冰冻葡萄粉及其多酚化合物抗凋亡的分子生物学机制研究

目的：探索冰冻葡萄粉抗胆酸诱导细胞凋亡的机制并调查冰冻葡萄粉中多酚化合物在此过程中的作用。方法：应用牛磺酸脱氧胆酸（TDCA）诱导Huh7细胞凋亡，同时用冰冻葡萄粉及其多酚化合物如表儿茶素、花青素、槲皮素、白藜芦醇进行干预，应用MTT法检测细胞活力，荧光探针DCFH—DA测定细胞内活性氧（ROS）生成量。免疫印迹法分析信号传导途径。结果：冰冻葡萄粉能显著降低TDCA诱导Huh7细胞产生的细胞内活性氧，凋亡蛋白Bax表达，并减少细胞色素c从线粒体内释放，抑制激活caspase-9，caspase-7和caspase-3。在300／ag／mL浓度的冰冻葡萄粉中，4种多酚化合物只有槲皮素显示微弱保护细胞防止线粒体介导的凋亡。增加多酚化合物的剂量才能出现明显的细胞保护效应。4种多酚化合物按300μg／mL的冰冻葡萄粉中各自的含量组合能够一定程度重现冰冻葡萄粉的抗凋亡效应。结论：冰冻葡萄粉降低氧化应激和线粒体介导的凋亡，其作用机制是防止线粒体损伤，抑制TDCA诱导的活性氧生成和激活的凋亡信号传导。推测表儿茶素、花青素、槲皮素是冰冻葡萄粉抗氧化、抗线粒体途径凋亡的重要活性成分。     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位（△ψm）以及胞内活性氧（ROS）水平。结果SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变。SFN由0-50μmol／L作用24h,早期凋亡率明显升高（P〈0.01）;△ψm明显降低（P〈0.01）;ROS有不同程度的升高。结论SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,弓I发经线粒体途径的内源性凋亡。     

线粒体在缺血预处理细胞凋亡中的作用

目的：研究缺血预处理对急生心肌缺血／再灌注细胞凋亡的影响及线粒体在其中的作用，方法：用在体心肌缺血／再灌注模型，将实验动物分为对照，缺血／再灌注，缺血预处理3组。分别观察线粒体超微结构，用原位末端标记（TUNEL）法测定凋亡心肌细胞和用免疫组化法测定Bcl-2蛋白表达，结果：与缺血／再灌注组相比，缺血预处理能保护线粒体超微结构，减小凋亡心肌细胞百分数（P＜0．01）及增加Bcl-2蛋白表达的光密度值（P＜0．01）。结论：缺血预处理过保护线粒体超微结构及上调跨线粒膜的Bcl-2蛋白表达而抑制心肌缺血／再灌注细胞凋亡。     

线粒体与细胞凋亡关系的研究

线粒体与细胞凋亡有着密切的关系。细胞凋亡过程中线粒体释放膜间隙中与凋亡相关的活性物质（促凋亡蛋白）。如细胞色素C、AIF、Smac／DIABLO等,线粒体上PT孔道的开放,削弱了线粒体膜两侧的质子梯度,导致ATP合成下降;释放的活性物质激活Caspase,引起细胞凋亡。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

褐藻素通过线粒体通路和氧化应激诱导前列腺癌细胞凋亡

目的 旨在探讨褐藻素（Fx）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用相应的试剂盒检测PC-3细胞活力和细胞凋亡。荧光探针染色检测PC-3细胞中的线粒体膜电位、线粒体形态和线粒体超氧化物。同时采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中三磷酸腺苷、过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量以及总抗氧化能力。Western blot方法检测PC-3细胞中Bcl-2、Bax和细胞色素c蛋白的表达。采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中caspase-9和caspase-3/7活性。结果 Fx呈时间和剂量依赖性地抑制PC-3细胞活力,呈剂量依赖性地诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中的线粒体膜电位水平降低,线粒体碎片化,线粒体超氧化物水平升高（P<0.05）,且Fx的作用效果成剂量依赖性。Fx剂量依赖性地降低PC-3细胞中的三磷酸腺苷水平和总抗氧化能力,剂量依赖性地增加过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中Bax和细胞质中细胞色素c的水平呈剂量依赖性增加,PC-3细胞中Bcl-2和线粒体中细胞色素c的水平呈剂量依赖性降低（P<0.05）。结论 Fx通过引发线粒体功能障碍导致氧化应激和激活线粒体介导的凋亡信号通路诱导PC-3细胞凋亡,提示Fx有望成为治疗前列腺癌的潜在药物。     

