微粒子化学发光免疫测定促甲状腺素敏感性方法的建立与应用

目的 :建立一种低成本、高敏感性检测血清促甲状腺激素(TSH)的微粒子化学发光免疫分析 (CLEIA)方法。方法 :采用碱性磷酸酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体 (mAb) ,与FITC偶联的抗TSHα亚单位的另一mAb配对 ,构成双抗体夹心免疫结合 ,用抗FITC多抗免疫磁珠做固相分离载体 ,用金刚烷胺CSPD为发光底物的非均相免疫分析法。结果 :方法灵敏度 4 μIU/L ,批内变异系数 (CV)平均为7.4 5 % ,批间CV平均为 10 .4 5 % ,回收率为 91.4 %～ 10 2 .4 %。将实际样品测定与ACS 180  系统检测的结果相比较有较好的相关性。结论 :微粒子化学发光定量测定TSH的成本低、灵敏度及特异性高和稳定性好 ,具有广阔的应用前景     

促甲状腺素光激化学发光免疫测定法的建立和初步应用

采用光激化学发光免疫测定法(LICA)技术建立促甲状腺素(TSH)快速定量检测方法。采用两株针对TSH不同表位的单克隆抗体,一株单抗包被发光微粒,另一株为生物素化单抗,两者与链亲和素包被的感光微粒一起构建双抗体夹心LICA。数据处理采用双对数函数处理程序。方法的灵敏度为0.015mIU/L;批内CV为2.5%～3.6%,批间CV为2.6%～4.4%;平均回收率为100.60%。与时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)比对,相关系数达0.9681;与TRFIA临床测定值呈明显相关;正常值范围为0.33～3.09mIU/L。本文建立的TSH光激化学发光免疫测定法是目前TSH检测中最快速灵敏的方法之一,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。     

高灵敏化学发光法特异性检测人血清促甲状腺激素方法的建立

目的 通过双位点夹心化学发光免疫分析原理,建立一种高灵敏度测定人血清促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)的化学发光免疫分析方法。方法 将样本与预包被有抗促甲状腺激素(TSH)抗体的超顺磁珠,以及抗TSH-碱性磷酸结合物添加到反应管中共孵育,待测样本中的TSH通过夹心法与磁珠和抗TSH-碱性磷酸结合物与形成双位点复合物。与磁珠结合的复合物吸附到磁场上,用缓冲液洗去未结合的物质。加入发光底物3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐[3-(2-spiroadamantane)-4-methoxy-4-(3-phosphoryloxy)-phenyl-1,2-dioxetane, AMPPD],测定相对光子强度(RLU),通过标准曲线计算待测样本中TSH的浓度。结果 本研究建立的TSH检测方法,最低检测限为0.003μIU/mL,批内CV小于1%,总CV小于3%,正确度样本实测值与靶值之间相对偏差均在±12.5%范围内,线性范围为0.005～100μIU/mL且相关系数(r)高于0.9900。开封稳定性试...     

化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原的性能评价

目的评价化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原.方法通过对不同浓度样品黄体生成素(LH)、癌胚抗原(CEA)含量的测定,进行精密度、灵敏度、干扰、回收试验.结果批内CV均小于5%,批间CV均小于6.5%;LH、CEA回收率分别为97.9%～102.2%、98.9%～102.4%,灵敏度分别达到2.4IU/L、2.6ng/ml;无吸样间的交叉污染.结论该方法各项指标结果准确,精密度好、灵敏度高、干扰小,具有广泛的应用前景.     

抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用

目的制备抗人糖抗原50(CA50)单克隆抗体(m Ab),鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA50抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得m Ab后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估,同时进行血样的测定。结果筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株,效价均在1∶108以上,2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉。建立的化学发光免疫分析法检测范围为0~500 U/m L,回收率为107.08%,灵敏度为0.83 U/m L,重复性CV值10%,与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96.7%,Kappa值为0.911。结论成功制备了抗人CA50m Ab,建立了人CA50的化学发光免疫分析法检测体系。     

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。     

抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用北大核心CSCD

目的制备抗人糖抗原50（CA50）单克隆抗体（m Ab）,鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA50抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得m Ab后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估,同时进行血样的测定。结果筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株,效价均在1∶108以上,2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉。建立的化学发光免疫分析法检测范围为0~500 U/m L,回收率为107.08%,灵敏度为0.83 U/m L,重复性CV值〈10%,与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96.7%,Kappa值为0.911。结论成功制备了抗人CA50m Ab,建立了人CA50的化学发光免疫分析法检测体系。     

