FoxM1对人宫颈癌顺铂耐药株Hela/DDP增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制研究

目的：探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)对人宫颈癌顺铂耐药株Hela/DDP增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制。方法：将Hela/DDP细胞分为空白组（常规培养，不予任何处理）、正常对照（NC）组（转染空白干扰质粒）、低表达组和过表达组。低表达组转染siRNA-FoxM1下调Hela/DDP细胞中FoxM1表达，过表达组转染pcDNA3.1-FoxM1上调Hela/DDP细胞中FoxM1表达。采用RT-qPCR法检测FoxM1 m RNA表达水平，CCK-8检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果：FoxM1 mRNA在Hela细胞中的表达水平低于Hela/DDP细胞（P<0.05）。空白组与NC组中FoxM1 mRNA、增殖率、凋亡率、侵袭细胞数及HSP70、S100A9蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。与空白组比较，低表达组细胞活力和侵袭能力及FoxM1 mRNA、HSP70蛋白表达水平降低，凋亡率和S100A9蛋白表达水平升高（P<0.05），与空白组比较，过表达组细胞活力和侵袭能力及FoxM1 m R...     

应用蛋白质组学技术筛选鉴定锌指蛋白139调控的胃癌转移相关蛋白质

目的以胃癌SGC7901细胞原位移裸鼠模型为对象,通过荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）结合液质联用（LC-MS）质谱
分析技术鉴定ZNF139 调控的胃癌转移相关蛋白质。方法合成针对ZNF139 的小干扰RNA（ZNF139-siRNA）,以
ZNF139-siRNA转染人胃癌细胞株SGC7901,G418筛选。以ZNF139-siRNA质粒转染的胃癌细胞、阴性质粒转染的胃癌细胞
及普通胃癌细胞分别进行裸鼠胃癌原位移植。造模成功后取出原位移植瘤及腹腔转移淋巴结。荧光双向差异凝胶电泳
（2D-DIGE）技术分别分离ZNF139-siRNA 各组原位移植瘤及腹腔转移淋巴结蛋白质;选定差异点,胶内酶解后,液质联用
（LC-MS）质谱分析技术鉴定蛋白质。蛋白印迹（Western blot）技术验证差异蛋白质的表达。结果转染ZNF139-siRNA质粒后
SGC7901细胞中ZNF139的表达受到有效抑制。与阴性质粒组及空白组比较,阳性质粒组原位移植瘤生长更慢（P<0.05）,且腹
腔淋巴结转移率更低（P<0.05）。蛋白质组学结果发现在阳性质粒组原发灶中Fascin、hnRNPA2/B1表达下调,ANXA1表达上
调;阳性质粒组转移淋巴结中ANXA5表达下调（P<0.05）。Western blot验证结果与蛋白质组学结果相符。结论ZNF139可能
通过调节Fascin、hnRNPA2/B1、ANXA1、ANXA5促进胃癌淋巴结转移。
     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

RNAi沉默STAT3基因联合化疗对人喉鳞癌细胞增殖的影响

目的利用RNAi沉默STAT3基因联合化疗,探讨其对喉鳞癌细胞凋亡的影响。方法体外培养人喉鳞状细胞癌hep—2细胞株,重组质粒脂质体包裹转染Hep-2细胞,实验分为五组。MTT法检测不同实验组转染24h、48h及72h的细胞增殖情况。流式细胞技术检测不同实验组转染后的细胞周期变化情况,及不同实验组转染后p-STAT3及其靶基因产物CyclinD1的蛋白表达水平。结果 （1）STAT3-siRNA增强了DDP对Hep-2细胞的增殖抑制作用和对细胞周期的阻滞作用;（2）转染72h后,流式细胞仪检测结果显示,重组质粒转染＋化疗组的STAT3信号传导通路相关蛋白的表达受到明显的抑制。结论 RNAi沉默STAT3基因能够降低相关调控蛋白的表达,提高人喉鳞状细胞癌hep—2细胞株对化疗的敏感性。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人胰腺癌细胞SW1990侵袭能力的影响

目的：观察信号转导与转录因子3（STAT3）siRNA表达载体对胰腺癌细胞侵袭能
力的影响,并探讨其机制。方法：实验分为空白对照组、阴性对照组及STAT3 siRNA组。以人
胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,将合成的STAT3 siRNA转染SW1990细胞后,采用RT-PCR及
Western blotting检测转染前后STAT3 mRNA及蛋白的表达变化,Transwell法检测其对胰腺癌
细胞侵袭能力的影响,RT-PCR及Western blotting检测其对胰腺癌细胞MMP-2和MMP-9表达
的影响。结果：STAT3 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,
与空白对照组及阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后胰腺癌细
胞的侵袭细胞数及MMP-2和MMP-9的表达显著减小,与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统
计学意义（P<0.05）。结论：STAT3 siRNA能特异地阻断胰腺癌细胞中STAT3信号的活
化,并进一步通过下调MMP-2和MMP-9的表达从而抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。     

