心肌细胞的骨架系统(Ⅰ)

心肌细胞的微管蛋白、微丝蛋白及中间纤维结蛋白是构成心肌细胞的主要骨架蛋白。它们对于维持心肌细胞正常形态、调节心肌细胞一系列生理活动起着重要的作用。本文从骨架蛋白分子结构、空间构筑、基因表达特点以及其与心脏疾病的关系，对目前国内外研究现状进行综述，认为进一步深入研究心肌细胞骨架结构、功能、骨架蛋白基因调控以及骨架蛋白与心衰的关系，仍是今后分子心肌细胞学研究的主攻课题。     

心肌细胞的骨架系统(3)

肌球蛋白（ｍｙｏｓｉｎ）是心肌细胞骨架系统的重要组成部分,而且具有收缩功能,因此对心肌细胞的形态与功能具有重要意义。本文介绍了心肌肌球蛋白的研究概况,从肌球蛋白的分子结构、功能、基因表达及心血管疾病时肌球蛋白的改变等几个方面阐述了这一研究进展,并提出,进一步探讨压力性负荷心肌肥大和心衰时肌球蛋白的变化规律和机理,目的在于探索心肌肥大和心衰发生的分子机理。     

体外培养心肌细胞代谢和微管蛋白对拉伸应变的响应

探讨不同参数的拉伸应变与体外培养心肌细胞代谢和微管蛋白含量的关系。建立体外细胞基底膜拉伸装置,分析膜上应变分布。分离乳鼠心肌细胞接种在膜上,施加不同大小和频率的周期性应变,观察细胞形态,测定培养液中葡萄糖和乳酸含量,Western Blot法测定细胞内聚合态微管蛋白-βtubulin含量。自行研制的基底膜拉伸装置性能稳定。所得心肌细胞成活率较高,α-横纹肌肌动蛋白和结蛋白免疫细胞化学染色阳性。拉伸后细胞由多角形趋向于杆状,且排列方向改变。固定频率1 Hz时,8%应变组的葡萄糖比消耗速率,乳酸比生成速率和-βtubulin含量均明显高于对照组（P〈0.05）。固定应变8%时,1 Hz的周期性拉伸对细胞代谢的促进作用最为明显（P〈0.01）,频率0.5~2 Hz的拉伸应变均可使-βtubulin含量升高。适当的拉伸应变可促进体外培养心肌细胞的代谢和微管聚合。     

PPAR-α参与血管紧张素Ⅳ诱导的心肌细胞肥大

 摘要：目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α（peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPAR-α）在血管紧张素Ⅳ（angiotensin Ⅳ,Ang Ⅳ）诱导心肌细胞肥大中的作用。方法 利用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度的Ang Ⅳ对心肌细胞的作用,并观察PPAR-α激动剂非诺贝特（fenofibrate,FF）和阻断剂MK886对Ang Ⅳ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白水平的表达。结果 Ang Ⅳ浓度依赖地（0.01、0.1、1 nmol/L）诱导心肌细胞肥大;同时PPAR-α mRNA和蛋白表达明显降低（P <0.01）;FF明显地抑制Ang Ⅳ 1 nmol/L诱导的心肌细胞肥大（P <0.01）,并上调PPAR-α mRNA和蛋白表达（P <0.01）。MK886可完全取消FF的上述作用（P <0.05）。结论 Ang Ⅳ所致心肌肥大与PPAR-α信号通路受损有关。     

二氮嗪预处理心肌细胞后磷酸化蛋白质组差异表达的初步研究

目的： 分析鉴定二氮嗪（DZ）预处理后心肌细胞磷酸化蛋白质组的表达变化。方法: 采用培养成年大鼠心肌细胞模型，分别提取、富集对照组和DZ（200 μmol/L）预处理组心肌细胞的磷酸化蛋白质，用双向电泳和质谱技术对两组中差异表达的磷酸化蛋白质进行分离和鉴定。结果: DZ预处理后，分子伴侣包含蛋白TCP-1和假拟蛋白XP_346548的磷酸化程度增加 (P<0.05)；而糖调节蛋白94 kD、依钙（结合）蛋白I和铁蛋白的磷酸化程度减弱(P<0.05)。结论: DZ预处理后，心肌细胞内的一些蛋白质发生了磷酸化修饰改变，它们可能介导MitoK_ATP通道开放后预处理心肌保护效应的发挥。     

