逆转肾癌细胞系GRC—1耐药的实验与机理研究

为探讨对ＧＲＣ１细胞系药物耐受的逆转，采用ＭＴＴ比色法测定了异博定、ＢＳＯ以及异博定联合ＢＳＯ在细胞系ＧＲＣ１对阿霉素耐药的逆转效果。结果两种逆转剂单独与阿霉素作用均可以提高阿霉素对ＧＲＣ１的杀伤作用，以两种逆转剂联合作用效果更好。流式荧光法显示异博定对ＧＲＣ１耐药的逆转是通过增加细胞内药物积累实现的。研究表明，逆转ＧＲＣ１的耐药可以通过其不同的耐药机制实现。     

存活素反义寡核苷酸诱导肾癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的观察存活素反义寡核苷酸封闭存活素的表达对肾癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体介导的存活素反义寡核苷酸技术转染肾癌细胞786-0。电镜观察细胞超微结构,免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法检测存活素蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞抑制率。酶标免疫测定caspase-3活性。结果存活素反义寡核苷酸能显著降低存活素蛋白和mRNA的表达,并呈浓度和时间依赖效应。转染后的肾癌细胞出现了大量凋亡小体。400、600、800 ng／ml反义寡核苷酸细胞凋亡率分别为（10．54±0．72）％,（12．80±0．38）％,（22．30±1．23）％,较空白对照组[（6．05±0．48）％]和正义对照组[（5．70±0．41）％]显著增加（P〈0．05）。反义寡核苷酸各组caspase-3的相对活性分别为0．052±0．009,0．078±0．004和0．092±0．002,与空白对照组（0．027±0．008）和正义对照组（0．028±0．001）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论存活素反义寡核苷酸能显著下调存活素基因表达,明显促进肾癌细胞786-0凋亡并抑制其增殖;可能是通过上调caspase-3表达来促进凋亡。     

日达仙诱导肾癌细胞株ACHN细胞凋亡的实验研究

目的：探讨日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡的抗肿瘤作用的机制.方法：以浓度50～400 mg/L日达仙作用肾癌ACHN细胞24～72 h后,用MTT比色法检测细胞生长活性,用单细胞凝胶电泳法和流式细胞仪分别检测ACHN细胞DNA损伤和凋亡的情况.结果：日达仙能显著抑制肾癌细胞株ACHN细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性;日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡.结论：日达仙通过抑制肾癌细胞株ACHN增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制肾癌细胞的体外生长.     

抗bcl-2核酶基因转染促进GRC-1肾癌细胞凋亡的研究

目的　观察抗ｂｃｌ２ 核酶促进ＧＲＣ１ 肾癌细胞凋亡的情况。　方法　体外构建抗ｂｃｌ２核酶基因逆转录病毒真核表达载体ｐＤＯＲＲＺ,用脂质体介导的ＤＮＡ 转染法导入ＧＲＣ１ 细胞,用ＤＮＡ 和ＲＮＡ 打点杂交、流式细胞仪（ＦＣＭ） 、电镜及光镜观察。　结果　核酶（ ＲＺ） 基因成功导入ＧＲＣ１ 细胞并在其内表达,转基因后ＧＲＣ１ 细胞的ｂｃｌ２ 蛋白量明显减少,ＦＣＭ 检测转基因后ＧＲＣ１ 细胞周期Ｇ１ 期前出现了典型的亚２ 倍体凋亡峰,电镜下观察ＧＲＣ１ 细胞出现典型的凋亡现象。　结论　人工合成的抗ｂｃｌ２ 核酶基因能够成功地导入ＧＲＣ１ 肾癌细胞并抑制ｂｃｌ２ 蛋白的合成,促进ＧＲＣ１ 细胞的凋亡。     

逆转录病毒载体介导的HSV1—TK基因在人肾癌GRC—1细胞中 …

探讨ＨＳＶ１－ＴＫ基因在人肾癌ＧＲＣ－１细胞中表达的可能性及意义。方法采用基因工程技术构建带ＨＳＶ１－ＴＫ基因的逆转录病毒重组体Ｇ１Ｎ－ＴＫ、用脂质体法对人肾癌ＧＲＣ－１细胞进行转染及用新霉素筛选。结果成功克隆出ＨＳＶ１－ＴＫ基因的ＧＲＣ－１／ＴＫ细胞,并对无环鸟苷敏感。     

