重组腺病毒Ad-IκBαM在5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究重组腺病毒Ad-IκBαM对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导胃癌细胞凋亡的作用情况,进而研究胃癌细胞抵抗5-FU的机制．方法:培养胃癌SGC-7901细胞,感染重组腺病毒Ad-IκBαM的细胞为实验组,感染Ad- IκBα及非感染的空白对照为对照组,以5 mg／L 5-FU加入上述各组细胞,采用EMSA法检测5-FU处理后各组细胞内NF-κB激活情况:应用MTT和TUNEL法分别检测5-FU对各组细胞诱导凋亡的情况．结果:5-FU作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad-IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制．MTT法证明,5-FU作用后,感染Ad-IκBαM细胞的凋亡(56．36％±0．60％)较感染Ad-IκBα组(47．50％±1．42％)及未感染组(42．95％±1．27％)明显,各组间比较有统计学差异(P≤0．001);TUNEL法结果与MTT相符,感染Ad-IκBαM组的凋亡率为29．7％±2．5％,明显高于感染Ad-IκBα组(20．0％±2．6％)及未感染组(12．3％±1．1％)(P<0．01)．可见,感染Ad- IκBαM可明显提高5-FU诱导的细胞凋亡．结论:感染Ad-IκBαM可通过抑制胃癌细胞NF-κB的活性增强5-FU的诱导凋亡作用．     

亚砷酸联合重组腺病毒Ad-IκBαM对肝细胞癌的治疗作用

目的:观察感染Ad-IκBαM对NF-κB激活的抑制及对亚砷酸诱导肝癌细胞凋亡的增强效应,探讨亚砷酸对肝癌细胞的治疗作用.方法:选择人肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721,以不同浓度亚砷酸处理.制备重组腺病毒Ad-IκBαM,用来转染经和未经亚砷酸处理的肝癌细胞.MTT和TUNEL方法观察各组细胞生长及凋亡情况;应用EMSA及Western blot研究肝癌细胞核内NF-κB的激活情况和感染Ad-IκBαM对NF-κB激活的抑制效果.结果:MTT结果表明各浓度亚砷酸对肝癌细胞的作用较正常肝细胞显著(P＜0.01);Western blot和EMSA结果提示亚砷酸可明显抑制肝癌细胞生长,使细胞内NF-κB系统活化;感染重组腺病毒Ad-IκBαM的肝癌细胞后,亚砷酸引起的NF-κB的激活受到明显抑制.亚砷酸联合Ad-IκBαM或Ad-IκBα作用于肝癌细胞SMMC-7721的凋亡指数分别为66.47%和36.67%;亚砷酸联合Ad-IκBαM或Ad-IκBα作用于肝癌细胞Bel-7402的凋亡指数分别为74.5%和32.37%.结论:亚砷酸对肝癌细胞有明显的杀灭作用,同时激活了肝癌细胞内的NF-κB;应用重组腺病毒Ad-IκBαM可以有效抑制NF-κB的激活,并可明显增强亚砷酸对肝癌细胞的作用.     

三氧化二砷联合Ad-IκBαM诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）对胃癌SGC-7901细胞作用过程中细胞内核转录因子KB（NF-κB）的激活及重组腺病毒Ad—IκBαM通过抑制NF-κB的活化增强As2O3的诱导凋亡作用。方法培养胃癌SGC-7901细胞,以非感染组及感染Ad—IκBα组为对照,采用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）及免疫组化法检测As2O3处理后细胞核内NF-κB的激活情况,以及感染Ad—IκBαM对NF-κB活性的影响;四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechest染色、原位末端标记（TUNEL）法分别检测感染Ad—IκBαM对As2O3诱导细胞凋亡的影响。结果EMSA及免疫组化法显示As2O3作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad—IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制;MTT法证明,As2O3作用后,感染Ad—IκBαM细胞的凋亡率（59．2±2．5）％较感染Ad-IκBα组（47．5±2．3）％及未感染组（40．0±1．2）％明显升高,各组间比较P〈0．01;Hoechest法显示,感染Ad—IκBαM组的凋亡率为（27.7±2．6）％,明显高于感染Ad—IκBα组（18．3±1．5）％及未感染组（11.0±1．7）％（P〈0．05）。TUNEL法结果与Hoechest法一致,感染Ad—IκBαM组的凋亡率为（31．1±2．5）％,高于感染Ad-IκBα组（20.7±2．1）％及未感染组（13.0±1、7）％（P〈0．05）。可见,感染Ad—IκBαM可明显提高As2O3诱导的细胞凋亡。结论As2O3作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,从而表明NF-κB激活可能为胃癌细胞抗诱导凋亡作用的重要机制;感染Ad．IKBctM可有效抑制NF-κB的活性,并增强As2O3的诱导凋亡作用。     