影响人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用

探讨叉头盒蛋白M1（FOXM1）对人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用。方法 将含有正义FOXM1 互补的脱氧核糖核酸（cDNA）的真核表达载体、空质粒的真核表达载体采用脂质体转染法转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为过表达组、过表达对照组;另构建干扰FOXM1基因表达的重组载体、空载载体,利用脂质体介导将其转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为沉默组、沉默对照组;并设置空白组、抑制剂组。上述每组5个复孔,均加入顺铂,抑制剂组另加入硫链丝菌肽,培养48 h。实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测各组FOXM1 信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达;倒置显微镜观察细胞形态学改变;噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪双染法检测各组细胞凋亡率;RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）、细胞分裂周期因子25B（CDC25B）、存活蛋白（Survivin）、p21 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,沉默组和抑制剂组FOXM1、Cyclin B1、CDC25B、Survivin mRNA及蛋白表达均下降（P＜0.05）,过表达组上述指标均升高（P＜0.05）;与空白组比较,沉默组和抑制剂组增殖抑制率、凋亡率、p21 mRNA及蛋白表达均升高（P＜0.05）,过表达组上述指标均下降（P＜0.05）;空白组、沉默对照组、过表达对照组细胞连接紧密、形态均匀、轮廓清楚,过表达组细胞连接致密,沉默组和抑制剂组细胞减少,轮廓不清、形态不均、大小不一,且可见细胞皱缩及细胞碎片。结论 FOXM1表达下调可增加人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性,FOXM1表达上调则可降低其化疗敏感性,推测与正反馈调节Cyclin B1、CDC25B、Survivin表达,负反馈调节p21表达有关。     

RNA干扰抑制CD133 表达对CD133+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+
HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+
HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验
鉴定其“干性”;随后以CD133mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和
Western Blot检测CD133mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药
物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为（3.36±1.80）%,（ 88.74±3.19）%;
CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133shRNA后的细胞CD133mRNA表达明显受到
抑制（P<0.05）,蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降（P<0.01）。顺铂对转染CD133shRNA后细胞生长抑制作用明显提高（P<
0.01）,且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加（P<0.05）。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基
因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。
     

HMGB1对人鼻咽癌细胞株C666-1体外增殖的影响

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人鼻咽癌细胞株C666-1增殖的影响并探讨其可能的机制。方法用siRNA干扰
鼻咽癌细胞株C666-1 HMGB1基因,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1,CDK6及相
关通路蛋白表达。用带GFP的HMGB1质粒转染鼻咽癌细胞株C666-1,EDU和CCK-8检测细胞增殖。结果干扰HMGB1的表
达后,细胞增殖明显减慢（P<0.001）;细胞周期分析显示处于G1期细胞比例增多（P<0.001）,S期细胞比例明显下降（P<0.001）;
Western blot结果显示cyclin D1、CDK6的表达下调,STAT3,P-STAT3的表达也下调。过表达HMGB1后,EDU显示处于S期细
胞比例增多（P<0.05）;CCK-8显示细胞增殖明显增快（P<0.001）。结论HMGB1促进人鼻咽癌细胞株C666-1的增殖,可能通过
STAT3信号通路上调cyclin D1、CDK6促进鼻咽癌细胞株C666-1由G1期进入S期从而调控其增殖。
     

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

下调MCT1表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并促进其凋亡

［摘要］ 目的探讨下调单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)表达对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响及其机制。 方法将体外培养的Hela细胞分为未转染组、阴性对照组和MCT1-siRNA组,Western blot检测Hela细胞中MCT1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,MTT法检测Hela细胞增殖活力,流式细胞仪检测Hela细胞周期分布和凋亡率。 结果与未转染组比较,阴性对照组Hela细胞中MCT1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平和细胞增殖、周期分布以及细胞凋亡率差异均无统计学意义（P＞0.05）,MCT1-siRNA组细胞中MCT1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞在S期所占百分比均明显降低,Bax蛋白表达水平、细胞在G0/G1期所占百分比和细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）。 结论下调MCT1表达可通过诱导细胞周期阻滞抑制Hela细胞增殖,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达促进Hela细胞凋亡。     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