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。     

癌抗原15-3酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立癌抗原15-3(CA15-3)酶促化学发光免疫分析方法.方法 利用双抗体夹心法建立CA15-3化学发光检测体系,分别对该体系的最低检测限、线性、分析特异性、准确度和精密度进行评估,并与进口全自动化学发光检测结果进行对比.结果 本方法灵敏度为0.26 U/mL,线性范围为0～ 300 U/mL,与CEA和CA125无交叉反应,添加回收率在97.0％ ～105.6％之间,分析内与分析间CV均小于10％,与进口全自动化学发光试剂同时检测160份样本的CA15-3浓度,检测结果的线性相关系数为0.987.结论 成功建立了CA15-3酶促化学发光免疫分析方法.该方法灵敏度高、重复性好,在临床应用中可替代进口化学发光检测试剂.     

孕酮化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立具有较宽检测范围的孕酮(P)化学发光免疫分析方法.方法 采用竞争一步法原理建立P化学发光免疫分析检测体系,对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、免疫试剂的稀释体系及温育时间等进行了考察和优化,最终选定的实验条件分别对该体系的最低检出限、线性、精密度、准确性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比.结果 本系统线性范围为0.5~90 ng/mL,最低检出限为0.05ng/mL,批内批间变异变异系数均小于10%,与高浓度孕烯醇酮、雄烯二酮、雌二醇均无交叉反应,添加回收率在96.1%~106.2%.与进口全自动化学发光试剂同时测定175份样本的P浓度,二者测定结果的相关系数r为0.981.结论 成功建立了孕酮化学发光免疫分析法,该方法线性范围宽,灵敏度高,可作为进口化学发光试剂的替代试剂在临床进行推广.     

抗人CA125单克隆抗体的制备、鉴定及化学发光体系的建立

目的制备抗人糖抗原125(CA125)单克隆抗体(mAb),并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA125抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得mAb,鉴定其特异性、纯度、亚型及效价,并建立双抗体夹心ELISA。分别对包被缓冲液、包被浓度和加样模式进行优化和选择后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其进行评估和血样的测定。结果获得3株抗人CA125的杂交瘤细胞株(30-1-4、31-1-5、43-1-6),不与CA199、CA50、CA724交叉,效价在1∶108以上,用30-1-4和31-1-5建立的化学发光免疫分析法经优化后,检测范围为0~1 000 U/mL,最低检测限为0.72 U/mL,与罗氏试剂检测结果的相关系数大于0.90。结论成功制备了抗人CA125 mAb,建立并优化了人CA125的化学发光免疫分析法检测体系,为CA125检测及卵巢癌的诊断奠定了基础。     

化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原的性能评价

目的 评价化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原。方法 通过对不同浓度样品黄体生成素（LH）、癌胚抗原（CEA）含量的测定，进行精密度、灵敏度、干扰、回收试验。结果 批内CV均小于5％，批间CV均小于6．5％；LH、CEA回收率分别为97．9％～102．2％、98．9％～102．4％，灵敏度分别达到2．4IU／L、2．6ng／ml；无吸样间的交叉污染。结论 该方法各项指标结果准确，精密度好、灵敏度高、干扰小，具有广泛的应用前景。     

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。     

ACCESS化学发光仪残余试剂的回收价值研究

探讨ACCESS化学发光仪(以下简称发光仪)剩余试剂的回收再利用价值.收集残余试剂并按要求储存,用发光仪对回收残余试剂进行精密度、回收率、线性评价和质控血清的检测试验,并与原装试剂进行对比分析.结果表明,回收试剂的批内、批间精密度均小于10%,回收率均在90%~110%,质控血清检测结果偏倚与原装试剂无显著性差异(P＞...     

β2-MG时间分辨荧光免疫试剂盒的研制及质量考核

为建立灵敏度好、特异性高的TRFIA检测β2-MG,以羊抗鼠IgG固相抗体,Eu3 标记的β2-MG与标本β2-MG共同竞争限量的抗β2-MG鼠单克隆抗体(mAb),以Log-Logit制作标准曲线.本法检测灵敏度为0.01 mg/L,检测范围为0.1～8.0 mg/L;试剂及包被板在37℃放置7天后,监测标准曲线的ED20、ED50、ED80未见明显偏移;批内CV,批间CV分别为4.1%和7.8%,与美国PE试剂盒所测结果的相关系数为0.9364,说明两者具有良好的相关性.本法检测β2-MG灵敏度高,特异性好,试剂盒存放时间长且无放射性污染,是一种有应用前景的检测方法.     