线粒体凋亡通路的研究进展

长期以来,线粒体被认为是细胞存活的关键.然而,直到20世纪90年代中期,线粒体在细胞程序性死亡中所起的重要作用才被人们所认知.线粒体凋亡通路与线粒体相关的一些重要蛋白,如促凋亡因子、细胞色素C、凋亡诱导因子（AIF）、线粒体衍生的第二种半胱天冬酶激活剂（Smac）、高温应激蛋白A2（HtrA2）、核酸内切酶G等在细胞凋亡过程中共同发挥着调控作用.该文主要就线粒体凋亡通路在哺乳动物细胞中所起作用的研究进展予以综述.     

线粒体在肝细胞凋亡中的作用及中药对其保护作用

肝细胞凋亡在肝纤维化中有着非常重要的作用,而许多促细胞凋亡信号作用于线粒体,能够改变线粒体通透性,继而导致其蛋白释放入胞质,由此构成线粒体介导的凋亡途径。中药及其有效成分能够从抗氧化、稳定线粒体膜流动性、抑制线粒体膜通透性转变及维持线粒体膜电位稳定等方面发挥线粒体保护作用,从而减少肝细胞的凋亡而发挥抗肝纤维化的作用。现就肝细胞凋亡的线粒体途径及中药保护进行综述。     

紫杉醇诱导黑色素瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇体外抑制人黑色素瘤细胞（A375细胞）增殖及诱导凋亡作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力；光镜和电镜观察细胞形态变化；流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率。结果：紫杉醇通过诱导细胞凋亡抑制A375细胞生长。并呈时间和剂量依赖性（P〈0．01）；当0．01-1μmol／L紫杉醇作用于培养细胞24h后即可引起猾亡小体等典型细胞凋亡形态学改变；FCM分析显示：紫杉醇在0．001μmol／L即可诱导细胞凋亡，但不影响细胞周期，在0．01μmol／L时使G0／G1期细胞明显减少，在0．1μmol／L以上时使细胞发生G2／M期阻滞。结论：紫杉醇具有抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡作用。不同浓度紫杉醇诱导细胞凋亡的作用机制不同。     

蒺藜皂苷对缺氧-复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响

目的：观察蒺藜皂苷（Tribulus terrestrisL．saponion，TTLS）对大鼠皮层神经元经缺氧一复氧后细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：离体培养大鼠皮层神经元，先用95％N：与5％CO2混合气体造成细胞缺氧3h，再给予95％O2。与59／6CO2混和气复氧12h，建立缺氧复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。中药组于缺氧-复氧时均加入TTLS进行干预。AnnexinV—FITC／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；JC-1荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的变化，荧光酶标仪测定神经元胞浆内caspase-3／7的活性，并采用免疫细胞化学法观察细胞Bax蛋白表达情况。结果：细胞缺氧3h复氧12h后，凋亡率明显增加，线粒体膜电位显著降低，胞浆内caspase-3／7活性增多，Bax蛋白大量表达（P〈0．01）。TTLS能抑制缺氧-复氧损伤的皮层神经元线粒体膜电位的降低，减少caspase-3／7活性，并可降低Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡的发生。结论：缺氧一复氧可以诱导皮层神经元的凋亡。TTLS可降低缺氧-复氧诱导细胞凋亡的发生，其机制与维持线粒体膜电位的稳定，抑制caspase酶活性，降低Bax蛋白表达有关。     

