LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性及其细胞毒性

目的:研究重组免疫毒素LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性,并观察由此产生的细胞毒性作用.方法:ELISA方法检测LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的高度特异性、饱合性及其与时间的关系;LHRH-PE40由LHRH受体介导对Hela细胞产生细胞毒作用进行光、电镜观察.结果:LHRH-PF40与Hela细胞表面受体的结合与正常鸡胚成纤维细胞的结合相比有显著意义(P＜0.01);LHRH-PE40与LHRH竞争LHRHR的OD值和TSH相比有显著意义(P＜0.01);光镜观察,LHRH-PE40对Hela细胞作用明显而对正常鸡胚成纤维细胞几乎没有作用;电镜观察,LHRH-PE40使Hela细胞表面出现凋亡征象.结论:与其他正常组织的细胞相比,Hela细胞膜表面LHRH受体分布呈过表达状;LHRH-PE40与细胞表面LHRH受体的结合具有高度特异性、饱和性;LHRH-PE40对细胞的作用由LHRHR介导,并且只对LHRHR阳性细胞产生毒性作用.     

miR-200a在结直肠癌细胞系中的表达及其对高转移细胞系Lovo的影响

目的检测结肠癌细胞系中miR-200a对高转移细胞系Lovo的影响。方法采用荧光定量PCR法检测6种结肠癌细胞系
HCT116、HT29, LS174T、SW480、SW620和Lovo中miR-200a的表达水平,在高转移细胞系Lovo中瞬时转染miR-200a mimics
使其高表达miR-200a,检测高表达miR-200a后Lovo细胞增殖、迁移、细胞同质黏附能力和凋亡等情况的变化。结果miR-200a
在6种细胞系中存在差异性表达,其中具有高转移潜能的Lovo中表达最低,成瘤但不转移的细胞系HCT116表达最高。在Lovo
细胞高表达miR-200a后,Lovo细胞的增殖和迁移能力明显减弱、细胞同质黏附能力增强且凋亡增加。结论miR-200a在结肠
癌细胞系中表达失常,其作用可能与结肠癌细胞的侵袭和转移有关,高表达miR-200a 能抑制Lovo细胞增殖和迁移、增强细胞
间黏附能力、促进凋亡,其分子机制有待进一步研究。
     

ERβ在结肠癌细胞株的表达及他莫昔芬对结肠癌细胞株体外抑制实验

目的：探讨ERβ在结肠癌细胞株Lovo、HT-29的表达和他莫昔（tamoxifen,TAM）对结肠癌细胞株抑制作用.方法：体外培养人结肠癌细胞株Lovo、HT-29,用细胞爬片免疫组化、RT-PCR、Western blot方法检测ER α、ERβ表达,用MTT法检测不同浓度的17β-E2、TAM、5-Fu、TAM＋5-Fu、TAM对结肠癌细胞株的生长影响作用.流式细胞仪（FCM）测定细胞凋亡率.结果：①在结肠癌细胞株Lovo、HT29中稳定表达ERβ而不表达ER α ②TAM、5-Fu能抑制Lovo、HT29细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株有促使细胞凋亡的作用.结论：①结肠癌细胞株Lovo表达ERβ而不表达ER α ②TAM以ERβ为靶点抑制Lovo细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU抑制Lovo细胞株的增殖,TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株促细胞凋亡的作用.     

苦参素诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法：用苦参素处理结肠癌Lovo细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制结肠癌细胞增殖，能诱导结肠癌细胞凋亡。     

雷帕霉素抑制人结肠癌细胞体外增殖及其机制研究

目的 研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTTOR特异性抑制荆雷帕霉素(Rapamycin)对体外培养的人结肠癌Lovo细胞生长的抑制作用,并初步探讨其机制.方法 分别用0.5、1.0、2.5和5.0ug/mL雷帕霉素对Lovo细胞进行干预,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达.结果 雷帕霉素对Lovo细胞表现出明显的增殖抑制作用,细胞增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐降低,呈现量-效、对-效关系.雷帕霉素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,并明显降低Lovo细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平.结论 雷帕霉素通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,诱导结肠癌Lovo细胞凋亡,从而抑制其增殖及生长.     