氯喹逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药作用

目的探究氯喹对人鼻咽耐药细胞的逆转耐药作用及其机制。方法MTT检测不同浓度的顺铂（2, 4, 8, 16, 32 μmol·L-1）
以及不同浓度的氯喹（5, 10, 20, 40, 80 μmol·L-1）处理HNE1细胞,HNE1/DDP细胞48 h 对细胞增殖的影响;q-PCR方法检测5,
10 μmol·L-1 氯喹处理HNE1/DDP后的多药耐药基因MDR1 mRNA的表达;PI单染方法检测氯喹（10, 20 μmol·L-1）处理HNE1/
DDP后细胞凋亡率;采用Western blot 方法检测氯喹处理HNE1/DDP后的P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）的表达。结果MTT
结果显示,不同浓度的氯喹（5, 10, 20, 40, 80 μmol·L-1）对细胞具有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性;q-PCR结果表明,氯喹
作用细胞后能明显降低MDR1 mRNA水平;PI 结果显示,氯喹作用细胞后,细胞的凋亡率明显增加;通过western blot 实验表
明,氯喹能明显降低MDR1和P-gp 蛋白水平。结论氯喹能逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药,其机制可能与下调MDR1
mRNA表达及抑制P-gp的功能与表达有关。
     

乳酸菌培养上清液下调Piwil2基因增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制.方法 采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5 μg/mL)和LS(体积分数分别为1％、5％、10％、20％)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和Piwil2基因表达的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Westernblot检测其沉默效果,CCK-8检测Piwil2基因沉默后对MDA-MB-231细胞增殖的影响;2μg/mL DDP联合不同浓度LS(体积分数分别为1％、5％、10％、20％)作用MDA-MB-231细胞,观察细胞增殖抑制效应和Piwil2蛋白表达的改变.结果 高浓度DDP(≥3μg/mL)可抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.05),而低浓度DDP(≤2 μg/mL)不能有效抑制细胞增殖;DDP以剂量依赖性方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2表达可恢复2μg/mL DDP对细胞增殖的抑制.与对照组(乳酸菌培养基,MRS)比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达,但并不影响细胞的增殖;与单用2μg/mLDDP比较,2μg/mL DDP联合20％ LS处理可显著下调Piwil2蛋白的表达并抑制细胞增殖(P＜0.05).结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低,乳酸菌培养上清液可通过下调PiwiL2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性.     

siRNA介导的LPXN沉默可抑制SHI-1 细胞增殖及增强SHI-1 细胞药物的敏感性

目的探讨LPXN表达下调对人急性单核白血病SHI-1 细胞增殖及药物敏感性的影响。方法将荧光标记的不同浓度 FAM-siRNA序列转染SHI-1细胞后FCM检测转染效率,并优化转染条件。合成LPXN基因特异的siRNA序列（LPXN-siRNA） 并转染SHI-1 细胞,Western blot 筛选能有效干扰LPXN蛋白表达的siRNA 序列以及细胞内p-MAPK的表达。CCK-8 检测 LPXN-siRNA转染后SHI-1细胞的增殖以及细胞对姜黄素（Cur）或阿糖胞苷（Ara-C）药物敏感性的改变。结果当细胞接种密 度为4×105/mL 且siRNA/Lipofectamine 2000 混合比例为200 pmol/1 μL 时,FAM-siRNA 转染入SHI-1 细胞的最高效率达到 74.5%,且筛选出L2-siRNA为有效下调LPXN表达的siRNA序列。在N-siRNA转染的阴性对照组SHI-1 细胞增殖抑制率为 8.247±1.003,而在下调LPXN表达的L2-siRNA转染组细胞增殖抑制率增加至（27.043±2.051）%（P<0.05）;并且各组进一步添加 （0~25 μmol）Cur或（0~2.0 μmol）Ara-C药物后,L2-siRNA转染组的细胞增殖抑制率、p-JNK和p-P38 MAPK的表达均明显高于 N-siRNA对照转染组。而p-ERK的表达水平则各组基本一致。结论siRNA特异性干扰下调LPXN蛋白表达后,可能通过激活 MAPK家族的JNK及P38 MAPK蛋白酶,从而抑制人急性单核白血病SHI-1细胞的增殖,增强SHI-1细胞对Cur或Ara-C药物 的敏感性。     

siRNA沉默FANCD2基因增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂化疗的敏感性

目的: 研究siRNA沉默FANCD2基因后人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株对顺铂(DDP)耐药性的变化。方法:合成针对FANCD2基因的siRNA(FANCD2 siRNA),采用脂质体将其分别转染肺癌A549细胞株和A549/DDP耐药细胞株。CCK-8法测定经DDP处理的A549和A549/DDP细胞株转染siRNA前后的细胞增殖率变化;免疫印迹法测定2种细胞株转染siRNA前后FANCD2蛋白单泛素化水平;免疫荧光测定胞核中FANCD2蛋白核聚小体的形成。结果：经DDP处理的A549/DDP细胞增殖率,FANCD2蛋白单泛素化水平及核聚小体形成程度明显高于A549细胞。转染FANCD2-siRNA后,A549和A549/DDP细胞的FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体形成明显降低,细胞增殖率显著下降。结论： 应用siRNA转染技术沉默FANCD2基因可抑制FA/BRCA途径的DNA修复功能,从而增加肺癌细胞对DDP的敏感性,部分逆转耐药肺癌细胞株对DDP的耐药性。     

FoxM1通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌细胞5-8F增殖、迁移的影响

目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P＜0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)％,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)％]和空白对照组[(10.94±1.52)％]显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P＜0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P＜0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.     