化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的方法学评价

目的 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原(SCC Ag)进行方法学评价及性能验证.方法 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的不精密度、回收率、线性分析、定量可报告低限值、特异性和灵敏度、反复冻融试验以及参考范围验证等方面进行评价.结果 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原低、中、高值样本批内不精密度CV％分别为3.88％、2.80％和0.69％,批间不精密度CV％分别为3.98％、3.10％和3.17％;回收率为95.77％～102.25％,平均回收率为98.89％;线性分析R2为0.9997;定量可报告低限值为0.21ng/mL,CV％为15.06％;特异性为96％,灵敏度为94％;低、中、高值样本反复冻融试验CV％分别为7.99％、2.97％和1.36％;参考范围验证的检测结果均＜1.3ng/mL.结论 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原方法符合实验室要求,检测性能良好,可广泛在实验室开展应用.     

免疫比浊法检测梅毒螺旋体抗体的方法评价

目的评价免疫比浊法在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用价值。方法分析免疫比浊法的精密度、线性、稳定性、干扰因素、携带污染指标,并与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)进行阳性率比较。结果免疫比浊法批内CV为1.64%~2.22%、批间CV为3.57%~3.74%;黄疸、脂血及溶血对本方法无明显干扰;阳性率均为16.8%,差异无统计学意义(x^2=0,P>0.05)。结论免疫比浊法检测结果与CMIA法检测结果相关性良好,可以满足临床诊断需要。     

抗精子抗体増敏化学发光免疫分析方法在不孕症的临床应用

目的对増敏化学发光免疫分析方法(ECLIA)测定抗精子抗体(AsAb)进行方法学评价及临床初步应用。方法对増敏化学发光免疫分析方法测定抗精子抗体试剂盒的线性、重复性、批内及批间变异值(CV)及发光稳定性进行测定,并用试剂盒对171例不孕不育妇女及120例正常对照组进行测定。结果抗精子抗体强阳性标本在稀释到1∶128稀释度时,发光值随抗体含量下降而降低,基本上呈线性关系;精密度实验批内CV值为2.37%～2.85%,批间CV值为4.04%～5.01%;发光稳定性试验,受检标本平均每min发光值降低3.1%～4.0%;不孕不育妇女组阳性比例为15.7%,正常对照组阳性比例为0.83%,两组阳性率比较有有统计学意义。结论增敏化学发光法测定抗精子抗体,该方法测定的重复性好,快速、线性范围宽、试剂稳定,值得临床推广使用。     

磁分离酶联免疫荧光法(MEIF)检测人血清中胰岛素

目的:采用磁微粒分离酶联免疫荧光(MEIF)分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法.方法:选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mAb).一株mAb用异硫氰酸荧光素(FITC)标记, 另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;偶联羊抗FITC抗体的磁珠用作固相分离载体, 4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物.结果:成功建立了定量检测人血清胰岛素的MEIF, 灵敏度2.0 μIu/mL, 线形范围0～188.52 μIu/mL, 批内变异系数(CV)为4.3%～5.2%, 批间CV为2.6%～9.5%, 稀释回收率为93%～117%, 加标回收率为94%～113%.实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较, 具有良好的相关性.结论:MEIF定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好, 在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景.     

人促黄体生成素光激化学发光免疫分析法的建立

目的采用光激化学发光免疫分析技术建立快速定量检测人促黄体生成素（hLH）的方法。方法用2株配对的hLH单克隆抗体,1株hLH单克隆抗体包被受体微球,另1株hLH单克隆抗体先用生物素标记,再与链霉亲合素的供体微球共同组成人促黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂,进而优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hLH试剂分析灵敏度为0.164 U/L,线性测量范围为0.164～135 U/L,分析内和分析间的精密度分别为4.3%～6.1%和7.4%～8.1%,均低于10%,与hTSH、hFSH和hCG无明显交叉反应,158份临床血清样本用本试剂与罗氏电化学发光检测试剂盒平行检测,对所测数值采用配对t检验分析,结果显示两种方法检测结果差异无统计学意义（t=-1.468,P=0.07）。结论自制hLH光激化学发光免疫分析试剂各项指标均能达到临床要求,有望替代国外同类产品。