亚砷酸联合重组腺病毒Ad-IκBaM对肝细胞癌的治疗作用

目的:观察感染Ad-IκBaM对NF-κB激活的抑制及对亚砷酸诱导肝癌细胞凋亡的增强效应,探讨亚砷酸对肝癌细胞的治疗作用.方法:选择人肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721,以不同浓度亚砷酸处理.制备重组腺病毒Ad-IκBaM,用来转染经和未经亚砷酸处理的肝癌细胞.MTT和TUNEL方法观察各组细胞生长及凋亡情况;应用EMSA及Westernblot研究肝癌细胞核内NF-κB的激活情况和感染Ad-IκBaM对NF-κB激活的抑制效果.结果:MTT结果表明各浓度亚砷酸对肝癌细胞的作用较正常肝细胞显著(P<0.01);Westernblot和EMSA结果提示亚砷酸可明显抑制肝癌细胞生长,使细胞内NF-κB系统活化;感染重组腺病毒Ad-IκBaM的肝癌细胞后,亚砷酸引起的NF-κB的激活受到明显抑制.亚砷酸联合Ad-IκBaM或Ad-IκBa作用于肝癌细胞SMMC-7721的凋亡指数分别为66.47%和36.67%;亚砷酸联合Ad-IκBaM或Ad-IκBa作用于肝癌细胞Bel-7402的凋亡指数分别为74.5%和32.37%.结论:亚砷酸对肝癌细胞有明显的杀灭作用,同时激活了肝癌细胞内的NF-κB;应用重组腺病毒Ad-IκBaM可以有效抑制NF-κB的激活,并可明显增强亚砷酸对肝癌细胞的作用.     

三氧化二砷粉针剂联合重组腺病毒介导的IκBαM治疗肝癌

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)粉针剂联合重组腺病毒介导的IκBαM抑制肝癌细胞增殖及对大鼠肝癌的治疗效果.方法:MTT法检测不同浓度As2O3联合Ad-IκBαM对肝癌细胞增殖的抑制作用.探讨体内As2O3联合Ad-IκBαM对二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝癌的抑制作用,并应用TUNEL法检测各处理组肝癌的凋亡指数.结果:As2O3处理肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒作用存在剂量依赖性以及时间依赖性,16 mol/L的As2O3抑制率最高,48、72、96 h分别为17.7%±5.3%、40.7%±2.5%、62.8%±5.4%.16 mol/L As2O3联合转染Ad-IκBαM处理组在72 h和96 h,对肝癌细胞抑制率分别为68.3%±2.1%和81.9%±3.0%,显著高于16μmol/L As2O3联合Ad-I B组(P值分别为0.004).二乙基亚硝胺于第16周诱发大鼠肝癌,成瘤率约达80%.各处理组成瘤大鼠(包括无菌生理盐水组、As2O3组、As2O3+Ad-I B组以及As2O3+Ad-IκBαM组)的生存期无明显差别.As2O3联合Ad-IκBαM处理组肝癌的凋亡率较其他处理组均显著增高.结论:腺病毒介导的IκBαM与As2O3具有协同作用,转染Ad-IκBαM可以明显增强As2O3的抑制肝癌细胞增殖作用以及体内抑瘤作用.     