抑制骨架蛋白对正常大鼠肾细胞力学性能的影响

目的确定正常大鼠肾细胞内骨架蛋白的变化对细胞力学性能的影响。方法通过微管吸吮技术对正常大鼠肾细胞用细胞松弛素D、秋水仙素和blebbistatin进行处理,然后分析细胞的杨氏模量和黏弹性的变化。结果经过骨架蛋白抑制剂的处理,细胞的弹性模量表现出显著的下降;与对照组相比,秋水仙素处理后细胞的黏弹性没有显著变化,而细胞松弛素D和blebbistatin处理后细胞的黏弹性显著降低。结论Blebbistatin对正常大鼠肾细胞力学特性的影响不依赖于细胞骨架的改变;抑制肌动蛋白聚合或抑制肌球蛋白IIATP酶的活性能够大幅降低细胞杨氏模量和黏弹性,微管蛋白是否正常聚合与细胞杨氏模量相关而对细胞黏弹性没有显著影响。     

丙戊酸抑制血管紧张素Ⅱ致大鼠心肌细胞肥大

目的 探讨丙戊酸在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致心肌细胞肥大过程中的抑制作用。方法 常规方法培养大鼠原代心肌细胞,分为3组：对照组、肥大组、丙戊酸组。利用AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大模型,并给予丙戊酸进行干预。反转录聚合酶链反应观察β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达;相差显微镜和电镜观察心肌细胞的表面积和超微结构变化;免疫组织化学法检测c-fos蛋白的表达。结果 原代心肌细胞在AngⅡ作用下表面积增加,超微结构发生改变;β-MHC mRNA和c-fos蛋白表达增加（P < 0.05）。给予丙戊酸干预后,上述变化显著缓解（P < 0.05）。结论 丙戊酸抑制AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,为临床上治疗心肌肥厚提供一条新的思路。     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70改变的意义

目的探讨急性心肌梗死猝死者梗死区心肌细胞内热休克转录因子1（hsfl）和热休克蛋白70（HSP70）改变的临床意义。方法分别用RT-PCR和免疫组化法检测（IHC）18例急性心肌梗死猝死者（研究组）和15例心脏正常因车祸快速死亡者（对照组）心肌细胞中hsfl和HSP70基因的mRNA和蛋白表达量。结果急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70的mRNA表达量都显著高于正常对照组（P〈0.01），且hsfl和HSP70mRNA的表达量之间呈显著的正相关关系（P〈0．001）。急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70蛋白在细胞浆和细胞核表达较对照组显著增强（P〈0.001），其中hsfl蛋白主要在心肌细胞核内表达，HSP70蛋白主要在心肌细胞浆内表达。结论急性心肌梗死猝死者心肌细胞内hsfl和HSPT0可能共同参与了急性心肌梗死的病理生理过程．这一过程可能是热休克反应的另一调节途径。     

视黄醇结合蛋白1通过激活TAK1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大

目的：探究视黄醇结合蛋白1(retinol binding protein 1, Rbp1)在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。方法：本研究通过联合分析基因表达数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据，寻找在心肌肥厚发生过程中的关键调控因子，构建该基因过表达及敲减腺病毒并感染大鼠乳鼠原代心肌细胞，利用血管紧张素II(angiotensin II, Ang II)诱导大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大模型，研究目的基因对大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的影响，应用Western blot及RT-qPCR探究目的基因调控大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的分子机制。结果：在小鼠心肌肥厚心脏组织中Rbp1的表达显著上调（P<0.01），体外细胞实验显示与对照组相比，Rbp1过表达组的大鼠乳鼠原代心肌细胞面积显著增大，心肌肥厚标志基因心钠肽（atrial natriuretic peptide, Anp）和肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7, Myh7)的表达显著升高（P<0.01），证实Rbp1过表达能促进Ang II诱导的大...     

心肌细胞结缔组织生长因子的表达及TGF-β1对其表达的影响

目的： 研究纯化的心肌细胞中结缔组织生长因子（CTGF）基因及蛋白的表达，并探讨转化生长因子β1（TGF-β₁）对其表达的影响。方法: 分离培养乳鼠心肌细胞，48 h后用流式分选方法（FACS）分选纯化心肌细胞，纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为对照组（空白纯化心肌细胞组）和TGF-β₁刺激组，用RT-PCR方法测定两组细胞中TGF-β₁、CTGF、纤维连接蛋白（FN） mRNA的含量， 用Western blotting法检测两组细胞胞浆蛋白中CTGF、FN含量。结果: 心肌细胞中有较低水平的CTGF表达，在予以 TGF-β₁刺激后细胞内CTGF mRNA与蛋白含量分别提高 2.49 倍(P<0.01) 和3.63 倍（P<0.01），FN mRNA与蛋白含量分别提高 1倍(P<0.01)和4.18倍（P<0.01），而TGF-β1mRNA水平减少34%（P<0.01）。结论: 纯化的心肌细胞有CTGF的基础表达，并且TGF-β1可以明显上调其表达，提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化过程。     

