PDIA3在大鼠同种异体移植肾组织中的表达及意义

目的探讨蛋白质二硫键异构酶A3(protein disulfide isomerase A3,PDIA3)在大鼠同种异体移植肾组织中的表达及意义。方法实验分2组。实验组(异基因移植组):近交系雄性F344和Lewis大鼠分别作为供体和受体,共8对。对照组(同基因移植组):近交系雄性F344大鼠作为供体和受体,共8对。分别建立原位大鼠肾移植模型。术后7 d获取移植肾组织,分别应用免疫组化、RT-PCR和Western blot等方法检测实验组和对照组移植肾组织中的PDIA3的表达情况。结果 PDIA3主要表达在细胞质,在实验组移植肾组织中的表达呈阳性或强阳性,而在对照组表达呈弱阳性。实验组移植肾PDIA3的mRNA表达量为(0.821±0.046),对照组移植肾PDIA3的mRNA表达量为(0.187±0.154),2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。实验组移植肾PDIA3的蛋白表达量为(0.812±0.045),对照组移植肾PDIA3的蛋白表达量为(0.237±0.134),2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠同种异基因肾移植急性排斥反应组移植肾组织中的PDIA3的表达明显高于同基因移植对照组。PDIA3可能参与肾移植急性排斥反应的发生、发展过程。     

大鼠慢性移植肾肾病模型的建立

目的:建立一种简易、实用的大鼠肾移植慢性移植.肾肾病(Chronic allograft nephropathy,CAN)模型,为研究肾移植术后慢性排斥反应的发病机理、治疗和预防提供平台.方法:F344近交系大鼠和Lewis近交系大鼠作为供、受体,取供体的左肾作为供肾,在裸眼直视下行供体的下腔静脉与受体肾静脉的端端吻合.供体腹主动脉与受体腹主动脉行端侧吻合,进行原位异体肾移植.术后10mg/(kg·d)×10d环孢素口服液灌胃,于4周后分别观察各受体移植.肾组织病理变化情况.结果:手术于2.5h内完成,成功率达97.50%.移植术后4周开始出现移植肾CAN的病理改变,12周可见典型慢性排斥反应病变.结论:该方法手术操作简单、直观,简化了显微外科技术的设备要求,建立了大鼠慢性移植肾肾病模型.     

内撑法间断吻合肾静脉建立大鼠肾移植慢性排斥模型

目的 用简便可靠、成功率高的大鼠静脉吻合术建立肾移植慢性排斥模型。 方法 以近交系F344大鼠为供体、近交系Lewis大鼠为受体,从腹主动脉原位灌注,移植时供体肾静脉与受体肾静脉采用内撑法行端端间断吻合,供、受体肾动脉端端吻合,供、受体输尿管端端吻合。 结果 共施行大鼠肾脏移植100例,存活率为95%,24周存活率为92.6%。 结论 用肾动、静脉及输尿管端端吻合能明显提高手术成功率,其中采用内撑法行端端间断吻合原路取回内撑管是肾静脉重建可靠方法。     

肾移植大鼠慢性排斥反应模型的建立

目的:建立一种方便、实用的慢性器官移植排斥反应模型,为研究器官移植后慢性排斥反应的发病机制、预防和治疗提供平台。方法:以近交系F344大鼠和近交系Lewis大鼠作为供、受体,取供体的双肾作为供肾,借助静脉支架管,行供体的静脉与受体肾静脉的端端吻合,肾动脉与腹主动脉行端侧吻合。施行原位异体肾移植。移植后即给与环孢素腹腔注射。并于术后4周后行病理检查。结果:所有手术均于60min内完成。所有的受体均存活超过60天,围手术期死亡数为零。受体无急性排斥反应发生。4周后可见典型的慢性排斥反应发生。结论:建立了大鼠慢性排斥反应肾移植模型。为研究慢性排斥反应的发生、进展和干预治疗提供了良好的平台。     

