抗死亡受体DR5抗体对大鼠佐剂型关节炎的作用机理探讨

目的研究抗．DR5McAb对大鼠佐剂型关节炎（AA）的作用及其免疫机理。方法注射弗式完全佐剂建立AA大鼠模型，尾静脉注射抗．DR5McAb，观察大鼠关节肿胀度、血清和滑膜液中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平的变化。RT-PCR检测各组织器官、滑膜和淋巴细胞中DR5 mnNA水平的表达，Western blot分析各组织器官中凋亡相关因子caspase-8、Bcl-2蛋白的表达。结果抗．DR5McAb能缓解AA病情，使关节肿胀度降低；血液和滑膜组织细胞产生IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降，抑制滑膜细胞和淋巴细胞的过度增殖。各组织器官中caspase-8蛋白水平上升，Bcl-2蛋白水平下调。结论抗-DR5McAb能用于大鼠从的治疗，其治疗机制与细胞表面DR5mRNA的表达、细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平和caspase-8、Bcl-2蛋白表达相关。     

Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及机理初探

目的:探讨Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡作用及其可能机理.方法:注射弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,分离并体外培养大鼠滑膜细胞.MTT检测、DNA倍体分析及流式细胞术分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞的凋亡作用,Western blot检测大鼠滑膜细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,Caspase抑制剂实验分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞凋亡作用的机制.结果:MTT实验表明Anti-DR5 mAb能抑制大鼠滑膜细胞的增殖,流式细胞术分析这种作用模式为细胞凋亡.Anti-DR5 mAb处理后的大鼠滑膜细胞中Caspase-3蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调.Caspase抑制剂实验证明Anti-DR5 mAb 诱导大鼠滑膜细胞的凋亡是通过Caspase途径实现的.结论:Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡,这种作用与滑膜细胞表面Caspase-3、Bcl-2蛋白表达相关.     

DcR3及其配体的研究进展

DcR3/TR6是最近发现的可溶性TNFR超家族成员,在归类上属于第三类,其配体具有多样性。它可竞争性地与FasL、LIGHT及,TL1A结合,在肿瘤免疫、移植免疫、自身免疫及抗感染免疫中都发挥着重要的作用。本文拟就DcR3及其配体的研究进展作一综述。     

DcR3重组蛋白对糖尿病大鼠心肌组织凋亡相关分子的表达及细胞凋亡的作用

目的:研究诱骗受体3(DcR3)在正常大鼠、糖尿病(DM)大鼠心肌组织的表达,DcR3重组蛋白对心肌组织凋亡相关分子表达以及心肌细胞凋亡的影响,探讨DcR3对DM大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠DM模型,尾静脉注射不同剂量的DcR3重组蛋白[1.2 mg/(鼠·d)、0.8 mg/(鼠·d)、0.4 mg/(鼠·d)]40 d。RTPCR检测心肌组织DcR3 mRNA、Fas mRNA、FasL mRNA的表达。Wester blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-8的表达。双抗夹心ELISA检测血液中IL-1β、TNF-α及LFN-γ水平的变化,HE染色观察心肌细胞凋亡的百分率。结果:DcR3治疗组大鼠与DM组比较心肌组织DcR3 mRNA高表达,Fas mRNA、FasL mRNA表达下调。Caspase-8蛋白水平下调,Bcl-2蛋白水平上调,以中剂量组的作用最明显。各DcR3治疗组血清IL-1β、TNF-α和IFN-γ水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01)。心肌细胞凋亡的百分率下降(P<0.05)。结论:DcR3重组蛋白有抑制DM大鼠心肌细胞凋亡的作用,其机制与竞争Fas,阻断FasL诱导细胞凋亡,心肌细胞表达DcR3,凋亡相关因子Caspase-8下调、Bcl-2上调及细胞因子水平的降低有关。     

肝癌发展中FasL及其受体Fas/DcR3的表达分析

目的研究小鼠肿瘤发生早期肿瘤坏死因子超家族成员FasL及其受体的表达特点,及其与免疫调节相关分子表达的时空关系,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法建立小鼠实体瘤模型,采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中可溶型FasL、Fas及DcR3、TGF-β、IL-10在肿瘤发生不同时相的表达,同时,应用ELISA方法定量检测血清中TGF-β、IL-10的表达。结果在早期的肿瘤组织中,Fas的表达先于DcR3,其后DcR3大量表达,而Fas的表达则下调直至丢失,DcR3、FasL同时表达并上调,TGF-β和IL-10也随肿瘤的表达而上调。TGF-β同DcR3的表达具有空间位置的一致性。FasL、DcR3、TGF-β和IL-10的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节,FasL、DcR3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中可能发挥着重要作用。     