三甲氧苄嗪对脂肪来源间充质干细胞氧化应激损伤的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究三甲氧苄嗪（TMZ）对脂肪来源间充质干细胞（ADSCs）氧化应激凋亡的影响及其机制。 方法 使用双酶消化获得SD大鼠脂肪组织的ADSCs,进行流式细胞学鉴定和多向分化潜能评估;应用过氧化氢（H2O2）诱导的ADSCs损伤凋亡模型,使用不同浓度的TMZ（250 μmol/L、500 μmol/L）干预氧化应激损伤的过程;Hoechst 33342染色定性分析凋亡细胞形态;JC-1线粒体膜电位染色和线粒体电镜检测观察TMZ作用下线粒体损伤逆转情况;Western blot检测TMZ对线粒体凋亡通路蛋白的影响;通过检测活性氧簇（ROS）、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛(MDA)水平评价TMZ对ADSCs抗氧化能力的作用。结果 获取的ADSCs,阳性表达CD29和CD90抗原,低或不表达CD34、CD45及CD31;ADSCs能够成功被诱导分化为脂肪细胞和骨性细胞;H2O2处理ADSCs,细胞凋亡数量增加,线粒体膜电位降低,线粒体结构破坏崩解,保护性凋亡蛋白（Bc12）表达下降,凋亡蛋白（Bax、Bad、Caspase3）表达上调;胞内ROS含量与MDA的质量摩尔浓度上升,SOD的活性和GSH的质量摩尔浓度降低。TMZ对ADSCs有浓度依赖性的保护作用,可降低H2O2诱导的细胞凋亡,逆转线粒体低电位,减轻H2O2对线粒体结构的损伤,提高Bc12的表达和下调Bax、Bad及Caspase3的表达,减低过量的ROS和 MDA,恢复SOD和GSH的抗氧化系统功能。结论 TMZ通过调控保护性蛋白的表达和提高内源性抗氧化能力,提高ADSCs 的存活率,从而逆转氧化应激损伤。     

硫辛酸抑制AIF 介导的非Caspase 凋亡通路对多巴胺能神经元的保护机制

目的：帕金森病（Parkinson’s disease,PD）最主要的病理变化是中脑黑质多巴胺（dopamine,DA）能神经元的变性死亡,但其病理机制仍然不清楚。硫辛酸是丙酮酸脱氢酶的辅助因子,具有抗氧化性和线粒体保护功能,对PD 具有一定的治疗效果。本研究旨在探索硫辛酸是否通过抑制致凋亡因子（apoptosis inducing factor,AIF）介导的非Caspase 凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。方法：6-OHDA 诱导建立单侧损毁的PD 大鼠模型后,给予硫辛酸干预;通过行为学、NueN 和TH 免疫染色观察硫辛酸的保护作用;通过Western Blot、免疫组化、激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF 介导非Caspase 依赖性凋亡通路对DA 能神经元具有保护作用。6-OHDA 诱导PC-12 细胞损伤建立PD 细胞模型,给予LA 干预;通过CCK-8、流式和线粒体膜电位检测硫辛酸的保护作用;通过Western Blot 和激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF 介导非Caspase 依赖性凋亡通路对多巴胺能神经元具有保护作用。结果：在PD 模型大鼠上,硫辛酸能够显著缓解
PD 模型大鼠行为学的改变,显著减缓PD 模型大鼠黑质区神经元的丢失;同时,硫辛酸也显著抑制PD模型大鼠黑质区AIF 的线粒体释放和细胞核转移。在PD细胞模型上,硫辛酸能够抑制6-OHDA诱导的PC12 细胞凋亡,显著抑制6-OHDA 诱导的PC12 线粒体通透性转变;同时,硫辛酸也显著抑制PC12 细胞模型AIF 的线粒体释放和细胞核转移。结论：硫辛酸能够通过抑制AIF 介导的非Caspase 凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。     