miR-21在肾癌细胞中抗凋亡的机制研究

目的 探讨miR-21对肾癌细胞中抗凋亡的机制。方法 人类肾癌细胞株Caki-1和OS-RC-2 细胞,分别以As-miR-21转染沉默miR-21,转染无关乱码寡核苷酸序列作阴性对照,以及不转染寡核苷酸的作空白对照,以AnnexinV FITC凋亡检测试剂盒检测凋亡,用Caspase-Glo 3/7试剂测半胱天冬酶3/7活性,用Western Blot 分析测定FASL和TIMP3的表达,用荧光素酶报告实验测定miR-21与FASL和TIMP3的结合,将PGL3-WT-TIMP3-3’UTR质粒中miR-21 结合位点“AUAAGCU”剪切后用Lipofectamine 2000转染至细胞测定As-miR-21对细胞凋亡的影响。结果 转染AS-miR-21的细胞凋亡率相对于阴性和空白对照细胞显著增加（P<0.05）。转染AS-miR-21后48h,Caki-1细胞中半胱天冬酶3/7活性显著增加（P<0.05）。转染PGL3-WT-FASL-3’UTR 和PGL3-WT-TIMP3-3’UTR质粒的Caki-1和OS-RC-2细胞中沉默miR-21荧光素酶活性显著增加,而转染去除miR-21结合位点的PGL3-MUT-FASL-3’UTR 和PGL3-MUT-TIMP3-3’UTR质粒的细胞荧光素酶活性不变。将缺乏3’-UTR的TIMP3质粒转染Caki-1和OS-RC-2细胞,再转染miR-21,TIMP3表达不受影响。而细胞过表达TIMP3则凋亡增加,但转染缺乏3’-UTR的TIMP3可以拮抗miR-21导致的抗凋亡作用。结论 miR-21通过FASL和TIMP3多条途径增加肾癌细胞的抗凋亡力。     

Fas配体诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用的关系。　方法　采用免疫组化技术检测 4 4例肾癌组织FasL表达及肿瘤周围浸润淋巴细胞 (TIL)凋亡情况 ,并应用肾癌细胞株 786 0、GRC 1与JurkatT淋巴细胞共培养检测T细胞凋亡率。SP法检测Ki6 7表达 ,评价肾癌预后。　结果　 (1) 4 4例肾癌组织FasL表达阳性率 4 6 .5 % ,高于正常肾组织的 2 3.2 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。随肾癌分期增加 ,FasL表达阳性率增加。肾癌FasL表达率与Ki6 7表达率呈显著正相关 (r =0 .93,P <0 .0 1)。 (2 )肾癌组织TIL凋亡率为 33.9% ,高于正常肾组织的3.5 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。肾癌FasL表达率与TIL凋亡率呈显著正相关 (r =0 .96 ,P <0 .0 1)。 (3) 786 0FasL表达率 18.6 % ,GRC 1表达率 2 .3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。Ju rkat细胞与 786 0细胞共培养的凋亡率 14 .9% ,与GRC 1共培养的凋亡率 1.3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。中和抗体NOK 2中和 786 0细胞FasL后 ,与之共培养的Jurkat细胞凋亡率显著减少 (P <0 .0 1)。　结论　肾癌组织FasL表达增高 ,以此诱导淋巴细胞凋亡 ,实现对宿主的免疫攻击。     

抗癌药物诱导人膀胱癌BIU—87和E—J细胞凋亡的作用

应用分子生物学方法，观察了丝裂霉素、喜树碱、顺铂和阿霉素对膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７和ＥＪ体外生长和生存的影响，对抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡作用进行了研究。结果：四种抗癌药均能在不同程度上抑制膀胱癌细胞生长，诱导膀胱癌细胞凋亡的能力与其生长抑制效应成正比。细胞形态学和ＤＮＡ分析显示喜树碱、顺铂处理的ＢＩＵ８７和丝裂霉素、阿霉素处理的ＥＪ细胞呈现典型的凋亡现象。揭示药物的抑癌作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的，它可能是抑制肿瘤生长的机理之一。不同膀胱癌细胞系对药物诱导凋亡的敏感性存在着差异。细胞凋亡现象为肿瘤化疗提供了新的领域。     

上皮钙粘附分子表达和细胞凋亡对肾癌的预后意义

应用免疫组化和ＤＮＡ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）研究肾癌组织中上皮钙粘附分子（ＥＣＤ）的表达和细胞凋亡率，并探讨两者对肾癌预后的影响。材料和方法收集从１９８１年１月～１９９１年９月经肾癌根治术切除的Ｔ１～２Ｎ０Ｍ０期肾癌标本４１例，随访至１９９６年９月...     

维生素K3促肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察维生素K3(VitK3)对肝癌细胞系HEPG2、Caspase3、BCL2基因的凋亡诱导作用。方法将不同浓度的VitK3作用于HEPG2细胞观察其作用的时间效应及剂量效应,应用细胞形态学,流式细胞术,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测凋亡相关基因Caspase3,Bcl2mRNA表达的变化。结果VitK3对HEPG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡;细胞体积缩小,核固缩,折光性加强;DNA凝胶电泳显示DNALadder在G1期之前出现SubG1峰。凋亡相关基因Caspase3转录水平比用药前增强。结论VitK促HEPG2细胞凋亡,且与Caspase3基因表达有关。     