Akt和核因子κB信号通路在胃癌细胞化学治疗耐药中的作用

目的 探讨Akt、核因子(NF)-κB信号通路在胃癌细胞化学治疗耐药中的作用,以及Akt、NF-κB信号通路的相互作用关系.方法 采用化学治疗药物阿霉素、足叶乙甙及两药联合应用Akt抑制剂(Wortmannin)或NF-κB抑制剂(MG-132)分别作用于胃癌细胞(SGC-7901).用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测SGC-7901细胞增长率;TUNEL法和膜联蛋白V/碘化丙啶(PI)双标法检测肿瘤细胞凋亡;免疫细胞化学法检测NF-κB/P65蛋白表达;电泳迁移率实验(EMSA)法检测NF-κB-DNA结合活性的变化;Western印迹法检测磷酸化Akt或磷酸化NF-κB抑制因子(IκB)α蛋白的表达.结果 ①阿霉素和足叶乙甙均能明显抑制SGC-7901细胞的生长,并呈时间、剂量依赖性;分别联合应用Wortmannin或MG-132后能进一步抑制其生长.②化学治疗药物剂量依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡和NF-κB或Akt活化,联合应用MG-132或Wortmannin均能增强化学治疗药物的诱导凋亡作用和抑制NF-κB或Akt活化作用.③Wortmannin可明显抑制NF-κB的活化,而MG-132对Akt的活化无明显影响.结论 化学治疗药物诱导SGC-7901细胞凋亡的同时诱导Akt、NF-κB活化,抑制Akt、NF-κB的活化可增加化学治疗药物的疗效.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对苦参碱诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κB(NF-κB)活化后对苦参碱诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法 MTT法观察苦参碱(分0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L组)及PDTC联合苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制作用.将HepG2细胞随机分为细胞对照组、PDTC组(20μmol/L)、苦参碱组(1.5 g/L)和PDTC+苦参碱联合组,流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测细胞凋亡;电泳迁移率改变实验检测细胞核内NF-κB的活化水平.结果 PDTC增强了苦参碱对细胞增殖的抑制作用(F=183.92,P＜0.01).苦参碱同时具有诱导HepG2细胞凋亡和NF-κ B活化的作用;PDTC能显著增加苦参碱诱导的HepG2细胞凋亡和抑制苦参碱诱导的HepG2的NF-κB活化,细胞凋亡率由6.11%±0.81%增加至12.95%±0.02%(χ2=9.67,P＜0.05),NF-κB活化的灰度值由38.82±0.17降至32.01±0.69(χ2=10.38,P＜0.05).结论 苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB活化,增强苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的作用.     

芦荟大黄素联合氟尿嘧啶对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨芦荟大黄素(AE)与5-氟尿嘧啶(5-FU)体外协同作用及对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用;光镜观察细胞生长状态,计数细胞分裂指数;电镜观察药物对细胞超微结构的影响;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 AE单独应用对细胞的增殖抑制作用弱,与5-FU合用明显抑制细胞生长,呈剂量依赖性;药物作用48 h后,联合用药组细胞分裂指数显著降低,可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核膜消失,核质浓缩及凋亡小体形成;TUNEL法分析显示,联合用药组细胞凋亡率为(69.4±4.1)%,与AE组[(15.7 4±1.9)%]、5-FU组[(33.5±2.8)%]比较差异显著(P<0.05).结论 AE与5-FU联合应用能有效抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,二药具有协同增效作用.     

核因子-κB活性增强参与胃癌细胞长春新碱耐药

目的 研究核因子-κB(NF-κB)在胃癌耐药形成中的作用。方法 应用凝胶电泳迁移率分析研究长春新碱(VCR)对胃癌细胞SGC7901及耐药细胞SGC790l／VCR内NF-κB DNA结合活性的影响，细胞-ELISA法检测细胞内NF-κB抑制因子IκB-α蛋白的表达，免疫细胞化学法观测细胞内p65核转位．MTT法检测细胞对药物的敏感性。结果 SGC7901／VCR耐药细胞中NF-κB的基础活性比敏感细胞高1．4倍。不同浓度VCR(5、10、20、50μg／L)均可引起耐药细胞NF-κB DNA结合活性增强，同时伴有IκB-α蛋白表达下降和p65核转位，亲本敏感细胞产生的上述效应均不及耐药细胞明显。与敏感细胞相比，10μg／L VCR作用不同时间时，SGC7901／VCR细胞中NF-κB活性上升速度慢但维持时间长。NF-κB抑制剂MG-132可抑制VCR诱导的NF-κB活化，IκB-α降解和p65核转位，并提高耐药细胞对VCR的敏感性。结论 NF-κB活性增强参与胃癌细胞对VCR耐药。     

