Dkk1对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

目的：探讨经典Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1对骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）成骨分化的影响。方法：以C3H10T1/2为目的细胞,通过重组腺病毒介导BMP9过表达,联用重组腺病毒Dkk1抑制经典Wnt信号通路。检测各处理组碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性变化、钙盐沉积、骨钙素（osteocalcin,OC）、骨桥素（osteopontin,OPN）变化;体内异位成骨实验分析Dkk1对BMP9诱导MSCs成骨分化的影响。结果：BMP9可诱导C3H10T1/2细胞成骨分化;Dkk1显著降低BMP9诱导的C3H10T1/2细胞ALP活性（F=1 467.21,P=0.000）、钙盐沉积、OC（F=32.95,P=0.000）和OPN（F=127.23,P=0.000）蛋白表达;异位成骨模型中Dkk1抑制BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化和骨块成熟。结论：Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1可降低BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化可能需要经典的Wnt信号通路参与。     

microRNA在高磷诱导血管平滑肌细胞钙化早期的动态变化

目的：观察高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化早期microRNA表达变化,分析其可能参与的信号通路途径。方法：采用高磷（无机磷 2.6 mmol/L）刺激大鼠血管平滑肌细胞系A7r5钙化7 d,邻甲酚酞络合酮比色法和考马斯亮蓝法检测细胞内钙含量,RT PCR法检测平滑肌细胞表型和钙化相关基因的表达变化,茜素红染色观察钙结节。microRNA microarray 法检测高磷刺激后0、3、12 h,680种microRNA表达变化。采用TAM软件分析不同时间点间信号激活情况。结果：高磷诱导的A7r5细胞钙盐含量升高9.6倍（P<0.05）,平滑肌细胞表型mRNA（SM-α actin,SM22）下调（P<0.05）, 钙化相关mRNA（BMP2、MSX2、Runx2）上调（P<0.05）,茜素红染色后可见高磷刺激组有明显钙结节。680种microRNA在3个时间点的表达各不相同,只有6种microRNA分别逐级上调或渐渐下调。26种信号通路被明显激活,其中包括细胞凋亡、分化增殖等已知与钙化相关的信号通路。结论：microRNA参与调节血管钙化是一种动态微调的过程,为血管钙化研究带来新的思路。     

血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

目的 观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2（BMP2）/Smad1/Runt相关转录因子2（Runx2）信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2 mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组（ P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高（P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降（P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2 mRNA（r =0.655, P<0.05)、Smad1 mRNA (r =0.735, P<0.05)、Runx2 mRNA ( r=0.734, P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。     

槲皮素调节ROS/TLR4信号通路抑制Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的观察槲皮素对氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化的作用,并阐明其分子机 制。方法采用Ox-LDL处理人血管平滑肌细胞,茜素红染色检测细胞钙化,测定碱性磷酸酶（ALP）活性和qPCR测骨相关蛋白 Msx2、BMP2、Osterix 以及收缩蛋白SMA和SM22α mRNA表达水平。观察槲皮素对Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化, ALP活性,TLR4、Msx2、BMP2、Osterix、SMA和SM22α的mRNA表达水平,ROS含量及SOD活性的影响。采用TLR4 siRNA 转染血管平滑肌细胞,观察敲低TLR4对细胞钙化,ALP活性及Msx2、BMP2、Osterix、SMA和SM22α mRNA表达水平的影响。 结果Ox-LDL可促进血管平滑肌细胞钙化和上调TLR4表达水平（P<0.05）;槲皮素能明显减轻Ox-LDL诱导的细胞钙化和降低 ALP的活性,下调Msx2、BMP2、Osterix mRNA的表达水平,上调血管平滑肌收缩蛋白SMA 和SM22α mRNA的表达水平（P< 0.05）。此外,槲皮素可明显提高SOD的活性,降低活性氧物质（ROS）的含量,下调TLR4的表达水平（P<0.05）;TLR4 siRNA也 能减轻Ox-LDL诱导的细胞钙化（P<0.05）。结论槲皮素可明显抑制Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化,其机制可能与ROS 激活的TLR4信号通路有关。     