胰岛素样生长因子Ⅱ及基质金属蛋白酶9表达与子痫前期发病的关系

目的检测胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）与基质金属蛋白酶9（MMP-9）在血清及胎盘中的表达,探讨二者的关系及其在子痫前期发病中的作用。方法（1）用酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例子痫前期患者（子痫前期组,其中轻度子痫前期20例、重度子痫前期10例）及15例正常晚期妊娠孕妇（对照组）的血清中IGF-Ⅱ及MMP-9的水平。（2）用免疫组化方法检测两组孕妇胎盘组织中IGF-Ⅱ及MMP-9的表达,用计算机图像分析系统进行定量分析比较。结果（1）子痫前期组血清IGF-Ⅱ及MMP-9水平均明显低于对照组（P〈0.01,P〈0.01）。（2）IGF-Ⅱ及MMP-9在子痫前期组胎盘中的表达量均显著低于对照组（P〈0.01,P〈0.01）。（3）子痫前期组患者血清及胎盘组织中IGF-Ⅱ水平分别与相应部位的MMP-9水平呈正相关（r=0.379,P〈0.05;r=0.442,P〈0.05）。结论孕妇血清及胎盘组织中IGF-Ⅱ、MMP-9水平变化与子痫前期发病及病情发展有关。     

深Ⅱ度烧伤愈合后Bcl-xl、Bax蛋白表达与增生性瘢痕的相关性

目的探讨Bcl-xl和Bax蛋白在深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期增生性瘢痕中的表达特点。方法人深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期的增生性瘢痕皮肤40例,正常皮肤组织10例。分为增生期组、减退早期组、减退晚期组、成熟期组,正常对照组。免疫组织化学染色,检测Bcl-xl和Bax蛋白的表达。结果深Ⅱ度烧伤创面愈合后,Bcl-xl和Bax蛋白主要表达于表皮基底细胞和真皮层成纤维细胞,增生期和减退早期Bcl-xl和Bax蛋白产物光密度值明显高于正常皮肤(p<0.01),减退晚期和成熟期随瘢痕成熟而逐渐递减接近正常皮肤。结论 Bcl-xl和Bax蛋白表达与深Ⅱ度烧伤创面愈合后增生性瘢痕的发生和瘢痕成熟相关。     

PI3K/AKT通路在刺五加保护大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤中的作用

目的研究刺五加注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用机制中PI3K/AKT信号通路的作用。方法取Wistar大鼠幼鼠心室肌细胞进行体外培养,缺氧及复氧各3h建立缺血再灌注损伤细胞模型。培养的心肌细胞分成:正常对照组(Co),缺血再灌注组(I/R),I/R+复方刺五加注射液组(Pi)和I/R+复方刺五加注射液+LY294002(Pi+Ly)。采用免疫细胞化学染色法和Western-bloting检测细胞内P-AKT蛋白含量。结果免疫细胞化学染色法及Western-bloting结果均显示,IR组P-AKT蛋白表达水平明显高于正常对照组;实验组(Pi)与其他各组(IR、Pi+Ly)比较,实验组(Pi)P-AKT蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论刺五加注射液减轻心肌缺血再灌注损伤可能与其激活PI3K/AKT信号通路有关。     

缺血修饰性白蛋白分泌与心肌缺血相关指标的关系

目的探讨心肌缺血时缺血修饰性白蛋白（ischemia modified albumin,IMA）分泌及与相关指标的关系。方法随机选择73例在胸痛3h内就诊的急性冠脉综合征患者（acute coronary syndrome,ACS）,分别在就诊时（3h组）和胸痛6h时（6h组）抽血检测IMA,同时检测心肌坏死指标：肌酸激酶同功酶（CK—MB）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌红蛋白（Myo）,与40例健康体检者（健康对照组）进行对照比较。结果ACS患者3h组血清IMA、Myo水平显著高于健康对照组（P〈0．01）;而CK—MB、cTnI与健康对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;3h组与6h组比较,仅IMA水平无显著性差异;6h组与健康对照组比较所有指标均呈显著性升高。相关性分析显示血清1MA水平与CK—MB、cTnI、Myo呈正相关性（r=0．498,P〈0．01;r=0．514,P〈0．01;r=0．506,P〈0．01）。结论IMA是反映ACS心肌缺血的一个非常早的灵敏指标,对于发病〈3h的ACS更有价值,结合Myo有助于ACS的早期诊断和排除诊断,并可能与随后的心肌坏死存在关联。     