藤黄酸诱导肺癌细胞H1975凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸（GA）诱导人肺癌细胞H1975凋亡的分子机制,探讨氧自由基（ROS）和JNK信号通路在GA杀伤 肺癌细胞中的作用。方法 以人肺癌细胞H1975为研究对象,MTT法测定GA抑制细胞增殖的作用,Annexin V/PI 双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA 法测定ROS 含量,JC-1探针染色分析线粒体膜电位（MMP）,Western blot检测JNK 信号通路的激活和线粒体凋亡途径相关蛋白表达的变化。结果 GA 呈剂量依赖性抑制H1975细胞的增殖,各实验组细胞存活率与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05 或0.01）。1、2.5 和5滋mol/L GA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 和cleaved PARP 的表达随GA 浓度增高而显著增加,与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05或0.01）。GA 作用2h 后H1975细胞ROS 含量显著升高,磷酸化JNK（p-JNK）表达上调（P＜0.05或0.01）。GA 作用16h后各实验组细胞MMP 均明显降低（均P＜0.05）。GA 作用24h后实验组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达与空白对照组相比明显下降（P＜0.05 或0.01）。结论 GA 具有诱导H1975 细胞凋亡的作用,其可能机制是上调细胞内ROS含量,激活JNK 信号通路,进而引起MMP 降低和线粒体凋亡途径激活。     

磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用及机制研究

目的：在体外研究磷酸氟达拉滨（fludarabine）对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞的作用以及可能的作用机制。方法：采用MTT法、透射电境、DNA凝胶电泳、流式细胞仪以及RT-PCR等分析方法。结果：磷酸氟达拉滨能抑制MUTZ-1细胞的生长，24、48、72h的IC50分别为137．65mg／L、6．27mg／L、0．51mg／L，具有浓度和时间依赖性。经透射电境、DNA凝胶电泳和Annexin、V／PI检测，证实1～16mg／L磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用24h后，可以诱导MUTZ-1细胞凋亡，其对Bcl-2、Bax、survivin、XIAP、cIAP1和cIAP2基因mRNA表达均无明显下调作用，但可以导致MUTZ-1细胞线粒体膜电位的下降。结论：1mg／L～16mg／L磷酸氟达拉滨不但能抑制MUTZ-1细胞生长而且能诱导细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其主要细胞毒作用之一。线粒体膜电位下降是其诱导细胞凋亡的重要环节之一。     

环腺苷酸对脑胶质瘤细胞诱导分化的实验研究

目的：探讨环腺苷酸（cAMP）对大鼠神经胶质瘤细胞C6的诱导分化作用。方珐：C6细胞经不同浓度的cAMP诱导后,应用MTT分析法、软琼脂克隆形成、电镜检测、流式细胞仪、GFAP免疫组化染色及TUNNEL染色等法,检测C6细胞的分化及凋亡情况。结果：0．2mmol／L cAMP即可诱导C6细胞分化,表现为增殖抑制、细胞突起增长增多、G1期阻滞、GFAP高阳性表达、线粒体增多．细胞核变小等。且有浓度依赖关系,10mmol／L cAMP可诱导出现凋亡。结论：cAMP可明显抑制C6细胞增殖、诱导细胞分化甚至凋亡。     

线粒体膜电压依赖阴离子通道

电压依赖阴离子通道（voltage—dependent anion channels。VDAC）位于线粒体外膜，其闭合可以抑制线粒体功能，导致线粒体膜通透性发生改变，释放蛋白如细胞色素C、Smac／Diablo、细胞凋亡因子等最终导致凋亡，VDAC受多种因素的影响，如缺氧、细胞低氧、乙醇、活性氧和活性氮、细胞因子、激酶、NADH的增加可以抑制VDAC，促进呼吸链底物如短链脂肪酸和乙醛氧化很多证据表VDAC对线粒体及细胞功能的调节非常重要。     