WTX基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用

目的 WTX基因转染结肠癌Lovo细胞株,分析WTX基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 将结肠癌Lovo细胞株分为WTX基因转染组和对照组,WTX基因转染组给予WTX质粒转染,对照组给予空载质粒转染.观察WTX基因转染组和对照组WTX基因的表达情况,两组Lovo细胞株结肠癌细胞的增殖情况、凋亡情况及细胞周期变化.结果 WTX基因转染组结肠癌细胞WTX蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);WTX基因转染组结肠癌转染后4、7d光密度值均明显低于对照组(P＜0.05);WTX基因转染组G1期细胞比例明显高于对照组(P＜0.05),WTX基因转染组G2期和S期细胞比例明显低于对照组(P＜0.05).结论 WTX基因抑制结肠癌细胞的增殖,影响结肠癌细胞周期,对结肠癌细胞凋亡没有影响.     

姜黄素抑制结肠癌SW620细胞侵袭的体外实验研究

目的：观察姜黄素对结肠癌SW620细胞侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法：应用姜黄素处理人结肠癌细胞系SW620后,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭性,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEI,检测癌细胞失巢凋亡。结果：姜黄素可有效抑制结肠腺癌细胞集落生长和穿膜侵袭能力,且与浓度相关。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,姜黄素可诱导结肠癌细胞失巢凋亡,且与浓度和时间相关。结论：姜黄素呵抑制人结肠癌细胞侵袭,诱导失巢凋亡是其机制之一。     

蟾蜍灵对结肠癌SW620细胞凋亡的影响

目的:研究蟾蜍灵诱导结肠癌细胞的凋亡作用.方法:采用不同浓度的蟾蜍灵处理结肠癌SW620细胞,采用四唑蓝比色法检测细胞生长,分别通过检测caspase-3活性和琼脂糖凝胶电泳了解细胞凋亡情况,以Fura-2荧光复合技术测结肠癌细胞内游离Ca2 浓度.结果:蟾蜍灵对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用.蟾蜍灵能够诱导结肠癌细胞凋亡.在结肠癌细胞凋亡过程中,胞内游离Ca2 浓度明显升高,以凋亡早期更为明显.1 h时为(288.56±8.46)nmol/L,明显高于对照组(125.56±3.18)nmol/L(P＜0.01).结论:蟾蜍灵对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用,与诱导细胞凋亡有关.Ca2 在蟾蜍灵诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用.     

丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控

目的 观察丁酸钠对结肠癌Lovo细胞p53的三个重要靶基因,p21wafl、Bax和Gadd45的调控,进一步探讨其抑制细胞增生、诱导细胞凋亡的分子机制.方法 Lovo细胞常规培养分别用1.25、2.5、5.0、10 mmol/L丁酸钠进行干预.用MTT法检测细胞增生,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期;AnnexinV-FITC/PI双标记观察细胞凋亡;RT-PCB和Western blotting分别检测丁酸钠对p21wafl、Bax和Gadd45三种基因mRNA和蛋白的表达.结果 丁酸钠以剂量和时间依赖的方式抑制Lovo结肠癌细胞的增生,诱导其凋亡,并阻滞Lovo细胞停滞于G2/M期.p21wafl、Gadd45和Bax基因mRNA和蛋白的表达增加,其中以Gadd45的表达变化最明显.结论 2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠以剂量和时间依赖的方式,抑制结肠癌Lovo细胞增生,诱导凋亡;丁酸钠参与结肠癌Lovo细胞周期的调控,2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠可以引起Lovo细胞的G2/M期阻滞;丁酸钠的上述作用可能与其调控Lovo细胞中p21wafl、Bax和Gadd45基因的表达有关.     

特异性miR-221抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-221在结直肠癌细胞中的表达状况及特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测四种人结肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miRNA-221表达状况,并以人脐静脉内皮细胞HUVEC作为正常对照;设计并合成miR-221、anti-miR-221(微小RNA抑制剂)寡核苷酸,以脂质体转染Caco2细胞系,以Real-time Q-PCR再次检测转染后细胞中miR-221表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态。结果与正常细胞相比,4种人结肠癌细胞系中miR-221表达均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01);癌细胞转染anti-miR-221后,G0/G1期细胞比例明显增加,而S期细胞比例显著下降,并可见细胞凋亡的发生(P<0.01)。结论 miR-221特异性抑制剂可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制结直肠癌细胞生长,提示miR-221作为结直肠癌生物治疗有效靶点有进一步研究价值。     

