密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞

目的研究密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合方法富集脐血中胎儿有核红细胞。方法对5例脐血首先用密度梯度离心和免疫磁珠分选依次进行胎儿有核红细胞分离,用流式细胞检测和细胞染色对分选前后细胞进行分选纯度分析。结果 1.通过流式细胞仪检测发现CD71单克隆抗体磁珠用于脐血中胎儿有核红细胞分选(CD71+,CD45-),分选后的纯度可以达到81%,而分选前CD71阳性细胞只占23.2%。2.分选前脐血涂片可见大量的成熟红细胞,含少量有核红细胞;密度梯度离心后可见绝大多数细胞为单个核细胞(淋巴细胞、单核细胞和有核红细胞),含少量红细胞;CD71单克隆抗体磁珠分选后阳性细胞多为胞浆丰富略嗜碱性的有核红细胞。结论密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高脐血中胎儿有核红细胞的分选纯度。     

孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿DNA的检测

目的　建立从孕妇外周血中分离有核红细胞 (NRBC)及DNA的可靠方法 ,并鉴定其来源。方法　对88例孕妇外周血分别通过密度梯度离心法 ,流式细胞术 (FCM )和荧光激活细胞分离技术 (FACS)分离NRBCs。应用套式PCR技术对 6 5例孕妇血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果　①NRBCs:2 7例样品经密度梯度离心 ,其中 14例分选到 1～ 10个NRBCs。FACS技术对 6 1例样品进行转铁蛋白受体阳性细胞 (CD71+ )分选 ,所有样品均有CD71+ 细胞 ,其浓度为 (0 35± 0 2 5 )× 10 -2 。②胎儿DNA :4 6例怀男胎孕妇血浆DNA中SRY基因检测出率为 6 5 2 2 % (30 / 4 6 ) ,怀女胎的 19例样品SRY基因未检出率为 94 74 % (18/ 19)。结论　从孕妇外周血中分选胎儿NRBCs和血浆中胎儿DNA的方法已取得较大进展。利用母血中胎儿细胞及DNA诊断遗传性疾病可望成为最佳非创伤性产前诊断技术     

从孕妇外周血分离滋养细胞和胎儿有核红细胞作非侵入性产前诊断

非侵入性快速胎儿核型分析需从孕妇外周血中分离胎儿细胞和用荧光原位杂交检测染色体。用特异性单克隆抗体与磁珠交联,结合梯度离心和微磁激活细胞分离法从孕妇外周血中富集到滋养细胞和/或胎儿有核红细胞以诊断胎儿异常。 研究对象为孕10～14周行绒毛活检的孕妇41例,每例取肝素化静脉血15～20ml,离心后弃血清,加入无血清培养液,再加入与磁珠交联的可识别滋     

母血中分离检测胎儿细胞的研究进展

进入母体血循环的胎儿细胞有4种.使用有效的方法从正常与异常妊娠母血中分离富集极少量的胎儿有核红细胞、滋养细胞、淋巴细胞和粒细胞.目前国外采用较多的有荧光激活细胞分选法、磁活化细胞分选法、免疫磁珠分离法、密度梯度离心法.分子生物学方法的引入.特别是聚合酶链反应及其衍生技术和荧光原位杂交技术提供了从母血中检测胎儿细胞敏感的方法并在无创伤性产前诊断方面得到一定的应用.     

应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少，Hahn，Holzgreve和Bianchi等报道，孕妇每毫升外周血中仅有1～2个完整胎儿细胞。所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记，并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术，是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的最佳手段。但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体，故不同学者选用的标记性抗体也有所不同。本研究采用荧光激活细胞分离技术（fluorescence-activated cell sorting，FACS），通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体（transferrin receptor，CD71）单标记染色和胎儿血红蛋白（fetal haemoglobin，HbF）单标记染色与双标记染色情况的比较，探讨CD71与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值。     

胎儿血红蛋白用于分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

目的研究胎儿血红蛋白(HbF)对单个核细胞的标记情况,并用于孕妇外周血中胎儿有核红细胞(NRBCs)的分选,同时探讨NRBCs的比例与孕周的关系。方法2003-10-2004-04深圳市人民医院选用胎儿特异性抗体HbF对90例正常孕妇外周血、15例未孕妇女和15例胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞技术(FACS)对胎儿有核红细胞进行分选。结果孕8~41周的孕妇外周血中HbF阳性标记率为(4·62±3·42)%,与未孕组及胎儿脐血组比较,差异均有极显著性意义(P<0·01)。经流式细胞仪分选出的孕妇外周血中的胎儿NRBCs数在孕12~18周、19~23周最高,分别为412·4±135·5和454·2±153·4。结论早、中、晚期孕妇外周血中均存在胎儿有核红细胞,单抗HbF可以有效地进行识别,利用该细胞进行无创伤性产前诊断的最佳时间宜在妊娠12~23周左右。     