基质金属蛋白酶-9在慢性同种移植肾病早期大鼠肾组织中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP9)在慢性移植肾病早期肾组织的表达及其与转化生长因子β1(TGFβ1)表达、小管间质单个核细胞浸润及血管平滑肌细胞增殖和移行的关系。方法以雄性Fisher大鼠作供体,雄性Lewis大鼠作受体进行同种肾移植,Fisher及Lewis雄性大鼠单肾切除作对照。移植后12周作肾功能、移植肾组织学检测,应用免疫组织化学方法测定肾组织中MMP9及TGFβ1子的表达,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肾组织MMP9mRNA表达水平及β肌动蛋白mRNA的表达。结果实验组大鼠12周时24h尿蛋白定量(g/d)0.025±0.028,与F344、Lewis对照组间24h尿蛋白水平差异无统计学意义;血清肌酐(μmol/L)96±36,显著高于F344组,与Lewis组比较差异无统计学意义;肌酐清除率(ml·min-1·100g体重-1)0.18±0.10,三组间差异无统计学意义。实验组大鼠肾动脉血管壁及肾间质MMP9(分别为0.095±0.020,0.32±0.09)与TGFβ1蛋白表达水平(分别为0.086±0.017,0.58±0.10)及肾组织MMP9mRNA表达水平(1.34±1.06)均显著高于对照组。相关分析结果显示,肾组织MMP9mRNA表达水平与间质单个核细胞浸润程度呈显著正相关,肾组织MMP9蛋白表达水平与间质中单个核细胞数量、血管平滑肌细胞数量、肾组织TGFβ1蛋白表达水平均呈显著正相关。结论MMP9在慢性移植肾病早期的病理变化中发挥关键性的作用,其产生机制与TGFβ1表达增强有关。     

川芎嗪延缓大鼠慢性移植肾肾病作用及机制的研究

目的:探索川芎嚷对大鼠慢性移植肾肾病((Chronic allograft nephropathy,CAN)的治疗作用及其机制,为临床上延长移植肾的存活时间提供新的治疗途径.方法:F344近交系大鼠和Lewis近交系大鼠作为供、受体,建立大鼠慢性移植肾肾病模型.将75只肾移植大鼠分成3组,每组25只,分别为对照组(环孢素组),实验组(川芎嗪联合环胞素组)和空白组.观察各组大鼠移植肾组织病理学变化.原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡指数,免疫组化检测肾脏Bel-2和Bax蛋白的表达.结果:空白组肾移植大鼠存活均未超过2周;对照组4周最早出现CAN病理改变,并随病程进展移植肾病变逐渐加重,12周可见典型的CAN病变;而实验组出现时间晚,且病变相对较轻.实验组与对照组相比移植肾病理变化Banff总分差异有统计学意义(P<0.01).实验组肾组织细胞凋亡指数为13.2±2.7,对照组肾组织细胞凋亡指数为28.9±4.4,二者比较差异有显著性P<0.05.实验组与对照组相比,Bcl-2蛋白表达明显增强(15.32±0.22 vs6.89±0.14,P<0.05),而Bax表达明显减弱(7.12±0.11 v8 13.45±0.61,P<0.05).结论:川芎嗪对大鼠慢性移植肾肾病有延缓作用,其保护作用机制可能与Bcl-2蛋白表达增强和Bax蛋白表达减弱介导的肾脏细胞凋亡有关.     