菱角纯化物三羟基苯甲酸二聚体对肝癌SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的：探讨菱角纯化物3,4,5-三羟基苯甲酸二聚体对肿瘤生长抑制的可能机制。方法：应用流式细胞术检测体外培养人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期进程的影响。结果：不同剂量（3.125、6.250、12.500和25.000 mg•L^-1）菱角纯化物分别处理细胞后，其凋亡百分数均明显高于对照组（P<0.001）。G₂+M期细胞百分数增高，其中3.125、6.250和12.500 mg•L^-1菱角纯化物组明显高于对照组（P<0.05或P<0.01）；S期细胞百分数低于对照组，尤其是6.250、12.500和25.000 mg•L^-1纯化物组降低明显（P<0.05）。结论：菱角纯化物3,4,5-三羟基苯甲酸二聚体对肿瘤生长的抑制作用可能通过G₂+M期阻滞引起细胞凋亡发挥作用。     

PPAR-γ配体联合顺铂对人肺癌PLA-801D细胞增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨15-脱氧前列腺素J₂(15d-PGJ₂ )联合顺铂（DDP）对人肺癌PLA-801D细胞生长的影响及其诱导凋亡的机制。方法：取生长良好的人肺癌PLA-801D细胞株,接种于96孔培养板,培养24 h后分别加入不同浓度15d-PGJ₂(0、5、10、20、40、80 μg•L^-1) (单纯使用15d-PGJ₂各组)和联合加入15d-PGJ₂与DDP (3 mg•L^-1)(15d-PGJ₂+DDP各组)(0 μg•L^-1 为对照组),作用24 h后用倒置显微镜观察每组细胞形态学的变化。采用MTT比色法检测15d-PGJ₂联合顺铂对人肺癌PLA-801D细胞增殖抑制作用;DPA 法检测其活性;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡及周期的变化。结果：当低浓度15d-PGJ₂（5、10和20 μg•L^-1）,作用于人肺癌PLA-801D细胞时,细胞生长抑制率、凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3 活性与对照组比较差异均无显著性（P>0.05）,当浓度为40 μg•L^-1时,细胞生长抑制率、凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3活性均高于对照组(P<0.01);当 15d-PGJ₂(10 μg•L^-1)和DDP（3 mg•L^-1）联合应用时, 即可使人肺癌PLA-801D细胞生长抑制率、细胞凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3 活性均较单独使用15d-PGJ₂明显增高(P<0.01)。当15d-PGJ₂(40 μg•L^-1)作用人肺癌PLA-801D细胞24 h后,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组（P< 0.01）,S和 G₂/M 期细胞比例均明显低于对照 组（P<0.01）。结论：单独使用15d-PGJ₂在高浓度时可以诱导人肺癌PLA-801D细胞凋亡, 15 d-PGJ₂与DDP联合应用时,前者低浓度即可诱导人肺癌PLA-801D细胞凋亡作用增强。     

人参皂苷Rh2诱导PC-3M细胞凋亡及其对新基因GRIM-19表达的影响

目的:研究人参单体皂苷Rh₂对激素非依赖性人前列腺癌细胞(PC-3M细胞株)的致凋亡作用及其对新基因GRIM-19表达的影响。方法:实验分为Rh₂高剂量组（40 mg·L^-1）、Rh₂中剂量组（30 mg·L^-1）、Rh₂低剂量组（15 mg·L^-1）及对照组（未加药组）。分别作用于PC-3M细胞24 h,吖啶橙染色观察其对PC-3M细胞的促凋亡作用;RT-PCR和Western blotting方法分别检测Rh₂对PC-3M细胞GRIM-19 mRNA及其蛋白表达的影响。结果:Rh₂高、中、低剂量组作用于PC-3M细胞24h吖啶橙染色均呈阳性结果。Rh₂低剂量组出现典型“出芽”现象,细胞中出现致密鲜亮橙色斑点。对照组细胞呈均匀绿色;RT-PCR结果显示,GRIM-19 mRNA随Rh₂浓度的增加表达逐渐增强,Rh₂中、低剂量组与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）,Rh₂高剂量组GRIM-19 mRNA表达与对照组比较差异具有高度显著性（P<0.01）。Western blotting结果与RT-PCR结果相一致,GRIM-19蛋白随Rh₂浓度的增加其表达逐渐增强,Rh₂中低剂量组与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）,Rh₂高剂量组GRIM-19蛋白的表达与对照组比较差异具有高度显著性（P<0.01）。结论:Rh₂诱导PC-3M细胞凋亡与上调GRIM-19基因和蛋白表达有关,其表达强度呈剂量依赖性。     