丹参酮ⅡA对高糖培养的大鼠血管平滑肌细胞p38MAPK信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响，分析该作用与氧化应激以及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 mitogen－activated protein kinases，p38 MAPK）信号通路的关系。方法：取第3代原代培养的大鼠血管平滑肌细胞建立高糖诱导细胞增殖模型，实验分为正常对照组、高糖组和丹参酮ⅡA组，BrdU掺入法测定血管平滑肌细胞的DNA合成水平；黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化p38 MAPK蛋白表达。结果：高糖诱导的血管平滑肌细胞呈快速增殖状态，在10～25mmol·L^-1间增殖效应呈剂量依赖性；丹参酮ⅡA能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，提高高糖培养的细胞中SOD水平，降低MDA含量，减少P-p38MAPK蛋白的表达。结论：丹参酮ⅡA抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，这可能与其能减少血管平滑肌细胞中的氧自由基，抑制p38MAPK信号通路有关。     

鳖甲煎丸对HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用及瘤体组织中β-catenin、Tbx3表达水平的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响,探
讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌的分子机制。方法裸鼠成瘤实验观察鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,免疫组织
化学法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中PCNA的表达水平,TUNEL法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤细胞凋亡,Western
blot检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中β-catenin和Tbx3的表达水平。结果鳖甲煎丸能够显著抑制人肝癌HepG2裸鼠移植
瘤的生长（P<0.05）;和阴性对照（NC）组（5.5±0.90）相比,高剂量（H）组（22.9±1.22）、中剂量（M）组（14.7±0.50）移植瘤细胞凋亡率
显著增加（P<0.05）;H（40.9±2.31）、M（53.5±2.41）、低剂量（L）组（62.3±1.80）与NC组（93.5±1.70）相比,PCNA阳性细胞比例显
著降低（P<0.05）;同时,鳖甲煎丸能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的信号分子β-catenin和Tbx3的表达。结论鳖甲煎丸抗肝细
胞癌的作用机制可能与抑制PCNA的表达以及调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平有关。
     

鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt/β-catenin信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe表达的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt 信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe 表达的影响,探讨其抗肝细胞癌转移
侵袭的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。方法24 只Wistar 大鼠随机分为3 组（8 只/组）,分别以临床剂量的20 倍、
10 倍的鳖甲煎丸和生理盐水灌胃3 d,3 d 后采血,离心,获取血清。分别将3 组血清加入DMEM培养液中培养肝癌细胞
HepG2,48 h 后采用流式细胞术检测细胞中的β-catenin 蛋白含量,qRT-PCR法检测DKK-1、FrpHe基因的表达情况,以进一步
阐明药物的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。结果流式细胞术结果：高剂量组和中剂量组含药血清均可显著降
低细胞中β-catenin 蛋白表达,且该作用与药物浓度有关。RT-PCR结果：高剂量组和中剂量组含药血清均可显著下调DKK-1
基因的表达,且该作用与药物浓度有关。而高剂量组和中剂量组含药血清对FrpHe 基因的表达影响不明显。结论鳖甲煎
丸能显著抑制肝细胞癌的生长、粘附和转移,且这种抑制作用与显著降低肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达、显著下调DKK-1 基
因的表达,从而阻断Wnt/β-catenin 信号通路有关。
     

高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin的表达

摘要：目的探讨高糖对小鼠足细胞podocalyxin表达的影响及结缔组织生长因子（CTGF）参与其损伤的可能机制。方法
构建针对CTGF基因的特异性siRNA质粒并转染至小鼠足细胞。将体外培养的足细胞分为6组( 1)正常对照组,正常足细
胞其培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1 g /L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,正常足
细胞其培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组：足细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照
组：足细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组：足细胞转染针对CTGF的siRNA表达质
粒后于高糖培养基中培养。Western blot 方法检测小鼠足细胞Podocalyxin、CTGF 蛋白表达及细胞外信号调节激酶
（ERK1/2）磷酸化水平。结果高糖培养足细胞24、48 h时均可下调其Podocalyxin蛋白表达量（P<0.05）,并可诱导CTGF
蛋白表达增加（P<0.05）。同时高糖可以活化足细胞ERK1/2信号途径,在高糖刺激30 min时开始活化,持续活化至24 h。
特异性siRNA干扰CTGF合成后,ERK1/2活化减少,并且足细胞Podocalyxin表达升高。结论CTGF是高糖诱导小鼠足
细胞损伤的重要介质,可通过ERK1/2途径诱导podocalyxin表达下降,针对CTGF的siRNA能明显改善podocalyxin表达
量,为DN的治疗提供新的思路。     