异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

Ad-p27mt转染重组腺病毒治疗裸鼠内人胃癌的分子机制

目的:研究Ad-p27mt转染重组腺病毒对人胃癌细胞凋亡的作用及机制.方法:Ad-p27mt转染重组腺病毒导入胃癌细胞株SGC-7901内;流式细胞仪检测凋亡染色体亚二倍体峰值,了解Ad-p27mt对人胃癌组织凋亡的作用;TUNEL法检测DNA片断,在Ad-p27mt组和Ad-LacZ组中分析细胞的凋亡.结果:Ad-p27mt成功转入人胃癌细胞SGC-7901内,转化率达100%.流式细胞仪检测发现在感染后18h出现G1-S相前出现凋亡染色体亚二倍体峰值,并且DNA电泳出现凋亡特征性的条带;TUNEL法检测Ad-p27治疗组与对照组的凋亡率分别是92.3%±3.76%和2.01%±0.15%,两组的差异有显著性(P<0.01).结论:重组腺病毒转染的人p27突变基因能诱导裸鼠体内人胃癌细胞SGC-7901的凋亡.     

低剂量131Ⅰ标记的抗癌胚抗原抗体C50联合化疗诱导裸鼠结直肠癌移植瘤细胞凋亡

目的从诱导细胞凋亡的角度,探讨低剂量131Ⅰ标记的抗癌胚抗原(CEA)单抗C50(131Ⅰ-C50)对结直肠癌移植瘤的治疗作用及联合5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的效果.方法建立表达CEA的人LoVo结直肠癌荷瘤裸鼠模型.接种第9天,分别采用5-FU、75μ131I-C50及5-FU联合131IC50尾静脉注射治疗裸鼠移植瘤.接种第15天,肿瘤组织进行HE染色和末端脱氧核糖核酸转移酶介导的荧光素-dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)凋亡细胞染色,计算肿瘤细胞凋亡指数.结果光学显微镜下各组裸鼠移植瘤组织未见细胞溶解、坏死表现.TUNEL法染色示空白对照组、化疗组、放射免疫治疗(RAIT)组及RAIT+化疗组的凋亡指数分别为(0.29±0.08)%,(18.68±2.69)%,(40.88±4.54)%和(62.33±8.00)%,各组两两之间凋亡指数差异均有显著性(P值均＜0.001).结论低剂量RAIT可通过诱导肿瘤细胞凋亡达到治疗结直肠癌的目的,RAIT联合5-FU化疗可明显增强诱导肿瘤细胞凋亡的效果.     

FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究

目的探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用。方法抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。将每份提取的单个核细胞分为空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组。应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平。结果(1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少。结论(1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制。     

葛根素抑制结肠癌HT-29细胞生长及部分机制

分别采用MTT法、TUNEL法及免疫细胞化学方法,观察葛根素对HT-29细胞增殖的量效和时效关系、增殖与细胞凋亡的影响及细胞核因子-κB(NF-κB)065蛋白表达的影响.发现随着葛根素作用时间和剂量的增加,药物对HT-29细胞的抑制率逐渐增高.TUNEL法和免疫细胞化学染色显示,不同剂量组葛根素可使HT-29细胞凋亡明显增加,PCNA表达显著降低,同时细胞内NF-κB p65蛋白表达显著降低(P＜0.05).认为葛根素具有抗HT-29细胞增殖作用,可能与阻断NF-κB p65蛋白通路,抑制氧化损伤有关.     

乌司他定对急性坏死性胰腺炎大鼠合并肺损伤的影响

目的 探讨乌司他定(UT1)对急性坏死性胰腺炎大鼠(ANP)合并肺损伤时肺内ET-1和NF-κB表达及肺损伤的影响.方法 60只SD大鼠按随机数字法分成假手术组、ANP组和UTI组,各20只.采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液1 ml/kg体重制备ANP模型,假手术组胰管注射等量生理盐水,UT1组在ANP制模成功后即从大鼠尾静脉注射UTI 10 000 U/kg体重.24 h后处死动物,测血清淀粉酶、TNF-α、肺组织湿/干重比,免疫组化法检测肺组织NF-κB和ET-1蛋白表达以及使用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 UTI组术后24 h血清淀粉酶、TNF-α和肺湿/干重比分别为(5 648±378)U/L、(89.19±3.54)ng/L和4.55±0.07,较ANP组的(6 799±437)U/L、(183.30±8.18)ng/L和4.89±0.20显著降低(P＜0.05).假手术组末见NF-κB和ET-1表达,未见凋亡细胞.UTI组NF-κB和ET-1阳性表达率分别为(19±3)%和(8±1)%,较ANP组的(25±2)%和(13±1)%显著降低(P＜0.05).UTI组细胞凋亡指数为13.75±1.25,较ANP组的6.90±0.85显著升高(P＜0.05).结论 ANP时肺组织NF-κB和ET-1的高表达可能导致肺损伤.UTI能改善肺微循环,减轻肺炎症性损伤.     