干扰ADAM17表达可降低人结肠癌细胞对西妥昔单抗耐药

目的研究ADAM17的表达与结肠癌SW480细胞对西妥昔单抗耐药相关性。方法通过Western blot法检测结肠癌细胞 系ADAM17的表达情况,筛选出高表达ADAM17的结肠癌细胞株做为目标细胞株;采用siRNA片段干扰结肠癌细胞ADAM17 的表达,Western blot验证干扰效果;100 μg/mL的西妥昔单抗处理细胞24 h后,FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测ADAM17不同表达状态下的结肠癌细胞的迁移能力;运用Western blot法,检测在ADAM17不同表达状态 下的结肠癌细胞EGFR、AKT的磷酸化水平。结果人结肠癌SW480 细胞株中ADAM17 表达较高（P<0.05）。siRNA-1 和 siRNA-2干扰片段可显著降低SW480株ADAM17表达（P<0.05）。ADAM17表达被干扰后的SW480细胞对西妥昔单抗敏感性 显著上升（P<0.05）。干扰ADAM17 表达后,在西妥昔单抗药物作用下SW480 细胞迁移能力显著降低（P<0.05）。干扰了 ADAM17 表达后,SW480 细胞实验组的p-EGFR、p-AKT较对照组组显著降低（P<0.001）。结论干扰ADAM17 表达可抑制 EGFR-AKT通路激活从而减少人结肠癌SW480细胞对西妥昔单抗耐药。     

β-arrestin1激活JNK信号通路促进慢性髓细胞白血病细胞K562增殖

目的以CML K562细胞为研究对象,探索β-arrestin1促进CML细胞增殖的相关信号通路。方法以β-arrestin1慢病毒载
体感染CML K562细胞,形成稳定的K562-siβ1和K562-β1细胞,及非特异性siRNA对照K562-Ctrl细胞。以此为研究对象,利
用细胞计数与CCK-8实验检测细胞增殖能力;Western blot检测蛋白表达;免疫共沉淀（Co-IP）实验检测蛋白间的相互作用。结
果细胞计数与CCK-8 实验结果显示K562-β1 细胞增殖与细胞存活率能力显著高于K562-Ctrl,而K562-siβ1 显著低于
K562-Ctrl。Western blot结果表明β-arrestin1特异性增强磷酸化JNK表达,JNK抑制剂SP600125能抑制p-JNK表达和K562细
胞增殖;免疫共沉淀实验表明β-arrestin1 能与Src 结合。结论CML K562 细胞中β-arrestin1 与Src 结合,促进JNK信号通路激
活,从而促进细胞增殖。
     

沉默HERC4表达可抑制宫颈癌细胞的增殖、凋亡和迁移

目的 探讨HERC4对宫颈癌细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法 设计特异HERC4siRNA干扰序列,Lipofectamine2000法转染Hela细胞,Western blotting检测转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白的表达水平;CCK-8法检测转染后Hela细胞的增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后Hela细胞凋亡率的变化;划痕实验检测转染后Hela细胞迁移能力.Western blotting检测转染后Hela细胞CyclinD1、Bcl-2表达变化.结果 转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,干扰组Hela细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加,迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).转染后Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P＜0.01).结论 siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中HERC4的表达,并通过抑制Cyclin D1表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力,抑制Bcl-2表达增加细胞凋亡能力.     

沉默Sam68对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Sam68基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖能力的影响及可能的分子机制。方法通过靶向沉默鼻咽癌5-8F细胞内源
性Sam68基因,研究细胞增殖能力的变化情况,并采用qRT-PCR和Western blotting实验方法检测Sam68、细胞周期相关蛋白及
其上游分子的表达情况。结果转染Sam68靶向siRNA的5-8F细胞中,Sam68蛋白和mRNA表达水平均明显降低。MTT、细胞
周期实验证实干扰Sam68后5-8F细胞的增殖能力受到抑制;Western blotting检测结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达明
显下调,p27 表达上调,同时p-FOXO3a、p-Akt 和p-GSK-3β的表达明显下调,而总FOXO3a、Akt 和GSK-3β的表达则无明显变
化。结论Sam68可能通过激活Akt/FOXO3a信号通路对细胞增殖的相关分子进行调控,进而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。