PIG11高表达诱导HepG2细胞凋亡及其机制的初步探讨

目的利用已建立的稳定高表达PIG11蛋白的HepG2细胞株,探讨PIG11蛋白表达对HepG2细胞凋亡的影响,以及线粒体膜电位改变和Cyt C释放在凋亡过程中的作用。阐明PIG11诱导细胞凋亡的分子机制。方法 PI染色,流式检测细胞的凋亡情况。用Rh123标记,流式测定线粒体膜电位。Western Blot检测胞浆和线粒体中Cyt C的含量变化。结果流式细胞仪检测Rh123荧光强度,结果显示：pLXSN-PIG11-HepG2细胞荧光强度（5.4±0.15）低于HepG2细胞（14.7±0.56）和pLXSN-HepG2细胞（13.2±0.53）（P〈0.01）。表明PIG11高表达诱导细胞凋亡过程中存在线粒体膜电位去极化。用CsA（10μmol/L）抑制各组细胞的线粒体通透性转移孔后,流式凋亡检测结果显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率明显降低。Western Blot检测发现存在线粒体Cyt C向胞浆释放。结论 PIG11高表达可诱导HepG2细胞凋亡,PIG11诱导细胞凋亡机制可能由线粒体膜电位改变及Cyt C向胞浆释放而介导。     

白藜芦醇诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇（resveratroi，Res）诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡及其机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、软琼脂集落生长试验和流式细胞术测定Res对PC-3的增殖抑制、集落生长抑制、周期阻滞和诱导凋亡作用，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测对凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。结果Res具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G0／G1期阻滞和诱导凋亡作用，作用72hIC50为0．39g／L，Res0．1g／L作用2天对PC-3细胞集落生长抑制率为88．9％，Res0．5g／L作用2天G0／G1期细胞比例从42．30％增高至75．20％。Res可以下调beb2基因／蛋白，上调bax的表达。结论Res可能通过抑制PC-3细胞的集落生长、增殖抑制、G0／G1期阻滞、下调bcl-2基因，上调bax基因表达等作用机制诱导前列腺癌细胞凋亡。     

维生素K_2对MDS细胞株SKM-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的研究维生素K2（VK2）对骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株SKM-1的增殖抑制和诱导凋亡作用并探讨其可能机制。方法 （1）应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定VK2对SKM-1细胞增殖的抑制作用;（2）通过Annexin-V/PI标记VK2作用后的SKM-1细胞,用流式细胞术分析其凋亡情况;（3）通过流式细胞术检测SKM-1细胞线粒体膜电位（ΔΨm）的变化;（4）应用RT-PCR检测凋亡抑制基因Survivin的表达,分析VK2诱导SKM-1细胞凋亡的机制。结果 （1）5、10、20、40μmol/L VK2分别作用于SKM-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制明显（均P〈0.05）,生长抑制率的增加呈剂量依赖性（P〈0.05）;（2）不同浓度VK2处理后48h,SKM-1细胞发生凋亡（均P〈0.01）,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性（P〈0.05）;（3）不同浓度VK2作用后24 h,SKM-1细胞线粒体膜电位降低明显（均P〈0.01）,且呈剂量依赖性（P〈0.01）;（4）不同浓度VK2处理后48 h,SKM-1细胞Survivin基因表达随着VK2浓度的增大而明显下调（均P〈0.05）。结论 （1）VK2对SKM-1细胞增殖有抑制作用,呈剂量依赖性;（2）VK2可诱导SKM-1细胞早期凋亡,呈剂量依赖性;（3）在此凋亡过程中,SKM-1细胞线粒体膜电位降低、凋亡抑制基因Survivin表达下调;（4）Survivin基因的表达下调可能是VK2诱导SKM-1细胞凋亡的机制之一。     

茜草多糖对衰老模型小鼠脑细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨茜草多糖延缓衰老作用机制及其对脑细胞凋亡的影响和作用机制。方法采用D-半乳糖衰老模型小鼠作为研究对象，提取茜草多糖，观察茜草对脑细胞凋亡、Bcl-2、线粒体细胞色素C（cytC）和Ca^2＋含量的影响。结果D-半乳糖衰老模型小鼠脑细胞凋亡率明显增加，而Bcl-2蛋白表达降低（P〈0．01），线粒体cytC和Ca^2＋含量明显下降（P〈0.01），茜草多糖可明显降低凋亡细胞数（P〈0.01），增加Bcl-2的表达（P〈0．05），提高线粒体cytC水平和Ca^2＋含量（P〈0．01）。结论茜草多糖具有延缓脑细胞衰老的作用，可通过①上调Bcl-2蛋白的表达，②保护线粒体避免cytC的释出，③提高线粒体Ca^2＋缓冲含量，从而发挥抑制脑细胞凋亡的作用。