Dkk3 过表达改善阿尔茨海默症小鼠的老年斑、认知障碍和脑部糖代谢

目的：Dkk3 是WNT 信号通路的调节蛋白,主要在小鼠和人的心脏及脑组织中表达。前期研究发现,Dkk3 在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）小鼠模型及AD 病人脑组织中表达显著降低。而以往研究报道,在AD 疾病条件下,WNT 信号通路中某些关键成分会下调,并与AD发生发展相关。然而,Dkk3 如何作用于WNT 信号,以及Dkk3 对于AD 的调节作用和分子机制尚不清楚。因此本研究拟利用已经建立的脑组织特异的Dkk3 转基因小鼠和APPswe/PSΔE9 双转基因AD 模型小鼠,探究Dkk3 对AD 的调节作用及其分子机制。方法：RT-PCR 法克隆小鼠Dkk3基因cDNA,将该基因插入PDGF 启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dkk3转基因小鼠。PCR 法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot 检测Dkk3 蛋白表达水平,确定Dkk3高表达首建鼠。Western blot 和免疫荧光方法观察Dkk3 于AD 小鼠脑组织中的表达;开放旷场和Morris 水迷宫检测小鼠自主行为和认知功能改变;硫磺素荧光染色和Aβ抗体免疫荧光染色观察小鼠脑组织老年斑病理变化,Western blot 检测Aβ单体、二聚体表达水平;PET/CT 检测小鼠脑部糖摄取的改变;Glut1 抗体免疫荧光染色观察小鼠脑组织葡萄糖转运蛋白水平改变;Western blot 检测Dkk3 蛋白表达水平、tau 过度磷酸化、WNT 的信号通路关键分子的改变。结果：建立了脑组织特异表达的Dkk3 转基因小鼠品系,同时通过杂交获得了Dkk3×APPswe/PSΔE9 小鼠。免疫荧光显示Dkk3 在小鼠脑皮质、海马等脑区神经元中表达,星形胶质细胞中不表达。Dkk3 在AD 小鼠和AD 病人脑组织中均表达下调;Dkk3 转基因表达改善AD 小鼠的探究行为异常和认知功能缺陷;Dkk3 转基因表达可导致AD 小鼠脑内Aβ产量下降,老年斑大小、数量和沉积面积减少;Dkk3转基因表达增强AD 小鼠脑部糖摄取,增加葡萄糖转运蛋白Glut1 的表达;Dkk3 转基因表达抑制GSK-3β活性、增加PKCβ1 磷酸化水平。AD 病人脑组织中也可见GSK-3β活性增强、PKCβ1 磷酸化水平下降。结论：Dkk3 是一个WNT 通路的激动剂,DKK3 转基因表达补偿了AD 小鼠脑组织中的Dkk3 表达下调,逆转了WNT 信号下调,一定程度上延缓了AD 的病理发展进程,改善了认知功能,提示Dkk3 可成为AD 治疗的一个潜在新靶点。     

联合表达BMP2和Sox9促进体外培养间充质干细胞成软骨分化

目的探讨联合表达骨形态发生蛋白2（BMP2）和Sox9对间充质干细胞（MSCs）成软骨分化的影响,为构建组织工程软骨
提供实验依据。方法以小鼠胚胎骨髓MSCs（C3H10T1/2）为种子细胞,重组腺病毒BMP2诱导其分化,联用重组腺病毒Sox9
过表达Sox9信号,重组腺病毒GFP作为对照。Real-Time PCR检测成软骨标志物Ⅱ型胶原（Col2a1）、蛋白聚糖（Aggrecan）、X
型胶原（Col10a1）表达变化;Alcian blue染色了解细胞基质糖胺聚糖合成情况;免疫组化和Western blotting检测Col2a1合成情
况。结果BMP2 能诱导C3H10T1/2 细胞成软骨分化,当与Sox9 联合作用时,Sox9 可促进BMP2 诱导的（Col2a1、Aggrecan、
Col10a1）基因表达上调;促进细胞基质糖胺聚糖、Col2a1蛋白合成。结论BMP2与Sox9联合作用可以促进体外培养MSCs成
软骨分化,可能为组织工程软骨提供新的方法。
     