大鼠喉移植改进模型的研究

目的探讨大鼠喉移植改进模型的可行性。方法近交系F344大白鼠80只。分为2组，对照组采用Strome喉移植模型，实验组保留咽升动脉，供体大鼠双侧颈总动脉分别与受体大鼠颈总动脉和颈前静脉行端端吻合，比较2组术后动静脉通畅率及移植喉存活率。结果对照组的动、静脉通畅率和移植喉存活率分别为30％、15％、30％，实验组为75％、65％、80％，两组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论改进的大鼠喉移植模型提高了受体鼠和移植喉的存活率，能更好地进行喉移植抗免疫排斥研究。     

供体应用钙调磷酸酶抑制剂预处理减少大鼠肾移植缺血再灌注损伤及机制

目的缺血性预处理被证实能够提高器官对缺血再灌注损伤的耐受性,在肾移植领域具有较大的应用价值。但因其实施过程中还具有一系列问题从而限制了这一技术的临床应用。因此笔者提出使用药物钙调磷酸酶抑制剂（CNIs）对供体进行预处理,以期减少移植后缺血再灌注损伤。方法采用近交系Lewis大鼠肾移植模型,设置环孢素A组（CsA,10mg／kg）、他克莫司组（Tac,1mg／kg）、生理盐水对照组。通过比较肾移植后第3天各实验组与对照组移植肾功能（血清肌酐）、组织病理学改变,以及移植肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、热休克蛋白70（HSP-70）的表达水平,评估移植肾缺血再灌注损伤程度并探讨其发生机制。结果各实验组血清肌酐值均小于对照组,组织病理学改变优于对照组,TNF-α表达水平低于对照组,HSP-70水平高于对照组。结论钙调磷酸酶抑制剂供体预处理能降低移植肾组织TNF-α,增加HSP-70的表达,从而减少肾移植缺血再灌注损伤。     

骨桥蛋白在大鼠慢性移植肾肾病中的表达及意义

目的:探讨慢性移植肾肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)大鼠的组织学改变与骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的关系?方法:以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,行原位异体肾移植,建立大鼠CAN模型,作为CAN组;以Lewis大鼠做供?受体,行原位异体肾移植,作为对照组?12周后,观察两组大鼠肾功能?肾组织学改变;免疫组织化学法检测OPN及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达?结果:与对照组比较,CAN组大鼠24 h尿蛋白定量?血肌酐及尿素氮明显升高,差异有统计学意义(P < 0.01);根据Banff 97评分标准,CAN组和对照组肾小管萎缩评分分别为1.70±0.82?0.10±0.30,肾小管间质纤维化评分分别为2.20±0.79?0.30±0.48,差异均有统计学意义(P < 0.01);CAN组移植肾肾小管上皮细胞中TGF-β1蛋白的阳性表达率为100%,而在对照组移植肾组织中未见阳性表达;CAN组移植肾组织中OPN的阳性表达率为90%,而在对照组移植肾组织中未见阳性表达,两者均存在明显差异?结论:OPN在CAN大鼠移植肾组织中高表达,可能作为TGF-β1的下游分子参与TGF-β1介导的慢性移植肾病变的发生发展?     

心肌细胞凋亡与急性心脏移植排斥的关系

目的：探讨心肌细胞凋亡,Fas蛋白,FasL蛋白表达与心脏移植急性排斥的关系。方法：利用大鼠腹腔异位心脏移植模型。实验组为异基因心脏移植,供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠。对照组为同基因心脏移植,供体与受体均为SD大鼠,设立4个观察点,分别为术后第1,3,5,9天,每个观察点7只动物,应用免疫组化法检测心肌组织Fas蛋白,FasL蛋白的表达,应用3－原位末端标记法（TUNEL法）检测凋亡心肌细胞。结果：（1）实验组移植心肌术后第3天即有一定量TUNEL阳性心肌细胞,术后第5天TUNEL阳性心肌细胞数达高峰,持续至术后第9天,对照组心肌检测到极少量的TUNEL阳性细胞。（2）术后第5,9天标本,实验组检测到大量FasL阳性心肌浸润细胞。（3）实验组与对照组心肌都检测到大量Fas阳性信号。结论：（1）心肌细胞凋亡是心脏移植排斥心肌细胞死亡的一种方式。（2）心脏移植排斥时同时检测到了Fas蛋白,FasL蛋白,TUNEL（＋）心肌细胞,可能是表达FasL的心肌浸润细胞诱导Fas阳性心肌细胞凋亡,介导移植排斥。