乙型肝炎病毒P22e蛋白经核因子-κB抑制HepG2细胞凋亡

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在乙型肝炎病毒P22e蛋白抑制HepG2细胞凋亡中的作用.方法 用含HBV P22e基因的重组pEGFP-C2HBVP22e质粒的肝癌细胞HepG2,以放线菌素-D(Act-D)、肿瘤坏死因子(TNF)α诱导该细胞凋亡,采用激光共聚焦显微镜、核蛋白电泳迁移率等技术,观察在HBV P22e抑制TNFα诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡过程中NF-κB的核转移、活化等情况.用NF-κB抑制剂ALLN抑制其信号通路,检测以Act-D、TNFα诱导的HepG2、HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞凋亡率的变化.对实验结果的数据分析用秩和检验和t检验. 结果激光共聚焦显微镜及电泳迁移率实验观察到HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞在发生凋亡前后,有明显的NF-κB向核内迁移活化现象.NF-κB抑制剂ALLN可使以Act-D、TNF α诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡率明显升高(6.19%±1.58%与39.99%±7.620/0,t=7.515,P<0.01).结论 在HBV P22e蛋白抑制肝癌细胞凋亡过程中,NF-κB信号途径起着重要作用.     

Protective effect of osteoprotegerin in vascular endothelial cells cultured with high glucose and its possible mechanism

目的 探讨护骨素对高糖诱导的血管内皮细胞保护作用及机制.方法 人脐静脉内皮细胞分别在正糖(5 mmol/L葡萄糖)、高糖(25 mmol/L葡萄糖)、高糖+护骨素(25 mmol/L葡萄糖+2 μg/ml护骨素)、高渗(5mmol/L葡萄糖+20 mmol/L甘露醇)环境下培养72小时.以流式细胞术测定各组细胞的凋亡;Western blot法分析各组细胞磷酸化核转录因子(NF-κB)抑制蛋白激酶β (p-IκKβ)、NF-κB抑制蛋白激酶β(IκKβ)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、bcl-2及bax表达水平.结果 (1)与正糖组相比,高糖组内皮细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);高糖+护骨素组细胞凋亡明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05);(2)与正糖组相比,高糖组p-IκKβ表达显著增高(P＜0.01),IκBo和bcl-2表达显著降低(P＜0.01);高糖+护骨素组p-IκKβ明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05),IκBα和Bcl-2表达水平明显高于高糖组,而又低于正糖组(P＜0.05).结论 高糖通过激活IκKβ/NF-κB信号通路引起血管内皮细胞凋亡;护骨素具有抗高糖诱导的IκKβ/NF-κB活性作用,从而降低内皮细胞凋亡,保护内皮细胞.     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌细胞的促凋亡作用

探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达联合5-FU对大肠癌LoVo细胞的促凋亡作用。方法复苏培养PI3K p85α干扰组LoVo细胞（PI3Kp85ɑ/RNAi-LoVo）和LoVo对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,MTT法检测5-FU对两组细胞的半数抑制浓度（IC50）,Annexin-FITC标记法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示LoVo干扰组细胞PI3K p85α蛋白抑制率为59%,MTT结果显示干扰组细胞5-FU的IC50值（4.57±0.16）μmol/L明显低于对照组细胞5-FU的IC50值（8.07±0.30）μmol/L（P=0.000）,细胞凋亡实验显示,干扰组细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加（P=0.000）。结论 PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU可促进大肠癌LoVo细胞凋亡,为基因治疗和化学药物联合治疗大肠癌提供新的策略。