三七总皂苷对K562细胞增殖、凋亡及周期的影响及机制

目的研究三七总皂苷（PNS）对K562 细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法采用MTT法检测PNS对
K562细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况;流式细胞术检测K562
细胞的周期变化;RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化;Western blot 检测cleaved caspase-3 蛋白、cyclin
D1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果100~800 μg/mL的PNS 作用于K562细胞后能够抑制
细胞增殖。PNS能够上调cleaved caspase-3蛋白表达,促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclin D1蛋白表达,促使K562细胞
阻滞在G0/G1期。同时,PNS 能够抑制K562 细胞mTOR mRNA 表达,降低mTOR 蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、
p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）的表达,从而抑制mTOR信号通路活性。结论PNS 对体外培养K562细胞有抑
制增殖,促进凋亡,使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleaved caspase-3蛋白表达
及抑制cyclin D1蛋白表达有关。
     

双特异性磷酸酶1通过视神经萎缩蛋白1抑制血管平滑肌细胞钙化

目的 研究双特异性磷酸酶1(DUSP1)/视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号通路对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法 采用体外血管钙化模型,β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙化,茜素红S染色检测细胞钙化,ELISA测定钙含量,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot测定DUSP1、OPA1、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。采用细胞转染的方法过表达DUSP1和敲减OPA1表达,观察细胞钙化、钙含量、细胞凋亡率和Runx-2、BMP-2、Caspase-3表达水平。结果 β磷酸甘油和氯化钙诱导血管平滑肌细胞钙化模型中,DUSP1(t=11.951,P<0.001)、OPA1(t=8.487,P<0.001)蛋白表达水平均显著下降。过表达DUSP1能促进OPA1蛋白表达(t=-8.921,P<0.001),减轻血管平滑肌细胞钙化,降低细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001);而敲减OPA1表达能促进血管平滑肌细胞钙化,增加细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001)。结论 DUSP1可能通过促进OPA1蛋白表达起到抑制血管平滑肌细胞钙化的作用。     

成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的分子机制

骨形成是一个涉及到从间质干细胞向成骨细胞分化的复杂发育过程。成骨细胞定向分化受到一个多步骤的分子通路控制,通过不同的转录因子和信号蛋白调控,包括Indian hedgehog, Runx2, Osterix (Osx),以及Wnt信号通路。 Osx是骨形成所必需的成骨细胞特异性转录因子,Osx最早是在间质干细胞被骨形成蛋白 2诱导向成骨细胞分化过程中发现的基因。 Osx基因敲除小鼠完全缺乏骨,而软骨是正常的,这为研究骨的形成打开了一个全新的窗口。Osx抑制Wnt信号通路的发现揭示了参与骨形成的一种新的反馈调控机制。骨形成过程中Osx下游的靶目标已经确定一些,包括Satb2、维生素D受体和血管内皮生长因子,以及Dkk1和Sost。骨形成过程一系列信号传导因子的揭示、阐明应当为一些新的特异性合成代谢治疗药物的研究开发提供分子理论基础,以便治疗骨缺失疾病（如骨质疏松症和骨坏死）。本文综述了Osx在骨形成作用分子机制中的最新进展,自Osx发现以来,各种研究证据表明Osx是决定成骨细胞定向的主导因子,继而调控成骨细胞的分化和增殖。     

不同成骨诱导作用下骨髓间充质干细胞的基因表达模式

目的研究骨髓间充质干细胞不同成骨分化模式的分子调控机制,为将其作为骨组织缺损基因治疗的载体细胞奠定理论基础。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,传代扩增后分别用矿化培养基（100nmol／L地塞米松、10mmol／Lβ-甘油磷酸钠和50mg／mL抗坏血酸）与重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2,500ng／mL）进行诱导。分别于诱导后1、2周行茜素红染色鉴定钙结节形成情况;诱导后1、2和3d时用RT-PCR检测Runx2、Osx、OCN和ColⅠ的基因表达情况。结果矿化诱导组和rhBMP-2诱导组,茜素红染色均呈阳性钙结节,但矿化诱导组细胞于1周后形成矿化结节,时间早于rhBMP-2诱导组（2周后形成矿化结节）;RT-PCR显示,在矿化诱导组,Runx2在诱导的1、2、3d均没有表达,Osx在诱导后2、3d有表达,OCN和ColⅠ在诱导的1、2、3d均有表达;在rhBMP-2诱导组．Runx2和Osx于诱导的第2d开始表达,OCN和ColⅠ在诱导的1、2、3d均表达。结论与rhBMP-2相比,矿化培养基通过更为直接的信号传导方式调控着骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,因此矿化培养基诱导骨髓间充质干细胞形成矿化结节的能力强于rhBMP-2。     