脑波治疗对青少年期精神分裂症患者认知功能的影响

目的探讨脑波治疗对青少年期精神分裂症患者认知功能的影响。方法随机将年龄在12-18岁之间符合DSM-IV精神分裂症标准患者46例,分为单纯应用奥氮平治疗组（实验组1）及应用脑波联合奥氮平治疗组（实验组2）,选择23例健康者作为对照组。实验组予奥氮平治疗8周前后予《简明精神状况检查量表》（BPRS）评分,各组分别予P300检测,分别比较P300潜伏期及波幅的差异。结果实验组1、实验组2PZ点潜伏期均比对照组延长,实验组1、实验组2FZ、CZ、PZ、OZ点波幅均比对照组降低（P〈0.05及0.01）。治疗后,实验组1、实验组2PZ点潜伏期均比治疗前缩短（P〈0.01）;实验组1、实验组2FZ、CZ、PZ、OZ点波幅均比治疗前升高（P〈0.05及0.01）。实验组2PZ点潜伏期比实验组1缩短（P〈0.05）;实验组2FZ、CZ、PZ、OZ点波幅均比实验组1升高（P〈0.05及0.01）。治疗后,实验组1BPRS评分高于实验组2（P〈0.01）,实验组2显效率及总有效率明显高于实验组1（P〈0.01）。结论脑波治疗通过调节、平衡人体的脑电活动及兴奋水平,具有辅助改善青少年期精神分裂症患者认知功能的作用。     

脑源性神经营养因子对大鼠惊厥性脑损伤的作用及调控因素

目的观察外源性脑源性神经营养因子（BDNF）、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）在活体内对海马BDNF表达的影响及其与神经元凋亡间的关系。方法80只Wistar大鼠,选取40只作为持续惊厥状态（SC）组,制作Wistar鼠SC模型,进一步分为SC-对照亚组（脑室内不注射）、SC-NS亚组（脑室内注射生理盐水）、SC-BDNF亚组（脑室内注射BDNF）和SC-抗pCREB抗体亚组（脑室内注射抗pCREB抗体）,每组各10只大鼠。余下40只大鼠作为对照（NC）组,不制备SC模型,进一步分组和处理方法同SC组。采用ELISA检测海马BDNF含量（pg·μg^-1）,Annexin-V检测海马细胞凋亡。结果①NC-BDNF亚组,注射侧海马BDNF含量为17.24±2.23,明显高于NC-对照亚组5.91±1.63;与NC-对照亚组相比,SC-对照亚组BDNF含量增高,达13.37±5.61。与SC-NS亚组相比,SC-BDNF亚组海马BDNF含量达55.40±4.11,呈显著性增高（P〈0.01）,同时,该侧海马细胞凋亡发生率从（8.36±0.61）%降低至（4.10±1.00）%（P〈0.01）。②NC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量为5.94±0.60,与NC-对照亚组差异无统计学意义。与SC-NS亚组（15.77±2.99）相比,SC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量急剧下降,为5.53±1.11,并伴有该侧海马细胞凋亡发生率的增加,由（8.36±0.61）%增至（9.37±2.50）%。③脑室内注射将诱导注射侧海马神经细胞凋亡,而对注射对侧海马影响不大。结论①脑室内注射外源性BDNF可影响同侧海马内源性BDNF表达,并对神经元凋亡有一定抑制作用。②选择性阻断CREB的磷酸化,可能通过抑制BDNF的表达,导致神经细胞凋亡。     

氨基胍对AGEs致2型糖尿病小鼠肾脏TGF-β1表达的影响

目的：研究氨基胍对晚期糖基化终末产物（Advanced glycation end products,AGEs）致2型糖尿病肾脏损伤KKAy 小鼠TGF-β1表达的影响.方法：筛选已形成2型糖尿病小鼠模型,随机分组（n=10）：模型对照组及氨基胍（20、40、80 mg·kg-1）干预组,同时设立正常血糖KK小鼠组（n=10）.末次给药12 h后,生物化学法检测空腹血糖（FBG）值,终点法测定尿蛋白水平及ELISA法测定肾内AGE含量.同时,Western blot法检测肾脏组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达.结果：与模型对照组比较,氨基胍有效降低血糖水平（P＜0.01）,并抑制尿蛋白生成（P＜0.01）,同时减少肾内AGE含量（P＜0.01）.此外,明显下调肾脏组织中TGF-β1表达（P＜0.01）.结论：氨基胍有效改善AGEs致2型糖尿病小鼠的肾脏代谢功能,其机制与调节肾组织内源性TGF-β1表达而减少AGEs沉积有关.     

