式细胞仪(FCM)观察Ad-p27mt对肝癌细胞生长抑制作用。⑵Ad-p27mt直接注射入人肝癌裸鼠移植瘤中,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。结果:Ad-p27mt转染肝癌细胞后,细胞增殖明显受抑制,G0/G1期细胞比例增加,P27表达增强,Bax/Bcl-2比例增高,采用Ad-p27mt基因治疗肝癌裸鼠移植瘤生长受抑制,肿瘤生长抑制率达57.09%。结论:Ad-p27mt基因转染对肝癌具有较显著的体内、外抑制作用和诱导凋亡作用,其机制是通过增强P27表达,使细胞产生周期阻滞,诱导凋亡的机理可能是上调Bax/Bcl-2比例所引起。     

腺病毒介导的p27kip1基因转移对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 :研究p2 7kip1基因转移对食管癌的体内、外抑制作用 ,并探讨其抑癌机制。方法 :①构建携带人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Ad p2 7kip1) ;②将Ad p2 7kip1转染人食管癌细胞Eca970 6 ,MTT法、3 H TdR和3 H Leucine掺入试验检测对细胞增殖的影响 ,流式细胞仪 (FCM)、DNA片段分析检测对细胞周期和凋亡的影响 ,TRAPPCR -ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学法及Westernblotting法检测p2 7kip1和Survivin的表达 ;③Ad p2 7kip1直接注射入人食管癌裸鼠移植瘤中 ,观测抑瘤效应 ,并检测p2 7kip1和Survivin的表达。结果 :①Ad p2 7kip1转染食管癌细胞后 ,细胞增殖明显受抑制 ,G0 /G1期细胞比例增加 ,并出现明显的亚二倍体凋亡峰和特征性的凋亡梯状条带 ,细胞端粒酶活性降低 ,p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低 ;②采用p2 7kip1基因治疗 ,食管癌裸鼠移植瘤生长明显受抑制 ,肿瘤生长抑制率达 6 4 .1% ,移植瘤中p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低。结论 :p2 7kip1基因转移对食管癌具有较显著的体内、外抑制作用 ,其机制是增强p2 7kip1表达、抑制Survivin表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,抑制端粒酶活性 ,并诱导凋亡 ,表明该基因疗法是食管癌治疗的新途径。     

人突变p27重组腺病毒的构建及其在结肠癌细胞SW480中的表达

目的 :为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变 p2 7的抗肿瘤特性 ,构建复制缺陷型重组hp2 7mt基因腺病毒。 方法 :hp2 7mt自载体pORF9-hp2 7mt中切出 ,经 2次亚克隆 ,插入到穿梭质粒 pShuttle -CMV中 ,形成转移质粒 pShuttle -CMV -hp2 7mt;然后再用PmeI线性化的 pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含腺病毒骨架质粒 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183,使其在细菌内发生同源重组。重组质粒鉴定正确后经PacⅠ酶切 ,转入Ad2 93细胞 ,包装成重组腺病毒Ad -hp2 7mt。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ,用紫外分光光度计进行滴度测定。用重组 p2 7mt的腺病毒Ad - p2 7mt感染大肠癌细胞SW 4 80 ,WesternBlot检测p2 7蛋白的表达。结果 :用含pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183后 ,可获得约 30 %的阳性重组质粒。PCR检测表明重组腺病毒DNA中含有目的基因。重组腺病毒滴度为 7.95× 10 15pfu/L。转染大肠癌细胞后 ,p2 7在SW4 80中获得了高表达 ,而未转染细胞和Ad -LacZ转染的细胞中仅有低表达。结论 :腺病毒作为一种基因转移载体 ,可有效介导 p2 7在肿瘤细胞中的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景。     

Study on the Penetrability of PEP-1-P27mt for Cell Membranes in Vitro

Double-stranded oligomeric nucleotide encoding PEP-1 peptides was synthesized, pro- karyotic expression pET15b-pep-1-p27mt recombinant constructed, E. coli BL21 (DE3)pLysS trans- formed and induced with IPTG to highly express fusion protein PEP-1-P27mt. Fusion protein with an N-terminal His-tag could be purified by Ni2 -resin affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Cultured EC9706 cells treated with PEP-1-P27mt revealed that PEP-1-P27mt was transduced into cells after 15 min and reached maximal intracellular concentra- tions in 2 h. PEP-1-P27mt of 1 μmol/L final concentration could most strongly suppress the growth. It was suggested that PEP-1 can carry P27mt across membrane, which provides a new biological pro- tocol for using cyclin dependent kinase inhibitors p27mt in suppressing the growth of tumor cells.     