过表达Wnt3基因抑制肝前体细胞凋亡

目的利用腺病毒载体转染体外培养的肝前体细胞,研究过表达Wnt3对肝前体细胞凋亡的影响。方法用携带Wnt3的腺
病毒载体（Ad-Wnt3）转染肝前体细胞,同时设立空载体腺病毒转染组（Ad-GFP）为对照。转染72 h 后,用荧光显微镜观察
Hoechst33342 染色后细胞凋亡情况;流式细胞术检测Annexin-PE/7-ADD法标记的细胞凋亡率;RT-PCR和Western blot分别检
测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平。结果qRT-PCR和Western blot结果显示,Wnt3在肝前体
细胞中特异性表达,表明腺病毒系统Ad-Wnt3能高效转染肝前体细胞。与对照组相比较,肝前体细胞转染Wnt3后,肝前体细胞的
凋亡水平明显下降,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。Bax的mRNA及蛋白表达水平
则明显下降（P<0.05）。结论在肝前体细胞中,Wnt3基因过表达能抑制肝前体细胞凋亡,其机制可能是通过Bcl-2家族起作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖促血管平滑肌细胞增殖的抑制效应

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制效应及其作用机制。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)和细胞计数方法测定细胞增殖状况,免疫印迹检测EGCG对高糖促增殖中的1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号途径的影响。结果不同浓度高糖(15、30、50mmol/L)可以促进A10细胞增殖;50μmol/L EGCG对A10细胞具有一定的抑制增殖作用;EGCG(50μmol/L)与高糖(30mmol/L)共作用A10细胞后,可明显抑制高糖促VSMCs增殖作用;EGCG(50μmol/L)能够降低高糖(30mmol/L)对PI3K/AKT信号的激活效果。结论 EGCG对高糖促VSMCs增殖具有明显抑制效应,该作用可能与PI3K/AKT信号途径有关。     

血管紧张素转换酶2基因转染抑制平滑肌细胞增殖

目的 通过血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促VSMC增殖的影响.方法 将大鼠VSMC分为正常细胞组、AngⅡ组、空载体+AngⅡ组及pm-ACE2+AngⅡ组,通过CCK8细胞计数试剂盒和流式细胞仪检测各组细胞周期,观察ACE2基因转染对AngⅡ促VSMC增殖效应的影响.结果 与正常细胞组相比,AngⅡ组细胞计数明显增高,pm-ACE2+AngⅡ组与AngⅡ组相比显著降低(0.535±0.004比0.866±0.026,P＜0.05);同时,AngⅡ组在G0/G1期细胞的百分率明显降低(58.80%±2.00%,P＜0.05),S期的则显著增高(35.90%±1.00%,P＜0.05),与AngⅡ组相比,pmACE2+AngⅡ组在G0/G1期的百分率明显升高(63.90%±1.40%,P＜0.05),S期则显著降低(27.80%±0.46%,P＜0.05).结论 ACE2基因转染能抑制AngⅡ的促VSMC异常增殖效应.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Ang Ⅱ on the proliferation of vascular smooth muscle cell (VSMC) in rats after the transfection of ACE2 gene. Methods pm-ACE2 was transfected into the cultured VSMC by Lipofectamine 2000. The normal cell group, Ang Ⅱ group and pcDNA3. 1/Hygro( + )transfected + Ang Ⅱ group were taken as controls respectively. After the transfection of ACE2 gene, the cell proliferative effect of Ang Ⅱ on VSMC was investigated by cell counting kit-8 (CCK8) and cell cycle detection by fluorescence activated cell sorter (FACS). Results The (optical density) OD value of Ang Ⅱgroup was obviously higher than that of other groups. And it was obviously lower in the pm-ACE2 + Ang Ⅱgroup than the Ang Ⅱ group (0. 535 ± 0. 004 vs 0.866 ± 0.026, P ＜ 0. 05 ). Compared with other groups, the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously lower in the Ang Ⅱ group(58. 80% ±2. 00%, P ＜0. 05)while the percentage of S stage was obviously higher ( 35.90% ± 1.00%, P ＜ 0.05 ). Compared with the Ang Ⅱ group , the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously higher( 63. 90% ± 1.40%, P ＜ 0. 05 ) in the pm-ACE2 + Ang Ⅱ group while the percentage of S stage was obviously lower( 27.80% ± 0. 46%, P ＜0. 05 ). Conclusion The over-expression of ACE2 gene can inhibit the proliferation of Ang Ⅱ-induced VSMC.