南蛇藤提取物对Lewis大鼠佐剂性关节炎(AA)预防及治疗作用

目的：观察南蛇藤提取物对Mtb诱发的Lewis大鼠佐剂型关节炎的影响。方法：以Mtb（Heat-killed mycobaeterium tubreuolsis H37Ra）免疫Lewis大鼠（1mg／只），诱发佐剂性关节炎模型，免疫后8天，出现临床类风湿关节炎症状。大鼠分成预防组及治疗组，分别灌胃南蛇藤（1．5～3g／kg）、生理盐水及甲氨碟呤（0．5mg／kg）。用积分法定期评定四肢炎症程度。实验结束后，大鼠关节做病理检测。结果：实验结果表明，预防组与模型对照组比较，南蛇藤提取物显著降低关节炎模型大鼠的临床积分，抑制关节炎症的发生（P〈0．05，P〈0．01）。治疗组中南蛇藤提取物组与甲氨碟呤组比较无显著性差异（P〉0．05）。病理结果显示南蛇藤提取物可减轻Lewis大鼠关节的损伤破坏程度。结论：南蛇藤提取物对AA模型大鼠关节炎症及病情进展有显著的抑制作用。     

诱骗受体3与肿瘤关系的研究进展

诱骗受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体超家族新成员,是一种可溶性受体,在一些疾病尤其是恶性肿瘤中过表达,与死亡受体3(DR3)相反,DcR3缺乏死亡结构域.过去对于DCR3的研究集中肿瘤,即DcR3可阻断细胞的凋亡进而造成免疫逃逸和化疗耐受,近来对于DcR3的研究多集中于炎症,以及DcR3及其类似物在特定疾病如自身免疫性疾病中的预防和治疗作用,本文综述了DcR3在肿瘤、炎症及其临床应用中的研究进展.     

DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用

目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用.方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体, 脂质体法转染HLF细胞, Western blot检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量.结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞Col Ⅳ表达量明显升高, 从12 h开始持续到72 h, 与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);而转染 抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染组不同时间Col Ⅳ表达量有统计学意义(F=34.25, P＜0.05).结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力, 可能是加速肺纤维形成的因素之一.     

DcR3与免疫系统关系的研究进展

DcR3是最近新发现的能与LIGHT、FasL竞争性结合并抑制其活性的可溶性的TNF家族成员之一 ,它在某些肿瘤、自身免疫病等疾病中高度表达。对DcR3的基因表达、调节机制以及其与某些疾病关系的探讨 ,必将会为疾病的进一步深入研究提供一条新的思路。     

佐剂型类风湿关节炎模型的改良与DDR2的表达研究

类风湿关节炎(RA)是青壮年的常见病和多发病，对它的研究必须首先建立一个稳定实用的动物模型，以往的方法成功率都较低，且模型建立周期都比较长。为此，我们改良了经典的佐剂型方法，取得了显著效果。盘状结构域受体2(Discoidin Domain Receptor2，DDR2)是一类广泛分布的受体型酪氨酸激酶，     

Correlation between expression of DcR3 on tumor cells and sensitivity to FasL

To investigate the correlation between sensitivity to Fas ligand （FasL） and expression level of decoy receptor 3 （DcR3） on tumor cell surface, Fas/DcR3 mRNA expression was detected by RT-PCR. Anti-DcR3 mAb was used to detect expression level of DcR3 on surface of tumor cells by flow cytometry. Caspase-8, caspase-9, caspase-3, Bcl-2 expressions were analyzed by Western blot, respectively. Sensitivity to apoptosis induced by FasL was determined by Annexin V apoptosis kit. The expressions of DcR3 on the surface of tumor cells from high to low were approximately 35.3% in BGC823 cells, and 21.6% in MCF-7 cells, respectively. The apoptotic rates induced by FasL from low to high were 15.6% in BGC823 cells, and 58.2% in MCF-7 cells, respectively. There was a significant correlation between the expression levels of DcR3 with FasL-inducing apoptosis. Cellular ＆ Molecular Immunology.     