细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒

目的:利用细菌内同源重组法,构建含人突变p27(hp27mt)基因重组腺病毒. 方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组. 重组质粒鉴定正确后经PacI酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt. 采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定. 结果:用含pShuttle-CMV-hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183后,可获得约30%的阳性重组质粒. PCR检测表明重组腺病毒含有目的基因. 滴度为7.95×1015 pfu/L. 结论:用细菌内同源重组法可快速、高效制备均一的高滴度重组腺病毒. 为研究p27mt对消化道肿瘤的治疗奠定了基础.     

p27mt对裸鼠肝癌移植瘤组织VEGF表达的影响

目的:研究外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生长的影响。方法:用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt组)注射瘤体2,1d后观察移植瘤的血管变化,免疫荧光法检测组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果:Ad-p27mt组移植瘤血管单支、纤细,VEGF表达低于对照组和Ad-Lac Z组(P<0.05)。结论:p27mt抑制裸鼠皮下移植瘤滋养血管生成可能通过降低血管中VEGF表达完成。     

Effects of Ad-p27mt gene transfer on the expression of Bax,Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice

In this study, the mechanism by which Ad-p27mt inhibits the growth, invasion and metastasis of transplanted liver tumor was studied by examining the effects of Ad-27mt gene transfer on the expression of Bax, Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice.The model of transplanted hepatic tumor was established in nude mice.The mice were then divided into three groups, which were injected with PBS, Ad-LacZ and Ad-p27mt and the growth of the transplanted liver tumor was observed.The expressions of P27, Bax and Bcl-2 proteins were detected by Western blotting and the expressions of VEGF and MMP-9 were immunohistochemically determined.Our result showed that the tumor size, expressions of Bax, Bcl-2 proteins, VEGF and MMP-9 were all lower than those in PBS and Ad-LacZ groups and the differences were statistically significant (P<0.05).Our study suggested that Ad-p27mt could inhibit the growth, invasion and metastasis of hepatic cancer by lowering the expressions of VEGF and MMP-9.     

突变型p27基因治疗裸鼠大肠癌移植瘤的研究

目的:研究外源性突变型p27(p27 m t)基因对大肠癌的体内抑制作用。方法:应用细胞移植法把人大肠癌SW 480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建大肠癌裸鼠模型,将腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27 m t)及Lac-Z注射到瘤体内,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,并进行细胞凋亡及MMP-9的相关检测。结果:Ad-p27 m t基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,MMP-9的表达也明显较低,与Lac-Z、空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:Ad-p27 m t基因对大肠癌裸鼠的体内肿瘤有明显的抑制作用,并能抑制MMP-9。     

大肠癌组织中p27蛋白的表达及其意义

目的研究p27蛋白在大肠癌组织中的表达及其临床意义.方法采用免疫组化方法对35例正常大肠组织及40例大肠癌组织p27蛋白的表达及其与临床病理学特征的关系进行分析.结果 p27蛋白在正常结肠组织中的表达阳性率为97.1%(34/35),而在大肠癌组织中的表达率为55.0%(22/40),p27在两组织中的表达差异有显著性(P＜0.01).p27低表达与大肠癌的分级高、淋巴结转移多及TNM分期晚显著相关.结论 p27蛋白表达在大肠癌发生过程中具有重要作用,其检测有助于大肠癌恶性程度评价和预后判断.     

p27基因及其蛋白在大肠癌的表达及其意义

目的　研究 p2 7mRNA和p2 7蛋白在大肠癌的表达及其临床意义。方法　应用原位杂交方法检测 58例大肠癌标本及 58例正常黏膜中p2 7mRNA的表达 ,应用免疫组织化学S P法检测相同组织中 p2 7蛋白的表达。 结果　p2 7mRNA在大肠癌及正常黏膜中的表达阳性率均为 1 0 0 %。p2 7蛋白在大肠癌中的表达阳性率为 55 1 7% (32 / 58) ,在正常组织中的表达阳性率为 96 55 % (56/ 58) ,差异有显著性(P <0 0 1 )。p2 7蛋白表达与肿瘤组织分化程度负相关 ,与其它临床病理因素无关。结论　p2 7蛋白表达的调控主要在转录后水平。p2 7蛋白表达在大肠癌发生过程中具有重要作用 ,其检测有助于大肠癌恶性程度评价和预后判断