肾细胞癌中微血管密度与肿瘤细胞凋亡的关系

目的　探讨肾癌组织中微血管形成与肿瘤细胞凋亡的关系。方法　应用免疫组织化学方法对 51例肾癌组织中血管内皮细胞的第Ⅷ因子抗原进行染色 ,并计数肿瘤的微血管 ;应用原位DNA片段末端标记法检测肾癌组织细胞凋亡状态。结果　肾细胞癌微血管密度在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肿瘤中分别为 49.3± 2 5.3、54.0± 2 8.8、94.9± 38.7;在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ Ⅳ期肿瘤中分别为 45.2± 2 1 .2、68.5±32 .6、99.5± 43.7,其密度在肿瘤的临床分期及病理分级间差异具有显著性 (P <0 .0 5)。肾细胞癌微血管密度与肿瘤细胞的凋亡指数呈负相关 (rs=- 0 .61 8,P <0 .0 0 1 ) ,但与肿瘤的Ki67标记指数无关(rs=0 .0 96,P >0 .0 5)。结论　在肾细胞癌发展过程中 ,微血管的形成可抑制肿瘤细胞的凋亡 ,而促进肿瘤的恶性进展     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术,观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并且具有时间和剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

生长抑素与肾癌的关系及肿瘤坏死因子的影响

为探索肾癌生物治疗的新途径，将肾癌细胞接种于裸鼠背部皮下，荷瘤裸鼠随机分为３个ＴＮＦ组及２个对照组。给药后第３天取血０５～０８ｍｌ，及移植瘤、瘤旁及正常组织各１ｇ，放射免疫法测定组织标本中生长抑素（ＳＳ）浓度。结果：肿瘤组织、对照组肿瘤旁、正常组织中ＳＳ浓度（ｐｇ／ｍｌ）依次为０．６７３、０９００、０５１４；ＴＮＦ组分别为０．７９１、０８７０、１０４３。结论：肾癌生长（对照组）时瘤旁组织中ＳＳ浓度最高，而肿瘤及正常组织中较低，提示瘤旁组织具有抑制肿瘤生长的作用。应用ＴＮＦ后ＳＳ含量以正常组织中最高，瘤旁及肿瘤组织较低。表明ＴＮＦ不但对肿瘤有直接杀伤作用，而且能促进机体增强抑制肿瘤生长、扩散作用。     

肾细胞癌抗凋亡基因bcl—2的免疫组化研究

为探讨ｂｃｌ２基因产物表达与肾癌生物学行为及预后的关系，采用免疫组化ＬＳＡＢ法对６０例肾细胞癌和５例正常肾组织ｂｃｌ２表达产物进行检测。结果表明：６６．７％肾癌显示阳性，正常肾组织均为阴性反应。ｂｃｌ２表达与肾癌的分期分级有关，且随着肾癌分期、分级的上升而降低（Ｐ＜０．０１）；ｂｃｌ２表达与肾癌组织学类型无关；ｂｃｌ２阳性表达者预后较好。提示ｂｃｌ２可作为肾癌恶性程度及预后的估价性指标。     

c-myc反义RNA对肾癌细胞GRC-1的体外生物学影响

目的探讨ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ对肾癌细胞系ＧＲＣ１的体外生物学影响。方法利用重组基因技术构建含ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ｍｙｃＡＳ,再通过脂质体介导完成重组体的细胞转染。结果与对照组相比,转染反义ＲＮＡ后的细胞体外生长速度减慢,软琼脂集落形成能力降低,部分细胞恢复生长接触性抑制;流式细胞仪显示肿瘤细胞Ｓ期百分率下降,细胞阻滞于Ｇ０／Ｇ１期;细胞ＤＮＡ合成减慢,３ＨＴｄＲ掺入率降低;原位杂交检测证实,转染后细胞内源性ｃｍｙｃ基因转录水平降低;被转染细胞在超微结构上也有相应改变。结论ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ确能在体外实验中抑制肾癌细胞生长和逆转肿瘤恶性表型。     

人肾颗粒细胞癌细胞系（GRC－1）的建立及其生物学特性

建立了一株人肾颗粒细胞癌细胞系（ＧＲＣ－１），在体外培养１１０代，历经１７个月。细胞生长和传代稳定，无其它细胞及微生物的污染。细胞为完全贴壁生长，群体倍增时间为１６小时，集落形成率为１４％，软琼脂培养平均集落为１７．５％，具有超二倍体核型，染色体众数为８２，流式细胞仪分析ＤＮＡ指数为１．８８，细胞在ＣｏｎＡ为３．１μｇ／ｍｌ时发生凝集反应，乳酸脱氢酶同功酶酶谱与正常细胞差异较大，为此细胞系所特有，有ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达，培养上清中有较高ＩＬ－６生物活性表达。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、凋亡影响。方法: 应用MTT法绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞的超微结构变化, 检测凋亡小体;流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化。结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞凋亡率逐步上升,癌细胞阻滞于G0／G1期。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,凋亡率随药物浓度加大逐步升高。具有剂量依赖效应。