维生素C碳点对口腔鳞状细胞癌KB细胞增殖、自噬和凋亡的影响

目的：研究维生素C碳点对口腔黏膜鳞状细胞癌（口腔鳞癌）KB细胞的杀伤作用,探讨其相关作用机制。方法：以不同浓度（5、10、20、40和80 mg·L^-1）维生素C碳点体外处理口腔鳞癌KB细胞作为实验组,以0 mg·L^-1维生素C碳点组作为空白对照组。MTT法检测各组细胞增殖率,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力,Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平,流式细胞术检测KB细胞的凋亡率。结果：与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1维生素C碳点组KB细胞的增殖率及克隆形成能力均明显降低（P<0.01）,40 mg·L^-1维生素C碳点组KB细胞中LC3 Ⅱ蛋白表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：维生素C碳点能够有效地杀伤口腔鳞癌KB细胞,抑制KB细胞的增殖并减弱其克隆形成能力,其杀伤作用可能与KB细胞自噬和凋亡的发生有关。     

菝葜皂苷元对结肠癌细胞Lovo黏附和侵袭能力的影响

目的:本研究旨在探讨菝葜皂苷元体外对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附、侵袭的影响。方法:采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果:①菝葜皂苷元有抑制人结肠癌细胞Lovo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01)。②菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo后,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01)。③菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo 24h后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。结论:菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo的增殖具有抑制作用;菝葜皂苷元能抑制人结肠癌细胞Lovo的黏附能力和侵袭能力。     

硫酸锌抗大鼠移植心脏早期心肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨大鼠移植心脏心肌细胞凋亡的机制及ZnSO4在心脏移植早期抗心肌细胞凋亡的效果。方法将Ono大鼠腹腔心脏移植模型共18例分为3组,A组:术后受体每隔12 h腹腔注射生理盐水1 m l;B组:术后受体每隔12 h按2 mg.kg-1腹腔注射0.31 mmol.L-1ZnSO4溶液;C组:术后受体每隔12 h按5 mg.kg-1腹腔注射0.31 mmol.L-1ZnSO4溶液。术后第4天取移植心脏右心室心肌组织进行细胞凋亡检测和caspase-3免疫组化染色。结果各组移植心脏均可见细胞凋亡的存在,各组凋亡指数组间均存在显著差异(P<0.05)。各组均可见caspase-3表达阳性的细胞存在,各组caspase-3表达指数组间比较存在显著差异(P<0.05)。结论caspase-3与心脏移植术后的心肌细胞凋亡之间关系密切。ZnSO4通过影响caspase-3的活化而发挥抗移植心脏心肌细胞凋亡效应。     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。     

氯丙嗪协同紫杉醇对Hep-2细胞的增殖抑制作用

目的：观察盐酸氯丙嗪与紫杉醇联合应用对人喉癌细胞株（Hep-2细胞）的增殖抑制作用及其对细胞周期各时相的影响。方法：对数生长期Hep-2细胞分为单纯紫杉醇组（3.0、6.0和12.0 mg•L^-1）、氯丙嗪4.0 mg•L^-1）加紫杉醇（12.0 mg•L^-1）联合组和空白对照组（100 mL培养液）,应用MTT比色法和流式细胞术检测各组Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析单独及联合用药后Hep-2细胞的周期进程及凋亡率。结果：3.0、6.0和12.0 mg•L^-1单纯紫杉醇组Hep-2细胞增殖抑制率分别为14.0%、23.9%和36.7%,随紫杉醇浓度增加细胞增殖抑制率升高,三组间及组间两两比较差异均具有显著性（P<0.05）;联合组Hep-2细胞增殖抑制率为46.3%,明显高于相同剂量单纯紫杉醇组（P<0.05）;单纯紫杉醇组随其用药浓度的增加G₁期细胞减少,S期和G₂期细胞增多,与空白对照组比较凋亡率升高（P<0.05）。结论：在一定浓度下,盐酸氯丙嗪能够增强紫杉醇诱导Hep-2细胞增殖抑制率及细胞周期进程各时相变化和凋亡率,氯丙嗪与紫杉醇联合应用具有明显的协同效应。     

食源性原花青素对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨食源性原花青素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组及10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组,各组细胞中加入含不同浓度（0、10、20和40mg·L^-1）食源性原花青素的培养基,采用噻唑蓝（MTT）法检测药物作用24、48和72h时SH-SY5Y细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用72 h时不同细胞周期SH-SY5Y细胞百分率,Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测药物作用72 h时SH-SY5Y细胞的凋亡率。结果：与对照组比较,各时间点10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组SH-SY5Y细胞增殖率均降低,作用48和72h时20mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,作用24、48和72h时40mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,40mg·L^-1组食源性原花青素组细胞中G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,G₂/M期细胞百分率降低（P<0.01）。与对照组比较,10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。结论：食源性原花青素可抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长,其机制主要是阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。