孕妇血浆中胎儿DNA检测在产前诊断中的应用

目的 探讨孕妇血浆中提取胎儿游离DNA,鉴别胎儿性别以诊断胎儿遗传性疾病的方法。方法 选择妊娠7-38周,B超确诊为单胎,经绒毛和羊水细胞染色体检测,确诊为妊娠男性胎儿的正常孕妇16例,妊娠女性胎儿的正常孕妇8例;X性连锁遗传病（假性肥大性肌营养不良,血友病,色盲,无汗性外胚层发育不良症）家族史行产前诊断者4例,用酚提取法,纯化孕妇血浆中胎儿DNA,然后用巢式聚合酶链反应（PCR）技术测定男性胎儿睾丸决定因子（SRY）。结果 16例妊娠男性胎儿孕妇血浆中,胎儿游离DNA第1次巢式PCR测定,检出SRY基因扩增片段10例,第1次检出率为62.5%;经第2次巢式PCR测定。另6例全部检出SRY基因扩增片段,累计检出率为100%,妊娠女性胎儿的8例孕妇血浆中,均未检出SRY基因扩增片段,4例X性连锁遗传病家族史者均检出SRY基因扩增片段。结论 从孕妇血浆中提取胎儿游离DNA行胎儿性别诊断是一种快速,简便,准确的产前诊断方法。     

双色共变性荧光原位杂交产前诊断胎儿唐氏综合征

目的 探讨双色共变性荧光原位杂交用于非侵入性产前诊断胎儿唐氏综合征的可行性。方法 对11例孕妇外周血中的胎儿有核红细胞进行抗血型糖蛋白磁珠直接标记,再经磁激活细胞分选法富集,以Y和21号染色体专一探针对分离的胎儿有核红细胞行双色共变性荧光原位杂交,预测胎儿21号染色体倍性和性别,并用羊水染色体核型分析结果,验证预测准确性。结果 11例胎儿21号染色体倍性均正常,与羊水染色体核型分析结果相符。其中5例为男性胎儿,男性胎儿有核红细胞数量为9－65个,平均为25个,男性胎儿有核红细胞纯度为1．4％－18．8％;6例为女性胎儿,孕妇外周血中未见男性胎儿有核红细胞;性别预测结果与羊水染色体型分析结果一致。结论 双色共变性荧光原位杂交用于分析胎儿21号染色体倍性及性别,诊断胎儿唐氏综合征准确、可靠。     

从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞方法学初探

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行无创性产前诊断成为新的研究热点,胎儿有核红细胞被认为是最理想的研究对象［１］。本研究采用简单的不连续密度梯度离心法分离富集孕妇外周血中有核红细胞,进行Ｙ染色体特异性ＤＹＺ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增以预测胎儿性别,探讨胎儿有核红细胞用于无创性产前诊断的一些问题一、资料和方法　　１．研究对象孕龄６～１４周,年龄２１～３０岁的孕妇共４５例,分为细胞制片组１５例,包括早孕８例,中孕７例;胎儿性别预测组３０例,包括早孕１８例,中孕１２例。此外,以未婚、无妊娠史的２例女…     

应用流式细胞技术富集孕妇外周血中胎儿有核红细胞

从孕妇外周血中分离胎儿细胞并进行遗传性疾病的检测 ,具有十分重要的临床价值。为了避免大量的母血细胞对胎儿细胞检测的干扰 ,必须对母血中的胎儿细胞进行分离富集。本研究采用流式细胞技术对 36例孕妇外周血中的有核红细胞 (ＮＲＢＣｓ)进行分离纯化 ,初步探讨ＮＲＢＣｓ在母血中的含量及与孕周的关系。一、资料与方法1.标本来源 :选择 1997年 10月至 1998年 6月在我院行产前检查的健康妊娠妇女 36例 (妊娠组 ) ,年龄 2 1～ 2 8岁 ,孕周 12～ 2 7周 ,均为第 1次妊娠 ,无严重贫血 (血红蛋白>90ｇ/Ｌ)等妊娠合并症或并发症。对照组分别选择…