新西兰大白兔佐剂性关节炎模型的评价

目的建立一种简单、可行的兔佐剂性关节炎动物模型,并对其进行鉴定。方法通过注射弗氏完全佐剂建立兔关节炎模型,测量造模前、后24 d致炎侧的足趾周长变化;摄X线片,观察其软组织肿胀及骨性变化;用滑膜组织HE染色方法观察组织病理学变化。结果造模后24 d致炎侧足趾周长较正常组肿胀明显(0.05);X线片显示,与正常组比较,佐剂性关节炎动物模型组软组织肿胀明显,关节间隙变窄甚至模糊不清,关节面不平整;取材过程中发现模型兔关节腔有明显积液,模型兔足趾部解剖有明显微血管增生和炎症;滑膜组织HE染色后,正常组的滑膜细胞呈现"串珠样"规则排列,模型组的滑膜细胞排列紊乱并出现水肿。结论成功建立了兔佐剂性关节炎动物模型,方法简便,成功率高,为进一步研究提供良好的实验动物模型。     

重组人DcR3腺相关病毒的构建和表达

目的克隆人DcR3基因于腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体pAAV-IRES-hrGFP中,以获得高感染滴度及纯度的重组人DcR3腺相关病毒,为将其用于感染移植肝,研究其对大鼠移植肝的保护作用打下基础。方法用基因重组的方法构建含全长人DcR3基因的重组腺相关病毒骨架质粒,利用脂质体法将腺相关病毒载体系统共转染入病毒包装细胞AAV-293细胞中,合成重组DcR3腺相关病毒,经PEG/氯仿纯化,用SDS-PAGE鉴定其纯度,扫描电镜观察病毒颗粒形态,倍比稀释法测定重组病毒的感染滴度。并用重组病毒感染COS-7细胞鉴定DcR3的表达。结果正确构建组装重组人DcR3腺相关病毒,纯化后病毒感染滴度为1.1×1010U/mL。在重组DcR3腺相关病毒感染的COS-7细胞上清液中检测到了DcR3的表达。结论成功构建了重组人DcR3腺相关病毒,为下一步研究DcR3对大鼠移植肝的保护作用打下基础。     

Meloxicam: A potent inhibitor of adjuvant arthritis in the Lewis rat

The effects of meloxicam, piroxicam, diclofenac and tenidap on the swelling of hind paws, radiologically-detectable bone and cartilage destruction of hind paws, increase in spleen weight, increase in erythrocyte sedimentation rate and changes in serum protein composition in male Lewis rats with adjuvant arthritis were studied following once-daily oral administration of these drugs for 21 days. All the drugs dose-dependently inhibited hind paw swelling. For equal activity against hind paw swelling caused by the secondary reaction, the required daily dose of piroxicam was about twice that of meloxicam; those of diclofenac and tenidap were about 3.5 and 60 times higher respectively. The bone and cartilage destruction induced by adjuvant arthritis were inhibited by meloxicam at low daily doses and by piroxicam at doses approximately four times those of meloxicam. Diclofenac and tenidap had only a weak effect on radiologically-detectable lesions when administered at doses sufficient to reduce paw swelling. Meloxicam also had a dose-dependent corrective effect on the systemic changes which occur in adjuvant arthritic rats, e.g. increase in spleen weight, increase in erythrocyte sedimentation rate and changes in serum protein composition. Piroxicam produced similar effects, at 3–4 times higher doses. Diclofenac and tenidap did not show comparable effects when administered at appropriate doses. These findings indicate that the action of meloxicam and piroxicam differs from that of diclofenac and tenidap in adjuvant arthritis in the Lewis rat. At oral doses which significantly reduce edema formation, only meloxicam and piroxicam showed a significant effect on systemic parameters of adjuvant disease in the Lewis rat.     

抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定

目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性.方法:纯化的His-DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价.结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10-5 ～1×10-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(1B1)可与SW480细胞成分反应.结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础.     

佐剂性关节炎大鼠免疫功能的实验研究

目的：阐明佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠模型免疫病理特征及发病机理。方法：应用费氏完全佐剂诱发大鼠产生裸关节佐剂性关节炎,研究其免疫功能变化。结果：ＡＡ大鼠致敏侧及时对侧后肢裸关节均发生明显炎性肿胀,其脾细胞对ＳＲＢＣ诱导的抗体生成反应明显增强,但其脾细胞对ＰＷＭ诱导的ＩｇＣ的产生及血清类风湿因子（ＲＦ）水平与对照组相比并无升高。ＡＡ大鼠对ＣｏｎＡ诱导的脾细胞增殖反应较对照组显著降低,脾细胞抑制活性降低