V-ATPase在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中液泡型ATP合酶(V-ATPase)表达与结肠癌临床病理特征的关系及其对结肠癌发生发展的意义。方法随机选取20例结肠肿瘤组织和配对的正常组织,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测V-ATPase基因的mRNA表达量,采用免疫组织化EnVinsion法检测V-ATPase基因在68例结肠癌组织及配对的正常癌旁组织中蛋白表达量。结果结肠癌组织及配对正常组织中V-ATPase基因mRNA平均表达量分别为(5.37±0.44)、(2.03±0.35)(P0.01)。免疫组织化学结果显示V-ATPase在结肠肿瘤组织及配对正常组织中阳性表达率分别为69.1%(47/68)和5.8%(4/68),其阳性表达主要在胞膜和胞质中,V-ATPase过表达与肿瘤分期(P0.05)、区域淋巴结转移(P=0.044)、远处转移(P=0.049)、脉管浸润(P=0.044)和分化(P0.001)有关。结论 V-ATPase基因在结肠癌组织中高表达对结肠癌的发生发展起重要作用,可能为结肠癌术后辅助化疗的重要靶点。     

负压创面治疗技术对大鼠慢性溃疡创面血流及缺氧诱导因子1-α表达的影响

：目的 通过观察负压创面治疗技术对大鼠慢性创面血流变化及缺氧诱导因子1-α（HIF1-α）表达的影响,探讨负压创面治疗技术对慢性创面治疗作用及机制.方法选取10～12周龄健康SD大鼠20只,进行慢性溃疡造模后随机分为实验组和对照组,均连续进行5 d创面治疗,实验组采用负压创面治疗技术治疗,对照组采用0.9%氯化钠溶液纱布换药治疗.采用激光多普勒血流检测系统对两组分别进行正常皮肤、治疗0 d创面及5 d治疗期间每天1次创面血流灌注量测量,进行两组正常对照和治疗0 d血流的组间、组内比较,比较治疗期间两组创面血流变化.每日大体观察两组创面愈合状况.5 d治疗期结束后对两组大鼠创面周围组织取材,免疫组化法测定缺氧诱导因子的表达,比较两组表达差异.结果 两组治疗0 d创面血流灌注量均比同组正常对照明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）,实验组治疗0 d创面血流灌注量、正常对照血流灌注量与对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.治疗期创面血流重复测量方差分析：处理效应与时间效应的交互作用有统计学意义（P＜0.01）,两组治疗期创面血流灌注均有随时间增加的趋势,但实验组增加的趋势比对照组更为明显,处理主效应有统计学意义（P＜0.01）,时间主效应有统计学意义（P＜0.01）,实验组各个治疗时点的创面血流灌注值均较对照组高,实验组HIF1-α表达明显少于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 负压创面治疗技术比常规换药能更迅速地改善创面血流及氧代谢,为慢性创面愈合提供良好的血流及氧代谢条件.     

Smad泛素化调节因子-2及其mRNA在增生性瘢痕组织中的表达

目的研究烧伤后增生性瘢痕组织中Smad泛素化调节因子－2（Smurf2）及其mRNA的表达。方法选取烧伤后增生性瘢痕患者9例,取材于患者整形手术切除的瘢痕,同时取同一患者剩余正常皮肤作为对照。Western blotting方法检测smurf2蛋白水平,RT—PCR检测其mRNA表达;进一步分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞,加入外源件转化生长凶子β1（TGF—β1）刺激,观察Smurf2蛋白和mRNA水平的变化。结果增生性瘢痕组织中Smurf2蛋白水平和mRNA表达显著高于正常皮肤（P〈0．05）,而且,在外源性TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2蛋白和mRNA表达呈时间依赖性增加。结论烧伤后增生性搬痕组织中Smurf2及其mRNA表达增强;在TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2及儿mRNA表达逐渐增加。